Name: 과도 대뇌 저산소증 - 허혈을 기반으로 혈전 성 뇌졸중 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: 배우세요 생쥐 혈전성 뇌졸중 모델을 통해 일과성 대뇌 저산소증-허혈을 유도하고 tPA 치료의 효과를 평가하는 방법을. 이 기법은 뇌경색 메커니즘 연구와 혈전용해 치료 개선에 활용됩니다.

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이 연구는 NIH 보조금 NS074559(C. K.에게)의 지원을 받았습니다. 본 방법론 보고서의 기반이 되는 연구 논문에 기여해 주신 모든 공동 연구자에게 감사드립니다.

이 프로토콜은에 모리 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 건강 지침의 국립 연구소를 다음입니다. 1. 설치 <ol><li> 수술 전 적어도 15 분 동안 37 ℃에서 열 펌프와 연결 온난화 패드에 수술 침대를 준비합니다. 수술 침대에 3 ML의 주사기의 배럴을 사용하여 목 롤을 놓습니다. 의료 공기에 2 % 이소 플루 란 마취 가스를 준비합니다. </li><li> 멸균 된 집게, 가위, 마이크로 니들 홀더, 지혈제, 면봉과 봉합을 준비합니다. 조직 접착제와 눈 연고를 준비합니다. </li><li> 가열 램프와 직장 프로브 저산소증 시스템과 온도 컨트롤러를 설정합니다. 92.5 %의 N 2로 균형 7.5 %의 O 2의 2 % 이소 플루 란과 저산소증 가스를 준비합니다. </li><li> 한 시간 수술 전, 마우스는 서방 멜 록시 캄 (4.0 ㎎ / ㎏)의 피하 주사에 의해 analgesized된다. </li></ol> &lt;P 클래스 = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. 과도 대뇌 저산소증 - 허혈 (그림 1B) <ol><li> 10~13주 세 남성 C57BL을 마취 / 동물이 발 짜기에 응답하지 않는 한 다음 전자 면도기를 사용하여 오른쪽 목에 머리를 제거 할 때까지 3 % 이소 플루 란으로 마취 유도 챔버 (22) 30g에 무게 6 마우스. </li><li> 2 L / 분의 유량으로 공기 의료 2 % 이소 플루 란으로 연결 수술 침대에 마우스를 놓는다. 안전 앞발 의료 테이프를 사용 측면에서 목 롤을 따라 밖으로 뻗어있다. </li><li> 알코올 다음 면봉 다음 betadine와 절개의 수술 부위를 청소합니다. </li><li> 해부 현미경, 직선 집게 약 0.2 센티미터 중간 선 피부에서 측 방향의 마이크로 가위를 사용하여 0.5 cm 오른쪽 자궁 절개를합니다. </li><li> 오른쪽 경동맥 (RCCA)를 노출 근막 조직을 따로 뽑아 미세 톱니 모양의 집게 한 쌍을 사용합니다. 조심스럽게 좋은 부드러운 포셉 한 쌍을 사용하여 미주 신경에서 RCCA를 구분합니다. </li><li> 라이브 RCCA에 (이형성) 개의 미리 절단 5-0 실크 봉합사 매듭 후 4-0 나일론 모노 필라멘트 봉합사 (도 1C)를 사용하여 피부를 봉합. </li><li> 건조를 방지하기 위해 두 눈에 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 신속 저산소증 시스템에 마우스를 전송하고, 30 분간 / 0.5 L의 유속으로 7.5 %에서 2 % 이소 플루 란으로 페이스 마스크 분 O 2를 코와 입에 넣어. <ol><li> 저산소증 동안에, 37.5 ± 0.5 ° C로 직장 온도를 제어하기 위해 가열 램프와 온도 조절기를 사용한다. / 분 80-120 호흡에서 호흡을 모니터링합니다. 저산소증 동안 37 ° C 위의 체온 유지 일관된 뇌경색을 만드는 것이 중요하다. 저 호흡은 일반적으로 20 분 저산소증 후 발생합니다. 얼굴 마스크를 제거하고 호흡이 1-2 분 소요 30 분 저산소증 기간에 포함되지 않는다 (40) 이하로 떨어지면 정상 공기 공급을 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 저산소증 후, 전송수술 침대에 마우스와는 RCCA에서 두 개의 봉합을 놓습니다. 