Name: 정상 체온 전의 VIVO 신장의 보존을위한 신장 관류는 이식 전에 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: 학습하세요 정상 체온 체외 신장 관류(NEVKP)를 이용한 이식 전 신장 이식편 보존 기법을. 이 방법은 냉 허혈 손상을 피하고 생리학적 조건을 유지하여 한계 이식편의 생존율을 향상시킵니다.

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우리는 사용자 정의 만든 신장 관류 회로와 함께 우리를 제공하는 소린 그룹 (밀라노, 이탈리아)에 감사드립니다. 또한 우리는 스틴 솔루션, BBraun AG 주사기 펌프 공​​급 (Melsungen, 독일), 및 RIEBER GmbH의 &amp; Co KG에 (로 이틀 링겐, 독일)와 함께 우리를 제공 XVIVO 관류 주식 회사 (예테보리, 스웨덴) 감사합니다.

참고 : 연구 프로토콜의 개략도는 그림 1에 제시되어있다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig1.jpg" /> 그림 1. 연구 프로토콜. 정상 체온 생체 신장 관류의이 연구 프로토콜은 돼지 모델을 기반으로합니다. 수술 신장 이식의 혈관의 해부 및 히스티딘 트립토판 - 케 토글 루타 레이트 500 ㎖ (HTK)로 세척 한 후, 이식을 검색 할 수 있습니다. 3 시간 동안 냉장 (SCS) 후, 신장 이식은 지정된 이식까지 여러 시간 동안 정상 체온 생체 (NEVKP)를 관류한다. 모든 동물은, &#39;국립 보건원 (National Institutes of Health)에 의해 출판&#39;실험 동물의 관리에 대한 가이드 &#39;의료 연구&#39;에 대한 국가 사회에 의해 공식화 &#39;&#39;실험 동물 관리의 원칙 &#39;을 준수 인도적인 치료를받은온타리오, 캐나다. 토론토 일반 연구소의 동물 관리위원회는 모든 연구를 승인했다. 1. 동물 <ol><li> 이 프로토콜에서 - (33 킬로그램 27) 남성 요크셔 돼지를 사용합니다. </li></ol> 2. 장기 검색 <ol><li> 수술 전 절차 <ol><li> 하우스 적어도 1 주간의 연구 시설에서 남성 요크 피그 스트레스 레벨을 감소시킨다. 마취 유도 전에 6 시간의 최소 돼지를 빠르게. </li><li> 케타민 (25 ㎎ / ㎏), 아트로핀 (0.04 ㎎ / ㎏)과 미다 졸람 (0.15 ㎎ / ㎏)의 근육 내 주사하여 돼지의 마취를 시작합니다. 이어서, 수술실 (OR)에 하우징 동물 시설에서 전송. </li><li> 또는 테이블에 앙와위에서 돼지를 놓습니다. 이 자발적으로 이소 플루 란의 5 % 산소의 2 패를 흡입 할 수 있습니다. 휴식 후 후두경으로 성대를 노출하고 삽관 의한 경련을 방지 할 2 % 리도카인 스프레이로. AF공기 5 ml의 - 6.5 mm의 튜브 터 삽관은 3 커프를 차단합니다. 참고 : Capnometry은 기관 튜브의 정확한 위치를 알 수있다. </li><li> 2.5 %로 이소 플루 란 가스를 낮 춥니 다. 16 호흡 / 분, 10 호흡량 - - 15 ㎖ / ㎏ 체중 (14)에 인공 호흡기를 설정합니다. 밀접하게 돼지를 모니터링합니다. 심박수 산소 포화도는 펄스 oxymetry 의해 기록된다. </li><li> 무균 조건에서 8.5 천을 소개 Seldinger 기술 (13)의 경정맥에 X 10cm 카테터. 따라서, 정맥 혈관에 구멍에 바늘을 사용합니다. 와이어를 도입 한 후, 카테터와 바늘을 교체합니다. 와이어를 제거하고 피부에 카테터를 고정합니다. 수술을 통해 시간당 링거 락 테이트 용액 200 ㎖를 관리. </li></ol></li><li> 수술 <ol><li> 소독 및 수술 분야의 적용 범위에 따라, 치골에 xyphoid에서 중간 선 절개를 수행합니다. 노출을 개선하기 위해, 수술 방법과 확장왼쪽 측면 절개. 수건 크고 작은 창자를 덮고 오른쪽 신장에 최적의 액세스를 위해 좌측에 위치. </li><li> 복부 대동맥에서 하대 정맥 (IVC)를 분리합니다. 대동맥의 뒷면에서 결찰 대동맥 가지. </li><li> 뒷면에 전체 대동맥 박리 한 후, 신장 지점에 대동맥 두개골 주위에 합자를 전달합니다. 또한, 장골 분기의 두개골이 합자를 배치합니다. 왼쪽 신장 동맥 주위에 넥타이를 놓습니다. </li><li> 그것의 부착 조직에서 오른쪽 신장을 무료로 제공됩니다. 신장 정맥, 동맥 및 요관을 해부하다. </li><li> 다이어프램을 열고 마음에 KG 기증자 중량 당 1,000 IU의 헤파린을 관리 할 수​​ 있습니다. DCD 모델의 경우, 심장 마비를 유도하기 위해 intracardially 3 분 전신 헤파린 후 KCl을 40 mval를 주입. 심정지 따뜻한 허혈 출발점으로 평가된다. </li><li> 한편, 혈액의 수집, CPDA 가방 (구연산, 인산, 덱 스트로스,의 선을 연결denosine) 왼쪽 상단 경정맥에 도입 된 카테터에. 부드러운 스핀 (브레이크없이 1,500 XG)를 수행합니다. 플라즈마 멸균 상태에서 버피 코트 (바이오 안전성 캐비닛 클래스 II)를 제거하고 수혈을 위해 적혈구를 저장합니다. </li><li> 장골 분기 이상 장기 플러시 라인 대동맥을 Cannulate. 대동맥과 왼쪽 신장 동맥에 합자를 묶어. </li><li> 100cm의 H 2 O의 압력 히스티딘 트립토판 - 케 토글 루타 레이트 (HTK) 용액으로 신장 플러시 흉부 맥을 클램프 및 경정맥 카테터를 통해 혈액을 수집합니다. 