Name: 다른 잡초 종의 강력한 제초제 저항 테스트를위한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-02T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: 학습하세요 다양한 잡초 종에서 제초제 저항성을 확인하고 저항 수준을 추론하는 강력한 프로토콜을. 종자 파종, 이식, 정밀 분무를 통한 신뢰할 수 있는 농업용 잡초 관리 방법입니다.

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이 연구는 이탈리아 국립연구위원회(CNR)의 지원을 받았습니다. 저자는 종자 샘플을 수집한 GIRE 회원들에게 감사하고 영어를 수정한 Alison Garside에게 감사한다.

1. 종자 시료 채취 및 보관 <ol><li> 불리한 기후 조건 또는 품질이 낮은 제초제 처리로 인해하지 즉 부당한 가난한 제초제 성능을 재배 필드, 모니터링합니다. </li><li> 한 번에 한 종의 종자 샘플을 수집하고 고유 한 코드를 할당합니다. 성숙한 종자는 일반적으로 제초제 처리 (들)을 살아남은 식물에서 작물 수확하기 전에 수집됩니다. 씨앗이 때 어머니 식물에 의해 성숙 창고 경우 적시에 모니터를 관찰합니다. </li><li> 종, 수집 날짜, GPS 좌표, 지방 자치 단체, 농부의 이름, 필드 크기, 감염 수준, 작물, 제초제 (들) 시즌 동안 사용 및 필드의 역사적 기록의 할당 된 고유 코드, 이름을 나타내는 각 샘플에 대한 양식을 작성 . </li><li> 필드 침략의 대표 적어도 30 무작위로 선택된 식물에서 종자를 수집합니다. 종자 샘플이 적어도 5,000 성숙한 씨앗이 포함되어 있는지 확인합니다. 의무적 교잡 잡초 종(예를 들어, 종 Lolium. 또는 Amaranthus 종은.), 5000 (11) 주위에 종자의 수를 유지하면서 10-15 식물의 수를 감소시킨다. </li><li> 잡초의 패치 (헥타르 이상) 넓은 지역에 흩어져있는 것처럼 다른 제초제 저항성 생물 형을 선택하는 필드를 하위 샘플. </li><li> 할당 된 고유 코드로 표시된 봉인되지 않은 종이 봉투에 보관 씨앗. </li><li> 수분이 증발하지만 차 휴면 유도를 방지하기 위해 높은 온도 (즉, 태양 아래 차를 떠나 피) 또는 극단적 인 온도 변화에 씨앗을 노출되지 않도록 할 수 있습니다. </li><li> (왕겨, 드 선체 씨앗 등을 제거)하고 건조한 장소에 상온에서 보관 청소. 첫 번째 저항 시험을 수행 한 후, 진공 밀봉 된 비닐 봉지에 바람직하게는 4 ° C에서 어두운 방에 오랜 시간 동안 씨앗을 저장합니다. 이러한 방식 씨앗 상당히 긴 시간 동안 그들의 생존을 유지. </li></ol> 참고 : 종자 휴면 적응과 농업 생태계에 지속 잡초를 할 수있는 유연하고 효율적인 메커니즘을 제공합니다. 종자 발아를 휴면을 중단하고 허용하기 위해 다른 프로토콜 즉 잡초 종, 수면 (16)의 종류에 따라 사용할 수있다. 휴면을 제거하는 세 가지 방법이 있습니다 : <ol><li> 춘화 참고 :. 예를 들어, Amaranthus의 retroflexus, 명아주 앨범, Lolium 종, 귀리 fatua, 폴리 고눔 여뀌 속 : 동시 발아 및 유묘 출현, 일주일에 몇 일에 이르기까지 종자 춘화의 기간을 얻으려면 많은 종에서 생리적 휴면을 제거하기 위해 필요 , Phalaris는 17 ~ 19 paradoxa. 최대 15 일 이상 기간이 Schoenoplectus mucronatus 위해 30 일 개양귀비, 방동사니의 difformis 및 Ammania의 coccinea 필요하고 <suP&gt; 20. <ol><li> 플라스틱 접시에 약간의 탈 물을 넣습니다. 초과를 제거, 필터 종이의 두 층을 잘라 물을 흡수. 종이에 공기 건조 씨앗을 놓습니다. 시간이 필요한 기간 동안 4 ° C에서 냉장고에 플라스틱 접시를 전송합니다. </li></ol></li><li> 혹평 주 : 일부 잡초 종 인해 기계적 휴면 즉 종피 특성에 다른 것보다 더 발아 분해성이며, 21 발아 황산을 사용하여 화학적 혹평의 사용을 필요로한다. <ol><li> 진한 황산 (95~98%)와 비커를 준비합니다. 물이 가득 비커를 준비합니다. 부직포 봉투에 씨앗을 넣습니다. </li><li> 진한 황산에 각각 20 분 또는 5 분 동안 예를 들어, Echinochloa 종. 또는 수수 halepense 씨앗을 만끽 해보세요. </li><li> 핀셋을 사용하여 비커에서 봉투를 타고 물이 가득 비커에 넣어. 열기봉투, 작은 소쿠리에 씨앗을 넣고 철저하게 흐르는 물을 씻어. </li></ol> 변종 : A. 질경이-aquatica는 다른 프로토콜을 필요로 22, 23 <ol><li> 클로로포름의 2 분의 씨앗을 만끽. 탈 이온수와 씨앗을 씻어 흡수 종이를 건조. 5 분 동안 80 % 황산 속에서 종자 덩크. </li><li> 작은 소쿠리에 씨앗을 넣고 철저하게 흐르는 물을 씻어. </li></ol></li><li> 수확 후 종자의 성숙 참고 : 다른 잡초 종의 종자에 관계없이 휴면을 중단하는 데 사용되는 방법, 만기 후 몇 개월 동안 전혀 발아하지 않습니다. <ol><li> RT와 낮은 습도에서 적어도 3~4개월의 기간 동안 씨앗을 저장 한 후 휴면 파괴 (예를 들어, 오리 자 사티 VAR. sylvatica 또는 피 속 rhoeas)에 대해 위의 프로토콜을 따르십시오. </li></ol></li></ol> 3. 종자 발아 <ol><li> 장소 씨는 PLAS에 발아한다0.1 %의 질산 칼륨 (KNO 3)와 0.6 % (M / V) 한천을 포함 TIC 요리 추가 : <ol><li> 탈 이온수를 사용하여 0.6 % + 0.1 %의 KNO 3에 한천 용액을 준비한다. 전자 레인지에서 용해한. </li><li> 플라스틱 접시에 한천 용액을 붓고. 기판을 냉각 한 후 씨앗에 넣어. </li></ol> 변형 토양은 플라스틱 접시에 기질로서 사용될 수있다. 이 연습은 Echinochloa 종에 특히 효율적입니다., S. halepense 및 Lolium 종. </li><li> 각각의 잡초 종을위한 최적의 조건에 따라 빛과 온도 조건을 일주일 정도 발아 캐비닛에 플라스틱 접시를 놓습니다. 가장 겨울 종의 경우, 온도 범위는 25분의 15 ° C의 밤 / 낮의 15-30 μmol m -2 초 -1의 광합성 광자 플럭스 밀도 (PPFD)을 제공하는 네온 튜브 12 시간 광주 기이다. 여름 많은 종의 경우, 온도 범위는 15/30 ° C의 밤 / 일이다. 변형 : S이러한 S. 등 오메 종, halepense, 열처리가 필요합니다. S의 따라서 혹평 후, 씨앗 정상적인 조건에서 다음 삼일 발아 캐비닛에 사흘 동안 24 ° C에서 45 ° C와 20 시간에서 4 시간의주기를, 그리고 : halepense는 다음과 같은 조건을 실시한다. </li></ol> 4. 모종 이식과 성장 <ol><li> 이식 표준 포팅 믹스로 가득 플라스틱 트레이 (325 X 265 X 95mm)에 15-20 모종 (60 % 미사 질 양토, 15 % 모래, 15 % agriperlite 10 % 이탄 - 부피). 주 : 이식 대신 직접 파종, 제초제 처리의 성능을 최적화하는 중요한 전제 조건 인, 동일한 성장 단계에서 식물의 균일 스탠드 얻을 수있다. </li><li> 수와 진보적 인 트레이 번호를 복제, 인구 코드, 제초제가 테스트중인 &lt;: 고유 식별에 대한 모든 정보를 포함하는 바코드 각 트레이를 식별합니다./ 리&gt; <li> 또는 필드의 용량이 거의 기판을 유지하기 위해 가열 된 물을 식물, 온실에서 찾는 트레이. 