Name: 소뇌 과립 세포 배양에서 미세 아교 세포의 선택적 고갈 L - 류신 메틸 에스테르를 사용하여 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: 배우세요 소뇌 과립 세포 배양에서 L-류신 메틸 에스테르를 사용하여 미세 아교 세포를 선택적으로 고갈시키는 방법을. 이 기술은 신경퇴행성 질환에서 미세 아교 세포와 뉴런의 상호작용을 연구하는 데 활용됩니다.

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이 연구는 영국 Aims2Cure와 UCL Impact Award 박사 과정 학생의 지원을 받아 JMP에 수여되었으며, MRC Capacity Building 박사 과정 JMP에 대한 치매 박사 과정 학생의 지원을 받았습니다.

여기에 설명 된 모든 실험은 영국의 동물 (과학적인 절차) 1986 년 법에 따라 수행 하였다. 악기, 문화 미디어, 그리고 요리 1. 준비 <ol><li> 두 스테인레스 스틸 실험실 해부 가위와 두 개의 스테인레스 스틸 실험실 집게를 준비합니다. 문화 후드 O의 모든 악기와 장소를 압​​력솥 / N 살균 자외선 (UV) 빛 아래. </li><li> 최소 필수 매체 (MEM) 배지 (500 mL로 10 % 태아 소 혈청 [FBS, 20 mM의 KCl을 25 mM의 NaHCO3를, 30 mM의 D- 글루코오스, 2 mM L- 글루타민, 100 U / ㎖ 페니실린, 100 μg의 / ㎖ 스트렙토 마이신, 6 μg의 / ㎖ 암피실린) 및 필터 소독. 달 동안 4 ℃에서 보관하십시오. </li><li> 14mm, 번호 1 두께 된 커버를 포함하는 24 잘 배양 플레이트를 준비합니다. 이전에 3 설명한 바와 같이 100 ㎎ / ℓ 폴리 D 라이신 (PDL)의 커버 슬립과 코트를 압력솥. 자외선은 O / N을 소독. </li></ol> CGC 문화 솔루션 2. 준비 <ol><li> 처리 된 오토 클레이브, UV 광, 멸균 DH에서 &#39;용액 A&#39;(100 ㎖)를 준비 포도당 250 ㎎, 소 혈청 알부민 [BSA] 300 mg을 인산염 완충 염수 [PBS (칼슘 및 955 ㎎을 함유하는 2 O 마그네슘) + 무료, 3.8 %의 1 ml의 황산 4 · 7H 2 O </li><li> A. 용액 9 ㎖에 희석 / ㎖ 트립신 5 mg을 1 ㎖를 함유하는 &#39;용액 B&#39;(10 ㎖)를 준비 </li><li> &#39;용액 C&#39;1000 유닛의 DNase, 대두 트립신 억제제의 0.5 ㎎, A. 용액 10 mL로 희석하여 3.8 % 황산 · 7H 2 O 100 ㎕를 함유하는 (10 ㎖)를 준비 </li><li> A. 용액으로 20 ㎖로 희석 용액 3.2 ml의 C를 함유 &#39;용액 D&#39;(20 ㎖)를 준비 </li><li> · 7H 2 O EBSS, 25 mM의 NaHCO3를, 3 mM의 황산을 포함 BSA / 얼의 균형 소금 솔루션 (EBSS) 솔루션을 준비하고,4 % BSA, pH를 7.4으로 이전에 3을 설명했다. </li><li> 150 mM의 LME의 최종 농도를 수득 MEM 배지 5 ㎖에 순수한 LME 추가하여 LME 준비 벤치 탑 pH 미터를 사용하여 pH를 7.4까지 용액을 복귀하고, 필터는 28mm의 폴리 에테르 설폰 (PES), 0.2 μm의 주사기를 사용하여 소독 필터. </li></ol> 3. CGCs을 배양 <ol><li> 이전에 3 설명한대로 4-7 일 된 쥐 새끼에서 소뇌를 수집합니다. 