Name: 절대 단백질 정량 질량 분석을 모니터링 선정 반응 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: 배우세요 액체 크로마토그래피와 선정 반응 모니터링(SRM)을 사용하여 복잡한 생물학적 샘플에서 표적 단백질의 절대 정량을 수행하는 방법을. 이 기술은 면역분석보다 빠르고 비용 효율적이며 다중 분석이 가능합니다.

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이 연구는 NIH(National Institute of Allergy and Infectious Diseases)의 교내 연구 프로그램(Intramural Research Program)의 지원을 받았습니다.

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절대 정량 단백질은 바이오 마커 확인 및 신호 전달 경로와 같은 생의학 모델링 애플리케이션 매우 다양한 필수적이다. 최근 LC-SRM을 사용하여 타겟 단백질 체학은 펩타이드 표준 준비, HPLC, QQQ-MS 및 LC-SRM 데이터 분석 등 다양한 기술에 개선의 혜택을했다. 결과적으로, 면역에 강력한 대안이되고있다. 면역 분석 및 / 또는 의무하지 다중화 매우 민감하고 높은 처리량이 될 수 있지만, 면역 세포 / 조직 용해 / 균질화 방법과 호환, 교차 반응성 및 / 또는 간섭에 취약 할 수 있기 때문에 강력한 면역 측정법을 개발하는 것은 매우 어려울 수있다 5,8. 예를 들어, 교차 - 반응성에 대한 포괄적 인 시험 제조 어려울 수 녹아웃 유전자로부터 유래 된 샘플을 사용하여 면역 측정법을 수행하는 것이다. 이 프로토콜은 대상 pept 설명IDE 선택, LC-SRM 분석 개발, 정량적 LC-SRM 및 LC-SRM 데이터 분석. 그것은 RAW 264.7 세...