주 : 성장 온도가 잡초 종류에 따라 달라집니다. 종종 시험은 가을 / 겨울 / 봄에 완료, 그래서 빛이 약 150 μmol 분 -2 초 PPFD을 제공하는 400 W 메탈 할라이드 램프, -1과 12 시간의 광주 (24), (19). 여름 잡초 종을 사용하여 보충 C 4 광합성주기는 일반적으로 더 높은 빛의 강도를 필요로하기 때문에 시험은 늦은 봄 - 여름에서 수행하거나 보충 빛의 세기가 약 400 μmol 분 -2 초 -1 14 시간의 광주에있다된다. </li><li> 패 디 쌀, 예를 들어, A를 감염시키고 일부 잡초 종에 대해 서로 다른 프로토콜을 사용하여 질경이-aquatica, S. mucronatus와 C 22에 기술 된 바와 같이 difformis. <ol><li> 24 라운드 세포 (55mm 직경, 64mm 깊이) FIL와 폴리스티렌 트레이에 모종을 이식60 % 미사 질 양토, 30 %의 모래와 (부피 기준) 10 % 이탄으로 이끌었다. </li><li> 12cm의 트레이 깊은 플라스틱 용기는 물이 가득하고 (그림 1) 부동 방지하기 위해 나사 스테인리스 봉에 의해 아래로 battened을 설정합니다. </li><li> 토양 표면의 레벨 아래 1~2cm에서 용기의 수위를 유지하고 조류의 증식을 방지하기 (10 ~ 12 L의 물을 포함)은 각 컨테이너에 황산구리 1.5 g을 추가한다. </li></ol></li></ol> 5. 제초제 트리트먼트 <ol><li> 사전 출현 제초제와 치료 : <ol><li> 발아 캐비닛에 3 일 정도는 3 장에서 설명한대로 한 후, 위에 설명 된 기판을 포함하는 플라스틱 트레이에 발아 씨앗을 이식 및 토양의 층 (약 1cm) 커버. 이 모종 제초제 효과보다는 과도한 매몰 깊이로 인해 나타날되지 않도록하기 위해서 중요한 공정이다. </li><li> 필드 CAPA에 기판을 가지고물이 가득 접시에, 바닥에 약간의 구멍이 트레이를 배치하여 도시. </li><li> 어느 날 이식 후 사전 출현 제초제 (25) 트레이를 취급합니다. </li><li> 접시에서 모세관 현상에 의해 위와​​ 아래 모두에 필요한 물을 첨가하여 상기 기판 또는 근접장 용량을 유지. 이 절차는 좋은 치료 효과에 대한 (즉, 발아 씨앗이있는 곳) 적절한 깊이에 제초제의 영속성을 선호한다. </li></ol></li><li> 포스트 출현 제초제와 치료 : <ol><li> 그들은 2-3 잎 단계에 도달 할 때 식물 스프레이 (즉, 성장 단계 확장 BBCH 성장 규모 (26)의 12 ~ 13). </li><li> 치료 다음 날부터 시작, 잡초 종의 물 요구 사항 및 Echinochloa 종의 계절 (예에 따라 관개 시스템을 설정합니다.이 9 오전 9 시부 터 일정한 간격으로, 3 분 동안 하루에 4 번 물을 제공합니다 PM). 물은 DIS입니다자동 스프링클러 관개 시스템을 사용하여 tributed. 변종 : 제초제는 식물 무대 BBCH 14-21에 적용됩니다. </li></ol></li><li> 제초제 준비 및 배포. 주 : (전후 출현) 모든 제초제 두 용량으로 권장 활성제로 상업적 제제로서 적용되어 추천 필드 도즈 (1X) 및 세 배 (3X)있다. <ol><li> 필요한 경우, 라벨 지시에 따라 대량의 계면 활성제 용액을 제조 하였다; 최종 농도는 일반적으로 최종 부피의 백분율 (예를 들어, 0.3 %)로 표현하거나 볼륨으로 단위 면적 (예를 들면, 1 L의 HA-1)별로 분배 될. </li><li> 활성 성분의 적절한 농도를 유지하기 위하여 제초제 (용질) 용액 용 용매로서 계면 활성제 용액을 사용한다. 첫 번째 제초제 솔루션을 준비합니다 (3 배). 상업적 제품의 수량이 계면 활성제 용액에 용해 (또는 경우 탈 이온수으로 계산할계면 활성제는 다음의 방정식을 사용하여)가 필요하지 않다 : 용량 허브 = [(용량 필드 X 선량 최대) × V 핀] / V 델 여기서 용량 허브 = 제초제 용량 (㎖), 용량 필드 = 제초제 필드 용량 (하 ㎖를-1), 용량 최대 = 최대 용량 제공, V 지느러미는 = 솔루션 (L)의 최종 부피는 V 델은에 의해 전달 볼륨을 = 벤치 분무기 (L 하 -1). </li><li> 덜 집중 하나 (1 배)을 제조 : (1, V / V 2) 제초제 솔루션 배 희석. 이 절차는 계량 또는 제초제를 피펫 팅 할 때 실수의 가능성을 감소시킨다. 볼륨 단위 영역 (L 헥타르 -1) 당 분산로서 제초제 용액 농도가 발현된다. </li><li> 낮은 제초제 량 (1X) 치료의 순서를 시작합니다. 이러한 방식으로 동일한 두 제초제먼트 사이 분무 캐비넷 세척 할 필요가 없다. </li><li> 제초제 solutio 배포N 세 평면 팬 (확장 범위) 유압 노즐 장착 붐 215 kPa의 압력에서 300 L의 HA-1 (± 1 %), 전달 정밀도 벤치 분무기, 0.75 m 초 -1의 속도를 사용하여 . </li><li> 제초제는 표백제를 1 %를 사용하여 변경 될 때 두 번 분사 캐비닛을 씻으 (v / v)의 다음 씻어. 변종 : 글 리포 세이트 200 L 하 -1 (27)의 스프레이 볼륨에 적용됩니다. 참고 : 특별한 관심이 높은 생물 제초제가, 같은 설 포닐 우레아의 sulfometuron 또는 flazasulfuron가 사용되는 경우 지불해야합니다. 후자의 경우에는 암모니아로 한 표백제 용액으로 세척하고 다른 작업을 수행 (2.5 % v / v)의 물로 조심 린스. </li></ol></li></ol> 6. 수집 및 데이터 분석 <ol><li> 각 트레이를 자동 식별 바코드 판독기를 통해, 치료뿐만 아니라 비주얼 기준 매스 (VEB)을 생존 식물의 수를 기록한다. 식물은 엉덩이입니다그들이 상관없이 색상이나 다른 모양의 활성 증가를 보여 경우 죽은 것으로 ESSID와. <ol><li> 테스트 제초제에 따라 세 사주 치료 (와트) 후 평가를 (예를 들어, ACCase 억제제 세 와트 및 루게릭 병 억제제 또는 글 리포 세이트에 대한 네 와트). </li><li> 즉, 취약 인구 (S 확인) 모든 실험에서, 결코 또는 드물게 제초제로 처리하지 않는 사이트에서 수집 된 인구를 포함하여 일반적으로 치료 효과를 평가합니다. </li><li> 처리 된 식물들의 수의 비율로 익스프레스 식물 생존율, (두 반복 실험의 평균값) 다만 제초제 처리 전의 계산하고, 평균값에 따라 표준 에러 (SE)를 계산한다. </li><li> 처리와 같은 인구 (25), (28)의 확인을 처리하지 사이에 VEB 식물 바이오 매스를 시각적으로 비교를 통해 얻을 수있다. 점수를, 0 (하지 처리 검사에 비해) 제초제의 영향을받지 않는 식물 (10)에 이르기까지 언제식물이 명확하게 죽은, 각 처리 트레이로 제공됩니다. </li></ol></li><li> S 생존자 이상 제초제 도즈 1X, R에서 20 %로 5 % 내지 원거리 때 식물의 5 % 미만이 제초제 도즈 1X, SR 살아남은 두 제초제 투여 량으로 치료에서 얻어진 결과에 기초하여 네 가지 범주로 돌리다 개체군 생존자 제초제 도즈 1X에서 20 % 이상 및 제초제 도즈 3X 17에서 10 % 이상이있는 경우 식물의 20 % 제초제 도즈 1X 및 RR 살아 남았다. </li></ol>