얼음에 5 ml의 솔루션을 포함하는 배양 접시에 바로 배치합니다. </li><li> 페트리 접시 뚜껑에 소뇌와 장소 조직에서 과잉 솔루션을 붓고. </li><li> 적어도 세 개의 서로 다른 방향에서 잘 골조 면도날 미세 조직을 잘라. </li><li> 5 분 동안 37 ℃에서 물을 욕조에 솔루션 (손실 제한 조직을 위해 솔루션 페트리 접시를 씻어) B와 장소에 다진 조직을 추가합니다. 분의 부드럽게 모든 커플을 흔들어. </li><li> 트립신, 흔들림 센트를 중화하기 위해 튜브에 용액 D (20 ml)에 추가5 분 동안 65 XG에 rifuge. </li><li> 상층 액을 붓는다. </li><li> 현탁액 가능한 균질해질 때까지, 직경을 감소시키는 세 골조 유리 피펫으로 잘 용액 C. 씹다 4 ㎖ (약 10 회)에 재현 탁. </li><li> 천천히 부드럽게 BSA / EBSS 위에이 균질 몇 방울을 추가합니다. 이 BSA / EBSS를 통해 싱크 시작하면, 더 씹다 및 / 또는 균질는 BSA / EBSS의 상단에 레이어에 앉아 있어야 좀 더 솔루션 C를 추가 할 수 있습니다. 흔들지 마십시오. 5 분 동안 100 XG 스핀. </li><li> 상층 액과 MEM 배지 1 ㎖에 재현 탁 펠릿 (소프트)를 제거합니다. </li><li> MEM 배지 500 μL에 80 만 셀 / 커버 슬립에서 혈구와 플레이트를 사용하여 세포를 계산합니다. 6 % CO 2와 37 ° C에서 인큐베이터에있는 장소. </li><li> 매체에게 다음 날 (준비 후 24 ~ 36 시간)을 변경합니다. 세포주기 억제제 아라 비노 푸라 노실 시티 딘 (ARAÇ) 10 μM을 함유하는 MEM 배지 용액을 제조. <ol><li> 각각커버 슬립은 다시 세포와 정상까지 오래된 매체의 250 μl를 추가, 신선한 24 웰 플레이트에서 기존 매체의 250 μl를 유지 나머지를 대기음, 정상 MEM 배지 250 μl를 추가 한 다음, 세포를 씻어이 대기음 ARAÇ 함유 매체의 250 μL와. 참고 : 세포는 체외 (DIV)에서 육일에서 사용할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 4. 선택적으로 미세 아교 세포 고갈 (6 DIV에서 수행) <ol><li> 150 mM의 LME의 최종 농도를 수득 MEM 배지 별개 분취 량 5 ml의 순수한 LME 추가. </li><li> pH 7.4의 용액으로 돌아가서 필터 28mm 폴리 에테르 술폰 (PES), 0.2 μm의 주사기 필터를 이용하여 멸균. </li><li> 제어 배양 정상적인 MEM 배지와 함께 10 분 동안 37 O C에서 수욕 MEM 배지 자리에 50 mM의 (2 × LME)의 농도로 용액을 희석. </li><li> 반 (250 μL) CGC의 문화 MEM 배지를 제거하고 37 ℃에서 유지한다. </li><li> 취급 세포또는 제어 문화에 대한 LME없이 미리 예열 MEM 배지 (250 μL) 25 mm의 잘 농도를주는 1 : 즉, 2 × LME (250 μL)를 포함하는 MEM 배지로 1 희석. </li><li> 1 시간 동안 6 % CO 2의 가습 분위기에서 37 ℃에서 세포를 배양한다. </li><li> 두번 신선한 미리 예열 MEM 배지에서 세척 세포 LME - 함유 배지를 제거하고 배양 배지를 유지 및 해당 웰 신선한 미리 예열 MEM 매체의 동일 부피를 대체한다. </li><li> (37 ° C에서 6 % CO 2 가습) 인큐베이터에 문화를 반환하고 추가 처리하기 전에 24 시간 동안 나머지 둡니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