케이지에 마우스를 반환 한 후 조직 접착제를 사용하여 상처를 닫고. 이 라이브 노트의 모두가 예기치 않게 저산소증 이후에 출시되는 동물을 제외합니다. </li><li> 저산소증과 마취에서 회복하기 위해 5 ~ 10 분 동안 마우스를 모니터링합니다. 케이지에 젖은 음식을 놓고 동물 보호 시설에 반환. 참고 : 생 후 24 시간에서 심각한 돌고 행동에 가벼운 보여주는 동물이 뇌 위반와 관련된다. 발작 증상이있는 대부분의 동물은 생 후 24 시간 평가시기 전에 죽는다. </li></ol> 3. 레이저 스페 클 대비 이미징 주 : 이것은 THI 모델의 필수적인 절차는 아니지만, 이차원 레이저 스페 클 대비 이미징 시스템 (16) 동안 또는 일시적 저산소 허혈 뇌 혈류 (CBF)의 변화를 특징 짓는 데에 이용 될 수있다. 세인트 직후, 티에서 기록을 CBF의 변경을 문서에EP 2.6. 대안 적으로,이 절차는 다음 단계 2.10 행할 수 THI 비방 CBF 후 회복과 비교한다. <ol><li> 엎드린 자세에서 마취 마우스를 놓고 노출하지만 개봉 두개골과 두피에 1cm 길이의 중간 선 절개를 수행합니다. </li><li> 제조사의 프로토콜에 따라 혈류 메이져 하에서 모두 대뇌 반구의 CBF를 모니터링하고 CCAO 수술 (단계 260) 후 즉시 뇌 혈류를 기록하기 시작한다. 50 분 동안 계속합니다. </li><li> 16 색 팔레트의 임의 단위와 CBF 화상을 확인하고 실시간으로 분석하여 제조자의 지시 (도 2) 다음 MoorFLPI 소프트웨어를 사용하여 선택된 영역. </li><li> CBF 이미지를 촬영 한 후, 조직 접착제와 두피를 닫고 케이지에 동물을 반환합니다. </li></ol> 4. 단자 위치 보장 관리 <ol><li> (220-300 &amp; KG 재조합 tPA의 / 용매 또는 10 mg의와 꼬리 정맥에서 동물을 주입# 956; 1 밀리그램 / M TPA)의 L, 0.5, 1, 또는 tCCAo 플러스 저산소증 후 4 시간에 (그림 4). </li></ol> 여러 다른 옵션 5. 뇌 손상 탐지 뇌 샘플을 수집하기 위해 생 후 1, 4, 24 시간에서 쥐를 안락사 :합니다. <ol><li> 기술 이전과 생의 모욕 후 24 시간에서 생체 2,3,5- 트리 페닐 테트라 졸륨 클로라이드에 의해 경색 볼륨의 정량화를 수행 (TTC) 방법. (17) <ol><li> 복강 내 1.4 M 만니톨 용액 (~ 0.1 ㎖ / g 체중) transcardial 관류 전에 30 분으로 동물을 주입. PBS와 Transcardial 관류 마우스는 2 % TTC 10 ㎖로 하였다. </li><li> 10 분 후 수술 도구와 동물의 뇌를 제거하고 vibratome와 1mm 두께로 밤새 고정 및 섹션 4 % 파라 포름 알데히드로 배치합니다. </li><li> 디지털 현미경과 퀀트 포 단면 한 뇌 슬라이드 일련의 스냅ImageJ에 소프트웨어를 사용하여, 손상, 반대쪽 반구의 면적에 대한 경색 영역 (오른쪽 흰색 영역)의 비율로 경색 량을 쓸어. </li></ol></li><li> 또한, 생 모욕 후 1 시간에서 면역에 의해 혈전 형성을 수행합니다. <ol><li> 10월 화합물 및 섹션 저온 유지 장치를 사용하여 12 μm의 두께 뇌에 고정 뇌 동결. </li><li> 형광 현미경에 형광을 관찰 : 염소 항 - 토끼 알렉사 Fluro 488 염료 (200 1)에 의해 : (100 1) 다음 토끼 항 피브리노겐 항체와 뇌 슬라이드를 품어. </li></ol></li><li> 또한, 생의 모욕 후 4 시간에 100 μL 2 % 에반스 블루 염료의 꼬리 정맥에 주사하여 혈관 폐색을 수행합니다. <ol><li> 에반스 블루 주사 후 4 % 파라 포름 알데히드로 두뇌를 제거하기 위해 머리를 잘라 신속하게 쥐를 안락사합니다. 참고 : 두 ...의 앞에 푸른 색으로 에반스 블루 순환을 위해 5 ~ 10 분 소요 사지 뒷다리. </li><li> 섹션에 ì100 ㎛ 두께로 고정 뇌에 슬라이딩 마이크로톰을 사용하여 형광 현미경에 680 nm의 방출 필터를 사용하여 형광을 관찰한다. </li></ol></li></ol>

