Name: 정맥 당부 하 검사와 비인간 영장류의 대사 상태의 특성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: 배우세요 비인간 영장류에서 정맥 당부하 검사를 수행하는 방법으로, 마카크의 대사 질환 진행 과정을 특성화하고 당뇨병 및 인슐린 저항성 연구에 활용할 수 있습니다.

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저자는 DHMRI CLAS 동물 관리 직원의 강력한 지원을 인정하고 싶습니다, 시설 관리자 씨 다니엘 페랄타와 참석 수의사, 박사 Glicerio 이그나시오, DVM MRCVS.

모든 동물 절차 프로토콜 14-017 아래, 노스 캐롤라이나 연구 캠퍼스 (NCRC)에있는 데이비드 H. 머독 연구소 IACUC 승인하고, 당뇨병과 prediabetes / 인슐린 저항성 및 치료제의 효능의 비인간 영장류 모델의 특성을 개선하기 위해 인슐린 감수성 및 신진 대사 기능. 1. 동물 선택 및 학습 준비 <ol><li> 매달 음식 섭취 및 체중에 기초하여 레코드를 선택 다이어트 및 중량 안정 동물. 참고 : 자신의 음식 섭취가 안정 될 때까지 식욕에 최근 하락을 전시 한 동물을 특징으로 할 수 없습니다. <ol><li> 성숙한 동물 (&gt; 5-6 년), 본문 개월 연속 간의 가중치 먼저 원숭이 검사와 무게에 극적인 변화를 대사 상태를 변경 이외의 다른 원인을 배제하지 않고 10 % 이상 차이가 동물을 선택하지 마십시오. </li></ol></li><li> 포도당, 인슐린 및 C-pepti에 대한드 분석은 단백질 분해 효소 억제제 (아프로 티닌 및 DPP4I)와 K 2 EDTA 샘플 수집 튜브를 준비합니다. 참고 : DPP4I + 아프로 티닌 칵테일 프로테아제 억제의 폭 넓은 스펙트럼을 제공하는이 추가적인 분석 (글루카곤, GLP-1)에 요구한다. 추가적인 분석이 수집되지 않는 경우, 혈액 튜브 시료 채취의 일관성을 유지하기 위해 동일한 방법으로 제조한다. 이 방법에 대한 유효성이 확인되지 분석을위한 샘플은 제조업체의 권장 사항에 따라 개별적으로 수집되어야한다. <ol><li> DPP4I 10 ml의 아프로 티닌, 동결 건조하여 100 mg을 혼합하여 프로테아제 억제제 칵테일을 준비합니다. 수집 된 혈액의 모든 밀리리터 각 혈액 튜브에 아프로 티닌 + DPP4I 혼합물의 10 μl를 추가합니다. </li><li> 가능한 컬렉션 없더군요 각 튜브에 단백질 분해 효소 억제제 칵테일의 추가 10 μl를 추가합니다. 사용할 때까지 -20 ° C에서 처리 된 혈액 튜브를 저장합니다. procedu 동안 젖은 얼음에 튜브를 유지다시 4 ℃에서 스핀. </li><li> 표준 혈청 화학 분석을 기준으로 혈액 샘플을 수집하는 혈청 분리기 튜브를 사용한다. 전체 혈구 수 (CBC)의 경우, 프로테아제 억제제없이 표준 K 2 EDTA를 사용합니다. 혈액 샘플 후 나누어지는 플라즈마 및 혈청에 사용 크리오 바이알 (cryovial)는 스핀 다운되었습니다. </li><li> 동물 식별, 날짜, 절차, 평가시기 및 샘플 볼륨 적절하게 혈액 튜브와 크리오 바이알 (cryovial) 레이블. 적절한 분석을위한 플라즈마의 분석 (들)와 크리오 바이알 (cryovial) 레이블. </li></ol></li><li> 생리 식염수 250 ml의 가방에 ml의 헤파린 1,000 USP 단위의 0.15 ml를 주입하여 헤파린 식염수 세척을 준비합니다. 0.06 mg의 헤파린 / ㎖의 용액을 얻었다. 샘플 사이에 세척을위한 식염수 잠금 장치에이 용액 60 ml의 - (40)을 그립니다. 각각 주입 전후 덱 스트로스 주입 포트 플러싱 별도의 주사기 내로 추가 1 mL 및 5 mL를 그린다. </li></ol> 2.동물 진정 및 준비 <ol><li> 동물의 케이지에서 절차 전에 더 이상 14 시간, 그리고 이하 18 시간 음식을 제거합니다. 참고 : 동물 혈당 값의 모든 식후 변화를 방지하기 위해 절차를 금식하는 것이 중요하다. 또한 마취 동안 역류 및 위 내용물의 흡인을 피하기 위해주의한다. </li><li> 전신 마취로 근육 주어진 케타민과 IVGTT 절차의 기간 동안 진정 동물, 10 ㎎ / ㎏에서. 절차를 수행하는 동안, 필요에 따라 30 분, 또는 - (20)의 간격으로 - (10 ㎎ / ㎏ 5) 추가 케타민을 관리 할 수 ​​있습니다. <ol><li> 진정 동물을 달아. 가열 과정 테이블에 옆으로 누운 위치에 동물을 배치합니다. </li><li> 동물 마취의 안정적인 비행기에 확인하기 위해 임상 매개 변수마다 15 ~ 20 분을 모니터링합니다. 맥박 산소 측정기와 - (200 BPM 100) 및 SPO 2 (&gt; 92 %) 심장 박동을 측정합니다. (- 50 호흡 / 분 20) w 호흡을 측정<html> 스톱워치 i 번째, 시각적 또는 십오초 이상 손으로 호흡을 계산하고 네 곱하여. 측정 온도 (&gt; 97 ° F) 직장. 잇몸과 입술 (습기, 핑크) 주위 점막의 색을 모니터합니다. </li></ol></li><li> 이 정맥 사이트를 준비합니다. 