가장 중요한 단계는 CGC에서 미세 아교 세포의 성공적인 선택적 제거를 보장하기 위해 및 / 또는 혼합 된 문화가있다 : 1) 멸균 및 건강한 CGC 문화를 유지하는 단계; 2) 필터 LME 함유 배지를 살균하여 pH 7.4 용액을 복귀; 3) 유지 CGC 미디어를 유지하고 37 미디어 LME이 함유 열 충격을 방지하기 위해 C를 °; 4) 세포를 배양기 밖에 유지되는 시간을 줄이기 위해 빨리 작동. 이전에 우리의 실험실에서 최적화 된 농도 - 우리는 우리의 CGC 문화에서 미세 아교 세포를 고갈 25 mM의 LME을 사용했다. 그럼에도 불구하고, 일부 미세 아교 세포는 여전히 일부는 차별화 된, 비 증식 미세 아교 세포의 인구를 반영 할 수 믿고 LME 처리를, 다음 문화에 남아 있습니다. 실제로, Hamby et al. (2006)은 50 ~ 75 mM의 LME는 고밀도 성상 세포 단일 층 (13)에서 미세 아교 ...

인간의 두뇌는 추정 850 억 뉴런 및 아교 세포를 포함 하나 85000000000 다른 비 신경 세포를 포함한다. 영어로 번역 &#39;아교 세포&#39;의 따라서 그리스 어원 - 신경 과학자가 신경 세포 인구에 주로 초점을 맞추고있다 지난 100 년간의 큰 부분을 위해, 아교 세포를 믿는 것은 뉴런 구조 지원을 제공하는 수동적 인 지원 세포보다 조금 더 할 수 &#39;접착제&#39;. 최근에, 그러나, 신경 - 아교 상호 작용이 신경 생물학, 신경 생리학, 많은 신경 퇴행성 질환의 기원과 진행의 기본 측면에 훨씬 더 근본적인 될 수 있다는 것을 점점 더 분명되고있다. 소뇌 과립 세포 (CGCs), 인간의 두뇌에서 가장 풍부한 균일 신경 인구는 소뇌를 지배하고 세포 구성 성분의 90 % 이상을 차지한다. 따라서, 이러한 세포는 t위한 모델 시스템으로 in vitro에서 광범위하게 사용되어왔다그는 신경 발달, 기능, 병리 2-6의 연구. 그러나, CGC의 문화는 여전히 논란의 여지 상당한 비율의 미세 아교 세포 및 기타 아교 세포가 포함되어 있습니다. 그 결과, 추정되는 다른 세포 치료법에 직접 신경 반응을 표시 CGC 데이터가 실제로 발생할 수 - 부분적 또는 전체로 - 배양에서 신경교 이웃 간접 보조 응답으로부터. 이를 평가하기 위해, 우리는 선택적으로 L-류신 메틸 에스테르 (LME)의 도움으로 CGC의 연결을 문화에서 미세 아교를 제거. LME 원래 선택적 식세포 7을 파괴하는데 사용 lysomotropic 에이전트이며, 이후 선택적 신경, 성상 세포, 및 신경 교세포의 혼합 배양에서 8,9,10 미세 아교 세포를 고갈하는 데 사용되어왔다. LME는 리소좀 파쇄 및 후속 13,14 아폽토시스를 유발하며, 대 식세포와 미세 아교 세포에 의해 내재화된다. 대 식세포와 미세 아교 세포는 그들이 particula로 발생 리소좀에서 특징적으로 풍부LME 처리에 노출시 RLY 취약합니다. 이 프로토콜은 CGC 및 다른 신경 / 아교 세포 배양 시스템을 이용한 실험에서 미세 아교 세포의 기여를 확인 할 수있는 강력하면서도 간단하고 쉬운 방법을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>펜치&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td>곡선 끝은 소뇌의 제거를 용이하게 합니다&nbsp;</td></tr><tr><td>마이크로 해부 가위</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3146</td><td>직선적이고 날카로운 점은 설치류 P4-7 해부를 용이하게 합니다&nbsp;</td></tr><tr><td>L-류신 메틸 에스테르 하이드로클로라이드</td><td>시그마-알드리치</td><td>7517-19-3</td><td></td></tr><tr><td>EBSS 용액&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7510-500 ml</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>27964-99-4</td><td>사용 1일 전에 커버슬립을 코팅하십시오&nbsp;</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>대두 트립신 억제제&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6414</td><td></td></tr><tr><td>마우스 anti-ED1 항체&nbsp;</td><td>앱캠</td><td>ab31630</td><td></td></tr></tbody></table>