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스트로크는 노화 인구 어떤 사회 중요성을 성장의 주요 건강 문제입니다. 전 세계적으로 뇌졸중이 사망 원인 (18)의 11.1 %에 해당하는 2010 년 추정 5,900,000 치명적인 이벤트와 사망의 두 번째 주요 원인이다. 스트로크는 장애 조정 생명 년의 세 번째 주요 원인이다 (DALYs)은 1990 (19)에 다섯 번째 위치에서 상승, 2010 년에 전 세계적으로 패했다.이 역학 데이터가 급성 (허혈성) 뇌졸중의보다 효과적인 치료의 필요성을 강조 표시합니다. 그러나, 임상 신경 치료에 강렬한 연구에도 불구하고, TPA에 혈전이 동물 실험에서 여러 번 약속 신경 에이전트가 임상 시험에 실패하면서, 미국 식품의 약국 (FDA)의 승인을 급성 허혈성 뇌졸중의 특정 치료 남아있다. 환자에게 신경 보호 요법을 번역하는 어려움은 많은 요소를 가지며, 현재 강조 좋은 실험실 practi에CE, 여러 데이터 세트의 메타 분석, 국제 협력 전임상 뇌졸중 연구 (20, 21)을 향...

혈전 용해 및 개통은 임상 1 급성 허혈성 뇌졸중의 가장 효과적인 치료입니다. 그러나, 임상 신경 연구의 대부분은 혈관 폐색 제거하여 뇌 혈류의 신속한 복구가 발생하고, 단자 위치 보장 혈전에 의해 아무 효과는 거의 도시 과도 정비공 폐색 모델 (관내 봉합 중간 대뇌 동맥 폐쇄)에서 수행 하였다. 이는 뇌졸중 모델의 선택 모호한 환자에게 신경 치료 2,3- 변환하는 어려움에 적어도 부분적으로 기여한다고 제안되었다. 따라서, 전임상 연구에서 TPA에 반응 혈전 색 전성 뇌졸중 모델을 사용하는 증가 통화가 있지만, 이러한 모델은 기술적 인 문제 (토론 참조) 4-7 있습니다. 여기에서 우리는 일방적 과도 저산소 허혈성 (THI) 모욕과 정맥의 TPA 치료 8의 응답에 따라 새로운 혈전 성 뇌졸중 모델을 설명합니다. 생 스트로크 모델은 1960 9 성인 쥐 실험을 위해 발명 된 레빈 절차 (챔버 일시적인 저산소증에 노출 다음 일방적 경동맥의 영구 결찰)를 기반으로 개발되었다. 원래 레빈 절차는 무명에 머 금고 있기 때문에 그것은 단지 변수 뇌 손상을 생산하지만, 1981 10 신생아 저산소 성 허혈성 뇌증 (HIE)의 모델로 로버트 Vannucci와 그의 동료에 의해 ​​다시 도입 될 때 같은 모욕 쥐 새끼에서 일관된 신경 병리학을 일으키는 원인이되었다. 최근에는 일부 연구자들은 저산소 챔버 (11) 내의 온도를 조정함으로써 성인 마우스에 레빈-Vannucci 모델을 적응 재. 원래 레빈 절차의 일관성 뇌 병변 저산소 실에서 성인 쥐의 체온 변동으로 인해 발생할 수 있음을 그럴듯. 이 가설을 테스트하기 위해, 우리는 저산소 가스를 투여하여 레빈 절차를 수정안면 마스크를 통해 수술 테이블 (12)에서 37 ° C에서 설치류 코어 온도를 유지하면서. 예상대로, 엄격한 신체 온도 제어가 크게 HI-유도 뇌 병리학의 재현성 증가했다. HI 모욕은 응고, 자식 작용, 및 그레이 - 흰색 - 문제 부상 (13)을 트리거합니다. 다른 연구자들은 또한 뇌졸중 후 염증 반응 (14)를 조사하기 위해 HI 모델을 사용하고 있습니다. HI 뇌졸중 모델의 독특한 특징은 밀접 혈류, 내피 손상 (예 인해 HI 유도 된 산화 적 스트레스에 대한) 및 과다 응고 (HI 유도 된 혈소판 활성화)의 정체를 포함한 혈전 형성의 Virchow의 화음을 (이하 있다는 도 1A) 15. 이와 같이, HI 모델은 실제 허혈성 뇌졸중에 중요한 일부 병리 생리 학적 메카니즘을 포착 할 수있다. 마음에 이런 생각과 함께, 우리는 또한 유엔의 가역적 결찰과 HI 모델을 정제ilateral 경동맥는 (따라서 과도 HI 모욕을 만드는)와 함께 또는 Edaravone없이 단자 위치 보장 혈전 용해에의 반응을 시험했다. Edaravone은 이미 시작 9의 24 시간 이내에 허혈성 뇌졸중을 치료하기 위해 일본에서 승인 된 자유 라디칼 스 캐빈입니다. 우리의 실험은 짧은 30 분 과도 HI를 혈전 경색을 유발 것을 보여 주었다, 그 결합 된 TPA에 Edaravone 치료는 시너지 효과 8을 부여. 여기에서는 상세한 외과 적 절차, 급성 허혈성 뇌졸중의 재관류 치료를 최적화하는 데 사용될 수있는 모델의 생 방법 론적 고려 사항을 설명한다.

