Name: 간단하고 컴퓨터 지원 마우스에 대한 후각 테스트를 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: 학습하세요 마우스 후각 판별 및 선호도 행동을 평가하는 컴퓨터 지원 비디오 분석 방법을. Image J 소프트웨어와 친숙한 실험 환경을 사용하여 신경과학 연구에서 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있습니다.

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이 연구는 알츠하이머병 연구를 지원하기 위해 스위스 국립 재단(31_138429)과 시냅시스 재단의 지원을 받았습니다.

모든 동물의 절차는 과학적인 목적으로 사용되는 동물의 보호에 관한 유럽 연합 지침 63분의 2,010 / 유럽 연합 (EU)에 따라하고 (프리 부르 주, 스위스) 지역의 동물 관리위원회에 의해 승인됩니다. 1. 동물 준비 <ol><li> 실험 동물 <ol><li> 성인 남성 야생 유형과 연령 3-5 개월 형질 전환 생쥐 (C57BL / 6 배경)에 대한 실험을 수행합니다. 마우스의 세 그룹은 야생형 한배의 새끼 컨트롤에 해당합니다 (그룹, Jagged1 flox / flox 19)와 두 개의 조건부 KO 마우스 라인 (B 군, Jagged1ncKO와 C, Jagged1gcKO). </li><li> 12 시간 제어 어두운 / 라이트 사이클 통풍 표준 실험실 조건에서 주택의 마우스, 그리고 음식과 물을 광고 무제한을 제공합니다. </li></ol></li></ol> 2. 실험 설정 <ol><li> 실험 무대 <ol><li> 실험 분야의 경우, 깨끗한 살균 마우스 케이지를 사용 (36cm 길이 × 20.5 cm 가로 x 13.5 cm 높이) (그림 1A). </li><li> 3cm 높은 신선한 침구와 번호가 케이지에 각 마우스를 할당합니다. 케이지를 재사용하는 경우, 악취 감수성 시험에서와 같이, 악취와 마우스 사이의 교차 오염을 방지하기 위해 다음과 같은 조치를 취해야. <ol><li> 물 측을 표시합니다. </li><li> 70 % 에탄올, 각면에 대해 하나의 분무 두 조직의 서류와 함께 케이지의 좁은 벽을 청소합니다. </li><li> 마우스의 유전자형에 따라 새장을 더미와 층류 후드 아래에 일시적으로 저장합니다. </li></ol></li></ol></li><li> 카메라 <ol><li> 케이지 (그림 1A)의 바닥에서 58cm의 목적으로 사용자 정의 삼각대에 카메라를 탑재합니다. 삼각대와 케이지의 위치를​​ 고정하고 카메라가 케이지의 상단을 중심으로 할 수 있도록 마크 구분. </li><li> X 240 픽셀, MOV 파일로 초당 15.08 프레임 320 픽셀의 비디오를 녹화. </li></ol></li><li> 냄새 <ol><li> 인 scen을 재현 탁표시된 경우 TS, 용매에있는 이들은 가용성이다. </li><li> 환경 테스트 사용 땅콩 버터하십시오. 땅콩 기름, 땅콩 버터 (/ V w 10 %)을 재현 탁. </li><li> 회피 시험 사용 순수 2 Methylbutyric (2 MB) 산 (98 %)를 참조하십시오. </li><li> 감도 테스트를 위해, 같은 마우스 식민지와 배경 (C57BL가 / 6)에서 여성의 소변을 사용합니다. <ol><li> 편의를 위해 후각 시험 1 ~ 2 일 전에 소변을 수집합니다. 제지 및 케이지 그리드 위의 배와 후드 아래에 마우스를 누르고 있습니다. 케이지 그리드에서 소변의 방울을 수집하는 플라스틱 페트리 접시를 놓습니다. </li><li> 1.5 ML 튜브의 각 여성에서 소변을 수집과 동물 사이의 변화에​​ 대한 정상화 모든 소변 샘플을 섞는다. 사용할 때까지 -20 ℃에서 보관하십시오. </li><li> 실험 날에, 소변을 해동하고 10의 희석 배수에 증류수 4 희석을 수행 (1:10 1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10,000). </li></ol></li></ol></li></ol>3. 