질량 분석기 (MS)를 사용하여 실험을 프로테옴 비 타겟 (산탄) 또는 타겟팅 방법을 사용하도록 설계 될 수있다. 디스커버리는 일반적 프로테오믹스 전통적인 데이터 의존적 획득 모드를 사용하여, 또는 (예를 들어, MS E, SWATH) 최근에 개발 된 데이터 독립 기술 중 하나를 사용하여 1,2- 어느 상향식 산탄 MS에 의존한다. 샷건 단백질 체학은 높은 처리량 펩타이드 식별 및 상대 정량을위한 강력한 도구이지만, 절대 정량 또는 단백질의 작은 정의 세트 (~ 수십) 대상에 대한 일반적으로 적합하지 않다. 가장 자주 사용되는 표적 단백질 체학 MS 방법이 높기 때문에 감도, 속도 및 동적 범위 3-5 반응 모니터링 (SRM)을 선택한다. SRM 대안 고해상도 풀 스캔 MS 6 활용 병렬 반응 모니터링을 포함한다. SRM은 대개 나노 유동 되돌리기를 사용하여 수행SED 상계 고속 액체 크로마토 그래피 (RP-나노 LC) 나노 - 전기 분사 이온화 결합 악기 삼중 사중 극 질량 분석 장치 (QQQ-MS)에 부착 (나노 ESI) 이온 소스. 전형적인 실험에서, 단백질 시료는 단백질 분 해적으로 분해하고, 생성 된 펩티드는 크로마토 그래피 분리하고, 탈착 및 이온화된다. 얻어진 전구체 이온 m / 제 중극 (Q1)에 의해 필터링 Z와 충돌 가스로 충돌에 의해 제 2 중극 (Q2)에서 조각난. 생성 된 단편 이온은 m / z 필터링 셋째 중극 (Q3) 및 다이 노드에 의해 정량화. 각각의 전구체 및 단편 이온 쌍 천이로 지칭되고, 각각의 전이는 지정된 기간 (전환 시간 전형적으로 2-50 밀리 초)에 대해 모니터링한다. LC-SRM 동안 전환을 통해 미리 정의 된 목록 QQQ-MS 사이클 (듀티 사이클은 통상적 ≤3 초이다), 각 전환의 크로마토 그램이 생성된다. 대체 전략에서단백질 정량 이거는 일반적으로 도트 말, 서양 오 점, ELISA를, 항체 마이크로 어레이, 역상 단백질 마이크로 어레이, 미세 유체 면역, 디지털 ELISA를, 그리고 마이크로 스피어 기반의 면역 7로 면역을 사용합니다. 최상의 면역은 LC-SRM보다 훨씬 더 민감 할 수 있으며, 면역 샘플 처리량 LC-SRM 5보다 상당히 높을 수있다. 그러나, 현상 면역 비용이 될 수 및 / 또는 시간 소모적, 생성 분석법은 세포 / 조직 용해 / 균질화 방법과 호환, 교차 반응성 및 / 또는 간섭에 취약 할 수 있으며, 및 / 또는 의무하지 5,8-를 멀티플렉싱. 이러한 문제의 일부는 항체와 MS 기반 기술을 결합함으로써 해결 될 수있다. 예를 들면, 표적 단백질 및 단백질 분해 전에 LC-9-12에 SRM을 사용하여 면역 침강 농축 될 수있다. 대안 적으로, 기술은 SISCAPA 펩티드 LEVE에서 단백질 분해에 후속 면역 침전을 채용L (13, 14). 또한 전략 immunoenrichment하는 높은 풍부 단백질은 분석 immunodepletion 15,16 coeluting하여 간섭을 감소함으로써 LC-SRM 감도를 증가시키기 위해 사용될 수있다. MS 기반 단백질 정량은 라벨이없는 안정 동위 원소 라벨 (예를 들어, 신진 대사 라벨, 화학 라벨, 무거운 표지 단백질과 펩티드 내부 기준)으로도 상대 및 절대 정량으로 구분 될 수있다. 라벨이없는 기술은 상대적으로 단백질 정량에 유용 할 수 있지만, 정확한 절대 정량에 적합하다 할 수 있습니다. 이와 비교하여, 라벨링 기술 샘플 준비 및 MS 차이와 연관된 에러를 감소하고, 상대적으로 자주 단백질 정량화 (17)에 사용된다. 예를 들어, 안정 동위 원소 표지 프로테옴 (SILAP) 표준은 인간 혈청 (18)의 LC-SRM을 통해 잠재적 인 바이오 마커의 상대 정량을 활성화 배양 된 인간 세포 라인을 사용하여 제조. MS에 의해 정확한 절대 단백질 정량은 정제, 정량화, 동위 원소 표지 단백질 또는 펩티드 내부 표준 아군-로하는 것이 MS에 앞서 생체 시료이 필요합니다. LC-SRM 워크 플로우에 무거운 동위 원소 표지 내부 표준의 통합은 높은 재현성과 실험실 16, 19 사이의 양도로 나타났다 절대 정량 할 수 있습니다. MS에 의해 절대 단백질 정량 안정 동위 원소 표지 된 내부 표준 펩타이드 표준 고체상 합성 (20) 연접 프로테아제 절단 펩티드 표준 21 이루어지는 단백질, 및 전장 단백질 22 표준을 사용하여 제조 포함한다. 대상 단백질 공유 수정 및 불완전한 샘플 준비 (즉, 불완전한 샘플 용해 및 균질화, 불완전 단백질의 가용화, 변성, 알킬화, 및 단백질 분해는) 정확한 정량을 훼손 할 수 있습니다. 내부 Protein 표준은 이러한 잠재적 인 문제의 대부분에 의해 영향을받을 가능성이있는 이상, 그러나 일반적으로 제조하기가 가장 어렵다. 대안은 아미노 - 및 카르복시 말단 측면 네이티브 잔기를 포함하도록 설계된 여러 펩티드 내부 표준을 사용하여 각각의 표적 단백질을 분석하는 것이다. 에 관계없이 내부 표준의 유형이 사용되는의, 그것은 아군-로한다 생물학적 시료 이른 시점에서 가능한 한 샘플 준비 중. 또한, 다수의 시료 전처리 기법 (예를 들어, 다른 변성 조건) 시험해야한다. 다수의 직교 실험 기술 (실험 교차 유효성 검사)의 사용은 23 ~ 25 도전 가장 가능성 정량을 극복하기위한 실행 가능한 전략이다. 단백질의 LC-SRM 정량은 광범위한 응용 분야에서 사용 된 매우 유연한 방법이다. 특히, 이는 내 펩티드 및 단백질 바이오 마커를 연구하는 데 사용 된혈청, 핵심 조직 검사, 미세 침 흡인 (5) 임상 샘플. LC-SRM은 또한, 보툴리눔 신경 독소 (27)를 검출하는 신호 전달 경로 (5) 내에 단백질 인산화 역학 정량화, 단백질 입체 구조 (28)의 변화를 정량화하기 위해, 단백질 복합체 5,26의 화학량 론을 측정하는 데 사용되어왔다. 본 연구실은 화성 경로 시뮬레이션의 개발을 지원하는 대 식세포 주 화성을 매개하는 신호 전달 단백질을 정량화하는 LC-SRM을 사용한다. 프로토콜의 전체 계획 (그림 1) 임시 목표 펩티드를 순위로 시작합니다. 그 후, 원유 외부 펩타이드 기준은 합성 및 생체 시료의 정성 분석을위한 LC-SRM 분석을 개발하는 데 사용됩니다. 생물학적 샘플 유래의 대상 펩티드가 검출되는 경우, 정제 된 무거운 표지 된 펩티드 내부 표준 정량적 LC-SRM을 위해 준비된다. 이 프로토콜은 AC에 사용될 수있다curately 생물학적 시료의 다양한 단백질 정량화, 단백질 표적의 다양한 연구를 지원한다.