<table><tbody><tr><td>성인 수컷 마우스</td><td>Charles River</td><td>C57BL/6&nbsp;</td><td>10-13주령(22-30 g)</td></tr><tr><td>모바일 실험실 동물 마취 시스템</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td>마취</td></tr><tr><td>의료 공기 (압축) 공기 탱크</td><td>Airgas</td><td>UN1002</td><td>마취</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-25</td><td>마취</td></tr><tr><td>멀티 스테이션 실험실 동물 마취시스템</td><td>Surgivet</td><td>V703501</td><td>저산소증 시스템</td></tr><tr><td>7.5% O2 92.5% N2 탱크로 균형을 이룹</td>니다. <td>Airgas</td><td>UN1956</td><td>저산소증 시스템</td></tr><tr><td>온도 조절기와 가열 램프가 있습니다.</td><td>콜 파머&nbsp;</td><td>EW-89000-10</td><td>온도 컨트롤러</td></tr><tr><td>직장 프로브</td><td>Cole Parmer&nbsp;</td><td>NCI-00141PG</td><td>온도 컨트롤러</td></tr><tr><td>해부 현미경&nbsp;</td><td>올림푸스&nbsp;</td><td>SZ40</td><td>수술 설정</td></tr><tr><td>히트 펌프와 워밍 패드</td><td>Gaymar&nbsp;</td><td>TP700</td><td>수술 설정</td></tr><tr><td>미세 곡선 집게(톱니)FST</td><td></td> <td>11370-31</td><td>수술 도구</td></tr><tr><td>미세 곡선 집게(매끄러운)</td><td>FST</td><td>11373-12</td><td>수술 도구</td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>FST</td><td>15000-03</td><td>수술 도구</td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>FST</td><td>12060-01</td><td>수술 도구</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito 지혈</td><td>FST</td><td>13008-12</td><td>수술 도구</td></tr><tr><td>5-0 실크 봉합사&nbsp;</td><td>하버드 기구</td><td>624143</td><td>수술 용품</td></tr><tr><td>4-0 나일론 모노필라멘트 봉합</td>사 <td>LOOK</td><td>766B</td><td>수술 용품</td></tr><tr><td>조직 접착제</td><td>Abbott Laboratories</td><td>NC9855218</td><td>수술 용품</td></tr><tr><td>Puralube Vet 연고</td><td>Fisher</td><td>NC0138063&nbsp;</td><td>안구 건조 예방&nbsp;</td></tr><tr><td>MoorFLPI-2 혈류 이미저</td><td>Moor</td><td>780-nm 레이저 소스</td><td>레이저 스페클 콘트라스트 