후각 테스트 참고 : 강한 유인 (땅콩 버터와 여성의 소변) 또는 강한 반발 (2-MB 산) (15)으로 인식되어 의도적으로 선택되었습니다이 프로토콜 냄새합니다. 또한 후각 동작과 간섭의 가능성을 제거하기 위해 회피 시험에 앞서 쾌적한 냄새로 선호도 민감도 시험을 실시하는 것이 중요하다. 그럼에도 불구하고, 본 논문에서는 환경 설정 및 회피 시험의 단순화를 위해, 모두 인식 테스트에서 설명한다. 각 행동 세션은 습관화 단계로 시작합니다. <ol><li> 요법 이니 단계 <ol><li> 깨끗한 할당 새장에 동물을 배치하고 5 분 (그림 1B)에 대해 알아 보자. 실험 케이지 환경 홈 케이지에 익숙하기 때문에, 짧은 시간 습관화을 허용하기에 충분하다. </li><li> 감수성 시험 하루에 완료되는 경우, 응용 프로그램, 습관화 전에 한번만 수행가장 높은 희석 냄새 명. 감수성 시험은 다른 날에 수행되는 경우, 각각의 날에 새로운 깨끗한 케이지 습관화 단계가 필요하다. </li></ol></li><li> 인식 테스트 <ol><li> 습관화 이후, 카메라를 작동하고 바로 아래쪽 (도 1C)에서 약 10cm에서 케이지의 대향 벽 상 쾌적한 향기 (땅콩 버터) 60 μL 및 중성 향기 (수돗물)의 60 μL 피펫. </li><li> 마우스가 2 분 (그림 1D)의 냄새를 알아 보자. 그 후, 카메라의 전원을 전환합니다. </li><li> 이 시점에서, 다음 마우스 습관화 단계부터 진행. 발수 냄새 60 μL (2-MB 산) 및 물 60 μl를 가하여 정확히 동일한 방식으로 회피 시험한다. </li></ol></li><li> 감도 테스트 <ol><li> 1 : 다음과 같은 순서로 여성의 소변 농도 증가에 수컷 마우스의 임계 흡착 평가 10000; 1 : 1000; 1 : 100; 1 :(10)과 순수한 소변. </li><li> 습관화되면, 이전에 3.2.1에 설명 된대로 실험에 의해 피펫 가장 높은 희석 각 마우스를 노출. </li><li> 비디오 카메라에서 2 분의 시간 프레임 내에서, 물 대 소변의 탐색 동작을 기록한다. 모든 마우스는 코호트 높은 희석 (1 : 10,000)에 대해 시험 한 후 전술 한 바와 같이, 소변의 높은 농도에 노출. </li></ol></li></ol> 4. 사후 데이터 분석 참고 : 설명하는 모든 행동 테스트는 데이터 분석 지침에 따라 사후 처리됩니다. <ol><li> Windows 시스템 ImageJ에에서 MOV 파일을 엽니 다 <ol><li> http://www.apple.com/quicktime/download에서 사용자 정의 된 설정을 사용하여 자바에 대해 빠른 시간을 설치합니다. </li><li> ImageJ에 웹 사이트 (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/qt-capture.html)에서 빠른 시간 플러그인을 설치합니다. </li><li> 라이브러리 extens에 ( 프로그램 파일 퀵타임 QTSystem C) QTJava.zip 가져 오기ImageJ에 이온 (.ImageJ JRE lib 디렉토리 내선). </li><li> 플러그인 폴더에 복사하여 QTJava.zip 및 QTJava.jar로 이름을 바꿉니다. </li><li> 매크로 폴더에 첨부 된 여섯 스크립트를 설치 (ImageJ에 플러그인 매크로). </li><li> 오픈 ImageJ에 그 후 가까운 ImageJ에를 컴파일하고 빠른 시간 플러그인을 실행합니다. </li><li> 빠른 시간 사용&gt; ImageJ에를 다시 열고 파일&gt; 가져 오기를 사용하여 MOV 파일을 엽니 다. </li></ol></li><li> 영상 조정 <ol><li> 비디오 파일은 ImageJ에 오픈되면, 실험자 케이지 (T0)에 방향제를 피펫 팅 된 시간에서 상수 2 분 탐색을 얻기 위해서 영상을 잘랐다. (스택 ToolsSlice 제거 ImageJ에 이미지) 1 단위를 사용하여 이전 프레임을 T0에 해당하는 프레임을 확인하고 제거합니다. 