신장의 최적의 높이를 확보하기 위해 신장 정맥 아래 복부 정맥을 잘라. </li><li> 오른쪽 신장의 완전한 세척 한 후, 대동맥의 세그먼트와 이식을 검색 할 수 있습니다. 신장 정맥을 잘라 긴 요관을 둡니다. </li></ol></li><li> 관류에 대한 신장 이식의 위로 표 준비 <ol><li> 부착 조직의 신장을 무료로 제공됩니다. 넥타이와 대동맥의 두개골 일부를 닫습니다ND 1/4 &quot;X 3/8&quot;감속기와 하부를 cannulate. 대동맥에서 오는 작은 동맥의 가지를 묶어. </li><li> 직접 1/4 &quot;X 3/8&quot;감속기와 신장 정맥을 Cannulate. 8 천을와 요관을 삽관 튜브를 공급. </li><li> NEVKP의 시작 때까지 얼음에 신장을 놓습니다. </li></ol></li></ol> 3. 정상 체온 예 생체 신장 관류 (NEVKP) <ol><li> 관류 회로의 제조 관류 회로는 신생아 심폐 바이 패스 장치 (그림 2)로 구성되어 있습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig2.jpg" /> 관류 회로 그림 2. 개략도.이 회로는 신생아 심폐 바이 패스 기술로 구성되어 있습니다. 관류 액 혈조에서 수집된다. 원심 펌프는 산소가 풍부하고 37 ℃로 가온 형산으로 솔루션을 추진한다. PA 후신장에 신동맥 통해 80 mmHg로 - 동맥 거품 필터 ssing, 관류 60의 압력으로 구동된다. 정맥 유출 (0-3 mmHg로)는 혈조로 다시 관류을 이끌고 있습니다. 주사기와 주입 펌프는 추가 화합물과 공급을 확보. 소변은 관류를 통해 수집된다. 관류 회로 특성이 연속적으로 기록된다. 시간별 정맥 및 동맥 혈액 가스 샘플 및 신장 손상의 마커 분석된다. <ol> <li> 신장 관류 장치에 사용자 정의 만든 관류 회로를 연결합니다. </li><li> 저혈과 형산에 튜브를 연결합니다. 형산의 동맥 유출에 동맥 라인 튜브를 연결하고 홀더의 거품 필터를 배치합니다. 퍼지 라인을 연결합니다. 정맥 저수지의 입구에 정맥 라인 튜브를 연결합니다. </li><li> 재관류 동안 평가, 동맥 콘센트 온도 프로브를 연결 유량계 및 BU를 연결bble 동맥 라인 배관에 센서 및 압력 라인을 연결한다. 레벨 센서를 연결합니다. </li><li> 정맥 및 동맥 샘플 포트에 정맥과 동맥 샘플 라인을 연결합니다. </li><li> 스탠드에 장기 챔버를 놓고 준비된 구멍을 통해 정맥과 동맥 튜브를 소개합니다. 단단히 테이블과 챔버에 튜브를 고정합니다. </li><li> 롤러 펌프로 흡입 튜브를 삽입하고 유체를 수집하기 위해 챔버로 한쪽 끝을 배치합니다. </li><li> 95 % O 2 / 5 % CO 2 및 형산 함유 가스 탱크에 산소 호스를 연결한다. 형산 및 장기 챔버 가열 유닛 튜브를 연결한다. </li><li> 사용 튜브는 정맥과 동맥 유출 라인을 닫습니다 클램프. 정맥 저수지의 유출에 다른 튜브 클램프를 적용합니다. </li></ol></li><li> 관류 용액의 조제, 별도의 보충 및 회로를 프라이밍 <ol><li> 와 소변 생산을 대체 한 주입 펌프를 사용하여링거 락 테이트. </li><li> 혈조로 인슐린 (5 IU / 시간) (0.5 ㎖ / 시간, 아미노산 0.5 ㎖ / 시간 포도당) 영양을 관리하는 하나의 주사기 펌프를 사용합니다. 직접 동맥 라인에 혈관 확장제 (베라파밀, 0.25 밀리그램 / 시간)을 주입하는 제 주사기 펌프를 활용한다. </li><li> 관류 용액으로 정맥 저수지를 입력합니다. 따라서, 링거 락 테이트 (175 ㎖)로 혈조 STEEN 용액 (200 ㎖), DRO (27 ㎖), 헤파린 (1000 IU), pH를 조절하기 위해 중탄산 나트륨, 칼슘 글루코 네이트를 붓는다. 마지막으로, 세척 적혈구 (125 ml)에 추가합니다. </li><li> 심장 폐 기계 (HLM)에 전환합니다. 압력, 온도 레벨, 및 버블 센서 패널을 활성화. 관류에 걸쳐 데이터를 기록하는 데이터 관리 시스템 (DMS)를 활성화. 관류 용액을 37 ° C로 장​​기 챔버를 예열하는 가열 수단을 활성화. O 2 공급을 엽니 다. </li><li> 저혈 뒤에 튜브 클램프를 열고 centrifug 무료완전히 공기에서 알 펌프 헤드. 1,000 rpm으로 원심 펌프를 시작하고 용액 회로 통하여 추진 될 수 있도록. 동맥 필터를 우회 튜브를 클램프 및 동맥 필터에서 공기를 놓습니다. </li><li> 압력 라인을 제로. 주사기와 주입 펌프를 활성화합니다. </li></ol></li><li> 신장 이식 관류 <ol><li> 얼음에서 신장을 제거하고 장기 실에서 침대에 신장을 배치합니다. 소변 수집기에 소변 카테터를 놓습니다. 정맥 및 동맥 튜브 공기 없는지 확인한 후, 튜브에 커넥터를 연결합니다. </li><li> 동맥과 정맥 튜브 라인의 바로 가기를 닫습니다. 원심 펌프의 속도를 조절함으로써 75 mmHg의 동맥에 압력을 설정한다. </li><li> 기록 압력, 동맥 흐름, 온도 및 DMS와 지속적으로 거품의 존재. 관류에 걸쳐 신중하게 값을 준수하십시오. 재관류 동안 챔버 내로 혈액 누출이 이거는다시 저혈에 흡입 튜브를 통해 cted. </li><li> 생성 된 소변의 양을 기록한다. 시간마다 정맥 혈액과 소변 샘플을 수집합니다. 정맥 및 동맥 혈액 가스 샘플 및 아스 파르 테이트 아미노 전이 효소 (AST) 및 젖산 분석을 취함으로써 관류를 모니터링합니다. </li><li> 관류의 끝에서, 신장 동맥에서 튜브를 분리하고 정맥, 차가운 HTK와 이식을 세척하고, 이식까지 멸균 기관 가방에 얼음에 보관합니다. </li></ol></li></ol>