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<li>Collavo, A., Strek, H., Beffa, R., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+an+ACCase-inhibitor-resistant+Lolium+rigidum.+population+based+on+the+use+of+ALS+inhibitors%3A+weed+population+evolution+observed+over+a+7+years+field-scale+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag.+Sci%22%5BJournal%5D)">Management of an ACCase-inhibitor-resistant Lolium rigidum. population based on the use of ALS inhibitors: weed population evolution observed over a 7 years field-scale investigation.</a> Pest Manag. Sci. 69 (2), 200-208 (2013).</li>
<li>Scarabel, L., Panozzo, S., Savoia, W., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-site+ACCase-resistant+Johnsongrass+%28Sorghum+halepense%29.+selected+in+summer+dicot+crops%5BTitle%5D)+AND+%22Weed+Technol%22%5BJournal%5D)">Target-site ACCase-resistant Johnsongrass (Sorghum halepense). selected in summer dicot crops.</a> Weed Technol. 28 (2), 307-315 (2014).</li>
<li>Hess, M., Barralis, H., Bleiholder, H., Buhur, L., Eggers, T., Hack, H., Strauss, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+extended+BBCH+scale+-+general+for+the+description+of+the+growth+stages+of+mono-+and+dicotyledonous+weed+species%5BTitle%5D)+AND+%22Weed+Res%22%5BJournal%5D)">Use of the extended BBCH scale - general for the description of the growth stages of mono- and dicotyledonous weed species.</a> Weed Res. 37 (6), 433-441 (1997).</li>
<li>Collavo, A., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+glyphosate-resistant+Lolium.+spp.+biotypes+found+in+a+European+annual+arable+cropping+system+also+affected+by+ACCase+and+ALS+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Weed+Res%22%5BJournal%5D)">First glyphosate-resistant Lolium. spp. biotypes found in a European annual arable cropping system also affected by ACCase and ALS resistance.</a> Weed Res. 54 (4), 325-334 (2014).</li>
<li>Scarabel, L., Cenghialta, C., Manuello, D., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+and+management+of+imidazolinone-resistant+red+rice+%28Oryza+sativa.+L.%2C+var.+sylvatica.%29+in+Clearfield%C2%AE+Italian+paddy+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Agronomy%22%5BJournal%5D)">Monitoring and management of imidazolinone-resistant red rice (Oryza sativa. L., var. sylvatica.) in Clearfield® Italian paddy rice.</a> Agronomy. 2 (4), 371-383 (2012).</li>
<li>Zelaya, I. A., Anderson, J. A. H., Owen, M. D. K., Landes, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+spectrophotometric+and+HPLC+methods+for+shikimic+acid+determination+in+plants%3A+Models+in+glyphosate-resistant+and-susceptible+crops%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of spectrophotometric and HPLC methods for shikimic acid determination in plants: Models in glyphosate-resistant and-susceptible crops.</a> J. Agric. Food Chem. 59 (6), 2202-2212 (2011).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