2 분 탐사를 초과하는 모든 프레임을 삭제 같은 명령을 사용합니다. </li><li> 케이지가 중앙에 있는지 확인하고 필요한 사용은 이미지&gt; 변환하는 경우&gt; 회전 명령을 정렬 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 보라O 처리 참고 : 비디오 처리는 완전히 컴퓨터 보조이며,이 종이를 동반 매크로 명령을 사용합니다. <ol><li> 127 픽셀 X 218 픽​​셀 크기의 케이지에 영역을 제한하기 위해 플러그인&gt; 매크로&gt; 실행 명령의 1 단계 매크로를 실행합니다. 케이지 (그림 2, 1 단계)을 통해 고정 된 사각형을 이동합니다. </li><li> 단계 2 매크로 (도 2, 단계 2)를 이용하여 관심 영역 (ROI)의 영역에 케이지 영역 자르기. </li><li> , 임계 값 신호를 할당 얼룩 제거 및 신호 변동을 필터링하여 배경으로부터 마우스 이미지를 추출하는 단계 3 매크로를 사용. Z 축은 곡선의 출력값은 2 분 동안 탐사 &quot;수조&quot;의 ROI 내에 움직이는 마우스 섀도우의 강도에 대응하는 평균 그레이 값을 나타낸다. 스프레드 시트 파일의 투자 수익 (ROI) (그림 2, 3 단계)에 따라 이름이 워크 시트에 결과를 복사합니다. </li><li> 에 4 단계 매크로를 사용하여투자 수익 (ROI) &quot;냄새 실&quot;에서 마우스의 평균 회색 값을 추출. 4.3.3에서와 같은 스프레드 시트 파일의 투자 수익 (ROI) (그림 2, 4 단계)에 따라 이름이 워크 시트에 결과를 복사합니다. </li><li> 상기 ROI &quot;물 경계&quot;에서 마우스의 움직임 분석을 제한하기 위해 단계 5 매크로를 사용한다. 4.3.3에서와 같은 스프레드 시트 파일의 투자 수익 (ROI) (그림 2, 5 단계)에 따라 이름이 워크 시트에 결과를 복사합니다. </li><li> ROI &quot;냄새 경계&quot;에서 마우스의 움직임 분석을 제한하는 단계 6 매크로를 사용한다. 4.3.3에서와 투자 수익 (ROI) 스프레드 시트 파일 (그림 2, 6 단계)에 따라 이름이 워크 시트에 결과를 복사합니다. </li><li> 모든 동영상을 처리하고 동물 당 프레임 수에 일관성이 있는지 확인합니다. 여기에, 2 분 탐사 세션에 해당하는 1810 프레임에 모든 동물을 기록합니다. </li><li> 각 동물과 종류의 프레임 평균 회색 VA 각 투자 수익 (ROI)에 대한매독 나누기 0보다 큰 값으로 프레임 수가 1 초에 대응하는 각각의 ROI에서 소요 초 얻었다. </li></ol></li></ol> 5. 통계 분석 <ol><li> 각 시험 http://www.real-statistics.com/one-way-analysis-of-variance-anova/homogeneity-variances/에 사용할 수있는 공식을 사용하여 바틀렛의 시험에 의해 그룹 / 유전자형 내 분산의 동질성을 확인합니다. </li><li> 시간 바틀의 검사 결과에 따라 동일하거나 동일하지 않은 차이를 가정 무 지향성 스튜던트 t-test를 이용하여 하나의 그룹 내에 악취 대 물 소비간에 인력 및 회피 시험에서는, 비교를 수행한다. 페로 니의 사후 테스트로 일원 분산 분석하여 유전자형 사이에 물에 소요되는 시간 뺀 냄새와 소요 시간을 비교합니다. </li><li> 감수성 시험에서 식 수용 함께 보낸 시간으로부터 감산 냄새 소요 시간을 비교 분석페로 니의 사후 테스트와 일원 분산 분석에 의한 소변의 특정 희석에 그룹 중 R. 페로 니의 사후 테스트와 반복 2 일원 분산 분석에 의해 성장하는 악취 농도 그룹 사이의 감도를 비교. </li><li> 매력 및 회피 테스트에서 유전자형과 치료 사이의 상호 작용은 페로 니의 사후 테스트 2 일원 분산 분석에 의해 조사한다. </li></ol>