이미징</td></tr><tr><td>만니톨</td><td>시그마</td><td>M4125</td><td>생체 내 TTC</td></tr><tr><td>2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Stoelting</td><td>51425</td><td>뇌 절편in vivo TTC&nbsp;</td></tr><tr><td>디지털 현미경</td><td>Dino-Lite</td><td>AM2111</td><td>전체 뇌 이미징</td></tr><tr><td>OCT 화합물</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 토끼 Alexa Fluro 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>면역 조직 화학</td></tr><tr><td>저온 유지 장치</td><td>Vibratome</td><td>ultrapro 5000</td><td>뇌 절편 IHC</td></tr><tr><td>Evans blue</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td>혈관 감지 관류</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>전자 현미경 과학</td><td>조직학을위한</td><td>5000</td> 뇌 절</tr>편 <tr><td>Avertin (2, 2, 2-Tribromoethanol)</td> <td>Sigma</td><td>T48402</td><td>안락사</td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>Olympus</td><td>DP73</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam SR</td><td>ZooPharm</td><td></td><td>NSAID 진통</td></tr></tbody></table>

과도 대뇌 저산소증 - 허혈을 기반으로 혈전 성 뇌졸중 모델

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

스트로크 연구는 임상 적으로 신경 치료를 번역에 많은 좌절을 견디고있다. 반대로, 실제 치료 (TPA의 혈전)이 거의 스트로크 전임상 연구를 지배 기계적 폐색 기반 실험 모델의 이익을 생성하지 않는다. 벤치와 침대 옆 간의 분할 전임상 행정 연구 TPA에 반응하는 모델을 채용 할 필요성을 시사한다. 이를 위해, 간단하고 TPA에 반응성 혈전 성 뇌졸중 모델 발명은 여기에 설명된다. 37.5 ± 0.5 ° C에서 동물의 직장 온도를 유지하면서,이 모델은, 30 분 동안 마우스에서 성인 안면 마스크를 통해 일방적 경동맥 및 7.5 %의 산소의 전달의 일시적 폐색 이루어져있다. 일방적 경동맥 또는 저산소증 가역 결찰 각 만 일시적 뇌 혈류를 억제하지만, 양쪽의 조합 욕설 재관류 결핍, 혈소판 피브린 침착, 및 대형 infar 지속 야기중간 대뇌 동맥 제공 영토에서 CT. 중요한 것은, 꼬리 정맥 0.5, 1, 또는 4 시간 후의 생 (10 밀리그램 / kg)에서 재조합의 TPA 주입 사망률 경색 크기의 시간에 따른 감소를 제공 하였다. 이 새로운 뇌졸중 모델은 단순 및 실험 결과를 비교하는 실험실에 걸쳐 표준화 될 수있다. 또한, 두개 절제술 또는 예비 형성된 색전을 도입하지 않고, 혈전증을 유도한다. 이러한 독특한 장점을 감안할 때, 티 모델은 전임상 뇌졸중 연구의 레퍼토리에 유용한 추가이다.