1) 종자가 성숙 제초제 처리 (들)을 살아남은 식물에서 수집되어야한다 : 프로토콜 내에서 몇 가지 단계가 인구에 제초제 저항의 성공적인 평가를 위해 중요하다. 어머니 식물 종자의 성숙 나중에 종자 발아에 어려움을 피하기 위해 매우 중요하다; 2) 씨의 적절한 보관은 발아를 방지 할 수 금형의 확산을 방지하는 것이 좋습니다; 제초제 패키지의 라벨에보고 3) 묘목은 오른쪽 성장 단계에서 처리되어야한다. 식물이 거의 같은 성장 단계에 도달 처리 할 수​​ 있도록주의를 기울여야한다; 식물이 확인 불가능한 따라서 실수를 방지 활성 성분의 정확한 농도로 살포되도록 4) 제초제 용액을 제조하고, 정밀도로 처리되어야; 5) 각 제초제 처리 후에 충분히 살포 캐비닛을 청소하는 것을 권장하고 피할 솔루션을 제조하는 데 유리고도의 생물학적 활성 제초제가 참여하고, 특히 다음과 같은 제초제 처리에 오염. 본 명세서에서 프로토콜은 용이 종의 제초제와의 관심에 따라 필요한 수정과 잡초 종의 넓은 범...