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</ol>

이해 상충이 없습니다.

냄새에 대한 인식, 냄새에 물과 감도 대 냄새 사이의 차별이 프로토콜에서 제안 된 테스트는 마우스의 타고난 후각 행동의 다양한 측면을 평가 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 이전에 15을 도시 선호도 및 회피 스케일에 따라서 임의의 냄새에 적용될 수있다. 프로토콜 탐색 활동을 기반으로하고 있기 때문에 그것은 마우스가 움직임에 영향을주는 후각 탐사 방해 할 수있는 임의의 모터 또는 불안 장애를 표시하지 않는 것이 중요하다. 기재된 시험 그러나 이들이 성인 여성 또는 세 생쥐 또한 후각을 조사하도록 구성 될 수 성인 수컷 마우스에 대해 의도된다. 1) 최소 3 일의 간격으로 각각의 시험을 수행 마우스에서 이러한 연구 조사 후각을 시작하기 전에 다음과 같은 측면에주의하는 것이 중요하다. 회피는 후각 메모리 (20)의 간섭을 최소화하기 위해 마지막으로 테스트해야합니다; 2) 전자를 수행마우스는 그들의 활성 사이클 21에있는 광...

후각은 포유 동물에서 가장 선진국과 중요한 감각 기능 중 하나입니다. 후각 활동의 손상 차손은 최악의 경우 음식 섭취, 사회적 행동하고, 심지어 생존에 영향을 미칠 수 있습니다. 인간으로, 후각 저하가 1 의존 나이이고 신경 장애 2의 강력한 예측 인자로 간주됩니다 - 6. 펜실베니아 대학에 의해 개발 된 후각 식별 검사는 현재 초기 신경 학적 결손 7을 평가하고 높은 확률로 치매 8,9의 진행을 예측할 수있는 가장, 사용되는 비 침습적 및 정량화, 진단 테스트 중 하나를 나타냅니다. 후각 시스템 및 설치류에서 후각의 굴지의 접근성, 기전 후각 기능 (10)를 다루는 연구의 강렬한 선을 촉발했다. 우리는 이전에 신호 RECEPT의 기능의 손실을 보여 주었다또는 Notch1은 후각 회피 (11)에 영향을 미친다. 이 프로토콜에서 우리는 후각 성능을 연구하는 신경 세포 나 교세포에서 신호 리간드, Jagged1 결핍 된 마우스를 사용합니다. 타고난 후각은 인식과 같은 세 개의 매개 변수, 냄새와 후각 민감도 4 사이의 차별에 의해 정의된다. 설치류 후각 테스트는 다양한 방식으로 수행 될 수 있으며, 일부 행동 연구는 특정 증기 농도 및 정확한 시간 프레임 (12)에 동물에게 냄새를 제공 olfactometers, 사용하게 - 14. 그럼에도 불구하고,이 장비는 고가이고 만 전문 시설에서 사용할 수 있습니다. 우리의 연구에서, 우리는 휘발성 향기를 이용하여 수행되고, 간단한 빠르고 재현성 후각 시험 프로토콜을 제공한다. 테스트는 유인 또는 기피 냄새를 측정 인식을 설명하고 향기와 물 11,15,16 사이의 차별을 평가한다. 와트, 동일한 설정을 사용하여E는 다양한 농도 (16, 17)에서의 냄새에 대한 민감도를 측정 할 수있다. 페이지 및 동료 (18)의 작품에서 영감을 사후 컴퓨터를 이용한 영상 처리, 실험 맹검 전체 실험을 수행 할 수있는 한 사람을 허용 할 필요없이 공정한 결과를 제공합니다. 이 프로토콜은 마우스에서 후각 거동을 연구하기위한 시작점을 제공하기위한 것이다.

