Name: 설치류에 아크릴 수지 성형 기반 헤드 고정 기법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: 학습하세요 설치류 행동 연구를 위한 아크릴 수지 기반 헤드 고정 기법. 금속 프레임 없이 뇌 접근이 가능하며 다양한 실험실에서 활용할 수 있는 혁신적인 방법론입니다.

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본 연구는 교육과학기술부 연구지원(2010-0022362)과 (2012R1A2A2A02046812)의 기초과학연구프로그램의 지원을 받았다.

윤리 문 : 이 실험은 경북 대학교 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었으며, 관리 및 사용 실험 동물의 (국립 보건 연구원, 1996)에 대한 안내에 따라 수행되었다. 실험 후, 동물은 이산화탄소 안락사 하에서 희생시켰다. 쥐의 헤드 고정 바의 1. 디자인 참고 :이 단계는 고정 바 디자인에 대한 일반적인 지침입니다. 치수 및 재료에 대한 모든 수정은 동물이나 임플란트에 따라 할 수있다. CAD 소프트웨어를 사용하여 헤드 고정 막대를 설계하는 것은 권장하지만, 필요하지 않습니다. <ol><li> 고정 막대를 설계하는 CAD 소프트웨어를 사용합니다. <ol><li> 직사각형 (123 × 35 × 6mm) (그림 1A)의 고정 막대를 디자인합니다. 고정 바의 중간에, 직사각형 노치 (포트 16 × 20 ​​mm)를 확인합니다. 슬로프 또는 들여 쓰기를 추가 whic시간은 (그림 1B는 -arrows 그림은 1A-) 포트의 경계에 가이드 레일 역할을합니다. 참고 : 포트의 영역은 개두술을 통해 뇌 영역의 대부분에 정위 조작을 사용하여 수직 접근 할 수 있도록 뇌를 통해 쥐의 두개골의 추정 사각형을 다루고 있는지 확인합니다. </li><li> 고정 바의 양쪽에 두 개의 긴 고정 구멍 (50 × 20 ​​× 6mm) 판을 연결합니다. 이 구멍은 직경 6mm (그림 1A-D)의 나사를 통과했는지 확인하십시오. 록킹 후크 (도 1A-B)를위한 포트 앞에 직경 3mm의 구멍을 만든다. </li><li> 상자 바닥 (135 × 305mm)과 측벽 (305 × 76mm)를 갖는합니다. 도 1a (삽입)에 도시 된 바와 같이 두 개의 직경 6mm의 구멍을 뚫는다. 고정 바 (그림 1A-E)에 지원하는 벽을 추가합니다. </li></ol></li><li> 설계 막대를 제조 및 상자 등의 시아 노 아크릴 레이트를 사용하여 각각의 조립그림 1A (삽입)에 표시. 6mm 직경의 나사를 사용하여 상자에 막대를 조립합니다. 인체 공학적 헤드 고정 (그림 1A-삽입)에 대한 바의 나사 위치를 조정하여 기울기를 적용합니다. 주 : 생쥐를 들어, 고정 바의 크기 (2 mm 두께의 아크릴 패널의 2 개의 층으로 이루어진) 60 × 20 ​​× 4mm이다. 포트는 8mm 폭 (상부) 및도 1c에 도시 된 바와 같이 9 X 10mm (아래)의 제곱이다. 고정 플레이트 쥐 &#39;의 동일한 크기이다. 상자 판과 측면 벽은 각각 100 × 72mm와 100 × 50mm이다. </li></ol> 임플란트 수술시 2. 헤드 마운터 건설 주의 : 치과 아크릴 수지를 처리​​ 할 때주의해야합니다. 액체는 피부에 자극을 줄 수 있습니다. 마스크를 착용하고 장갑을 착용하십시오. 환기가 잘되는 곳에서 작업 할 수 있습니다. <ol><li> 수술 전 준비 <ol><li> 단단히 고정 막대를 사용하여 AP의 포트의 테두리를 감싸는막대에 적용되는 아크릴 수지의 접착을 방지하기 위해 araffin 필름 (그림 1B 그림 2A 참조). 코트 아크릴 수지의 얇은 층으로 파라핀 필름으로 덮여 포트 보더. </li><li> 멸균 수술 도구를 사용합니다. 철저 고정대 소독 및 70 % 에틸 알코올을 사용한 주변. </li></ol></li><li> 정위 이식 수술을 수행 <ol><li> 복강 내 케타민 10 ㎖의 칵테일 혼합물의 주입 (2 ㎖ / kg) (50 ㎎ / ㎖), 자일 라진 하이드로 클로라이드 1.5 ㎖ (23.32 ㎎ / ㎖) 및 염수 250 ml로 동물을 마취. 동물이 완전히 마취와 꼬리와 발가락 핀치에 응답하지 않음을 확인합니다. 필요한 경우 수술 중 1 ㎖ / ㎏의 칵테일 혼합물을 주입. </li><li> 정위 장치에 동물을 고정합니다. 수술 중 건조를 방지하기 위해 눈에 안과 연고를 적용합니다. 면도 및 70 % 에탄올로 두피를 청소합니다. 