<html> 제초제는 글로벌 식물 보호 시장 (1)의 50 %를 차지, 가장 광범위하게 사용 잡초 측정 한 것입니다. 그들은 노동 집약적이고 시간이 많이 소요되는 토양 재배 관행을 방지하고, 궁극적으로 비용 효율적이고 안전하고 유익한 식품 생산이 결과, 상대적으로 저렴한 도구입니다. 그러나 함께 제초제 사용에 이상 의존 많은 잡초 종의 큰 생물 계절 및 유전 적 다양성의 존재는, 자주 제초제 저항성 잡초 집단의 선택을 초래한다. 매우 특정한 대사 표적 선택적 제초제 도입 3-5 년간 저항 경우의 수를 극적으로 증가하고있다. 현재까지 전 세계적으로 240 잡초 종 (140 dicots 100 외떡잎은) 액션 (SOA) 4의 다른 제초제 사이트에 대한 저항을 진화했다. 이것은 지속 가능한 작물 생산을위한 주요 잡초 관리를위한 관심과 일반적으로 더 많은 것이다. 자주 온실에서 수행 신뢰성 시험에 기초 e_content &quot;&gt; 저항의 조기 발견, 제초제 내성 잡초를 관리하는 중요한 단계이다. 다른 접근법으로, 목표 정확도, 시간 및 이용 가능한 자원의 요구 수준에 따라 개발되어왔다 잘 6-12 간주 잡초 종으로. 그러나, 새로운 잡초 생물 형의 저항 상태의 확인이 (필요한 경우 즉,에 속하는 하나 이상의 제초제 생존 할 수있는 능력 등 여러 가지 생리 학적 특성을 공유하는 사람들의 그룹, 일반적으로 이들을 제어 할 도즈 사용 특정 그룹), 견고한 전체 식물 생물 검정법은 제어 된 환경 4, 11에서 수행 될 필요가있다. 생물 형이 하나의 제초제에 내성이 드물게있다. 각 생물 형 따라서이에 강한 제초제의 특정 저항 패턴, SOA의 즉, 수와 유형을 특징으로, 주어진 저항입니다각 제초제 13 수준. 간 또는 복수의 저항 (5)의 패턴의 조기 판정 및 신뢰성은 14 필드 저항성 관리에 중요하다. 그것은 그 제초제 저항이 자연의 허용 오차와 아무 상관이 언급 할 가치가 일부 제초제, 예를 들어, ACCase 억제 제초제, 단자엽 종 대 2,4-D 대 쌍자엽 종, 속새 arvense 대 대한 몇 가지 잡초 종 전시 글 리포 세이트. 이 논문은 제초제 (들)에 의해 가난한 제어가보고되었다 분야에서 샘플링 추정 제초제 저항성 생물 형을 테스트하기위한 강력한 방법을 제공합니다. 관련된 잡초 종과 관련하여 표준 프로토콜에 관련 변형되게됩니다. 페트리 접시 (8)에 단 하나의 제초제 용량 (15), 또는 치료 씨앗을 사용하거나 전체 공장 생물 검정을 기반으로 다른 기술 / 프로토콜을 통해 장점은 높은 reliab 관련된ility 때문에 실험에서 두 제초제 선량 개재물 저항 레벨을 추정하는 가능성. 그러나, 루틴 저항 테스트를 위해, 동일한 방법이 때문에 비용을 절감 하나만 제초제 용량으로 적용 할 수있다. 뿐만 아니라 저항 상태의 확인을 허용하는대로, 얻어진 정보는 모두 다음의 연구 단계를 최적화 및 / 또는 음향 저항 관리 전략을 고안에 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>종이 봉지</td><td>Celcar SAS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 접시</td><td>ISI plast SPA</td><td>SO600</td><td>투명 플라스틱</td></tr><tr><td>황산 95-98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320501</td><td></td></tr><tr><td>부직포</td><td>Carretta Tessitura</td><td>Art.TNT17</td><td>무게 17g m-2</td></tr><tr><td>클로로포름 >99.5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>한천</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1296</td><td></td></tr><tr><td>질산칼륨 >99.0%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8394</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 용기</td><td>Giganplast</td><td>1875/M</td><td>600 x 400 x 110 mm</td></tr><tr><td>플라스틱 트레이</td><td>Piber plast</td><td>G1210A</td><td>325 x 265 x 95 mm</td></tr><tr><td>폴리스티렌 트레이</td><td>Plastisavio</td><td>S24</td><td>537 x 328 x 72 mm, 24 라운드 셀(6x4)</td></tr><tr><td>구리 황산</td>염 <td>Sigma-Aldrich</td><td>451657</td><td></td></tr><tr><td>Agriperlite</td><td>Blu Agroingross sas</td><td></td><td></td>AGRI100</tr><tr><td>Peat</td><td>Blu Agroingross sas</td><td>TORBA250</td><td></td></tr><tr><td>발아 캐비닛</td><td>KW</td><td>W87R</td><td></td></tr><tr><td>노즐</td><td>Teejet</td><td>XR11002-VK, TP11001-VH</td><td>두 번째 유형의 노즐은 글리포세이트</td></tr><tr><td>바코드 생성기</td><td>Toshiba TEC</td><td>SX4</td><td></td></tr><tr><td>Labels with barcode</td><td>Felga</td><td>TT20200</td><td>Stick-in 둥근 모서리가있는 라벨</td></tr><tr><td>바코드 리더</td><td>Cipherlab</td><td>8300-L</td><td>휴대용 데이터 터미널</td></tr><tr><td>벤치 분무기</td><td></td><td></td><td>내장 <</td></tr><tr>td colspan ="4 "> 결과에 포함 된 제초제 : </td></tr><tr><td> 상업용 제품 </td> <td> 활성 성분 </td><td>Company</td><td>코멘트</td></tr><tr><td>Altorex</td><td>imazamox</td><td>BASF</td><td></td></tr><tr><td>Azimut</td><td>florasulam</td><td>Dow AgroSciences</td><td></td></tr><tr><td>Biopower</td><td></td><td>Bayer Crop Science</td><td>Surfact to be used with Hussar</td></tr><tr><td>WG Dash</td><td></td><td>BASF</td><td>Surfact to used with Altorex</td></tr><tr><td>Granstar</td><td>tribenuron-methyl</td><td>Dupont</td><td></td></tr><tr><td>걸리버</td><td>azimsulfuron</td><td>듀퐁</td><td></td></tr><tr><td>Hussar WG</td><td>요오드설프론</td><td>바이엘 작물 과학</td><td></td></tr><tr><td>후보</td><td>bispyribac-Na</td><td>바이엘 작물 과학</td><td></td></tr><tr><td>라운드업</td><td>글리포세이트</td><td>몬산토</td><td></td></tr><tr><td>트렌드</td><td></td><td>듀퐁</td><td>Surfact Granstar 및 Gulliver</td></tr><tr><td>Viper</td><td>penoxsulam</td><td>Dow AgroSciences</td>와 함께 사용<td></td></tr><tr><td>위돈 LV4</td><td>2,4-D</td><td>이사그로</td><td></td></tr></tbody></table>