<table><tbody><tr><td>마우스 케이지</td><td>Italplast (이탈리아)</td> <td>1144B</td><td>길이 36cm x 너비 20.5cm x 높이 13.5cm</td></tr><tr><td>부서진 나무 침구</td><td>Abedd (오스트리아)</td> <td>LTE E-001</td><td>3cm 높이</td></tr><tr><td>땅콩 버터</td><td>Migros (스위스)</td> <td>NA</td><td>1 : 10</td></tr><tr><td>2- 메틸 부티르산</td><td>시그마 Aldrich (스위스)</td> <td>W269514</td><td></td></tr><tr><td>같은 마우스 균주의 가임 암컷의 순수한 여성 소변</td><td>NA</td><td></td><td>Dilution 시리즈</td></tr><tr><td>카메라</td><td>올림푸스(미국)</td><td>Camedia C-8080</td><td>MOV 파일</td></tr><tr><td>Quicktime for Java(Windows)</td><td>Apple(미국)</td><td>MOV</td><td>파일 시각화를 위한 NA 비디오 플러그인</td></tr><tr><td>ImageJ for Windows</td><td>NIH(미국)</td><td>NA</td><td>비디오 처리/분석</td></tr></tbody></table>

간단하고 컴퓨터 지원 마우스에 대한 후각 테스트를

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

후각은 매우 종 가운데 보존하고 재생과 생존을 위해 필요합니다. 인간에서, 후각은 노화의 영향을받는 감각 중 하나이며, 신경 퇴행성 질환의 강력한 예측 인자이다. 따라서, 후각 테스트 초기 신경 학적 결손을 검출하는 비 침습적 진단 방법으로 사용된다. 후각 네트워크 감수성 근본적인 메커니즘을 이해하기 위하여, 설치류에서 후각 연구는 지난 10 년간 추진력을 얻고있다. 여기서는 사전 식품이나 물 제한없이 마우스에서 타고난 악취 지각 감도의 매우 간단한 시간 효율적이고 재현 후각 테스트 방법을 제시한다. 시험은 마우스에 익숙한 환경에서 수행되는, 냄새와 취기 노출의 2 분의 세션 만이 필요합니다. 분석에 ImageJ에 컴퓨터 보조 명령을 사용하여, 사후를 수행하기 때문에, 될 수있는한 연구원에 의해 처음부터 끝까지 수행. 이 프로토콜은 특별한 하드웨어 또는 설치를 필요로하지 않으며, 후각 인식과 감도를 테스트에 관심이있는 실험실에 대해 표시됩니다.

인식 테스트는 2-MB 산에 땅콩 버터와 회피에 매력을 측정합니다. 세 그룹의 마우스는 시험 물에 비해 &quot;냄새 경계&quot;에서 소요 시간을 정량화한다. 물 (8 t = 2.52, p &lt;0.05)에 비교하여 환경 시험에서, 대조군은 냄새에 상당한 선호도를 표시한다. 반면에, B 군은 땅콩 버터에 상당한 매력을 표시하지 않고 물 (T 6 = 3.22, P &lt;0.05)과 더 많은 시간을 보낸다. 따라서, 대조군 (F 1,7 = 26.39, P &lt;0.005)에서 다르게 동작합니다. 또한, C 군은 차별을 보여줍니다 물과 땅콩 버터 (T 8 = 0.78, P = 0.45)와 같은시기에 보낸다. 전반적으로, 세 그룹이 다르게 동작 (F 2,9 = 19.83, P &lt;0.005)과 유전자형과 치료 (땅콩 버터와 물) 사이에 상당한 상호 작용이있다 (F 2,1 = 4.90, P &lt;0.00...