카테터가 삽입됩니다 관심의 영역에서 머리를 손질하고, 교류 클로르헥시딘의 스크럽 70 % 알코올로 전체 지역을 소독하기 위해 머리 가위를 사용합니다. <ol><li> 좌우 두부 또는 복재 정맥의 영역에 하나의 도관을 배치하고 삼방 스톱 콕 (mg의 헤파린 / ㎖ 0.06) 헤파린 염수 플러시에 첨부. 이 샘플링 혈액 무승부 사이트입니다. </li><li> 다른 다리의 두 번째 카테터를 배치하거나 두부 또는 복재 정맥의 영역에서 팔과 포트를 연결합니다. 덱 스트로스 주입이 사이트를 사용합니다. 이전 포도당 주입에 캐 뉼러의 특허를 유지하기 위해, 작은 헤파린 생리 식염수 1 ml의 높이를 사용합니다. </li></ol></li></ol>e_title &quot;&gt; 3. IVGTT 절차 참고 : IVGTT 절차는 8 혈액 그리기 샘플링 시간 포인트 (표 1)로 구성되어 있습니다. <ol><li> 기준 샘플을 채취하고, 공복 혈당치를 측정하는 휴대용 혈당 측정기를 사용한다. 동물의 전반적인 상태를 평가하기 위하여 CBC 표준 화학 분석을 위해 혈청 시료뿐만 아니라 전체 혈액 샘플을 얻었다. 제조자의 지시 8,9 당 원숭이 사용하기 위해 검증 키트를 사용하여 기준 샘플로부터 포도당 및 인슐린 수준을 분석하기 위해 혈장 샘플을 수집한다. 참고 : 이전에 정맥의 죽은 공간에 잔류 혈액 또는 헤파린을 제거하기 위해 혈액 수집에 대한 모든 샘플을 복용 정맥에서 가져온 0.5 ML의 사전 무승부를하는 것이 중요합니다. </li><li> 기준 샘플을 획득 한 후, 덱 스트로스 주입 포트에 30 초 이상 50 % 덱스 트 로즈 (250 ㎎ / ㎏)의 투여 량을 주입. 주 : 고용량 모델 (500 ㎎ / ㎏)을 사용할 수있다비록 용량은 길이 비교를 위해 절차를 통해 고정한다. <ol><li> 포트에 남아있는 포도당이 없다는 것을 확인하기 위해 헤파린 생리 식염수 5 mL를 주입 포트를 세척합니다. 주입의 끝은 T0입니다. 주입에서 잔류 포도당 이후의 혈액 샘플을 오염시킬 수 있으므로 기술자, 장갑을 교체해야합니다. </li></ol></li><li> 제 사후 주입 샘플 시각은 T5 분 T7 최소, T10 분 T15 분 T20 분 뒤에 덱 스트로스 주입의 끝에서, T3의 분으로하고, 마지막 샘플 시점은 T30의 분이다. 기준 샘플 분석 혈당 및 인슐린 수준을 각각 평가시기로부터 플라즈마를 수집한다 (단계 3.1 참조). <ol><li> 시점 T3의 분에서 다시 혈당을 검사 휴대용 혈당 측정기를 사용한다. 참고 :베이스 라인에서의 혈당 측정기 측정 값과 T3는 포도당의 주입을 확인하기 만하다. 시점 T3의 분에서의 혈당치는 ~ 100 밀리그램 / DL 높은 CO되어야기준선 공복 혈당 수준 mpared. </li></ol></li></ol> 4. 동물 복구 및 샘플 처리 <ol><li> 캐 뉼러를 제거하고 시간 소수점 분 T30 후 지혈 용 카테터 사이트에 압력을 적용합니다. 이 의식을 회복하고 앉아 때까지 동물을 모니터링합니다. 동물 한 번 제공 피드는 완전히 회복된다. </li><li> 즉시 얼음에 K 2 EDTA 튜브에 각각 전체 혈액 샘플을 배치합니다. 컬렉션을 10 분 동안 4 ℃에서 3000 rpm으로 원심 분리한다. 분석 할 때까지 -80 ° C에서 크리오 바이알 (cryovial), 동결 및 저장소로 나누어지는 플라즈마 샘플. <ol><li> 표준 혈청 화학 분석을위한 혈청 튜브에 혈액이없는 이하에서 20 분 및 RT에서 3000 rpm으로 원심 분리 전에없이 30 분 동안 실온에서 방치시키고. 컬렉션의 48 시간 내에 분석 할 때까지 혈청 샘플을 고정. 참고로서까지 CBC 분석을 위해 수집 냉장 전혈 시료컬렉션의 24 시간 내에 사예드. </li></ol></li></ol> 5. 데이터 처리 <ol><li> 플라즈마 인슐린과 혈당 곡선을 설정 한 후,베이스 (16), (17) 상기 글루코스 값의 자연 로그의 기울기로부터 글루코오스 제거율 K를 결정한다. 참고 : 건강한 NHP는 건강한 동물은 종종 30 분 이내에 기준 혈당 값으로 돌아갑니다으로, 종종 더 큰 2보다 더 잘 1 위의 포도당 통관 율 K를 가질 것으로 예상 할 수있다. 인슐린 생산이 내려 바와 같이, 포도당 통관 율 K가 1 이하로 떨어지는, 더 크게 떨어질 것이다. </li><li> T30 (16) (17)를 통해 시간 - 포인트 사이의 각 선분의 곡선 아래의 영역을 나타내는 사다리꼴의 면적의 합계의 합계로서 전체로서 AUC를 계산한다. 참고 : 전통적으로, 절차의 처음 10 분 AUC가 acut이 고려된다절차의 마지막 20 분에서 AUC 후반 인슐린 반응 (LIR)로 간주되는 동안 인슐린 반응 예는 (공기) 포도당. 동물이 더 dysmetabolic 해짐에 따라, 인슐린 AUC는 인슐린 무감각 증가에 대한 보상을 반영 증가 할 것이다. 현성 당뇨병 동물 트랜지션 그러나, AUC는 AIR 의해 캡쳐 급성 인슐린 위상 종종 처음에는 감소한다. </li></ol>