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본 연구는 적혈구 계 용액 NEVKP이 돼지 모델에서 오랜 시간 동안 우수한 결과로 수행 될 수 있다는 것을 보여준다. 10 시간 생체 관류하는 동안 신장 안정 관류 매개 변수, 활성 신장 대사, 항상성, 최소한의 신 손상을 보여 주었다. 소변 생산 및 신장 손상은 관류 액의 조성에 의존한다. 이것은 생리 학적 범위 내 oncotic 압력 관류의 삼투압을 유지하는 것이 중요하다. 특히, 낮은 oncotic 압력이 크게 신장 부종과 신장 손상의 증가 마커 비 생리 학적으로 높은 소변 생산 발생합니다. STEEN 용액 함유 알부민 oncotic 압력을 조절하고, 신장에 대한 생리 학적 조건을 시뮬레이션 모델이 선택된다. 탄산 수소 나트륨 수용액 및 글루 콘산 칼슘 pH가 생리적 값을 달성하기 위해 시스템에 추가되고, HCO 3 </suB&gt;, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 및 염화. 혈관 확장제의 선택 및 투여 량은 충분한 혈액 순환과 산소 공급을 확보하는 것이 중요하다. 정상 체온 생체 신장 관류의 기술은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 예 생체 관류 부정적인 이상 관류 기간에 영향을 미칠 수있는 신장의 호르몬 지원과 연결되어 있지 않습니다. 또한, 새로운 기술은 현 시점에서, 비용 증가와 연관된다. 미래 향상 기술을 단순화하고 비용을 절감 할 수있다. 휴대용 신장 관류 장치의 개발은 완전히 앞으로 감기 신장 저장을 방지 할 수 있습니다. 심각하고 지속 장기 부족 한계 기관 (ECD 또는 DCD 신장 이식) (7)의 사용 증가로 이어집니다. 현재, 장기 보존 정적 냉장 또는 저체온 기계 관류를 기반으로합니다. 오랜 감기 허혈성 시간은 중요한 꼬마 도깨비가 기본표준 기준 15 한계 이식 8,9의 신장 기능의 결과에 행위, 냉장 보관을 최소화하는 새로운 보존 기술은 특히 관심을 16-19의이다. 주요 장애물은 더욱 광범위 한계 이식편을 사용하여 이식하기 전에 장기의 품질과 생존력을 평가하기 없다는 것이다. 현재와​​ 같은 기증자의 나이, 기증자 관련 질환 및 이식의 따뜻한 허혈 시간으로 만 임상 매개 변수는 장기 허용 또는 이식 거부 여부를 결정하는 데 사용됩니다. 정상 체온 조건 하에서 이식편을 보존함으로써, 그래프트 평가 관류 특성에 기초하여, 데이터가있다. 이러한 신장 혈관 유량, 압력, 신장 내 저항, 소변 생산, 산소 소비 (예 AST 및 락 테이트 등), 신장 손상 파라미터 같은 실시간 파라미터 그래프트의 가능성을 평가하는 유용한 변수로 가정된다. 되어온에서이온은 NEVKP 동안 활성 대사는 이전에 이식에 한계 신장 이식을 개선하기 위해 복구 전략의 적용을 할 수 있습니다. 예를 들어, 염증성 경로, 면역 조절, 유전자 전사뿐만 아니라 줄기 세포의 투여 억제는 보존 시간 동안 신장 이식을 수정받는 결과를 개선하기위한 미래 기술 될 수있다.