우리는 쥐를 대상으로 간단하고 편견 없는 후각 테스트를 제시합니다. 이 프로토콜을 사용하면 물과 비교되는 새로운 냄새에 대한 후각적 구별, 선호도, 회피 및 민감도를 단일 행동 세션으로 평가할 수 있습니다. 이 방법은 단일 실험자에 대해 표시되며 분석은 컴퓨터 지원 비디오 처리를 기반으로 합니다.

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

다음 실험의 전반적인 목적은 마우스의 선천적 후각 식별 능력, 후각적 선호도 또는 회피 반응, 그리고 후각 민감도를 테스트하는 것입니다. 이는 마우스를 새로운 유인제 또는 혐오제와 중성 냄새인 물에 노출시킴으로써 수행됩니다. 그동안 비디오 카메라가 행동 세션을 기록합니다.다음으로, 제공된 매크로를 사용하여 Image J에서 비디오를 분석함으로써 냄새 및 물 파라미터에서 보낸 시간을 구합니다. 결과는 사후 컴퓨터 보조 분석을 바탕으로, 서로 다른 유전자형 간의 물과 비교한 냄새에 대한 선호 또는 회피 행동을 보여줍니다. 전용 아레나와 후각 장치를 사용하는 것보다 이 후각 테스트의 주요 장점은 익숙한 아레나를 사용하므로 설정이 간단하고 빠르게 완료할 수 있다는 점입니다.또한, 이 절차는 저비용 하드웨어를 사용하여 진행되며, 시연은 저희 연구실의 학생인 Emmanuel Abry가 맡았습니다. 본 실험에서는 3~5개월 된 수컷 C 57 black, six 야생형 및 형질전환 마우스를 사용하십시오. 이번 시연에서는 두 가지 녹아웃 라인과 리터메이트 대조군을 사용합니다.실험 구역으로는 3cm 두께의 베딩이 깔린 깨끗하게 멸균된 마우스 케이지를 사용하십시오. 다음으로 카메라 설정을 준비합니다. 맞춤형 삼각대 마운트를 사용하여 케이지 바닥에서 58cm 높이에 카메라를 배치하십시오.케이지가 위치해야 할 지점을 표시하기 위해 카운터에 표시를 합니다. 중앙 이미지를 얻으려면 카메라를 약 15 fps의 320 x 240 픽셀 비디오로 기록하도록 설정하십시오. 테스트를 준비하기 위해, 가능한 경우 각 향의 농축액을 용매에 저장해 두십시오.선호도 테스트를 위해 피넛 오일에 피넛 버터를 10% w/v 농도로 녹인 용액을 조제합니다. 회피 테스트의 경우, 98% methyl butyric acid 용액을 준비합니다. 민감도 테스트를 위해, 테스트 1~2일 전에 동일한 계통의 생쥐로부터 암컷의 소변을 수집합니다.암컷의 배가 케이지 그리드 위로 오도록 고정한 후, 플라스틱 접시에 소변 방울을 수집합니다. 정규화를 위해 여러 마리의 암컷으로부터 샘플을 수집하십시오. 개체 간 변이를 고려하여, 모든 샘플을 1.5 milliliter 튜브에 모아 -20 °C에서 보관하십시오.동물 순화를 시작하려면 동물을 세척된 케이지에 넣고 탐색하게 합니다. 5분 동안 테스트 케이지의 환경은 홈 케이지와 동일하게 유지해야 합니다. 각 테스트 날마다 순화 단계를 한 번씩 반복하며, 순화 기간이 끝나면 기록을 시작하고 기분 좋은 향 60 µL를 피펫으로 분주합니다.이 경우에는 한쪽 벽면에 피넛 버터를 바르고, 반대쪽 벽면에는 동일한 양의 물을 피펫으로 떨어뜨립니다. 중성 향의 경우, 각 벽면의 약 10cm 높이에 방울을 떨어뜨려 적용합니다. 