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</ol>

저자는 대사 질환 분야에서 활약하는 계약 연구 기관 (크라운 바이오 사이언스)와 제휴하고 있습니다.

IVGTT은 상기 분석에서 공복 혈당 및 인슐린 수준이 달성된다. 체중 5, 12, 13에 기초하여 단일 덱 스트로스 주입 글루코스 자극 인슐린 분비의 능력을 평가하고, 그 동물의 능력을 평가하는 허용 인슐린을 해제하고베이스 라인쪽으로 높은 혈당 수준을 반환합니다. 이는 정상적인 글루코스와 인슐린 수준, 건강 관리, 정상 혈당와 dysmetabolic 혈증 동물 또는 고혈당, 인슐린 저항성 당뇨병 동물로 동물을 특성화하는 정보를 사용자에게 제공한다. 특히 이른 시점에서 혈액 샘플을, 덱 스트로스 주입 후에 그려진 것으로 적절하고 일관된 방식으로 처리하는 것이 중요하다. 이것은 내부와 피사체 사이에 변동을 감소시키고, 데이터의 시간적 순서로 오류에 대한 기회를 감소시킬 것이다. T3의시기는 매우 중요하다 소풍 오 때문에덱 스트로스의 주입 후 3 분 기준선 F 혈당 동물의 대사 상태를 특성화하기 위해 사용되는 엔드 포인트 중 하나이다. 그 혈액이 시간에 촬영되...