2 % 리도카인의 피하 주사를주고 SCA를 절개두개골의 중간 선을 따라 LP로. 완전히 골막을 긁어. 식염수 여러 번 씻어. </li><li> 두개골의 가장자리 근처에 버 - 홀 드릴링을 확인합니다. 임플란트 나사는 두개골 표면에서 4 ~ 5 회전 (최대 1mm까지의 깊이)는 뇌경막의 위반을 방지합니다. 나사 주입 후 두개골 표면에 뇌척수액과 혈액의 확인 누설하지 않습니다. 식염수로 씻어 특히 나사 주위에 공기 퍼프를 사용하여 두개골 표면을 건조. </li><li> &quot;치과 용 접착제 (슈퍼 본드 ​​C &amp; B)&quot;의 얇은 층으로 코트 두개골 표면. 완전히 추가 전극 주입이 예약 된 경우 브레 그마를 포함하여 두개골의 표면을 커버하지 마십시오. 개두술 좌표를 마킹 브레 그마를 사용합니다. 임플란트 전극 및 / 또는 마이크로 드라이브 및 주위 아크릴 수지를 적용하여 두개골에 고정합니다. </li><li> 치과 용 시멘트의 상단에 추가 아크릴 수지를 적용합니다. 바 코팅 수지 사이에 충분한 칠 아웃 공간을 떠나 아크릴 수지의 적절한 양을 사용하여D 초기 장착 수지 나사 및 / 또는 전극 (그림 2A)에 집착 할 때. </li></ol></li><li> 머리 고정 바를 두개골 표면 위 5mm 이상을 배치하고 중앙 (그림 2A - 왼쪽)을 맞 춥니 다. </li><li> 두개골의 기본 초기 설치 수지 사이의 간격에 아크릴 수지를 적용합니다. (그림 2A -CENTER). 하드가 수지 될 때까지 기다립니다. </li><li> 귀 막대를 제거하고 고정 바 포트에서 성형 마운터를 당깁니다. (그림 2A - 오른쪽). 조심스럽게 성형 마운터 필요한 경우의 가장자리 레일 주변에 추가로 아크릴 수지를 적용합니다. </li><li> 멸균 식염수 두피의 상처 표면을 씻어. 즉시 수술 후 항생제 (enrofloxacin, 5 ㎎ / ㎏ SC) 및 진통제 (부토 르파 놀 주석산, 2 ㎎ / ㎏ SC)를 주입한다. 하나의 새장에 개별적으로 동물을 집입니다. </li></ol> 3. Habituating 동물 머리 고정을합니다 참고 :이 단계 드를저자의 경험적으로 성공적인 평가를 기반으로 습관화 일정을 스크라이브. 머리 고정에 대한 습관화 절차에 대한 개요, 슈워츠의 10 구오의 11 일을 참조하십시오. <ol><li> 동물에게 충분한 회복 기간 (주 이상)을 얻었다. 1 일에서 자주 나눈 짧은 세션에 동물을 처리합니다. </li><li> 다음 날 (2 일)에 고정 환경 (상자)에 동물을 노출. 고정 바의 포트에 머리 마운터를 삽입하지 마십시오. 환경에 익숙해 동물을 둡니다. 안전하게 1-2 초 동안 손을 사용하여 헤드 마운터를 잡아 즉시 놓습니다. 손으로 잡아 몇 배 단기 고정을 반복합니다. </li><li> 3 일에, 머리 고정에 동물을 길들. <ol><li> 홈 케이지에서 동물을 가져오고 고정 바의 포트를 향해 머리를 연출 박스에 정착. 헤드 마운터를 잡고 고정 바의 포트에 삽입합니다. </li><li> 동물의 (마운터 바인딩고무 밴드를 사용하여 상기 고정 바의 걸림 후크에 머리). 5 분 동안 서. 참고 : 찍찍과 동물의 스트레스를 증가 투쟁 동물을 리드 고정 후 동물의 트렁크 또는 꼬리를 만지지 마십시오. 동물이 더 이상 1 분 고군분투 계속하면, 분리 한 후 시도하십시오. 고정을 머리에 노출하지만이 점차 습관화 진행됨에 따라 감소됩니다 때마다이 단계에서, 동물은 소변과 대변 배설을 보여줍니다. </li><li> 잠금 고무 밴드를 검색하고 포트에서 마운터를 꺼냅니다. 다시 홈 케이지에 동물을 넣고 시리얼의 조각 또는 보상 등 홈 케이지에 해바라기 씨앗을 제공합니다. 다음 재판은 30 분에 시작됩니다. 하루 만에 3.4.1 다섯 3.4.4에 이상을 반복합니다. </li></ol></li><li> 7 일 4 일, 프로토콜 3.4에 설명 된대로 고정을 머리에 동물을 노출. 점진적으로 (10 분, 20 분, 30 분, 및 습관화 진행됨 50 분)의 헤드 고정 지속 시간을 증가시킨다. 참고 : 동물이 경우 더t는 스트레스의 하이 레벨의 신호가 될 수 있고, 음식 보상을 피드. 고정 시간을 증가하지 마십시오. 동물 행동 어려움을 겪고 반복 표시하는 경우, 더 긴 기간을 길들. </li><li> 매일 동물의 체중을 확인합니다. 체중 감소에 실패 습관화를 생각해 보자. 성공 습관화 후 헤드 고정과 행동 작업을 진행합니다. 참고 : 성공적인 습관화 후속 행동 훈련 (그림 3E 및 F)를 용이하게한다. </li></ol>