이차원 레이저 스페 클 대비 이미징 (LSCI) 16을 30 분 과도 일방적 경동맥 폐색 (tCCAO), 저산소증에 30 분간 노출 (7.5 % 산소), 및 30 분 일방적으로 뇌 혈류 (CBF)의 변화를 비교하기 위해 사용 하였다 저산소증 (THI)에서 결찰을 경동맥. 이 실험은 tCCAO가 normoxia에서 경동맥 결찰 반구에서 CBF를 억제하는 것으로 나타났다에 ~ 빨리 경동맥 폐색 (그림 2A에서 R)의 출시 이후 85 % 이상으로 회복 초기 값의 50 %. 전신 저산소증에 노출 혼자 일시적으로 정상 산소 분위기 (그림 2B)로 복귀 한 후 130 ~ %로 반등 기준 값의 약 75 %에 CBF 감소. 빠르게 거의 경동맥 ligatio 릴리스 후 20 분에서 30 % 이상으로 회복되지 10 분, 주위 기준값의 20 % 이하로 동측 반구 CBF 감소 저산소증 하에서 콘트라스트 경동맥 결찰 (THI) 중N과 normoxia로 돌아. CBF는 반...

혈전색전성 뇌졸중 모델은 재개통 치료를 최적화하기 위한 중요한 도구입니다. 본 연구에서는 혈전증 및 경색을 유발하는 일과성 대뇌 저산소성 허혈성(tHI) 모욕에 기초한 쥐 혈전성 뇌졸중 모델을 보고하며, 뇌졸중 환자와 유사한 치료 창에서 조직 플라스미노겐 활성제(tPA) 매개 섬유소용해에 호의적으로 반응합니다.