IVGTT 일상적 다른 대사 상태 5에서 7 인간의 β 세포 기능을 결정하기 위해 사용되는 편리한 기능적 분석이다. T2D 동물 모델에서, 잘에서 대사 질환 진행을 보여 동물을 특성화하기위한 도구로서 인식되고 dysmetabolic 고혈당 상태 8, 9 건강한. T2D의 가장 가까운 동물 모델은 붉은 털과 노몰 거스 원숭이가 주목할만한 예입니다있는 인간이 아닌 영장류 (NHPs)에서 증명된다. 이러한 동물은 자연스럽게 인간 10과 나이 및 빈도에 기여 비만과 같은 위험 인자 T2D을 개발한다. 또한,이 유사한 질병의 진행은하고 dysmetabolic 질환 11 진행됨에 따라 췌장 병리은 아밀로이드 침착을 표시합니다. 여기에서 우리는이 동물의 대사 상태의 우리의 식민지 특성화의 일환으로 NHPs에 IVGTT을 수행하는 우리의 표준 방법에보고한다. 이 방법은소비 다른, 더 많은 시간과 비용이 많이 드는 기술 2를 기준으로 수행하기 쉬운. IVGTT 신속하고 자주 동물의 많은 식민지를 특성화하는 데 유용합니다. 당화 혈색소 (당화 혈색소)의 수준을 고려하면, 동물의 다이어트 및 음식 섭취 이력뿐만 아니라 %의 근육량과 체지방은 IVGTT 일반적 현성 당뇨병 6 향해 동물의 대사 상태와 진행 특성화 충분 8. 당화 혈색소는 3 개월 이전 6 주 동안 혈당 측정의 신뢰성을 제공하는 적혈구의 수명 동안의 평균 혈당 수준을 나타낸다. IVGTT의 금식 기준선 혈액 샘플에서 측정했을 때,이 값은 절차 사이의 개월 동안의 혈당 조절에 창을 제공합니다. 동물이 그들의 마지막 IVGTT 때문에 당뇨병에 dysmetabolic에서 전환 한 경우, 이전 값보다 훨씬 더 높은 혈색소 값을 나타냅니다전환이 빨리 시작하는 것이 그들의 마지막 IVGTT 후, 반면, 가까운 이전 값으로 당화 혈색소 값은 최근 전환 된 것을 나타냅니다. 일반적으로, 붉은 털 원숭이에, 당화 혈색소가 6 %가 가난한 혈당 조절 10, 23 비정상으로 간주하고, 표시되어 더 이상 값. 혈당 수준은 전체 동물의 행동 및 일반적인 건강의 컨텍스트 내에서 해석되어야한다. 당뇨병 원숭이 - 전시 과식증, 갈증과 다뇨증 - 인간 등을들 수있다. 동물의 그룹 하우징은 dysmetabolic 당뇨병 원숭이에 필요한 이러한 지표와 개별 치료의 측정에 상당한 도전을 제공합니다. 우리는 단독 치료보다 개인화를 제공 할 수 있도록하기 위하여 동물을 선택할 것을 권장하고 쉽게 원숭이의 상태의 마커 행동 8 모니터링 될 수있다. 또한, 당뇨병 원숭이 체중 감소뿐만 아니라 증가 된 상승 된 지질 프로파일 (나타낼 것이다콜레스테롤, 중성 지방 혈증) 및 혈청 화학 방해 미네랄 대사. 이러한 장기에 손상이 대사 장애 / 당뇨병 발전의 합병증은 종종 있으며, 혈당, 지질, 미네랄 불균형 9, 11, 18의 공동 결정 할 수있다, 24로는, 간, 혈청 화학 신장 기능의 지표를 측정하는 것이 중요하다 . 이 방법을 사용하면 원숭이의 수명이 특정 가치가 위에, 역사적인 값은 여러 자주 특성화에서 생성 된. 이러한 글루코스 클램프 또는 등급 글루코스 주입 (GGI)와 같은 또 다른 과정은 완전 동물의 상태를 평가하는 데 필요한 경우 역사를 사용할 때, 초기 특성에 일반적이다. 3 개월마다의 주파수의 기준이 설정되고 나면 그러나, 반복 IVGTTs는 동물의 진행 상황을 추적하기 위해 일반적으로 충분하다. 동물이 전반에 걸쳐 여러 연구에 등록되어있는 경우에 특히 중요하다연도는 신진 대사 상태에 따라. 건강 한번에 동안 비교적 안정적으로 유지 될 수있는 반면, 동물의 대사 상태가 악화되면, 인슐린 내성 및 글루코스 불내성의 극적인 증가는 매우 급속하게 일어날 수있다. 혈색소 값 석 달 간격 예정된 절차와 동물의 건강 상태의 감소 또는 개선의 일부 보간 허용한다. 이러한 이유로,이 방법은 자연 수명에 걸쳐 여러 종의 연구에 사용되는 동물의 특성에 적합하다.