다른 잡초 종의 강력한 제초제 저항 테스트를위한 프로토콜

Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

전체 식물 수준에서 추정되는 제초제 저항성 잡초 개체군을 테스트하기 위한 강력한 프로토콜은 저항성 상태를 확인하는 데 필수적입니다. 온실에서 수행된 전체 식물 생물 검정을 기반으로 하는 제시된 프로토콜은 적절한 변형을 통해 광범위한 잡초 종 및 제초제에 쉽게 적용할 수 있습니다. 현장 제초제 처리에서 살아남은 식물의 종자 샘플을 수집하여 사용할 때까지 저온에서 건조하게 보관합니다. 발아 방법은 잡초 종과 종자 휴면 유형에 따라 다릅니다. 유사한 성장 단계에 있는 묘목은 식물이 제초제 처리를 위한 올바른 성장 단계에 도달할 때까지 적절한 조건에서 온실에 이식되고 유지됩니다. 검증할 수 없는 실수를 피하기 위해 제초제 용액을 준비하려면 정확성이 필요합니다. 도포 부피 및 스프레이 속도와 같은 다른 중요한 단계도 평가됩니다. 이 프로토콜의 장점은 한 번의 제초제 투여를 사용한 전체 식물 생물 검정을 기반으로 하는 다른 프로토콜과 비교하여 더 높은 신뢰성과 내성 수준을 추론할 수 있는 가능성과 관련이 있습니다. 더 빠르고 저렴한 생체 내 또는 체외 진단 스크리닝 테스트(페트리 접시 생물학적 분석, 분광 광도계 테스트)가 제안되었지만 정성적 정보만 제공하고 일부 종은 필요할 수 있는 힘든 설정으로 인해 광범위한 사용이 방해를 받습니다. 일상적인 저항성 테스트의 경우, 제안된 전체 식물 생물학적 분석은 한 번의 제초제 투여량으로 적용할 수 있으므로 비용을 절감할 수 있습니다.