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</ol>

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이 프로토콜은 당면한 재료를 사용하여 간단하고 편리한 머리 고정 방법을 보여줍니다. 물리적으로 성공적인 머리 고정을 위해 수술 중 첫 번째 중요한 단계는 치과용 접착 레진 시멘트를 적용하기 전에 두개골 표면을 깨끗이 헹구고 건조시키는 것입니다. 둘째, 이 방법은 측두근 아래에 이식되는 나사를 사용하지 않고 두개골의 나사에만 의존하므로 두개골 가장자리 표면에 대한 수직 이식이 중요합니다10. 이는 특히 쥐의 경우 우발적으로 레진 마운터가 두개골에서 분리될 가능성을 줄입니다.
헤드 마운터를 만드는 데 사용되는 아크릴 수지는 바에 접착됩니다. 우리는 포트 위에 파라핀 필름을 덮어 이를 방지했습니다. 그러나 이것은 불편한 절차입니다. 이를 개선하기 위한 한 가지 가능한 해결책은 금속 재료로 고정 막대를 설계하는 것입니다. 또한, 이는 파라핀 필름이 차지하는 간격을 제거하여 아크릴 막대보다 클램핑 시 더 많은 안정성을 제공해야 합니다. 설명된 방법은 파라핀 필름에서 유...