<table><tbody><tr><td>Allegra X-15R 원심분리기</td><td></td><td></td><td>플라즈마: 4 &#176; C 3,000rpm에서 10분 동안</td></tr><tr><td>Sorvall ST16R 원심분리기</td><td></td><td></td><td>혈청: 22 &#176; 3,000rpm에서 10분 동안 C</td></tr><tr><td>Thermo Scientific -86 &#176; C 냉동고, Forma 88000 시리즈</td><td></td><td>모델: 88500A</td><td></td></tr><tr><td>포도당 50% (D50)</td><td>웹스터</td><td>07-8008986</td><td>I.V. 포도당 주입물</td></tr><tr><td>3 ml 루어 락 주사기</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td></td><td>시리얼 혈액 채취</td></tr><tr><td>5 ml Luer Lock 주사기</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td></td><td>헤파린 화 식염수 플러시</td></tr><tr><td>10 ml Luer Lock 주사기</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td></td><td>I.V. D50</td></tr><tr><td>거즈 스폰지 2 x 2</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>366.23000.4</td><td>중고 건조, 70% 알코올 및 2% 클로로엑스 용액</td></tr><tr><td>4 ml 세럼 분리기 튜브 배송&nbsp;</td><td>미드웨스트 수의학 공급</td><td>366.45000.4</td> 슈퍼켐 패널 K2<td>EDTA용 혈액 채취 튜브</td></tr><tr><td>, 2 ml</td><td>VWR</td><td>95057-239</td><td>혈액 채취 튜브</td></tr><tr><td>아프로티닌, 100 mg</td><td>시그마</td><td>A1153-100MG</td><td>혈액 채취 튜브 프로테아제 첨가제</td></tr><tr><td>22 G x 1" 카테터</td><td>미드웨스트 수의학 공급</td><td>193.75250.2</td><td>I.V. 카테터&nbsp;</td></tr><tr><td>주입 플러그 W/ 캡</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.11500.2</td><td>%50 포도당 주입 포트</td></tr><tr><td>Porus Tape, 1/2" x 10 yd</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.85000.2</td><td>카테터 및 hep의 준수를 유지합니다. 잠금</td></tr><tr><td>클로르헥시딘 용액 2%</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>193.08855.3</td><td>prep catheter site</td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>VWR</td><td>71001-654</td><td>prep catheter site</td></tr><tr><td>tourniquet</td><td>Webster</td><td>07-8003432</td><td></td></tr><tr><td>3-way</td><td>stopcock Midwest Veterinary Supply</td><td>366.28510.4</td><td>hep. lock</td></tr><tr><td>37" 확장 세트</td><td>Webster</td><td>07-8454200</td><td>hep. lock</td></tr><tr><td>Exel 50-60cc LL 주사기</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.12250.2</td><td>Heparinized Saline flush</td></tr><tr><td>250 ml bag 0.9%</td><td>saline Webster</td><td>07-8365593</td><td>flush</td></tr><tr><td>1,000 U Heparin, 10 ml</td><td>Webster</td><td>07-883-4916</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine (Ketaset) 100&nbsp; mg/ml</td><td>Fort Dodge</td><td>(AV 주문)</td><td></td></tr><tr><td>Precision Xtra 포도당 테스트 스트립 50/bx</td><td>Abbott(American Diabetes Wholesale)</td><td>9381599728K7</td><td>테스트 기준선/T3 혈당 수치</td></tr><tr><td>Masimo Rad 57</td><td>DRE</td><td>6052057V</td><td>맥박 산소</td></tr><tr><td>측정기 Pavia 직장 온도계</td><td>Patterson</td><td>07-8391335</td><td></td></tr><tr><td>Precision Xtra Glucometer</td><td>Abbott</td><td>9381599728K7</td><td>휴대용 혈당계</td></tr></tbody></table>

정맥 당부 하 검사와 비인간 영장류의 대사 상태의 특성

Characterization of Metabolic Status in Nonhuman Primates with the Intravenous Glucose Tolerance Test