이제 동물이 2분 동안 탐색하게 한 뒤, 녹화를 중단하고 마우스를 홈 케이지로 돌려보냅니다.테스트 대상인 각 마우스에 대해 이 과정을 반복하십시오. 항상 새로운 테스트 케이지를 사용해야 합니다. 모든 선호도 테스트를 수행한 3~5일 후에 새로운 테스트 케이지를 사용하여 회피 테스트를 실시하십시오.각 마우스에 대해 회피 테스트를 수행합니다. 유인 테스트와 마찬가지로, 쾌적한 향을 회피 향인 2-methyl butyric acid로 교체하기만 하면 됩니다. 민감도 테스트의 경우, 동일한 마우스의 실험 반복 시 하나의 케이지를 재사용할 수 있습니다.따라서 케이지의 수조 쪽을 표시하고, 실험 간에 70% ethanol을 적신 종이로 짧은 벽면을 세척할 준비를 하십시오. 실험 당일에는 10배 희석 계열을 사용하여 네 가지 농도의 소변 용액을 제조합니다. 회피 테스트와 마찬가지로 2차 증류수를 사용하여 각 동물을 5분 동안 테스트 케이지에 적응시킵니다.그런 다음 각 마우스를 가장 높은 희석 배수인 1:10,000의 소변에 먼저 노출시킵니다. 녹화하는 동안 테스트 케이지에 희석된 소변을 도포하고 반대편 벽에는 물을 도포합니다. 다른 테스트와 마찬가지로 동물이 탐색하도록 둡니다.2분 동안 유지합니다. 그 후, 동물을 깨끗한 마우스 케이지로 옮깁니다. 모든 동물이 가장 낮은 농도에 노출된 후, 모든 테스트 케이지 벽면을 세척하고 다음으로 농도가 높은 소변을 사용하여 각 마우스에 대해 테스트를 반복합니다.순수 소변을 테스트할 때까지 이 과정을 계속하십시오. 한 실험에 대한 모든 데이터를 수집한 후, Image J에서 비디오를 열어 조정하십시오. 조정 및 처리 세부 사항은 설명된 프로토콜을 사용하여 텍스트 프로토콜에 제공되어 있습니다. 두 가지 서로 다른 녹아웃 라인.그룹 B와 C를 베딩으로 만든 대조군인 그룹 A와 비교하였다. 등분산 또는 이분산 가정 하의 비방향성 student's T-test를 사용하여 유전자형 내에서 냄새와 물 사이에 소비한 시간을 비교하였다. 유전자형 간의 행동 비교에는 일원 분산 분석(one-way ANOVA)을 사용하였다. 실험군인 그룹 B와 C 모두 유인성 냄새에 대해 선호도를 보이지 않았다. 회피 테스트에서 혐오성 2-methyl butyric acid 냄새에 대한 반응은 그룹 A와 B에서는 예상대로 나타났으나, 그룹 C는 이 냄새에 대해 회피 행동을 보이지 않았다.감도 테스트에서, 1:1000 희석 비율일 때 선호되는 소변과 물에 머문 시간의 차이를 계산하여 유인 임계값을 구했습니다. 반면, 실험군 B와 C는 선호도를 나타내기 위해 100배 더 높은 농도가 필요했습니다. 숙련되면 이 기술은 적절하게 수행할 때 몇 시간 내에 완료할 수 있으며, 이 절차에 따라 후각 학습 및 소멸과 같은 다른 방법을 통해 후각 가소성과 학습을 조사할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

쥐 후각 시스템의 기본, 아직 고유의 특성은 생물학 자 사이의 증가 공부를 주도했습니다. 그 함수의 비교적 간단 평가 그때도 필요합니다. 여기 마우스 후각 감성과 선호도의 특성에 대한 민감한 테스트를 설명합니다.