헤드 고정 또는 헤드 금지는 엄격한 클램핑의 두개골에 프레임 또는 판을 부착하여 동물의 머리를 고정하는 기술이다. 이 기술은 정확한 감각 자극, 또는 깨어 동물 1-3에서 신경 기록없이 수면 - 각성주기 4시 juxtacellular 라벨에 대한 행동 감지를 위해 채택되었다. 또한, 생체 내에서 뇌 영상 5,6- 사용된다. 지금 헤드 고정 기술은 신경 및 행동 연구에서 일반적으로 사용되는 도구이다. 기본적으로, 전통적인 헤드 고정 두개골 6-8 위에 금속 헤드 게시물의 수술 첨부 파일이 필요합니다. 첨부 후 헤드의 고정화 결과 고정 플랫폼에 고정된다. 이러한 신경 및 / 또는 광 기록, 뇌 회로의 개입과 같은 웨이크 동물에서 신경 생리 학적 연구는, 뇌 영상은 치과 아크릴을 사용하여 이식 수술을 동반한다. 따라서,그것은 실험적 필요할 때 그 실험실 헤드 고정을 구현하는 단순한 작업을 보인다. 프레임은 자신의 홈 케이지에 동물의 자연스러운 행동을 방해하지 가벼운 무게와 충분히 작은을 할 수 있도록 설계되어야한다. 고정 플랫폼에 고정 할 때 또한 기계적 강성을 제공한다. 그것은 더 실험 목적에 따라 생체 적합성을 가지고있다. 따라서, 설계 및 일반 실험실 장비 등의 헤드 게시물을 제작하는 것은 기술적으로 어렵다. 본 연구에서는, 신규 한 헤드 고정 방법은, 금속 포스트 헤드를 사용하지 않고 편리하게 클램핑 통해 기계적 강성을 제공하고, 설명한다. 방법을 사용하여, 헤드 고정은 수술 이식은 보통 뇌 연구 설치류에서 수행되는 일반적인 실험실 조건 하에서 수행 될 수있다. 금속 헤드 게시물은 IMPLAN 동안 이루어집니다 맞춤형 헤드 고정 줄​​ 및 성형 공정에 의해 부분적으로 성형 아크릴 수지 시멘트로 대체됩니다테이션 수술. 고정 바는 신경 기록 프로브, 자극 전극과 같은 다른 임플란트와 높은 공간 호환성을 제공합니다. 또한 나사 체결을 제거함으로써 고정 플랫폼 동물의 머리를 클램핑하는 단계를 단순화한다. 우리는 이전의 행동 연구에서이 방법을 사용하고 우리는이 방법이 실제 실험 9에서 구현하기 쉽고 편리 결론을 내렸다.

<table><tbody><tr><td>치과 용 아크릴 수지</td><td>Lang Dental Manufacturing</td><td>Ortho-Jet</td><td>성형 마운터</td></tr><tr><td>파라핀 필름</td>을 만드는 <td>Bemis</td><td>Parafilm</td><td>아크릴 수지가 바에 접착되는 것을 방지하기 위해</td></tr> 치<tr><td>과 접착제</td><td>Sun Medical</td><td>Super-Bond C & </td><td>B 아크릴 수지와 두개골 플렉</td></tr>스 <tr><td>글라스 또는 기타 아크릴 판</td><td></td><td></td> 사이를 접착하여 <td>고정 바 및 상자 플랫폼</td></tr><tr><td>Cyanoacrylate</td><td></td><td></td>를 만들어 <td>아크릴 판을 접착</td></tr></tbody></table>합니다.

설치류에 아크릴 수지 성형 기반 헤드 고정 기법

Acrylic Resin Molding Based Head Fixation Technique in Rodents

머리 고정은 단단한 클램핑을 위해 두개골에 머리 기둥을 부착하여 동물의 머리를 고정시키는 기술입니다. 전통적인 머리 고정은 두개골에 금속 프레임을 외과적으로 부착해야 합니다. 그런 다음 부착된 프레임은 고정된 플랫폼에 고정되어 머리가 고정됩니다. 그러나 헤드 고정을 위한 금속 프레임은 일반적인 실험실 환경에서 설계하고 구현하기가 기술적으로 어려웠습니다. 본 연구에서는 새로운 머리 고정 방법을 제시한다. 맞춤형 헤드 고정 바를 사용하여 이식 수술 중에 헤드 마운터를 구성합니다. 전극, 캐뉼라와 같은 임플란트를 두개골에 부착하기 위해 아크릴 수지를 도포한 후, 그 위에 추가 수지를 도포하여 고정 바의 포트에 맞는 금형을 구축합니다. 몰드 헤드 마운터는 가이드 레일 역할을 하며, 조사관은 헤드 마운터를 고정 막대의 포트에 삽입하여 동물의 머리를 편리하게 고정합니다. 이 방법은 치과용 아크릴을 사용한 이식 수술이 필요한 경우 쉽게 적용할 수 있으며 CNC 가공 금속 헤드 포스트를 쉽게 제작할 수 없는 실험실에 유용할 수 있습니다.