정맥 내 글루코스 내성 시험 (IVGTT)은 글루코스 항상성의 특성에 중요한 역할을한다. 혈청 생화학 프로파일 모두 공급의 혈당치를 포함한 금식 상태, 혈색소, 인슐린 수치, 다이어트의 병력, 신체 조성 및 체중 상태, 정상 및 비정상 혈당 조절에 대한 평가와 함께 할 때 만들어 질 수있다 . IVGTT의 해석은 덱 스트로스 도전과 관련하여 시간이 지남에 포도당과 인슐린 수치의 변화 측정을 통해 이루어집니다. 고려해야 할 중요한 요소는 다음과 같습니다 T0 (포도당 주입의 끝), 처음 20 분에 빠른 포도당 통관의 기울기에서 파생 된 포도당 통관 율 K (T20에 T1), 시간과 관련하여 도달 피크 포도당과 인슐린 수준 포도당 기본으로 돌아가려면, 곡선 (AUC) 아래의 면적은.이 IVGTT 대책은 건강한 t에서 포도당 항상성 이동 등의 특성 변화를 보여줍니다OA 병에 걸린 대사 상태 5. 여기에서 우리는에서 인간 형 당뇨병 (T2D)의 가장 적절한 동물 모델과 IVGTT 이러한 동물의 임상 적 프로파일은 인간이 아닌 영장류 (히말라야와 시노 몰 거스 원숭이)의 특성을 설명하는 비만 dysmetabolic에 건강한 린, T2D와 상태 8, 10, 11.

도 1에 나타낸 결과는 30 분 IVGTT에 걸쳐 성숙 건강 및 당뇨병 사이 노몰 거스 원숭이에서 전형적인 포도당 및 인슐린 곡선 실증한다. 건강하고 고급 당뇨병 원숭이의 데이터는 신진 대사 특성의 범위의 양 극단에서 동물 사이의 명백한 차이점을 대비하기 위해 표시됩니다. 이 IVGTT 프로토콜은 비슷한 결과와 붉은 털 원숭이의 저자에 의해 성공적으로 사용되어왔다. 건강한 원숭이 (히말라야와 사이 노몰 거스)의 금식, 기준 혈당 값은 낮은 60-50로 밀리그램 / DL (8)이 될 수 있습니다. 그림에 나타낸 바와 같이, 초기 포도당 여행 - T3에서 측정 - 건강한 NHP에 대한 200 밀리그램 / DL을 초과 자주하는 당뇨병 동물에 대한 일반적인 기준 혈당 값의 높은 상승하지 않을 수 있습니다. 다음 서른의...

이 프로토콜의 목적은 인간이 아닌 영장류에서의 혈당 조절을 평가하고 dysmetabolic 건강한에서 대사 상태를 평가하기 위해 정맥 내 글루코스 내성 시험 (IVGTTs)를 수행하기위한 표준 방법을 제공하는 것이다.

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical ...