신장은 자주 장기 이식 고체이다. 투석 1-4에 비해 말기 신장 질환을 앓고있는 환자의 경우, 신장 이식 더 수명, 및 삶의 질 개선을 제공한다. 장기 지속성 부족 이식 의학 (표 1) (5)의 필드에 심각한 문제를 나타낸다. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> 미국 * </td><td> Eurotransplant 지역 ** </td></tr><tr><td> 신장 이식 대기자 명단에 환자 </td><td> 101,563 (2 월 2015) </td><td> 10,689 (12 월 2014) </td></tr><tr><td> 사망 한 기증자의 신장은 2014 년에 이식 </td><td> 10,650 </td><td> 3119 </td></tr><tr><td> 중간 (년) 사망 한 기증자 신장 이식에 대기 시간 </td><td> 최대 5 년 * </td><td> 사년까지 ** </td></tr></tbody></table> 표 1. 신장미국과 Eurotransplant 지역에 이식 부족. 신장 이식의 결과가 부정적으로 연장 6 실시 투석 환자에서 불량한 결과로, 대기 시간에 의해 영향을 받는다. 이는 같은 심장 죽음 (DCD) 후 기부 오래된 기증자로부터 신장, 여러 동반 질환을 가진 기증자 (확장 기준 기증자 (ECD), 신장 등의 추가 기증자 소스로 한계 신장 이식에 대한 관심을 촉발시키고있다.했을 한계 기증자의 신장을 과거에 거절 이제 이식 7 간주됩니다. 한계 신장 이식의 사용을위한 주요 장애물은 감기 무산소 저장 보존 기술이다. 현재 신장 이식 얼음에 정적으로 저장 또는 산소없이 4 ° C에서 관류한다. 감기 무산소 보존 기술은 신장 동안 계속 보존 그래프트 부상과 관련된 때문에 metab의 부족 그래프트 평가를 허용하지 않는다체학 소변 생산. 특히, 한계 신장 이식은 크게 신장 손상의 결과로, 제대로 냉장 보관을 허용, 지연 이식 함수 (DGF) 8,9의 높은 비율. DGF 불량 장기 이식 기능 예후 인자이다. 체외 신장 관류는 장기의 보존, 평가 및 수리를 위해 다른 방법을 나타냅니다. 돼지 모델에서 유익한 결과는 정상 체온 조건 10, 11에서 생체 신장 관류 제시했다. 확장 된 기준 기증자에서 검색 신장이 이식 (12) 직전 1 시간 동안 관류 때 2013 년에 수행 한 최초의 임상 시험이 지연 이식 기능의 낮은 비율을 보여 주었다. 이 논문은 정상 체온 생체 신장 관류 (NEVKP)의 모델을 제시한다. 본 연구의 목표는 최소로인가 냉 허혈 시간을 줄이고 NEVKP의 기간을 연장하는 것이다. NEVKP냉장 기술들에 의해 야기 될 수있는 손상을 감소시키는 것을 목표로 대체 보존 방법이다.

<table><tbody><tr><td>신생아 심폐 우회 기술</td><td>SORIN GROUP Canada Inc (Markham, Canada)맞춤형</td><td></td> <td>신생아 정맥 저장소 D100 (500 ml, 1/16" 유입 및 유출), 신생아 산소 공급기 D100, 원심 펌프 헤드 (Revolution), 동맥 버블 필터 (D130)</td></tr><tr><td>심장 폐 기계, St&ouml; ckert S3</td><td>SORIN GROUP Canada Inc (Markham, Canada)</td><td>맞춤형</td><td>원심 펌프, 롤러 펌프, 제어 패널(압력, 유량, 온도, 기포 및 레벨 센서), 산소 믹서기, 히터 장치</td></tr><tr><td>Tubing</td><td>SORIN GROUP Canada Inc (Markham, Canada)</td><td>01906BPC SG XS</td><td>3/16" x 1/16"</td></tr><tr><td></td><td></td><td>019071PC SG XS</td><td>1/4" x 1/16"</td></tr><tr><td></td><td></td><td>019060PC SG XH</td><td>3/8" x 1/16"</td></tr><tr><td>튜빙 커넥터</td><td>SORIN GROUP Canada Inc (Markham, Canada)</td><td></td><td>다양한 크기의</td></tr><tr><td>STEEN 솔루션</td><td>XVIVO (G&ouml; teborg, SWE)</td><td>19004</td><td>200 ml</td></tr><tr><td>Ringer's lactate</td><td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td><td>JB2324</td><td>175 ml</td></tr><tr><td>Sodium</td><td>bicarbonate Hospira (Montr&eacute; al, QC, CAN)6625050</td><td></td> <td>pH 의존성</td></tr><tr><td>글루콘산 칼슘</td> 제약 <td>파트너(온타리오주 리치몬드 힐)</td><td>C31110</td><td>칼슘 의존성</td></tr><tr><td>헤파린</td><td>Sandoz Canada Inc(토론토, 온타리오, 캐나다)</td><td>10750</td><td>1,000 IU</td></tr><tr><td>아미노산 및 포도당, Travasol 10%</td><td>Baxter(Mississauga, ON, CAN)</td><td>JB6760</td><td>1ml/hr</td></tr><tr><td>속효성 인슐린, Novorapid</td><td>Novo Nordisk Canada Inc(미시소거, 온타리오, CAN)</td><td>DS6H748</td><td>5 IE/hr</td></tr><tr><td>Verapamil</td><td>Sandoz Canada Inc(퀘벡, QC, CAN)</td><td>52216</td><td>0.25 mg/hr</td></tr></tbody></table>

