다른 잡초 종의 강력한 제초제 저항 테스트를위한 프로토콜

이 절차의 전반적인 목표는 광범위한 잡초 종 및 제초제에서 제초제 저항성을 테스트 및 확인하고 제초제 저항성 수준을 추론하는 것입니다. 이것은 먼저 제초제 처리에서 살아남은 식물에서 채취한 종자의 휴면 상태를 깨고 동시에 발아와 묘목 출현을 얻음으로써 달성됩니다. 며칠에서 일주일 이상에 이르는 종자 vernalization 기간이 필요합니다.

두 번째 단계는 질산칼륨이 든 오거 배지를 플라스틱 접시에 붓는 것입니다. 그런 다음 Vern 씨앗을 응고된 오거에 놓고 접시를 각 잡초 종에 대한 최적의 조건으로 발아 캐비닛으로 옮깁니다. 다음으로 15-20 개의 묘목을 표준 화분 믹스로 채워진 플라스틱 트레이에 이식합니다.

고유 식별을 위한 모든 정보를 포함하여 각 트레이에 바코드가 할당되며, 묘목이 2-3개의 잎 단계에 도달할 때까지 트레이를 가열된 온실에 넣습니다. 마지막 단계는 정밀 벤치 분무기를 사용한 제초제 처리이며, 모든 제초제는 권장 현장 용량의 2회 용량으로 권장 계면활성제가 포함된 상업용 제형으로 적용되며, 처리 후 3-4주 후에 3배의 최종 평가가 수행됩니다. 바코드 리더기는 생존한 식물의 수와 실험 단위당 시각적 추정 바이오매스를 기록하는 데 사용됩니다.

그런 다음 데이터를 컴퓨터에 다운로드하고 분석하여 제초제 저항성 상태를 확인합니다. in vivo 또는 in vitro 진단 스크리닝 테스트에 비해 이 방법의 주요 장점은 견고성과 유연성과 관련이 있습니다. 즉, 이 방법은 신뢰할 수 있으며 사소한 적응을 통해 다양한 종에 쉽게 적용할 수 있습니다.

이 방법은 CRO 분야에서 제초제 저항성 잡초 개체군의 연구 및 관리와 관련된 주요 질문(예: 저항성 패턴 및 수준)에 답하는 데 도움이 됩니다. 또한 이러한 반응 실험과 같은 추가 실험 단계를 적절하게 계획할 수 있습니다. 일반적으로 제초제 내성 테스트를 처음 접하는 연구원은 특정 실험 조건에 맞게 고려하고 조정해야 하는 많은 단계와 측면으로 인해 어려움을 겪을 것입니다.

한 번에 한 종에서 종자 샘플을 수집하고 고유 코드를 할당하는 것으로 시작합니다. 왕겨를 제거하고 씨앗을 운반하여 씨앗을 청소하십시오. 할당된 고유 코드를 나타내는 각 샘플에 대한 양식을 작성하십시오.

종 이름, 수집 날짜, GPS 좌표, 지방 자치 단체, 농부 이름, 밭 크기, 계절에 사용된 감염 수준, 작물 제초제 및 밭의 역사적 기록. 씨앗은 할당된 고유 코드가 표시된 밀봉되지 않은 종이 봉지에 보관하십시오. 수분이 증발하도록 하되 씨앗을 고온이나 극심한 온도 변화에 노출시키지 마십시오.

2차 휴면 유도를 피하기 위해. 세척된 씨앗은 vernalization을 허용하기 위해 섭씨 4도의 어두운 방에 보관하십시오. 플라스틱 접시에 탈이온수를 넣으십시오.

두 개의 디스크와 여과지 조각을 자르면 모세관을 통해 물과 두 디스크 사이에 다리를 형성합니다. 여과지를 물에 담그고 플라스틱 접시에 넣으십시오. 그런 다음 공기 건조 된 씨앗을 종이에 놓습니다.

플라스틱 접시를 종에 따라 필요한 시간 동안 섭씨 4도로 옮깁니다. 다음으로, 탈이온수를 이용하여 0.1%의 질산칼륨이 함유된 0.6%의 오거 용액을 준비하고, 오거를 전자레인지에 녹인 후 오거 용액을 플라스틱 접시에 붓는다. 기질이 냉각되면 발아할 Vern 씨앗을 응고된 오거에 놓습니다.

플라스틱 접시를 발아 캐비닛에 넣고 vernalization 지속 시간과 조명 및 온도 조건은 잡초 종에 따라 다릅니다. 직접 꿰매는 대신 이식하면 동일한 성장 단계에서 식물의 균일한 스탠드를 얻을 수 있으며, 이는 제초제 처리의 성능을 최적화하는 중요한 전제 조건입니다.15-20개의 묘목을 60%미사질 양토, 토양, 15%모래, 15%농업 펄라이트, 및 10%피트. 테스트 중인 고유 식별 인구 코드, 제초제, 복제 번호 및 프로그레시브 트레이 번호에 대한 모든 정보를 포함하여 바코드로 각 트레이를 식별합니다.

가열된 온실에 트레이를 놓고 필요에 따라 식물에 물을 주어 기질을 현장 용량 또는 현장 용량에 가깝게 유지합니다. 성장 온도는 출현 후 제초제의 잡초 종에 따라 다릅니다. 스프레이 식물은 2-3 개의 잎 단계에 도달하면 라벨 지침에 따라 계면 활성제 용액을 대량으로 준비하며, 최종 농도는 일반적으로 최종 부피의 백분율로 표시됩니까, 아니면 부피가 단위 면적당 분배됩니까?