이 정맥 내 포도당 내성 검사(IVGTT)의 전반적인 목적은 마카크 원숭이의 대사성 질환이 건강한 상태에서 대사 이상 및 고혈당 상태로 진행되는 과정을 특성화하는 것입니다. 이 방법은 당뇨병의 인슐린 저항성에 대한 치료 효능의 식이요법 또는 약리학적 조사를 위해 대사 상태에 따라 층화된 피험자 코호트를 설정하는 데 사용될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다른 시간 소모적이고 비용이 많이 드는 기술들에 비해 수행하기 쉽다는 점입니다.절차를 시작하기 14~18시간 전에 마카크 원숭이의 케이지에서 먹이를 제거하여 식후 혈당 수치의 변동을 방지하십시오. 다음 날 아침, 진정된 동물의 체중을 측정합니다. 그 후 영장류를 가열된 시술 테이블 위에 측와위로 눕힙니다.15분에서 20분마다 펄스 옥시미터를 사용하여 심박수와 말초 모세혈관 산소 포화도를 측정하십시오. 스톱워치를 사용하여 호흡수를 측정하고, 체온계를 사용하여 직장 체온을 측정하십시오. 또한 매번 임상 파라미터를 확인할 때마다 잇몸과 입술 주변의 점막이 촉촉하고 분홍색인지 확인하십시오.동물의 기초 건강 상태를 확인한 후, 캐뉼라가 삽입될 부위의 털을 클리퍼로 제거하고, 클로르헥시딘과 70% 알코올을 교대로 사용하여 두 부위를 모두 멸균합니다. 삽입 부위 준비가 완료되면 첫 번째 캐뉼라를 삽입하고, 3방향 스톱콕을 이용해 루어를 헤파린 식염수 플러시와 연결합니다. 이곳이 혈액 채취를 위한 샘플링 부위가 됩니다.스톱콕을 다리에 테이프로 고정합니다. 카테터의 위치는 개통성 유지와 정확한 연속 혈액 채취를 위해 매우 중요합니다. 따라서 헤파린 희석액 플러시 인-락(flush in-lock) 시스템을 쉽게 고정하고 조작할 수 있도록 복제정맥의 내측 및 더 근위부 영역을 고려하는 것이 중요합니다.그 다음, 두 번째 카테터를 삽입하고 dextrose 주입을 위한 포트를 부착한 후, dextrose 주입 전까지 캐뉼라의 개통성을 유지하기 위해 heparinized saline 1 mL를 플러싱합니다. 포트를 팔에 테이프로 고정합니다. 두 카테터가 모두 삽입되면 기저치 샘플을 채취하고, 휴대용 혈당계를 사용하여 공복 혈당 수치를 측정합니다.표준 화학 분석을 위한 혈청 샘플과 동물의 전반적인 건강 상태를 평가하기 위한 전체 혈구 계산용 전혈 샘플을 확보하십시오. 전혈 샘플을 반전 혼합하십시오. 각 채혈 후, EDTA 튜브에 담긴 샘플을 프로테아제 억제제와 혼합하십시오.기초 샘플을 채취한 후, dextrose 주입 포트를 통해 50% dextrose 용량을 30초에 걸쳐 주입합니다. 그다음, 포트에 dextrose가 남지 않도록 5 mL의 헤파린 식염수로 플러싱합니다. 주입이 끝나면 장갑을 교체하십시오. 주입 시 남은 dextrose가 이후의 혈액 샘플을 오염시킬 수 있기 때문입니다.첫 번째 주입 후 샘플 채취 시점은 포도당 주입 종료 후 3분이며, 이어서 5, 7, 10, 15, 20분 및 마지막으로 30분에 샘플을 채취합니다. 채취 후 10분 이내에 포도당 및 인슐린 분석을 위한 샘플을 원심분리한 다음, 혈장 분액을 크라이오바이알에 나누어 담아 샘플의 후속 분석 시까지 -80 °C에서 냉동 보관합니다. 3분 시점의 샘플 채취 시에는 휴대용 혈당측정기를 사용하여 혈당 수치를 확인함으로써 포도당 주입 여부를 확인합니다.마지막 샘플 수집이 완료되면 캐뉼라를 제거하고, 지혈을 위해 카테터 삽입 부위를 압박하며 동물이 완전히 회복될 때까지 모니터링합니다. 여기 30분간의 IVGTT 과정 동안 성숙하고 건강한 게잡이원숭이와 당뇨병이 있는 게잡이원숭이에서 나타난 전형적인 포도당 및 인슐린 곡선이 제시되어 있습니다. 건강한 원숭이의 공복 기저 포도당 수치는 50 to 60 mg/dL까지 낮을 수 있으며, T 3분 시점에서 초기 혈장 포도당 수치의 급격한 상승이 관찰됩니다.이는 당뇨병 동물이 보이는 전형적인 혈장 포도당 급증보다 훨씬 낮은 수치입니다. 실험 과정 동안 건강한 동물의 포도당 수치는 종종 기저값으로 돌아오는 반면, 대사 이상 및 당뇨병 동물의 수치는 그렇지 않습니다. 건강한 동물의 동반 인슐린 곡선은 두 개의 정점을 보이는데, 이는 포도당 수송 및 흡수에 미치는 인슐린의 말초 효과가 정상보다 크게 작용하여 혈당이 초기에 빠르게 감소하는 것과 일치합니다.인슐린 반응의 첫 번째 단계에서조차 이러한 말초 효과의 크기는 간의 포도당 감소 기여도와 일치하지 않으며, 더 작지만 더 지속적인 두 번째 인슐린 피크 동안 간은 내인성 포도당 생성을 억제함으로써 혈당 수치에 가장 큰 영향을 미칩니다. 동물이 과도한 당뇨 상태가 되면, 덱스트로스 볼루스 투여에 반응하는 인슐린 생산량이 급격히 감소합니다. 이 경우 실험 과정 전반에 걸쳐 혈당 수치가 높은 상태로 유지됩니다.포도당과 마찬가지로, 이제 제거는 거의 전적으로 비인슐린 의존적 기전에 의해 매개됩니다. 이 절차 이후에, 인슐린 민감성에 관한 추가적인 질문에 답하기 위해 단계적 포도당 주입법이나 고인슐린혈증 정상혈당 클램프와 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 마카크 원숭이의 혈액에 노출된 바늘을 다루는 것은 B형 헤르페스 바이러스 노출 가능성으로 인해 매우 위험할 수 있음을 잊지 마십시오.이 절차를 수행하는 동안에는 적절한 개인 보호 장구를 착용하고, 날카로운 도구를 다룰 때 각별히 주의하는 등의 예방 조치를 항상 준수해야 합니다.