정상 체온<em&gt; 전의 vivo</em&gt; 신장의 보존을위한 신장 관류는 이식 전에 이식

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

신장 이식은 말기 신부전 환자를 위한 잘 확립된 치료 옵션이 되었습니다. 지속되고 있는 장기 부족 현상은 여전히 심각한 문제로 남아 있다. 따라서 장기 기증자에 대한 수용 기준이 확대되어 한계 신장 이식편이 사용되게 되었습니다. 이러한 가장자리 장기는 냉장 보관을 잘 견디지 못하여 보존 손상이 증가하고 이식 기능이 지연되는 비율이 높아집니다. 냉장 보관의 한계를 극복하기 위해 광범위한 연구가 대체 정상 보온 보존 방법에 초점을 맞추고 있습니다.
Ex vivo 정상열 장기 관류는 혁신적인 보존 기술입니다. 체외 폐, 간 및 신장 관류에 대한 첫 번째 실험 및 임상 시험에서 유리한 결과가 나타났습니다.
한허혈성 손상의 감소와 더불어, 정상온열 신장 보관 방법은 장기 평가 및 복구의 기회를 제공합니다. 이 원고는 돼지 모델에서 신장 적출, 장기 보존 기술 및 분리된 체외 정상온열 신장 관류(NEVKP)에 대한 정보를 제공합니다. 관류 용액 및 회로에 대한 수술 기술, 잠재적 평가 옵션 및 대표 결과가 시연됩니다.