<table><tbody><tr><td>아세토니트릴(ACN), LC-MS 등급</td><td>Fisher</td><td>A955-1</td><td></td></tr><tr><td>BCA(비신초닌산) 단백질 분석 키트</td><td>Fisher</td><td>23235</td><td></td></tr><tr><td>비드 박동용 비드, 지르코니아 실리카, 0.1mm</td><td>BioSpec 제품</td><td>11079101z</td><td></td></tr><tr><td>베스타틴 염산염</td><td>Sigma</td><td>B8385-10MG</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 DMEM(포도당 포함, L-글루타민 제외)</td><td>Lonza</td><td>12-614F</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 EDTA, 500 mM, pH8</td><td>Gibco</td><td>15575</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 소 태아 혈청(FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 L-글루타민</td><td>시그마</td><td>G8540-25G</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 인산염 완충 식염수(PBS) pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 Trypan Blue 생존 가능성 염색, 0.4% w/v</td><td>Lonza</td><td>17-942E</td><td></td></tr><tr><td>셀로미터 자동 T4 셀 카운터</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>셀로미터 자동 T4</td><td></td></tr><tr><td>셀로미터 자동 T4 일회용 계수 챔버</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>CHT4-SD100-014</td><td></td></tr><tr><td>디티오트레이톨(DTT)</td><td>시그마</td><td>D5545-5G</td><td></td></tr><tr><td>포름산, LC-MS 등급, 앰플</td><td>Fisher</td><td>A117-10X1AMP</td><td></td></tr><tr><td>혈구계, Neubauer 개선, 0.1mm 깊이</td><td>Marienfeld-Superior</td><td>0640030</td><td></td></tr><tr><td>HEPES, 1M, pH 7.2</td><td>Mediatech</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>염산, 37% w/w</td><td>VWR</td><td>BDH3028-2.5LG</td><td></td></tr><tr><td>요오드아세트아미드</td><td>시그마</td><td>I1149-5G</td><td></td></tr><tr><td>레이저 기반 마이크로피펫 풀러</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-2000</td><td></td></tr><tr><td>LC 코팅 실리카 모세관, 50 &마이크로; m id</td><td>Polymicro Technologies</td><td>1068150017</td><td></td></tr><tr><td>LC 바이알, 오토샘플러, 12mm x 32mm 폴리프로필렌</td><td>SUN SRI</td><td>200-268</td><td></td></tr><tr><td>LC 바이알 나사 캡, 오토샘플러, 프리슬릿 PTFE/실리콘</td><td>SUN SRI</td><td>500-061</td><td></td></tr><tr><td>루시퍼라아제, from Photinus pyralis</td><td>Sigma</td><td>L9506-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatin A</td><td>EMD Millipore</td><td>516481-25MG</td><td></td></tr><tr><td>pH 스트립 colorpHast (pH 0.0-6.0)</td><td>EMD Chemicals</td><td>9586-1</td><td></td></tr><tr><td>PhosStop phosphatase inhibitor cocktail</td><td>Roche</td><td>04906837001</td><td></td></tr><tr><td>RapiGest SF</td><td>Waters</td><td>186001861</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak SPE, C18 1 ml 100 mg 카트리지</td><td>Waters</td><td>WAT023590</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak SPE, 추출 매니폴드, 20 위치</td><td>Waters</td><td>WAT200609</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak SPE, 평면 고무 전구</td><td>Fisher</td><td>03-448-25</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨(NaOH)</td><td>Fisher</td><td>S318-500</td><td></td></tr><tr><td>SpeedVac 진공 농축기</td><td>Fisher</td><td>SPD111V</td><td></td></tr><tr><td>트리플루오로아세트산(TFA), LC-MS 등급</td><td>Fisher</td><td>A116-50</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin, 염기서열분석 등급, 수정된</td><td>Promega</td><td>V5113</td><td></td></tr><tr><td>튜브 Micronic 튜브용 디캐퍼</td><td>USA Scientific</td><td>1765-4000</td><td></td></tr><tr><td>튜브, 2ml 마이크로 원심분리기, O-링 나사 캡, 멸균</td><td>Sarstedt</td><td>72.694.006</td><td></td></tr><tr><td>Urea</td><td>Sigma</td><td>U0631-500g</td><td></td></tr><tr><td>물, LC-MS 등급</td><td>Fisher</td><td>W6-1</td><td></td></tr></tbody></table>