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인슈린 과다 - euglycemic 클램프, 또는 인슐린 클램프는 인슐린 행동을 평가하기위한 황금...

의식 억제 마우스에 인슈린 과다 - euglycemic 클램프

이 비디오는 실험실 마우스에서 경구 포도당 내성 검사를 수행하는 방법을 소개합니다.

구강 포도당 내성 검사(OGTT): 마우스의 포도당 대사 측정

현재 문서 생성 및 다이어트 유발 된 인슐린 저항 및 비만 모델 높은 지방 다이어트를 먹이 쥐의 대사 특성에 설명합니다. 그것은 더 상세한 프로토콜 경구 포도 당 내성 검사 및 포도 당 물질 대사에서 vivo에서의 전신 변경 모니터링 인슐린 내성 검사 수행을 갖추고 있습니다.

높은 지방 다이어트를 먹이 쥐 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)과 인슐린 내성 검사 (ITT)를 사용 하 여 포도 당 대사 Vivo에서 의 연구

비만의 발생률 상승 하 고 만성 폐 질환의 위험을 증가 시킵니다. 설정 기본 메커니즘 및 예방 전략, 잘 정의 된 동물 모델 필요 합니다. 여기, 우리는 세 가지 방법 (포도 당 내성 검사, 몸 plethysmography, 및 폐 고정) 쥐에서 폐 결과에 비만의 효과 연구를 제공 합니다.

복 포도 당 내성 검사, 폐 기능 측정 및 폐의 고정 비만 및 장애인된 대사 폐 결과에 미치는 영향 연구

이 프로토콜 신체 조성 분석기와 신체 구성 및 쥐에서 대사 매개 변수 특성을 대사 동물 모니터링 시스템의 사용을 설명 합니다. 고 지방 먹이로 유도 된 비만 모델은 이러한 기술의 응용 프로그램에 대 한 예제로 사용 됩니다.

신체 구성 및 높은 지방 연 준 쥐에서 대사 배우면 분석

현재 문서는 등칼로리 에 대한 자세한 프로토콜을 설명 2:1 간헐적 단식 보호하고 야생 형 및 ob / OB 마우스에서 비만 과 장애인 포도당 대사에 대해 치료.

쥐에서 등칼로리 2:1 간헐적 단식의 대사 효과의 평가

이 프로토콜은 비인간 영장류 췌도에서 산소 소비의 정확하고 재현 가능한 측정을 보여줍니다. 마이크로플레이트의 아일렛 로딩 기술과 코팅은 다른 유형의 배양된 스페로이드에서 호흡을 효율적으로 측정할 수 있는 프레임워크를 제공합니다.

비인간 영장류 췌장 췌도 산소 소비 분석

이 연구는 다낭성 난소 증후군 마우스 모델에서 간 포도당 생산의 직접적인 측정을 설명하며, 꼬리 정맥을 통해 안정적인 동위 원소 포도당 추적자를 사용하여 단식과 포도당이 풍부한 상태 모두에서 함께 한다.

다낭성 난소 증후군 마우스 모형에 있는 간 포도당 생산의 평가

여기에서 우리는 갈색 지방 조직(BAT) 활동이 인간 대사에 미치는 영향의 생리학적 중요성을 정량화하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이것은 탄수화물 부하와 간접 열량계를 쇄골 상 온도 변화의 측정과 결합하여 달성됩니다. 이 새로운 접근법은 인간의 BAT 열 발생에 대한 약리학적 표적을 개발하는 데 도움이 될 수 있습니다.

간접 열량계, 적외선 체온 측정 및 혈당 수치의 조합을 사용하여 인간의 갈색 지방 조직 열 발생을 측정합니다.

청각 및 듣기 능력에 기여인지 능력에 대한 심층 평가를 수행하기위한 테스트 배터리 (IMAP)가 설명되어 있습니다. 그것은 어린이 친화적이고 언어 confounds에서 무료로 관리를 신속하게합니다. 자극 생성 및 프로토콜 관리 절차를 복제할 수 있도록 소프트웨어 플랫폼 (IHR - STAR)를 통해 제어됩니다.

IMAP 테스트 배터리 : 듣기의 감각을 만들기

배우세요 비인간 영장류에서 정맥 당부하 검사를 수행하는 방법으로, 마카크의 대사 질환 진행 과정을 특성화하고 당뇨병 및 인슐린 저항성 연구에 활용할 수 있습니다.

정맥 당부 하 검사와 비인간 영장류의 대사 상태의 특성

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