심장 박동 신장 검색의 모델을 사용하여 여섯 실험의 결과를 다음에 나타낸다. 현장 플러시 및 신장에 검색 한 후, 이식은 적혈구가 준비하는 동안 3 시간 (SCS) 얼음에 보관 하였다. 임상 환경의 경우, 이것은 검색 및 백 테이블 작성에 필요한 시간을 시뮬레이션한다. NEVKP 10 시간 동안 수행 하였다. 생리적 조건을 유지하고 생체 신장을 위해 주변을 시뮬레이트하도록, 장기 챔버 가열 밀봉한다. 관류 소변 여분의 용액을 혈액 가스 분석 oncotic 압력 및 삼투압 생리 값을 표현한다. 현장에서 요크셔 돼지에서 얻은 정상 값 (기본 값), 각각의 그림 설명에있는 각각 (- 13 3도). NEVKP의 목적은 그래프트가 충분한 영양과 산소가 공급되는 것을 보장하는 것이다. 허혈 CA로따라서, 신장 내 저항을 증가 안정된 압력으로 일정한 흐름을 달성, 혈관 수축을 사용하는 것은 적절한 산소에 대한 좋은 지표이다. 37 ° C의 목표 그래프트 온도 SCS 후 장기 재가 온을 통해 도달 된 후, 흐름 값 및 신장 내 저항이 전체 관류에 걸쳐 약 60 ~ 80 mmHg의 일정한 생리 압력을 안정적으로 유지 (도 3 및도 4). 소변 생산 수량이 관류 액 (도 5)의 조성물에 주로 의존한다. 정맥 및 동맥 PO 2의 시간별 측정은 신장의 신진 대사 활동을 알 수있다. (도 6) 14 - 산소 소비는 식 (PO 2 VEN) × 유량 / 중량 (PO 2 기술)을 사용하여 계산 하였다. 재관류 동안의 pH, HCO 3, 전해질은 개입 (- 10도 7)를 필요로하지 않고 안정하다. 같은 실시간T 및 락트산 측정은 세포 손상을 감시하는 역할을한다. 세포 손상의 파라미터의 어떠한 증가 NEVKP 기간 (도 11 및 12) 중 검출되지 않는다. 관류 용액의 삼투압은 안정 (도 13)이다. 조직 학적 평가는 사소한 변경 (- 16 그림 14)를 보여준다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig3.jpg" /> 표준 편차 (㎖ / 분)와도 3의 평균 동맥 흐름. 통하여 관류 흐름은 생리 학적 범위 내에서 유지된다. 현장에서 측정 된 돼지의 생리적 값은 : 예술을 의미한다. 유량 : 170 ± 57 ml / 분 (범위 83-325 ml / 분). <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig4.jpg" /> 그림 4. 신장 내 저항 (IRR), 평균과 표준 편차 (mmHg로 / </strong&gt; ㎖ / 분). 평균 동맥압 (MAP)의 60 및 80 mmHg의 사이에서 일정하게 유지된다. 신장 내 저항 끊임없이 / ㎖ / 분, 0.5 mmHg로 낮다. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig5.jpg" /> 도 5 총 배뇨량은 평균과 표준 편차 (㎖). 총 배뇨량 주로 관류 액의 조성에 따라 달라진다. 소변 생산 낮은 oncotic 압력 및 높은 삼투압. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig6.jpg" /> 도 6 산소 소비량, 평균 및 표준 편차 (ml / 분 / g). <img alt="그림 7" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig7.jpg" /> 그림 7. 산도 정맥, 평균과 표준 편차. 산도 REMA중탄산염의 관리없이 생리적 범위 인 정수입니다. 현장에서 측정 된 돼지의 생리적 값 : pH가 7.46 ± 0.06 (범위 7.34-7.63). <img alt="그림 8" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig8.jpg" /> 그림 8. HCO 3 정맥, 평균과 표준 편차 (밀리몰 / L)을. HCO 3 중탄산염의 관리없이 생리적 범위에 남아 있습니다. 현장에서 측정 된 돼지의 생리적 값 : HCO 3 30.3 ± 2.4 밀리몰 / L (범위 21.6-35.8 밀리몰 / L). <img alt="그림 9" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig9.jpg" /> 그림 9. 정맥 나트륨 농도, 평균과 표준 편차 (밀리몰 / L)을. 나트륨은 생리 학적 범위에 남아 있습니다. 현장에서 측정 된 돼지의 생리적 값 : 137.1 &amp;# 177; 3.8 밀리몰 / L (범위 : 118.7-140.9 밀리몰 / L). <img alt="그림 10" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig10.jpg" /> 그림 10. 정맥 칼륨 농도, 평균과 표준 편차 (밀리몰 / L)을. 칼륨은 생리적 범위 내에서 일정하게 유지된다. 현장에서 측정 된 돼지의 생리적 값 : 3.85 ± 0.46 밀리몰 / L (범위 3.5-5.36 밀리몰 / L). <img alt="그림 11" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig11.jpg" /> 그림 11. 정맥 아스 파르 테이트 아미노 전이 효소, 평균과 표준 편차. (AST, U / L)을 생체 정상 체온 신장 관류에서, AST는 세포 손상 마커를 보여줍니다. AST 값은 관류를 통해 낮다. <img alt="그림 12" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig12.jpg" /> 그림 12 : 젖산<html> , 평균과 표준 편차 (밀리몰 / L)을. 생체 정상 체온 신장 관류에서, 젖산은 세포 손상 마커를 나타냅니다. 값은 재관류 걸쳐 안정하다. <img alt="그림 13" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig13.jpg" /> 그림 13 :. 혈청의 삼투압, 평균과 표준 편차 (mosm / L) 관류 액에 일정한 삼투압이 낮은하지만 일정한 소변 생산을 보호합니다. 현장에서 측정 된 돼지의 생리적 값 : 282 ± 1.7 mosm / L (범위 279-283 mosm / L). <img alt="그림 14" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig14.jpg" /> 그림 14 :. 조직학 (H &amp; E) 가벼운 관의 공포 화를 보여주는 피질 접합의 50X / 200X 확대. 괴사의 흔적은 없습니다.arget = &quot;_ 빈&quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 15" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig15.jpg" /> 그림 15 : 조직학 (PAS) 가벼운 관의 공포 화를 보여주는 피질 접합의 50X / 200X 확대.. 괴사의 흔적은. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig15large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하여 주시기 바랍니다.</a> <img alt="그림 16" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig16.jpg" /> 그림 16 :. 조직학 (TUNEL 염색) 25X / 200X 확대. 아주 가끔 핵이 세포 사멸의 매우 낮은 비율을 보여 스테인드있다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig16large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

심각한 장기 부족 이식 한계 신장 이식의 사용 증가 가져왔다. 한계 이식, 특히 가난하게 냉장 보관을 허용하기 때문에 이것은 다른 저장 방법에 대한 관심을 촉발했다. 정상 체온 생체 신장 관류의 기술 (NEVKP)는 이전의 이식 신장 이식을위한 새로운 보존 방법을 나타냅니다.

정상 체온<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 신장의 보존을위한 신장 관류는 이식 전에 이식

