Simple Bulk Readout of Digital Nucleic Acid Quantification Assays

Leanna S. Morinishi; Paul Blainey

doi:10.3791/52925

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

Simple Bulk Readout of Digital Nucleic Acid Quantification Assays

디지털 핵산 정량 분석 실험의 단순 대량 판독

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06:55 min

September 24, 2015

DOI: 10.3791/52925-v

Leanna S. Morinishi¹, Paul Blainey²

¹Broad Institute, ²Department of Biological Engineering,Massachusetts Institute of Technology

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

우리는 단순화된 (아날로그) 판독으로 핵산을 정량화하기 위한 종말점 디지털 분석을 설명합니다. 당사는 특수 기기가 아닌 표준 qPCR 기계를 사용하여 액적 기반 디지털 분석의 벌크 형광을 측정하고 현미경 검사로 결과를 확인합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 분석의 벌크 형광을 측정하기 위해 기존의 realtime PCR 기기를 사용하여 디지털 액적 분석의 판독을 단순화하는 것입니다. 이는 먼저 관심 샘플, 두 가지 표준물질의 증폭 반응을 준비하고 액적을 형성하여 각각을 수천 개의 나노리터 크기의 반응기로 분할함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 각 물방울 내의 핵산을 증폭하기 위해 물방울을 배양하는 것입니다.

다음으로, 각 샘플 또는 표준물질의 벌크 형광을 표준 QPC 또는 열순환기로 측정합니다. 마지막 단계는 표준 샘플에서 생성된 표준 곡선을 사용하여 관심 샘플에서 형광 방울의 비율을 예측하는 것입니다. 이 방법의 성능을 검증하기 위해 형광 현미경을 사용하여 벌크 형광 분석의 정량화 성능을 독립적으로 평가할 수 있습니다.

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