추정 내성 인구의 저항 상태를 평가하기 위해, 제초제의 효과를 확인하기 위해 분석에서 감수성 검사를 포함하는 기본이다. P. 실시 스크리닝 테스트 결과 속 rhoeas 집단은, 밀 필드를 감염시키고 잡초는, 감수성 검사 (09-36)에와 의심에 강한 하나 (10-91)에 사 후 출현 제초제의 효능에 나타난 그림 2에보고됩니다. 인구 09-36 완전히 하나의 식물, 플로라와 tribenuron 메틸 (그림 2) 테스트 다른 두 ALS 제초제의 용량 1 배 살아있는 동안 요오 도술 푸론 억제제 루게릭 병에 의해 제어되었다. 대신, 인구 10-91의 식물의 약 60 %는 요오 도술 푸론과 tribenuron 메틸 모두 제초제 용량을 살아 약 50 %가 플로라의 1 배의 용량을 살아 남았다. 이러한 결과는 인구 10-91이 요오 도술 푸론과 tribenuron 메틸 및 내성에 (RR) 매우 내성이 있는지를 확인(R)는 플로라합니다. 다른 응답...

잡초 개체군에서 제초제 저항성을 확인하기 위한 강력하고 유연한 접근 방식이 제시됩니다. 이 프로토콜을 통해 제초제 저항성 수준을 추론하고 약간의 적응으로 광범위한 잡초 종 및 제초제에 적용할 수 있습니다.

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented ...

이 절차의 전반적인 목표는 광범위한 잡초 종과 제초제에 대한 제초제 저항성을 테스트 및 확인하고, 제초제 저항성 수준을 추론하는 것입니다. 이는 우선 제초제 처리 후 생존한 식물에서 수집한 종자의 휴면을 타파하여, 발아와 유묘 출현이 동시에 이루어지도록 함으로써 달성됩니다. 이를 위해 며칠에서 일주일 이상의 종자 춘화 처리 기간이 필요합니다.두 번째 단계는 질산칼륨이 포함된 agar 배지를 플라스틱 접시에 붓는 것입니다. 그 다음 Vern 종자를 응고된 agar 위에 배치하고, 각 잡초 종에 최적화된 조건이 설정된 발아 챔버로 접시를 옮깁니다. 이후 15~20개의 묘목을 표준 상토가 채워진 플라스틱 트레이에 이식합니다.각 트레이에는 고유 식별을 위한 모든 정보가 포함된 바코드가 부여되며, 모종이 2~3엽 단계에 도달할 때까지 가온 온실에 배치합니다. 마지막 단계는 정밀 벤치 스프레이어를 이용한 제초제 처리입니다. 모든 제초제는 권장 계면활성제가 포함된 상용 제형으로 처리하며, 처리 농도는 권장 포장 용량의 2배와 3배로 적용합니다. 처리 3~4주 후 최종 평가를 실시합니다. 바코드 리더기를 사용하여 실험 단위당 생존 식물 수와 시각적으로 추정된 생물량(biomass)을 기록합니다.그 다음 데이터를 컴퓨터로 다운로드하여 제초제 저항성 상태를 결정하기 위해 분석합니다. 이 방법이 in vivo 또는 in vitro 진단 스크리닝 테스트보다 갖는 주요 장점은 견고함과 유연성에 있습니다. 즉, 이 방법은 신뢰할 수 있으며 약간의 조정만으로 광범위한 종에 쉽게 적용할 수 있습니다.이 방법은 저항성 패턴 및 수준과 같이 CRO 포장 내 제초제 저항성 잡초 집단의 연구 및 관리에 관한 핵심 질문들에 답하는 데 도움을 줍니다. 또한, 반응 실험과 같은 후속 실험 단계들을 적절하게 계획할 수 있게 해줍니다. 일반적으로 제초제 저항성 테스트에 익숙하지 않은 연구자들은 고려하고 특정 실험 조건에 맞춰 조정해야 할 단계와 측면이 매우 많기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다.먼저 한 번에 한 종씩 종자 샘플을 수집하고 고유 코드를 부여합니다. 겨를 제거하고 종자의 줄기 부분을 떼어내어 종자를 세척합니다. 부여된 고유 코드를 기입하여 각 샘플에 대한 양식을 작성합니다.종 이름, 수집 날짜, GPS 좌표, 지방 자치 단체, 농민 성명, 경작지 크기, 감염 수준, 작물, 해당 시즌에 사용된 제초제 및 해당 경작지의 이력 기록을 작성합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Environment

환경

이 원고는 살충제 자화율을 조사하고 arthropod 해충에 연락을 저항하고 체계적 살충제를 감지하는 데 사용되는 기술을 보여주고 설명합니다.