성인 마우스의 후각 행동 테스트

후각 기능의 손상은 파킨슨병, 알츠하이머병, 헌팅턴병을 포함한 많은 신경퇴행성 질환에서 흔히 나타나는 특징입니다. 본 기사에서는 신경 퇴행성 질환의 마우스 모델에서 후각 능력을 측정하는 데 사용할 수 있는 마우스의 후각 구별 및 감지를 평가하기 위한 일련의 테스트에 대해 설명합니다.

신경 퇴행성 질환의 마우스 모델에 대한 후각 분석 실험

이 원고는 설치류의 후각 시스템을 조사하는 프로토콜을 설명합니다. 후각 습관화/습관 제거 테스트를 통해 조사관은 마우스가 반복적으로 제시된 냄새에 습관화되어 있는지, 그리고 새로운 냄새가 나왔을 때 마우스가 습관 해제를 보이는지 여부를 결정할 수 있습니다.

마우스에서 냄새 차별과 요법 이니에 대한 테스트

주의집중 세트 이동 인지 이상은 많은 정신 질환의 핵심 특징입니다. 여기에서 우리는 인간 연구에 대한 번역 타당도가 높은 마우스의 주의력 세트 이동 능력, 실행 기능 및 기타 인지 능력에 대한 효과적인 연구를 위한 새로운 자동 시스템의 개발을 제시합니다.

마우스에 대한 조작 적 인트라 / 여분의 차원을 설정 교대 작업

여기, 우리는 쥐 냄새 차별 테스트는 연관 학습 작업에 기차. 이 프로토콜은 또한 두뇌에 구조적인 변화를 유도 하는 학습에 대 한 연구에 대 한 수 있습니다.

후 각 학습 및 쥐에 있는 차별의 객관적이 고 재현성 시험

이 문서에서는 새로운 마우스 판단 편향 프로토콜에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 정서적 상태에 대한이 후각 파기 작업의 민감성에 대한 증거도 입증되고 다양한 연구 분야에서 그 유용성이 논의됩니다.

후각 파기 작업을 통한 마우스 판단 편향 평가

본 논문은 흡입된 환경오염물질 노출이 마우스의 후각 기능에 미치는 영향을 평가하기 위한 매몰식품 검사와 사회적 악취 차별 실험에 대해 자세히 설명한다.

흡입된 환경 오염 물질이 마우스의 후각 기능에 미치는 영향 연구

이 프로토콜은 go/no-go 후각 행동 실험을 위한 후각계의 구성을 설명합니다. olfactometer의 성공적인 구성을 보장하기 위해 이미지와 함께 단계별 지침이 제공됩니다. 프로세스 중에 발생하는 문제를 해결하기 위한 정보도 포함되어 있습니다.

설치류 후각 행동 연구를 위한 후각계 구축

여기에서는 우울증의 마우스 모델에서 식욕 자극과 혐오 냄새 자극에 대한 부정적인 후각 편향을 평가할 수 있는 후각 선호도 테스트 프로토콜을 제시합니다.

An Olfactory Preference Test for measuring Olfactory Hedonic Biases in Mouse Models of Depression(우울증의 마우스 모델에서 후각 쾌락 편향을 측정하기 위한 후각 선호도 테스트)

이 문서에서는 마우스에서 학습 공포와 메모리를 평가하기 위해 비디오 분석 시스템을 사용하여 상황과 큐 공포 조건화 시험을위한 프로토콜을 제시한다.

마우스에서 비디오 분석 시스템을 사용하여 콘텐츠 및 시작됨 공포 컨디셔닝 테스트

학습하세요 마우스 후각 판별 및 선호도 행동을 평가하는 컴퓨터 지원 비디오 분석 방법을. Image J 소프트웨어와 친숙한 실험 환경을 사용하여 신경과학 연구에서 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있습니다.

간단하고 컴퓨터 지원 마우스에 대한 후각 테스트를

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