계면활성제 용액에 용해될 상용 제품의 양을 계산합니다. 이 방정식을 사용하여 제초제 투여량은 권장 현장 투여량에 최대 테스트 투여량을 곱하고 용액의 최종 부피를 벤치 분무기에 의해 전달된 부피로 나눈 값을 곱하여 계산됩니다. 가장 농축된 제초제 용액을 준비하십시오 먼저 제초제 용액을 세 번 희석하여 덜 농축된 용액을 준비합니다.

이 절차는 제초제의 무게를 측정하거나 피펫팅할 때 실수를 할 가능성을 줄여줍니다. 제초제 솔루션. 농도는 단위 면적당 분포되는 부피로 표시됩니다.

더 낮은 제초제 용량으로 치료 순서를 시작하십시오. 이런 식으로 동일한 제초제로 두 처리 사이에 분무 캐비닛을 세척할 필요가 없습니다. 정밀 벤치 분무기를 사용하여 제초제 용액을 배포하여 3개의 플랫 팬 유압 노즐이 장착된 붐으로 215킬로 파스칼의 압력과 초당 0.75미터의 속도로 헥타르당 300리터를 공급합니다.

제초제를 교체할 때 1% 표백제를 사용하여 스프레이 캐비닛을 두 번 세척한 다음 헹굽니다. 제초제 테스트 기록, 처리에서 살아남은 식물의 수, 각 트레이를 자동으로 식별하는 바코드 리더를 사용하여 시각적 추정 바이오매스 또는 VEB에 따라 처리 후 3주 또는 4주 후에 평가를 수행합니다. 식물은 색깔이나 다른 모양에 관계없이 활발한 성장을 보이지 않으면 죽은 것으로 평가됩니다.

VEB는 동일한 개체군에 대한 처리된 개체군과 처리되지 않은 개체 간의 식물 바이오매스를 시각적으로 비교하여 얻습니다. 제초제의 영향을 받지 않는 식물의 경우 10부터 식물이 분명히 죽었을 때 0까지의 점수가 처리된 각 트레이에 제공됩니다. 제초제로 처리되지 않았거나 거의 처리되지 않은 현장에서 수집된 집단과 같은 감수성 집단을 모든 실험에 포함하여 일반적인 치료 효과를 평가합니다.

식물 생존율을 제초제 처리 직전에 계산된 처리된 식물 수의 백분율로 표현하고 표준 오차를 계산합니다. Perme value는 제초제 투여량에서 살아남은 식물이 5% 미만일 때 취약할 수 있는 두 가지 제초제를 투여한 처리에서 얻은 결과를 기반으로 개체군을 4가지 범주로 분류합니다. 생존자가 제초제 투여량에서 5%에서 20% 사이였을 때 약간 내성이 있었습니다.

식물의 20% 이상이 제초제 투여량에서 살아남을 때 1x 저항합니다. 1 x 및 생존자가 제초제 투여시 20 % 이상, 제초제 투여 시 1 x 및 10 % 이상일 때 높은 내성을 가지고 있습니다. 4개의 iopa 집단에 대한 파놀라움을 사용한 제초제 처리의 3가지 대표적인 결과가 표시됩니다.

감수성 검사는 완전히 통제되었지만 개체군 1410은 20% 미만의 식물이 살아남았기 때문에 약간 내성이 있는 것으로 분류되었습니다. 인구 1411은 3 x 용량으로 조절되었지만, 1 x 용량에서 식물 생존율은 20% 이상이었으므로 우리의 상태에 기인합니다. 마지막으로, 인구 1412는 권장 현장 선량의 1배 또는 3배로 통제되지 않았으므로 내성이 높은 범주에 할당되었습니다.

trien Ron methyl으로 처리된 팝 또는 재has 식물의 시각적 추정 바이오매스에 대한 두 번째 예가 여기에 나와 있습니다. 처리되지 않은 대조군에는 10의 점수가 할당되는 반면, 완전히 통제된 식물이 있는 트레이는 VEB가 0입니다. 중간 점수 5점이 트레이에 할당됩니다.

처리되지 않은 식물의 절반인 총 식물 바이오매스를 갖는 것은 식물이 제초제 처리의 영향을 받지 않아 저항성이 높은 처리되지 않은 대조군과 유사한 바이오매스를 가진 식물과 트레이를 가지며 VEB가 10입니다. 이 절차를 시도하는 동안 성숙했을 때 수집하여 복원해야 하는 잡초 종자의 품질이 이 절차에 따라 실험의 성공에 큰 영향을 미친다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 저항 수준과 관련된 추가 질문에 정확하게 답변하기 위해 이러한 응답 바이어스와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 제초제 내성 테스트에 접근하는 방법과 다양한 잡초 종에 다양한 단계를 적용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 특히 시드 CY 제동 및 시드 발아. 제초제나 농축산을 사용하는 것은 매우 위험할 수 있으므로 마스크, 장갑 및 기타 개인 보호 장비를 착용하는 것과 같은 예방 조치는 이 절차를 수행하는 동안 항상 복용해야 한다는 것을 잊지 마십시오.