모니터링 살충제 저항 Bioassays

이 동영상은 herbivory에 호스트 식물 저항의 메커니즘을 설명 및 저항을 spittlebug하기 위해 항생과 관용의 상대적인 기여도를 추정 노 선택 테스트를...

특성화 Herbivore 저항 메커니즘 : Spittlebugs에 Brachiaria 종. 예로

우리는 엽록체 trnL-F 스페이서 지역 내의 대상의 DNA 서열 차이의 종류를 구분하는 것이 다양한 특정 PCR primers의 직원을 고용하고 비용 효과적이고 신속한 분자 genotyping 프로토콜을...

의 야생 - 타입과 장식 품종을 구별하기 PCR 기반 Genotyping 방법 Imperata cylindrica</em

임상 증상은 다음 이전에 또는에 - - 타겟 치료제에 대한 약물 저항은 광범위하고 저항의 메커니즘을 식별 할 필요가있다 대체 임상 관리 전략을 안내하기위한 중요합니다. 여기, 우리는 이러한 메커니즘의 발견을 촉진하는 순서와 체외에서 약제 내성 라인의 몇 유도에 프로토콜을 제시한다.

구현<em&gt; 체외</em&gt; 약물 저항 분석법 : 임상 적 저항 메커니즘을 폭로 가능성을 극대화

이 원고는 쌍떡잎 잡초에서 절제된 잎으로 제초제 대사율을 효과적으로 정량화하여 변동성을 줄이고 전체 식물 분석에서 일반적으로 관찰되는 제초제 흡수 또는 전좌의 가능한 교란 효과를 제거하는 방법을 설명합니다.

절제 잎 분석과 쌍자엽 잡초의 제초제 대사의 요금을 측정

잔디가 시스템에 양도 잔류 농약 실험은 인간의 위험 노출 평가의 핵심 구성 요소입니다. 양도 잔류를 측정하는 실험 방법은 관심과 잔디가 시스템 역학의 인간의 상호 작용을 조정해야합니다. 세 양도 잔류 농약 프로토콜이 제시 세 잔디가 시스템에서 적합성이 논의된다.

잔디가 시스템에 양도 잔류 농약을 정량화하기위한 프로토콜

여기서, 레니포름 선충 저항을 위한 면 유전자형의 신속한 비파괴 스크리닝을 위한 프로토콜이 제시된다. 프로토콜은 감염 반응을 결정하기 위하여 선충 감염한 면 묘목의 뿌리를 시각적으로 검토하는 관련시킵니다. 각 식물에서 식물 싹은 다음 종자 생산을위한 식물을 복구하기 위해 전파된다.

르니포름 선충 저항을 위한 면 유전자형 검열

대립 신경병은 자르기 시스템에서 유용한 보충 잡초 제어 전략으로 약속을 보여 주었다. 원하는 식물 시편의 알수 기전을 결정하기 위해 계단 단계 스크리닝 방법이 제공됩니다.

잡초 쌀의 알수 로병성 잠재력에 액세스하는 반복 계단 단계 분석(오리자 sativa ssp.)

여기에서, 묘목에서 Phytophthora nicotianae 저항성에 대한 담배 유전자형의 효율적이고 정확한 스크리닝을위한 프로토콜이 제시됩니다. 이것은 분자 메커니즘 연구뿐만 아니라 정밀 번식을위한 실용적인 접근 방식입니다.

Phytophthora nicotianae 저항성에 대한 담배 유전자형의 스크리닝

글리포세이트 기반 제품(GBP)은 전 세계적으로 가장 일반적인 광범위한 스펙트럼 제초제입니다. 이 기사에서는 현장 실험에서 생물 정보학 분석에 이르기까지 GBP가 미생물에 미치는 영향을 정량화하기위한 일반적인 지침을 소개합니다.

글리포세이트 기반 제품이 마이크로바이옴에 미치는 잠재적 영향의 정량화

여기서는 용량 증가 방식을 이용한 항암저항성 세포 생성 프로토콜을 제시하고, 이어서 후생유전학적 조절자를 표적으로 하는 집중된 sgRNA 라이브러리를 이용한 CRISPR/Cas9 기반 스크리닝을 통해 획득된 화학저항성 조절자를 규명합니다. 프로토콜은 또한 항암저항성 세포 모델에 맞춘 여러 최적화 포인트를 제공하여 내성 메커니즘을 연구하는 연구자들에게 견고한 틀을 제공합니다.

화학저항성 세포에 대한 후생유전체 전체 CRISPR-Cas9 기반 녹아웃 스크리닝

학습하세요 다양한 잡초 종에서 제초제 저항성을 확인하고 저항 수준을 추론하는 강력한 프로토콜을. 종자 파종, 이식, 정밀 분무를 통한 신뢰할 수 있는 농업용 잡초 관리 방법입니다.

다른 잡초 종의 강력한 제초제 저항 테스트를위한 프로토콜

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