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 안정적인 뇌경색을 유발하는 간단한 혈전성 뇌졸중 모델을 구축하고, 조직 플라스미노겐 활성제(tissue plasminogen activator) 또는 TPA 치료의 보호 효과를 평가하는 것입니다. 먼저, 우측 총경동맥(right common carotid artery, RCCA)의 이중 결찰과 결찰된 동물을 저산소 조건에 노출시켜 혈전증을 유도함으로써 일시적 대뇌 저산소 허혈(transient cerebral hypoxia ischemia, THI) 유도 과정을 보여줍니다. 30분간의 저산소 조건 유지 후, 경동맥의 두 매듭을 풉니다.마지막 단계에서는 TPA 치료의 투여 및 효과 평가 과정이 제시됩니다. 대안적으로, 뇌혈류의 실시간 기록, 혈전 형성 및 혈관 폐쇄 정도를 조사할 수 있습니다. 이 프로토콜을 통해 성체 마우스의 자체 응고 시스템을 이용하여 혈전성 뇌졸중을 유도하고 휴지기를 가질 수 있습니다.우리는 이 모델을 사용하여 허혈성 상태 가설 하에서 뇌가 자체 혈류를 어떻게 조절하는지 연구하고자 합니다. 또한, 이를 통해 혈전 치료법을 어떻게 개선할 수 있을지 연구할 것입니다. 뇌 경색 유도 과정 동안 적절한 체온과 원활한 호흡을 유지하는 것이 어려울 수 있으므로, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다.유도 단계. 절차를 시작하기 최소 15분 전에 수행합니다. 수술대를 가온 패드 위에 놓고 37 °C로 설정한 후, 3 mL 주사기 배럴로 만든 넥 롤을 수술대 위에 놓습니다. 저산소증 시스템이 92.5% 질소로 균형을 맞춘 7.5% 산소 내 2% isof fluorine을 공급하도록 설정하고 온도 조절기를 조정합니다.10~13주령, 22~30g의 C 57 black six 수컷 마우스를 수술대에 놓습니다. 발가락 꼬집기로 마취 상태를 확인한 후, 동물의 눈에 연고를 도포합니다. 네 다리를 목 방향으로 펴고, 말아서 의료용 테이프로 고정합니다.그 다음 제모 크림을 사용하여 동물의 목 부위 털을 제거하고 수술 부위를 세척합니다. 이제 수술대를 해부 현미경 아래로 옮기고 정중선을 따라 피부의 오른쪽 경부 부위에 0.5 centimeter 절개를 가합니다. 미세 핀셋을 사용하여 기관과 근육을 벌려 우측 총경동맥을 노출시킨 후, 동맥 아래에 미리 잘라둔 5-0 silk 봉합사 두 개를 배치합니다.경동맥을 미주신경과 주의해서 분리한 후, 우측 총경동맥(RCCA)에 5-0 silk 봉합사 두 개를 미리 절단 가능한 형태로 묶습니다. 그 다음 4-0 nylon 단필라멘트 봉합사를 사용하여 피부를 봉합하고 마우스를 빠르게 저산소증 시스템으로 옮깁니다. 동물의 코와 입에 페이스 마스크를 씌우고 직장 탐침을 삽입하여 저산소증 유도 과정 동안 체온이 37.5 °C로 유지되도록 합니다.30분 후에 가열 램프를 조절하십시오. 마우스를 다시 수술대로 옮기고 두 개의 봉합사를 푸십시오. 그런 다음 조직 접착제로 상처 부위를 폐쇄하고 마우스를 케이지로 돌려보낸 뒤, 동물이 완전히 회복될 때까지 관찰하십시오.또는, 저산소 허혈 중 및 후에 뇌혈류를 조사하기 위해 레이저 스펙클 대비 영상법을 사용할 수 있습니다. 동물을 복와위로 배치합니다. 다음으로, 두개골을 노출시키되 개방하지는 않도록 1cm 길이의 정중선 절개를 통해 두피를 엽니다.그 후 즉시 동물을 혈류 영상 장치로 옮기고 뇌혈류 기록을 시작합니다. 제조사의 지침에 따라 FLPI 소프트웨어를 사용하여 뇌혈류 영상을 확인하고, 선택한 영역을 실시간으로 분석합니다. TPA 치료의 효과를 평가하려면 일시적인 일측성 경동맥 폐쇄 및 저산소증 유도 후 적절한 시점에 동물의 꼬리 정맥에 정맥 주사합니다.그 후 일시적 뇌 저산소 허혈 발생 24시간 후에 in vivo TTC 염색을 통해 경색 부피를 정량화합니다. 다음 날, 진동 절단기(vibram)를 사용하여 1mm 두께의 절편을 제작합니다. 마지막으로, 디지털 현미경을 통해 4장의 뇌 절편 연속 이미지를 얻고, 적절한 영상 분석 소프트웨어를 사용하여 손상되지 않은 반대측 뇌반구 면적에 대한 흰색 경색 부위 면적의 비율로 경색 부피를 정량화합니다.본 절차 외에도, 다른 혈전 용해 방법들을 사용하여 그 효과와 임상적 가능성을 평가할 수 있습니다. 이 기술은 허혈성 뇌졸중 분야의 연구자들이 뇌 내 혈전 용해 치료를 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

hypoxic - 허혈성 뇌 손상에 대한 출생 후의 쥐 모델은 인간의 신생아 hypoxic 허혈성 뇌증 (히에)의 잘 설립 모델입니다. 이 문서에서는, 우리는 포스트 나탈 쥐 새끼의 히에의 모델을 설명합니다.

Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델

이 비디오는 마우스 모델에서 오른쪽 총경동맥을 차단하고 마우스를 저산소 환경에 노출시켜 혈전성 뇌졸중을 복제하는 절차를 보여줍니다. 이 과정은 뇌로 가는 혈액과 산소의 흐름을 감소시켜 혈전 형성과 뇌 손상을 유발합니다.

마우스 모델에서 저산소증 및 허혈을 통한 혈전성 뇌졸중 유도

Photothrombosis 매우 재현성 방식으로 관심 분야의 작은 잘 구분 경색을 유도하기위한 빠르고, 최소 침습 기술입니다. 그것은 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.

Photothrombotic 국소 빈혈 : 마우스 스트로크 연구를위한 최소 침습 및 재현성 광화학 대뇌 피질의 병변 모델

중대 뇌동맥 폐색 (MCAO)의 다양한 쥐 모델은 널리 실험 뇌 연구에 사용됩니다. 여기서 우리는 인간의 허혈성 뇌졸중의 대다수에 의해 부과 된 손상에 해당하는 크기의 일관성있는 대뇌 피질의 경색을 생산 두개 영구 원심 MCAO의 모델을 보여줍니다.

마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

신생아 뇌졸중은 조기 뇌 손상의 중요한 원인으로, 연구를 위해 일관된 국소 손상 패턴과 높은 재현성을 가진 번역 모델이 필요합니다. 이 연구는 만삭 등가 설치류에서 비출혈성, 편측성 국소 허혈-재관류 손상을 생성하기 위한 자세한 수술 절차를 설명합니다.

P10 쥐에서 신생아 뇌졸중의 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 모델

여기에 설명된 광혈증 뇌졸중 모델은 감광성 염료투여 후 레이저 조명을 이용하여 영구 미생물 폐색을 유도하여 손상되지 않은 두개골을 통해 뇌졸중이 생성된다.

마우스에서 뇌졸중 모델링: 포심 피질 병변

중간 대뇌 동맥 폐색의 다른 모델 (MCAo) 실험 적인 뇌졸중 연구에 사용 됩니다. 여기서, 외부 경동맥(ECA)을 통한 과도 MCAo의 실험적인 뇌졸중 모델이 기술되며, 이는 자발적인 혈전 용해 또는 치료로 인해 뇌혈관 혈전이 제거되는 인간의 뇌졸중을 모방하는 것을 목표로 한다.

마우스에서 뇌졸중 모델링: 외부 경동맥을 통한 일시적인 중간 뇌동맥 폐색

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

여기에서는 C57BL/6J 마우스에서 경두개 전기응고를 통해 원위 중뇌동맥 폐색(dMCAO) 모델을 확립하고 후속 신경학적 행동 및 조직병리학적 특징을 평가하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

본 연구는 급성 고혈당증이 있는 C57BL/6 마우스에서 중대뇌동맥 폐색/재관류(MCAO/R)를 사용하여 재현성이 높은 출혈성 변형(HT)의 동물 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

일과성 국소 허혈과 결합된 급성 고혈당증에 의해 유도된 출혈성 변형의 마우스 모델

배우세요 생쥐 혈전성 뇌졸중 모델을 통해 일과성 대뇌 저산소증-허혈을 유도하고 tPA 치료의 효과를 평가하는 방법을. 이 기법은 뇌경색 메커니즘 연구와 혈전용해 치료 개선에 활용됩니다.

과도 대뇌 저산소증 - 허혈을 기반으로 혈전 성 뇌졸중 모델

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