소뇌 과립 세포 배양에서 미세 아교 세포의 선택적 고갈 l - 류신 메틸 에스테르를 사용하여

Selective Depletion of Microglia from Cerebellar Granule Cell Cultures Using L-leucine Methyl Ester

중추신경계의 상주 면역 역량 세포인 미세아교세포는 선천성 면역을 매개할 뿐만 아니라 신경 기능을 조절하고 조절하는 데 다각적인 역할을 합니다. 1차 설치류 세포 배양 모델은 뉴런-아교세포 상호 작용에 대한 이해를 크게 발전시켰지만, 혼합 배양에서 미세아교세포를 특이적으로 제거하는 방법이 활용된 것은 최근의 일입니다. 여기에 설명 된 그러한 기술 중 하나는 대식 세포와 마이크로 아교 세포에 의해 내재화 된 리소 부트 자극 제제 인 L-류신 메틸 에스테르를 사용하는 것으로, 리소좀 파괴 및 후속 세포 사멸을 유발합니다13 , 14. L-류신 메틸 에스테르를 사용한 실험은 다양한 배양 조건에서 주변 세포 환경에 대한 미세아교세포의 기여도를 확인할 수 있는 능력이 있습니다. 본 연구실에서 최적화된 프로토콜을 사용하여 P5 설치류 소뇌 과립 세포 배양에서 미세아교세포를 제거하는 방법을 설명합니다. 이 접근 방식을 사용하면 실험 데이터에 대한 미세아교세포의 상대적인 영향을 평가할 수 있을 뿐만 아니라 미세아교세포가 뇌졸중, 알츠하이머병 또는 파킨슨병과 같은 신경학적 상태의 배양 모델에서 신경 보호 또는 신경독성 역할을 하는지 여부를 결정할 수 있습니다.

선택적으로 CGC 및 / 또는 혼합 된 문화에서 미세 아교 세포를 제거하기 위해이 기술의 능력을 정확하게 파악하고 자신의 주변 세포에서 미세 아교 세포를 분화하는 연구자의 후속 능력에 의존한다. 도 1에 도시 된 바와 같이, 이것은, 예컨대 동종 렉틴-B4 같이, 소교 특정 셀 머신을 사용하여 달성 될 수있다.도 2에서 설명한 바와 같이, 성상 세포 및 신경 세포의 밀도 및 형태로 관측 변경은 각 주 치료 그룹에 대해 기록되지 않았다. 배양액 화합물 소교 특정 동작을 지원 단독 LME로 처리했을 때 중요한 신경 또는 성상 세포 형태의 유의 한 변화는 관찰되지 않았다.도 3a는 성상 세포 밀도 및 기본 설치류 성상 세포 배양 (12)로부터 형태에서 관측 변화를 도시하지 않지만 수행 오염 된 미세 아교 세포의 손실을 표시합니다. 그림 (b)에서와 같이, 변경없이 astrocy에테 밀도와 형태...

Microglia는 다양한 비세포 자율 메커니즘에 의해 배양의 뉴런 및 기타 신경교세포에 영향을 미칠 수 있습니다. 여기에서는 1차 신경 세포 배양에서 미세아교세포를 선택적으로 고갈시키는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 신경염증이 특징적인 신경퇴행성 질환에 영향을 미치면서 미세아교세포-뉴런 상호작용의 역할을 규명할 수 있는 잠재력을 가지고 있습니다.

소뇌 과립 세포 배양에서 미세 아교 세포의 선택적 고갈 L - 류신 메틸 에스테르를 사용하여

Microglia, the resident immunocompetent cells of the CNS, play multifaceted roles in modulating and controlling neuronal function, as well as mediating ...

