실험 시신경의 탈수 초화의 쥐 모델에서 시각 유발 전위 기록

다음 실험의 전반적인 목표는 생체 내에서 시신경의 탈수초를 모니터링하는 것입니다. 이것은 먼저 시각 피질에 미세 전극을 이식함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계로 lyin은 시신경에 미세 주입되어 탈수초화의 국소 병변을 유발합니다.

그런 다음 시각적으로 불러일으킨 잠재적인 녹음을 만들 수 있습니다. 궁극적으로 회귀 분석은 시각적으로 유발된 잠재적 지연 지연과 볼륨 사이에 강력한 선형 상관 관계가 있음을 보여줍니다. 이 비디오는 쥐의 시각적 유발 전위를 기록하는 기술을 보여줍니다.

이식된 두개골 전극을 사용하여 미세 주입 기술을 사용하여 시신경의 국소 탈수초 제거 기술을 시연할 것입니다. 모든 실험은 맥쿼리 대학교 의과대학의 실험실에서 수행됩니다. 이 기술은 박사 과정 학생인 Nitin Chichi에 의해 시연될 것입니다.수술을 시작하기 전에 케타민과 메인의 복강 내 주사로 12주 이상의 성인 쥐를 마취하기 시작합니다.

금단 반사가 없는지 확인하십시오. 수술 중 동물에게 돌아가야 하는 반사 신경을 처리하기 위해 필요에 따라 10% 용량의 케타민을 투여할 준비를 하십시오. 그런 다음 수술 부위의 피부를 면도한 다음 동물을 열 패드에 올려 준비를 완료합니다.

포비돈 요오드로 피부를 문지르고 동물을 드레이프하고 안과 연고를 바르십시오. 또한 멸균 기구를 사용하여 무균 상태를 유지하십시오. 수술을 시작하려면 머리 정중선을 세로로 절개합니다.

그런 다음 두개골이 잘 노출되도록 결합 조직을 제거합니다. 다음으로, 마이크로 핸드 드릴을 사용하여 bgma 뒤쪽 7mm, 정중선 옆 3mm의 작은 버 홀을 구멍에 조심스럽게 넣습니다. 두개골을 통해 나사 전극을 삽입하고 피질에 약 0.5mm

그런 다음 필요에 따라 bgma에 3mm 길이의 정중선에 기준 나사 전극을 이식합니다. 치과용 시멘트를 바르고 나사 전극을 감싸고 고정합니다. 마지막으로 피부를 봉합합니다.

전극을 노출된 상태로 두면 각 녹음에 대해 피부를 다시 열 필요가 없습니다. 이제 동물이 마취에서 회복되기 전에 비스테로이드성 항염증제나 nsaid, 또는 오피오이드 진통제를 신속하게 투여하십시오. 마지막으로 항생제 연고로 피부를 치료한다.

동물을 보온 패드가 있는 회복 케이지에 넣고 완전히 걸을 수 있을 때까지 지속적으로 모니터링합니다. 그런 다음 적어도 일주일 동안 회복되도록 하십시오. VEP 기록을 하기 전에, 앞서 설명한 대로 동물의 수술을 준비하고, 가느다란 홍채 가위로 눈의 안와에서 1.5cm 높이의 피부를 절개합니다.

피하 조직을 열고 안와강에 접근합니다. 그런 다음 입체경으로 결막과 앞쪽 힘줄 캡슐을 엽니다. 다음으로, 안구 외 근육과 안와 내 눈물샘을 수축시킵니다.

시신경 주위의 시신경을 약 3mm 노출시키려면 안과용 칼날을 사용하여 경막과 지주막질 물질층을 세로로 엽니다. 그런 다음 Hamilton 주사기에 부착된 유리 마이크로 피펫을 지구본에서 2mm 후방의 신경에 삽입합니다. 30초에 걸쳐 리인 덩어리에 염료를 주입하여 절차를 완료합니다.

절개 부위를 봉합합니다. 감염을 예방하기 위해 항생제 연고를 바르십시오. 동물을 보온 패드로 옮기고 회복될 때까지 모니터링하십시오.

동물을 마취하고 이전과 같이 피부를 준비한 후 그곳의 어두운 방으로 옮깁니다. 체온을 섭씨 37도의 50도 이내로 유지하고, 어둡게 모니터링되는 동안 호메오 테마 블랭킷 시스템과 온도 프로브를 사용합니다. 5분에서 30분 동안 동물을 적응시킵니다.

30분 후, 1%트로픽 IDE 안약으로 동공을 확장시킵니다. 그런 다음 가위와 집게를 사용합니다. 두개골 위의 피부를 열고 미리 배치된 NC 두 개의 나사 전극에 접근합니다.

임피던스 미터에 나사를 연결합니다. 그런 다음 전극 임피던스를 측정하고 5킬로옴 미만으로 유지합니다. 이제 자극된 눈의 반대쪽 시각 피질에 나사를 연결합니다.

그런 다음 꼬리에 바늘 전극을 삽입하여 지면을 표면화합니다. 이제 보정된 미니 간즈펠트 자극기를 눈꺼풀 주변 피부에 올려 눈 분리를 개선합니다. 그런 다음 1Hz에서 100번의 플래시를 사용하여 1Hz의 저역 통과 필터와 고대역 패스를 사용하여 광자 자극을 전달합니다.

100헤르츠에서 필터링합니다. 완료되면 피부를 봉합하고 동물을 보온 패드에 올려 마취에서 회복합니다. 일주일에 몇 번에서 몇 주에 한 번까지 반복 녹음이 가능합니다.

중재, VEP 추적은 N 1 대기 시간에 상당한 지연이 있음을 보여줍니다. 시신경 주사 후, 재현성을 입증하기 위해 매일 녹음을 했습니다. 탈수초화(demyelination)의 부분적인 시신경 병변은 룩살(luxal) 패스트 블루(fast blue)로 염색된 조직 절편에서 관찰될 수 있었다.

병변 부피를 측정한 후, 잠복 지연과 병변의 크기 사이의 상관관계가 명백해졌습니다. 이 기술은 시신경의 병변을 유도하는 데 사용할 수 있으며 이러한 병변을 VP의 변화와 연관시키는 데 사용할 수 있으며 국소 탈수초 모델로 사용할 수 있습니다. 유발된 병변 크기는 매우 다양하기 때문에 변화를 조직학적으로 연관시키는 것이 중요합니다.