간단하고 컴퓨터 지원 마우스에 대한 후각 테스트를

다음 실험의 전반적인 목표는 생쥐의 타고난 후각 구별, 후각 선호 또는 회피 및 후각 민감성을 테스트하는 것입니다. 이것은 마우스를 새로운 유인제 또는 항소제와 물인 중성 냄새에 노출시킴으로써 달성됩니다. 한편, 비디오 카메라는 행동 세션을 기록합니다.

다음으로, 제공된 매크로를 사용하여 이미지 J에서 비디오를 분석하여 냄새 및 물 매개변수에 소요된 시간을 얻습니다. 결과는 사후 컴퓨터 지원 분석을 기반으로 한 다양한 유전자형 중에서 물과 비교하여 냄새에 대한 선호도 또는 회피 행동을 보여줍니다. 전용 경기장과 후각을 사용하는 것에 비해 후각 테스트의 주요 장점은 친숙한 경기장을 사용하기 때문에 빠른 완료와 간단한 설정이 가능하다는 것입니다.

또한, 내 연구실의 학생에 따르면 Emmanuel Abry가 절차를 보여줄 Unexpensive 하드웨어를 사용합니다. 이 실험을 위해 3개월에서 5개월 된 수컷, C 57 검은색, 6가지 야생형 및 형질전환 마우스를 사용합니다. 이 데모에서는 두 개의 녹아웃 라인과 깔짚 짝 컨트롤을 사용합니다.

실험 분야의 경우 3cm의 침구가 있는 깨끗하고 살균된 마우스 케이지를 사용하십시오. 다음으로 카메라 설정을 준비합니다. 케이지 바닥에서 58cm 위에 맞춤형 삼각대 마운트에 배치합니다.

케이지의 위치가 있어야 하는 위치를 나타내기 위해 카운터에 몇 가지 표시를 하십시오. 중앙 이미지의 경우 초당 약 15프레임으로 320 x 240 픽셀 비디오를 녹화하도록 카메라를 설정합니다. 준비하기 위해 테스트 작업자는 가능할 때마다 각 향의 농축액을 용매에 저장해야 합니다.

선호도 테스트를 위해 땅콩 기름에 땅콩 버터의 10% 중량 x 부피 용액을 만드십시오. 회피 테스트를 위해 메틸 부티르산에 98%의 용액을 사용하십시오. 민감도 검사의 경우, 검사 1-2일 전에 동일한 균주의 쥐로부터 암컷의 소변을 채취합니다.

케이지 그리드 위에 배를 대고 있는 암컷을 제지하고 소변 방울을 플라스틱 접시에 모으십시오. 정규화하기 위해 여러 암컷에서 샘플을 수집합니다. 개별적인 변동성을 위해 모든 샘플을 1.5ml 튜브에 넣고 섭씨 영하 20도에서 보관하십시오.

동물들이 습관화되는 것을 시작하려면, 한 마리를 청소된 우리에 넣고 탐험하게 한다. 5분 동안 테스트 케이지의 환경은 가정용 케이지와 같아야 합니다. 습관화 단계가 끝날 때마다 각 테스트 일에 한 번씩 습관화 단계를 반복하고 녹음을 시작하고 60 마이크로 리터의 쾌적한 향기를 피펫팅하십시오.

이 경우 반대쪽 벽의 한쪽 벽에 땅콩 버터를 바르고 같은 양의 물을 피펫으로 만듭니다. 중성적인 향으로 각 벽에서 약 10cm 높이로 방울을 바르십시오. 이제 동물이 2분 동안 탐색하게 한 다음 녹음을 중지하고 마우스를 집 우리로 되돌립니다.

테스트할 각 마우스에 대해 이 프로세스를 반복합니다. 항상 새로운 테스트 케이지를 사용합니다. 3-5일 모든 선호도 테스트를 수행한 후 새 테스트 케이지를 사용하여 회피 테스트를 수행합니다.

각 마우스에 대해 회피 테스트를 수행합니다. 매력 테스트와 마찬가지로 기분 좋은 향기만 두 개의 메틸 부티르산인 회피 냄새로 교체하십시오. 민감도 테스트의 경우, 동일한 마우스에 대한 시도 사이에 하나의 케이지를 재사용할 수 있습니다.

따라서 케이지의 물 쪽을 표시하고 시험 사이에 70% 에탄올을 적신 종이로 짧은 벽을 청소할 준비를 하십시오. 실험 당일, 10배 희석 시리즈로 소변의 4가지 농도를 만듭니다. 회피 테스트와 같은 이중 증류수를 사용하여 각 동물을 5분 동안 테스트 케이지에 적응시킵니다.

그런 다음 각 쥐를 처음에는 가장 높은 희석률로 소변에 노출시키십시오., 그것은 1에서 10, 000입니다. 기록하는 동안 소변 희석액을 테스트 케이지에 바르고 반대쪽 벽에 물을 바르십시오. 다른 테스트와 마찬가지로 동물이 탐험하게 합니다.

2분 동안. 그런 다음 동물을 깨끗한 쥐 케이지로 옮깁니다. 모든 동물이 가장 낮은 농도를 경험한 후 모든 테스트 케이지 벽을 청소하고 다음으로 농도가 높은 소변을 사용하여 각 마우스에 대해 테스트를 반복합니다.

순수한 소변이 검사될 때까지 이 과정을 계속하십시오. 실험을 위해 모든 데이터를 수집한 후 이미지 J의 비디오를 열어 조정 및 처리 세부 정보를 설명하고 설명된 프로토콜을 사용하여 텍스트 프로토콜에 제공합니다. 두 개의 다른 녹아웃 라인.

그룹 B와 C는 쓰레기를 만든 대조군 그룹 A와 비교했습니다.동일하거나 같지 않은 분산을 가진 무방향성 학생의 T-검정은 유전자형 내에서 냄새와 물 사이에 소요된 시간을 비교합니다. One-way inova를 사용하여 유전자형 간의 거동을 비교합니다. 회피 테스트에서 반발성 2개의 메틸 부티르산 냄새에 대한 반응은 그룹 A와 B에서 예상했던 것과 같았지만, 그룹 C는 이 냄새에 대한 회피 행동을 보이지 않았다.

민감도 테스트에서 인력의 역치는 1에서 1000 희석으로 물보다 선호되는 소변인 물과 함께 보낸 시간에서 소변과 함께 보낸 시간을 빼서 구했습니다. 두 실험 그룹 모두 B와 c는 선호도를 나타내기 위해 100배 더 높은 농도가 필요했습니다. 일단 마스터하면 이 기술이 제대로 수행되면 몇 시간 안에 완료할 수 있으며, 이 절차에 따라 후각 학습 및 소멸과 같은 다른 방법을 수행하여 후각 가소성 및 학습을 조사할 수 있습니다.