이 절차의 전반적인 목표는 sella 과립세포 배양물에서 미세아교세포를 선택적으로 제거하는 것입니다. 이는 먼저 cgcs 집단을 배양하고 37 °C, 6% CO2 조건의 배양기에 보관함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 MEM 배지에서 LME 용액을 조제하여 최종 농도가 150 mM LME가 되도록 하는 것입니다.CGC 배양물에서 MEM 배지의 나머지 절반을 제거하여 인큐베이터에 보관하고, CGC 배양물을 MEM 배지가 포함된 동일한 부피의 LME로 교체한 후 37 °C, 6% carbon dioxide 조건의 인큐베이터에서 1시간 동안 배양합니다. 마지막 단계로, 미리 데워둔 신선한 MEM 배지로 CGC 배양물을 두 번 세척합니다.보존된 배양액을 동일한 부피의 신선한 배지로 교체한 다음, 추가 처리 전 24시간 동안 세포를 배양기에 다시 넣어둡니다. 최종적으로, 면역 화학 및 형광 현미경을 사용하여 소뇌 과립 세포 배양물에서 미세아교세포가 특이적으로 제거되었음을 확인합니다. 이 방법은 다양한 조건에서 미세아교세포가 뉴런에 미치는 영향은 무엇이며, 이러한 영향이 알츠하이머병 및 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질환의 이해에 어떤 의미를 갖는지와 같은 신경생물학 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.일반적으로 이 기술에 익숙하지 않은 연구자는 일차 배양 과정에서 정밀함과 신속함이 요구되기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 4~7일 된 쥐 새끼의 소뇌를 수집하여 본 절차를 시작하십시오. 수집한 소뇌를 즉시 얼음 위에 놓인 5 mL의 용액 A가 담긴 페트리 접시에 넣으십시오.그 다음 소뇌에서 과량의 용액을 제거하고 조직을 페트리 접시 뚜껑에 놓습니다. 이어서 홈이 있는 면도날을 사용하여 조직을 최소 세 가지 다른 방향으로 잘게 다집니다. 그 후, 다져진 조직을 용액 B에 넣습니다. 이를 37 °C의 항온수조에 5분 동안 두고, 몇 분마다 한 번씩 가볍게 흔들어 줍니다.그런 다음, trypsin을 중화시키기 위해 튜브에 용액 D 20 milliliters를 추가하고 60 5G에서 5분 동안 원심분리합니다. 그 후, 상층액을 따라 버립니다. 용액 C 4 milliliters에 재현탁합니다. 현탁액이 최대한 균질해질 때까지 직경이 점차 작아지는 세 개의 화염 멸균된 유리 피펫을 사용하여 샘플을 10회 트리트레이션(trituration)합니다.다음으로, 이 균질액 몇 방울을 B-S-A-E-B-S-S 위에 천천히 조심스럽게 첨가하십시오. 만약 균질액이 B-S-A-E-B-S-S-T 층을 통해 가라앉기 시작한다면, 더 적정하고 용액 C를 조금 더 추가하십시오. 균질액은 B-S-A-E-B-S-S 위에 층을 이루며 얹혀 있어야 합니다. 흔들지 말고 100 G에서 5분 동안 원심분리하십시오. 그 후 상층액을 제거하고 펠릿을 재현탁하십시오.1 mL의 MEM 배지 내에서 헤모사이토미터를 사용하여 세포 수를 측정하고, 커버슬립당 800,000개의 세포를 분주합니다. 그 후 500 µL의 MEM 배지를 추가하고, 37 °C, 6% CO2 조건의 인큐베이터에 넣습니다. 이어서 10 µM의 세포 주기 억제제 RC가 포함된 MEM 배지 용액을 조제합니다. 새로운 24-웰 플레이트에 각 커버슬립당 250 µL의 기존 배지를 남기고 나머지는 흡입하여 제거합니다.세포를 세척하기 위해 250 µL의 일반 MEM 배지를 추가합니다. 이어서, 기존 배지 250 µL를 세포에 다시 넣고 RSE가 포함된 배지 250 µL를 추가하여 채웁니다. 이 과정에서, MEM 배지 5 mL에 순수 LME를 첨가하여 LME의 최종 농도가 150 mM이 되도록 합니다.산-염기 용액을 사용하여 용액의 pH를 7.4로 조정하십시오. 그런 다음 0.2 µm 공극의 28 mm PES 시린지 필터를 사용하여 멸균 여과하십시오. 다음으로, LME 용액을 MEM 배지에서 50 mM 농도가 되도록 희석하십시오.그런 다음 대조군 배양을 위한 일반 MEM 배지와 함께 37 °C의 항온수조에 10분 동안 둡니다. 10분 후, 각 CGC 배양액에서 MEM 배지 250 µL를 분취합니다. 그 후 해당 배지를 37 °C로 유지합니다.다음으로, 2배 농도의 LME가 포함된 MEM 배지 또는 LME가 포함되지 않은 예열된 MEM 배지로 세포를 처리합니다. 대조군 배양의 경우, 6% 이산화탄소가 포함된 습윤한 분위기의 37 °C에서 세포를 1시간 동안 배양합니다. 그 후, LME 포함 배지를 제거하기 위해 예열된 신선한 MEM 배지로 세포를 두 번 세척합니다. 그런 다음, 남아있는 배양액을 동일한 양의 신선하고 예열된 MEM 배지로 교체합니다.마지막으로, 추가 처리 전 배양물을 37 °C, 6% 습윤 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양합니다. 이 그림은 25~75 mM LME로 1시간 동안 처리한 후 세척한 CGC 배양물을 대상으로 수행한 실험의 대표 이미지를 보여줍니다. 총 세포 수와 세포 사멸 형태를 보이는 세포의 정량을 위해 DPI로 면역화학 염색을 수행하였으며, 미세아교세포의 식별 및 정량을 위해 ISO lectin B four를 사용하였습니다. 이 그래프는 세포 사멸 형태를 보이는 세포의 정량 결과를 보여주며, 여기에 제시된 것은 25 mM LME로 1시간 동안 처리한 CGC 배양물 실험의 대표 이미지입니다.신경세포 밀도의 변화를 확인하기 위해 DAPI 및 anti beta three tubulin을 사용하여 면역화학 염색을 수행하였으며, 별아교세포의 밀도와 형태 변화를 확인하기 위해 anti GFAP를 사용하였습니다. 음성 대조군 이미지는 1차 항체를 생략한 CGC 배양 세포를 나타냅니다. 이 기술은 숙달되면 적절히 수행했을 때 약 2시간 만에 완료할 수 있습니다.