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

본 절차의 전반적인 목적은 이식 전 ex vivo 상태에서 정상 체온의 생리학적 조건 하에 신장 이식편을 보존하는 것입니다. 이는 먼저 공여자 신장의 신혈관을 캐뉼레이션함으로써 수행됩니다. 그 후 이식편을 회로에 연결하고 정상 체온 조건에서 관류시킵니다.최종적으로, 이식에 적합한 이식편인지 결정하기 위해 신장의 손상 기능 파라미터와 조직학적 상태를 모니터링합니다. 저온 저장이나 저온 기계 관류와 같은 기존 보존 방법과 비교하여 이 기술의 주요 장점은, 정상 온도 XVE 관류가 이식 전 표준 또는 확장 기준 기증자 이식편의 냉성 허혈성 손상을 방지한다는 점입니다. 공여자의 대동맥과 대정맥을 완전히 박리한 후, 신동맥 분지보다 머리 쪽의 대동맥 주위에 결찰사를 통과시키고, 이어서 장골 분지보다 머리 쪽에 두 개의 결찰사를 배치합니다.장골 분지 상단 원위부의 하대정맥 주변을 결찰하고, 왼쪽 신동맥 주위를 묶습니다. 그런 다음 오른쪽 신장을 유착 조직으로부터 분리하고 신정맥, 신동맥 및 요관을 박리합니다. 다음으로 횡격막을 절개하고 공여체 체중 kg당 1000 international units의 헤파린을 심장 내로 투여합니다.혈액을 수집하기 위해 CPDA 백의 라인을 왼쪽 상경정맥 카테터에 연결합니다. 왼쪽 신동맥, 대동맥 및 대정맥에 결찰사를 묶고, 세척을 위해 장골 분지 상단에 대동맥 캐뉼라를 배치합니다. 최적의 세척을 위해 신정맥 아래의 복부 대정맥을 절단하고, 100 centimeters H2O의 압력으로 HTK 용액을 사용하여 즉시 신장을 세척합니다.흉강 정맥을 동시에 클램핑하고 경정맥 카테터를 통해 혈액을 수집합니다. 신장이 완전히 세척되면, 신정맥을 절단하고 요관을 길게 남겨둔 상태에서 대동맥 분절과 함께 이식편을 회수합니다. 그런 다음 대동맥의 두측 끝을 결찰하여 닫고, 하단 끝에 1/4인치 x 3/8인치 리듀서를 사용하여 캐뉼라를 삽입합니다.그런 다음 1/4인치 x 3/8인치 리듀서를 사용하여 신정맥에 직접 캐뉼라를 삽입합니다. 8 French 급식관을 요관에 삽입하고 신장을 얼음 위에 놓습니다. 관류를 시작하기 전, 맞춤 제작된 관류 회로를 신장 관류 장치에 연결합니다.다음으로, 장기 챔버를 스탠드 위에 배치하고 준비된 구멍을 통해 정맥 및 동맥 튜브를 삽입합니다. 튜브를 고정한 후, 흡입 튜브를 정맥 저장소에 연결하고 반대쪽 끝을 챔버 내에 배치하여 누출되는 관류액을 수집합니다. 튜브 클램프를 사용하여 정맥 및 동맥 유출 라인과 정맥 저장소의 유출구를 닫습니다.인퓨전 펌프를 사용하여 생성된 소변을 링거 젖산 용액(ringers lactate solution)으로 대체하십시오. 관류 과정 전반에 걸쳐 소변 생성량에 따라, 하나의 시린지 펌프를 사용하여 정맥 저장조에 영양분과 인슐린을 투여하고, 다른 펌프를 사용하여 동맥 라인에 혈관 확장제를 직접 주입하십시오. 이때 정맥 저장조를 관류액으로 함께 채우십시오.그 다음 회로를 프라이밍하기 위해 인공심폐기를 켜고 압력, 온도 레벨 및 기포 센서 패널을 활성화합니다. 관류 및 가열 장치 전반에 걸쳐 데이터를 기록할 수 있도록 데이터 관리 시스템을 활성화합니다. 관류액과 장기 챔버를 37 °C로 가온합니다.산소 공급 장치와 정맥 저류조 뒤쪽의 튜브 클램프를 열어 원심 펌프 헤드에서 공기를 완전히 제거하십시오. 그다음 원심 펌프를 1000 rpm으로 가동하여 회로 전체에 용액을 순환시키십시오. 튜브를 클램핑하고 동맥 필터를 우회시켜 동맥 필터 내의 공기를 배출하십시오.마지막으로 세척된 적혈구 125 milliliters에서 압력 라인을 영점 조절하고, 회로 프라이밍이 완료되면 시린지와 주입 펌프를 작동시킵니다. 신장을 얼음에서 장기 챔버의 베딩으로 옮기고 요도 카테터를 소변 수집기에 배치합니다. 정맥 및 동맥 튜브에 공기가 없는지 확인한 후, 커넥터를 튜브에 연결합니다.그 다음 동맥 및 정맥 튜브 라인 사이의 단락(shortcut)을 닫고, 동맥압을 75 mmHg로 설정하십시오. 데이터 관리 시스템을 사용하여 동맥압, 혈류량, 온도 및 기포 발생 여부를 지속적으로 기록하며, 관류 과정 전반에 걸쳐 해당 값들을 주의 깊게 관찰하십시오. 생성된 소변량을 기록하고, 관류 중 장기의 기능을 모니터링하기 위해 매시간 정맥혈과 소변 샘플을 수집하십시오. 아울러 정맥 및 동맥혈, 가스, aspartate aminotransferase 및 lactate 분석용 샘플도 함께 채취하십시오.관류가 끝나면 신동맥과 신정맥에서 튜브를 분리하십시오. 이식편을 차가운 HTK로 세척하고, 이식 전까지 멸균 장기 보관백에 넣어 얼음 위에 보관하십시오. 정상 온도 외생체 신장 관류의 목적은 관류 동안 이식편에 충분한 산소와 영양이 공급되도록 하는 것입니다.실제로, 장기의 재가온을 통해 37 °C의 목표 이식편 온도에 도달한 후, 3시간 동안 얼음 위에서 보관한 뒤에도 전반적인 관류 과정 동안 약 70 mmHg의 일정하고 생리적인 압력을 유지하며 유량 값과 신장 내 저항이 안정적으로 유지되었습니다. 소변 생성량은 주로 관류액의 조성에 따라 달라집니다.정맥 및 동맥의 산소 분압을 매시간 측정하여 관류 중 신장의 대사 활동을 확인하는 한편, pH, 중탄산염 및 전해질 또한 안정적으로 유지되어 추가적인 조치가 필요하지 않습니다. 실시간 아스파르테이트 아미노전달효소 및 젖산 측정은 세포 손상을 모니터링하는 데 사용됩니다. 정상 체온의 ex vivo 신장 관류 기간 동안 이러한 세포 손상 지표의 증가가 관찰되지 않았으며, 관류액의 삼투압 또한 안정적으로 유지되었습니다.또한, 조직학적 분석 결과 조직의 변화가 최소한이며 가벼운 세포질 변화와 매우 낮은 세포사멸률이 나타났습니다. 이 기술을 숙달하면 신장 이식편의 대안적인 장기 보존 방법으로 사용할 수 있으며, 이식 전 장기 평가 및 수복을 위한 추가적인 옵션을 제공할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오에서는 돼지 기증자 신장에서 장기간 냉간 허혈성 저장 시간을 통해 보존 손상을 유도하는 기술에 대해 설명합니다.