절대 단백질 정량 질량 분석을 모니터링 선정 반응

Selected Reaction Monitoring Mass Spectrometry for Absolute Protein Quantification

복잡한 생물학적 시료 내 표적 단백질의 절대 정량화는 광범위한 연구 및 임상 응용 분야에 매우 중요합니다. 이 프로토콜은 selected reaction monitoring(SRM) 질량 분석법(MS)을 사용하여 정량 분석의 개발 및 적용을 위한 단계별 지침을 제공합니다. 첫째, 양형 표적 펩타이드일 가능성이 있는 펩타이드는 수많은 기준에 따라 식별됩니다. 여기에는 단백질형 펩타이드 식별, 번역 후 변형 부위 방지, 표적 단백질에 대한 표적 펩타이드의 고유성 분석이 포함됩니다. 다음으로, 미처리 외부 펩타이드 표준물질을 합성하여 SRM 분석을 개발하는 데 사용하고, 그 결과로 생성된 분석을 사용하여 생물학적 샘플의 정성 분석을 수행합니다. 마지막으로, 정제되고 정량화된 중질 동위원소 표지된 내부 펩타이드 표준물질을 준비하고 동위원소 희석 시리즈 SRM 분석을 수행하는 데 사용합니다. 모든 결과 MS 데이터의 분석이 제공됩니다. 이 프로토콜은 RAW 264.7 세포(마우스 단핵구/대식세포 세포주) 내 화학주성 신호 전달 경로의 단백질의 절대 풍부도를 정확하게 분석하는 데 사용되었습니다. Gi2 (헤테로 트리메릭 G- 단백질 α-서브 유닛)의 정량화가 자세히 설명되어 있습니다.

신호 전달 경로의 예측 계산 모델의 개발은 시스템 생물학 (53)의 기본적인 목적 중 하나이다. 불행히도, 심지어는 광범위하게 연구하고 높은 임상 적 의의를 가지고있다 신호 전달 경로를 들어, 정량적 섭동에 응답 통로 거동을 예측하는 것은 일반적으로 여전히 불가능하다 (예를 들면,이 MAPK / ERK 경로 (54)도 마찬가지이다). 최근 조사 경로 (56) 신호 마우스 대 식세포 화성을 연구 대상으로 프로테오믹스, transcriptomics, 전산 모델링 및 시뮬레이션을 고용했다. 조사의 초점은 RAW 264.7 세포 (마우스 단핵구 / 대식 세포주)의 스핑 고신 -1- 인산 매개 주 화성이었다. 통로 모델링을 용이하게하기 위해, LC-SRM 분석법 개발 및 RAW 264.7 세포 내의 화성 경로 단백질의 절대 풍부을 측정하기 위해 수행 하였다. 얻어진 풍부 값을 사용했다경로 모델의 매개 변수로 D. <p class="jove_content"...