selective-depletion-microglia-from-cerebellar-granule-cell-cultures

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 성인 쥐의 뇌 피질에서 미세아교세포를 분리하는 기술을 보여줍니다. 첫째, 피질은 뉴런과 다른 신경교세포를 제거하기 위해 세분화와 균질화를 거쳐 미세아교세포를 보존합니다. 그 후, 세포 현탁액은 항 미엘린 자기 마이크로비드와 자기장에 노출되어 미엘린 파편과 미엘린을 포함하는 세포에서 미세아교세포와 골수성 세포를 효과적으로 분리합니다.

성인 마우스 뇌의 피질에서 미세아교세포의 분리

이 비디오는 1차 마우스 소뇌 과립 뉴런을 분리하고 배양하는 기술을 보여줍니다. 세포는 증식하는 신경교세포를 제거하고 소뇌 과립 뉴런의 순수한 배양을 생성하기 위해 항대사 산물로 처리됩니다.

Isolation and Culture of Mouse Primary Cerebellar Granule Neurons(마우스 1차 소뇌 과립 뉴런의 분리 및 배양)

이 비디오는 1차 쥐 신경 세포 배양에서 미세아교세포를 선택적으로 제거하는 기술을 보여줍니다. 소뇌 과립 뉴런은 증식하는 신경교세포를 제거하기 위해 항대사산물로 처리됩니다. 또한, 배양물에서 미세아교세포를 고갈시키기 위해 리소좀 표적화제로 처리됩니다.

쥐 소뇌 과립 뉴런 배양에서 미세아교세포를 선택적으로 제거

이 비디오는 자기 세포 분류를 사용하여 마우스 뇌의 탈수초 병변에서 미세아교세포를 추출하는 프로토콜을 보여줍니다. 이 프로토콜에는 미세아교세포를 포함하는 병변된 뇌 조직을 절개하고, 특정 효소로 조직을 처리하여 단세포 현탁액을 얻고, 미세아교세포 수용체 특이적 자기 비드를 사용하여 미세아교세포를 분리하는 것이 포함됩니다.