돼지 기증자 신장의 보존 손상 모델링: 신장에 장기간의 저온 허혈을 가하여 이식 기능 장애를 유도하는 절차

동물 장기 생리학에 대한 연구는 실험적인 생체 외 관류 시스템을 수행하여 달성할 수 있습니다. 이전에 개발한 생체 외 간 관류 모델에 항상성 기관인 돼지 신장을 추가하는 것은 더 나은 생리학적 환경을 달성하기 위한 주요 단계가 될 수 있습니다.

자가 생체 외 관류 돼지 간-신장 실험 단계

지방산 간, 오래된 기증자로부터 이식, 또는 심장 죽음 (DCD) 후 검색 간장 등의 한계 이식 만이 저조한 기존의 차가운 정적 스토리지를 허용. 우리는 이전에 이식 한계 간 이식의 보존, 평가, 수리 subnormothermic 생체 간 관류의 새로운 모델을 개발했다.

Subnormothermic의 기술<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 간 스토리지, 평가를위한 관류 및 한계 간 이식의 수리

여기에서 우리는 기증자 간 이식의 산소 전 현장 기계 관류를 설명하는 프로토콜을 제시한다. 이 문서에서는 조달 및 기계 관류에 대한 간 이식을 준비, 관류 액, 주요 관류 시스템을 준비하고 간 이식의 산소 정상 체온 기계 관류를 수행하는 단계 프로토콜에 의해 단계가 포함되어 있습니다.

기증자의 간을의 현지 외 정상 체온 기계 관류

상당한 간 기증자 부족 이며 간 기증자에 대 한 기준을 확대 했습니다. Normothermic ex vivo 간 관류 (NEVLP)를 평가 하 고 장기의 기능을 수정 개발 되었습니다. 이 연구 NEVLP의 쥐 모델을 보여 줍니다 고 간 보존 부상 완화 pegylated catalase의 능력을 테스트 합니다.

Ex Vivo Normothermic 간 관류의 작은 동물 모델

대형 동물 모델은 전임상 이식 연구에서 필수적인 역할을 합니다. 임상 설정과의 유사성으로 인해, 본 문서에 기재된 치열 신장 자동 이식의 돼지 모델은 장기 보존 기술 및 치료 내정간섭의 시험을 위한 우수한 생체 내 설정을 제공한다.

24시간 장기 보존 및 지속적인 원격 분석을 사용하여 돼지 모델에서 직소 신장 자동 이식

Normothermic ex vivo machine perfusion (NEVP)은 췌장 동종 이식편의 보존을 위해 거의 연구되지 않았습니다. 우리는 이식 전에 췌장 동종 이식편에 대한 혁신적인 보존 기술을 제시합니다.

이식 전 췌장 동종이식의 보존을 위한 Normothermic Ex Vivo 췌장 관류

여기에서는 후속 기계 관류 또는 이식을 위한 전임상 돼지 모델에서 신장 조달을 위한 수술 모델을 자세히 설명하는 프로토콜을 제시합니다.

전임상 대형 동물 모델에서의 신장 조달

기증자 심장 보존은 심장 이식 성공의 주요 결정 요인입니다. 기술의 발전으로 보존 조건이 최적화되고, 이식 전 기증자 심장을 보다 정확하게 평가할 수 있게 되었습니다. 여기서는 현재 심장 보존에 적용 중인 두 가지 혁신적 기술인 균일 냉각 보존과 정상 체 외 심장 관 류를 설명합니다.

심장 이식에서 장기 보존을 위한 혁신적 전략: 균일한 냉각 보존과 외부 정상 관류

이 프로토콜은 쥐 신장을 체 외 에서 정상모세포 기계로 관류하여 수혜자 쥐로 이식하는 과정을 설명합니다.

이식을 위한 쥐 신장의 정상 기계 관류

학습하세요 정상 체온 체외 신장 관류(NEVKP)를 이용한 이식 전 신장 이식편 보존 기법을. 이 방법은 냉 허혈 손상을 피하고 생리학적 조건을 유지하여 한계 이식편의 생존율을 향상시킵니다.

정상 체온

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