이 프로토콜은 선택된 반응 모니터링을 사용하여 복잡한 생물학적 샘플 내 표적 단백질의 절대 정량화 분석을 수행하는 방법을 설명합니다. 마우스 대식세포 화학주성 신호전달 경로의 단백질을 정확하게 정량화하는 데 사용되었습니다. 표적 펩타이드 선택, 분석 개발, 정성적 및 정량적 분석이 자세히 설명되어 있습니다.

Absolute quantification of target proteins within complex biological samples is critical to a wide range of research and clinical applications. This ...

이 절차의 전반적인 목표는 액체 크로마토그래피-선택적 반응 모니터링(liquid chromatography, selected reaction monitoring 또는 L-C-S-R-M)을 사용하여 복잡한 생물학적 시료 내 표적 단백질의 절대량을 정량화하는 것입니다. 펩타이드 표적을 선정한 후, 정제되지 않은 외부 펩타이드 표준품을 합성하여 액체 크로마토그래피-질량 분석법(liquid chromatography, mass spectrometry 또는 LCM ms)을 이용한 SRM 분석법을 개발합니다. 이렇게 구축된 분석법은 준비된 생물학적 시료의 정성적 LC-SRM 분석을 수행하는 데 사용됩니다.생물학적 샘플에서 유래한 표적 펩타이드가 검출되면, 내부 펩타이드 표준 물질의 안정 동위원소 희석 시리즈를 추가하여 정량적 lc SRM 분석으로 생물학적 샘플을 분석합니다. 궁극적으로 lc SRM은 매우 다양한 생물학적 샘플로부터 단백질을 정확하게 정량화하고, 광범위한 단백질 표적 연구를 지원하는 데 활용될 수 있습니다. 면역 분석과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 분석법 개발이 상대적으로 빠르고 저렴하며, 결과 분석법이 다중 분석(multiplexing)에 적합하고 항체 교차 반응성에 취약하지 않다는 점입니다.먼저 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 동결건조 펩타이드 표준품을 준비합니다. 그다음, 10 $\mu$M의 펩타이드 농도가 되도록 각 동결건조 펩타이드 표준품에 포름산 아세토니트릴 용액 100 $\mu$L를 첨가합니다. 샘플을 2분 동안 볼텍싱하고 배스에 둡니다.펩타이드가 완전히 용해되도록 5분 동안 초음파 처리합니다. 용해된 펩타이드를 회수하고, 진공 농축기를 사용하여 결과 혼합물을 최종 부피 80 µL가 되도록 농축합니다. 침전된 펩타이드를 용해시키기 위해 20 µL의 acetyl nitrile을 첨가합니다.이제 샘플에는 각 펩타이드가 10 µM 농도로 포함되어 있으며, 부피 대비 부피로 20%의 acetonitrile이 함유되어 있습니다. 내부 및 외부 펩타이드 표준물질을 준비하려면, 트리플 쿼드러플 질량 분석기가 결합된 나노 흐름 HPLC 시스템을 이용한 샷건 질량 분석법으로, 주입당 각 펩타이드가 약 1~10 pmol이 되도록 외부 펩타이드 표준물질 혼합물을 분석하십시오. 텍스트 프로토콜에 상세히 설명된 대로, 각 LCMS 런에 60분 선형 기울기, 컬럼 재생 단계 및 컬럼 재평형 단계가

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연구

JoVE Journal

Biology

생물학

안정 동위 원소 표준 및 안티 펩타이드 항체 (SISCAPA) 각각의 단백질에 대한 surrogates으로 펩티드의 양적 측정을 제공하기 위해 안정 동위 원소 희석 질량 분석법 (MRM - MS)과 펩티드의 커플 선호도 농축하여 캡처합니다. 여기서 우리는 부분적으로 자동화된 형식으로 자기 입자를 사용하여 프로토콜을 설명합니다.

펩타이드 면역 친 화성 농축을 사용하여 단백질의 양을 정함은 질량 분광법과 함께

우리는 유사한 단백질을 가진 종의 혼합물에서 성분을 식별하고 정량화하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 질량분석법은 식별을 위해 펩타이드를 검출하고 피크 면적의 비율에 따라 상대적인 정량화를 제공합니다. 사기 탐지를 위한 도구 식품으로서 이 방법은 쇠고기에서 1% 말을 감지할 수 있습니다.