Isolating Microglia from Mouse Brain Demyelinating Lesions Using Magnetic Activated Cell Sorting(자기 활성화 세포 분류를 사용한 마우스 뇌 탈수초 병변에서 미세아교세포 분리)

이 비디오는 마우스의 1차 소뇌 과립 뉴런에서 ROS(Reactive Oxygen Species)를 사용하여 뉴런 손상 모델을 생성하는 방법을 간략하게 설명합니다. 고농도의 과산화수소를 첨가하여 산화 스트레스를 유발하는 과정을 자세히 설명합니다. ROS 노출은 DNA 가닥 단절과 게놈 불안정성을 유발합니다. 또한 세포 단백질의 산화는 기능을 손상시키고 지질 과산화는 멤브레인 무결성을 손상시킵니다. 이 연쇄 반응은 사이토크롬 c 방출 및 카스파아제 활성화로 이어져 신경 세포 사멸을 초래합니다.

Modeling Reactive Oxygen Species-Induced Neuronal Death in Mouse Cerebellar Granule Neurons

미세 아교 세포 생물학의 성공적인 조사에 하나의 키는 CNS의 조직으로부터 분리하는 동안 생체 미세 아교 immunofunction의 보존이다. 형광 이미징, 면역 세포 화학, 및 염증성 자극 지질 다당류 (LPS)와 팸 3 CSK 4 (팸)와 ELISA 다음 미세 아교 세포의 활성에 의해 평가 매우 순수하고 immunofunctional 세포 배양에 회전 흔들림 결과를 통해 미세 아교 세포를 분리.

쥐과 신생아에서 보존 면역 표현형과 기능으로 두피 소교 세포의 분리

이 프로토콜은 신경 과학 및 신경 약리학 연구 에서 체외 모델로 사용되는 배양 소뇌 과립 뉴런 (neuronal culture)의 Fluorescein diacetate (FDA) 및 Propidium Iodide (PI) 이중 염색을 사용하여 신경 생존력을 정확하게 측정하는 방법을 설명합니다.

소뇌 과립 신경 세포 배양에서 Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide 이중 염색을 이용한 신경 생존력의 평가

이 프로토콜 분리 하 고 기본 마우스 뇌과 립 신경 (CGNs) 6-7 주 오래 된 강아지, 손실에 대 한 CGNs의 효율적인 변환 및 기능 연구의 이득에서에서 경작 하 고 NMDA 유발 신경 excitotoxicity, 모델링에 대 한 간단한 방법을 설명 합니다. 낮은 칼륨-유도 된 세포 죽음, DNA 손상 및 산화 스트레스 같은 문화 모델을 사용 하...

신경 죽음 및 마우스 기본 소 뇌과 립 신경에 변성을 모델링

기본 microglia murine 두뇌에서의 격리에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 이 기술은 신경 상황의 현재 이해를 발전에 에이즈. 조밀도 기온 변화도 원심 분리와 자력 분리 매우 순수한 샘플의 충분 한 수확량을 생산 하기 위해 결합 됩니다. 또한, 우리 microglia의 특성에 대 한 단계를 설명합니다.

특성화 및 조밀도 기온 변화도 원심 분리 하 여 마우스 기본 Microglia의 절연

우리는 성인 마우스 뇌 반구의 다른 해부 된 영역에서 microglia의 격리를위한 프로토콜을 제공하고, 전체 길이 전사체의 깊은 단일 세포 RNA 시퀀싱을위한 반자동 라이브러리 준비를 제공합니다. 이 방법은 건강과 질병에서 microglia의 기능적 이질성을 해명하는 데 도움이됩니다.

깊은 단세포 RNA 염기서열 분석에 대한 하나의 성인 마우스 뇌 반구에서 영역 별 Microglia의 격리

여기에서, 우리는 원주형 자기 활성화 세포 분류를 활용하여 탈수초성 질환의 동물 모델에서 원발성 미세아교세포를 분리하고 정제하는 프로토콜을 제시한다.

탈수초화의 동물 모델에서 자기 활성화 세포 분류에 의한 마우스 일차 미세아교세포의 분리

배우세요 소뇌 과립 세포 배양에서 L-류신 메틸 에스테르를 사용하여 미세 아교 세포를 선택적으로 고갈시키는 방법을. 이 기술은 신경퇴행성 질환에서 미세 아교 세포와 뉴런의 상호작용을 연구하는 데 활용됩니다.

소뇌 과립 세포 배양에서 미세 아교 세포의 선택적 고갈 L - 류신 메틸 에스테르를 사용하여

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