고기 인증에 펩티드 응용의 MRM 질량 분석을 사용하여 혼합물에서 종 결정 및 정량

여기, 우리 뒤에 고해상도 (~ 30000) MS-탐지 아군된 펩타이드 표준 단일 클론 항 체에의 정량화에 대 한 펩 티 드 파편의 펩 티 드 선구자 이온 이동성 분리와 결합 하 여 크로마 분석 결과 설명 다이제스트입니다.

액체 크로마토그래피 이온 이동성 QTOF 질량 분석에 의해 단백질 바이오에 주인 세포 단백질의 정량화에 대 한 HS MRM 분석 결과

하나의 샘플을 사용하여 생물학적 조직에서 지질, 대사 산물 및 단백질을 포괄적으로 추출하기위한 프로토콜이 제시됩니다.

단일 시료의 대사 산물, 지질 및 단백질의 종합 분석을위한 간단한 분취 추출 방법

우리는 정확 하 게 액체 크로마토그래피 고해상도 질량 분석기에 인터페이스와 isobaric 라벨, 광범위 한 분류, 생물 정보학 도구, 그리고 품질 관리 단계에에서는 단백질을 quantitate 프로토콜을 제시.

깊은 프로테옴 Isobaric 라벨, 광범위 한 액체 크로마토그래피, 질량 분석 및 소프트웨어 기반 정량화 하 여 프로 파일링

우리는 복잡한 생물학적 샘플에서 유비퀴틴화 된 단백질에서 유래 한 diGly 펩티드의 정제, 검출 및 식별방법을 제시합니다. 제시된 방법은 유비퀴티노메 분석의 깊이 수준에 대하여 공표된 방법을 재현가능하고 견고하며 능가합니다.

펩타이드 농축 및 질량 분광법에 의한 단백질 유비퀴틴화 부위 검출

여기에서, 우리는 무세포 단백질 합성 반응에 있는 중앙 탄소 및 에너지 물질 대사에 관련시킨 40의 화합물을 정량화하는 강력한 프로토콜을 제시합니다. 무세포 합성 혼합물은 역상 액체 크로마토그래피를 사용하여 효과적인 분리를 위해 아일린으로 유도한 다음 동위원소로 표시된 내부 표준을 사용하여 질량 분석법에 의해 정량화됩니다.

역상 액체 크로마토그래피-질량 분광법에 의한 무세포 단백질 합성 대사의 절대 정량화

설명된 프로토콜은 라벨 기반 및 라벨 자유 양수의 두 가지 접근법을 사용하여 조직 샘플의 최적화된 정량 적 프로테오믹스 분석을 제공합니다. 라벨 기반 접근법은 단백질의 보다 정확한 양을 얻을 수 있는 장점이 있으며, 라벨없는 접근법은 비용 효율적이며 코호트의 수백 가지 샘플을 분석하는 데 사용됩니다.

조직 샘플의 질량 분광계 기반 산탄총 프로테오믹스의 포괄적인 워크플로우

이 프로토콜은 임상 샘플에서 단백질의 다중 반응 모니터링 (MRM)에 대한 트리플 쿼드러폴 질량 분광계의 사용을 소개하는 것을 목표로합니다. 우리는 샘플 준비에서 임상 샘플을 위한 데이터 분석에 이르기까지 필요한 모든 예방 조치를 취하도록 체계적인 워크플로우를 제공했습니다.

인간 뇌 조직에서 단백질의 다중 반응 모니터링 기반 검출을 이용한 정량적 프로테오믹스 워크플로우

바이오마커 프로가스트린 방출 펩타이드(ProGRP)로 예시된 건조 혈청 샘플에서 저농도 바이오마커를 측정하기 위한 프로토콜이 제시됩니다. 항체 코팅된 마그네틱 비드는 프로테오타입 ProGRP 펩타이드의 선택적 클린업 및 농축에 사용됩니다. 포획된 펩타이드는 이후 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법으로 분석됩니다.

표적 질량분석법 기반 단백질 분석의 마이크로샘플링 저농도 단백질

배우세요 액체 크로마토그래피와 선정 반응 모니터링(SRM)을 사용하여 복잡한 생물학적 샘플에서 표적 단백질의 절대 정량을 수행하는 방법을. 이 기술은 면역분석보다 빠르고 비용 효율적이며 다중 분석이 가능합니다.

절대 단백질 정량 질량 분석을 모니터링 선정 반응

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