이 헤드 고정 방법은 래트 및 마우스 모두에 적용 가능하다. 총 여덟 쥐 내측 전뇌 다발로 전극을 자극 양자 간 이식을 받았다. 그들 중 4를 들어, 사용자 정의 텅스텐 와이어 전극 (마이크로 드라이브)를 추가로 M1의 앞다리 영역 (그림 2C)에 이식했다. 쥐 (N = 2), 네 개의 스테인레스 스틸 와이어 전극을 정면 / 후두 피질 영역으로 이식 하였다. 수술에서 회복 한 후 프로토콜 섹션 2에서 설명하는 바와 같이 수술하는 동안, 헤드 마운터가, 쥐 모두에서 헤드 고정을 위해 성형했다, 그들은 습관화 또는 행동 작업 중 하나에 대한 헤드 고정 매일 세션에 노출되었다. 성형 헤드 마운터이 실험의 말까지 머물렀다 (40.5 ± 1.73 (쥐에 대한 SD) 일 평균 ±과 ± 5.66 81 (수술 후 마우스를 위해 SD) 일 평균 ±). 쥐의 행동 작업하는 동안 매일 40 헤드 고정 60 분 노출; 마우스는 수의 40 분에 매일 20 노출havior 작업. <p class="jove_cont...

전통적인 머리 고정 기술은 두개골에 부착된 금속 프레임을 머리 고정 장치의 인터페이스로 사용했습니다. 이 프로토콜은 설치류의 행동 작업을 위한 프레임이 없는 아크릴 수지 성형 기반 머리 고정 기술을 보여줍니다.

Head fixation is a technique of immobilizing animal's head by attaching a head-post on the skull for rigid clamping. Traditional head fixation requires ...

본 절차의 전반적인 목표는 설치류 이식 수술을 수행하는 실험실에서 널리 구할 수 있는 치과용 아크릴을 이용한 새로운 머리 고정 기술을 제공하는 것입니다. 이 방법은 뇌 및 행동 연구 분야의 핵심적인 질문들에 대한 답을 제시할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 금속제 헤드 포스트나 플레이트를 사용하지 않는다는 점이며, 따라서 CNC 가공 헤드 포스트를 쉽게 제작할 수 없는 실험실에서도 사용할 수 있습니다.CAD 소프트웨어를 사용하여 123 x 35 x 6 mm 크기의 직사각형 고정 바를 설계하고, 중앙에 16 x 20 mm 크기의 직사각형 포트를 만드십시오. 이 포트는 뇌에 접근하는 용도로 사용되므로 필요에 따라 크기를 수정해야 합니다. 포트 테두리를 따라 가이드 레일 역할을 할 경사면이나 홈을 추가하십시오. 고정 바의 양측에는 장공 형태의 앵커 구멍을 통해 부착할 수 있는 플레이트를 준비하십시오.구멍은 6 millimeter 나사가 통과할 수 있어야 하며, 포트 앞쪽에는 잠금 후크를 끼울 수 있도록 직경 3 millimeter의 구멍을 추가하십시오. 다음으로 135 by 305 by 76 millimeter 높이의 큐브 벽면과 바닥을 설계하십시오. 더 넓은 측벽은 바를 지지하는 데 사용됩니다.이 목적을 위해 6 millimeter 크기의 구멍이 필요합니다. 아크릴로 모든 부품의 가공이 완료되면, 시아노아크릴레이트를 사용하여 상자와 바(bar)를 조립하십시오. 그런 다음 6 millimeter 나사를 사용하여 바를 상자의 지지벽에 고정하십시오.마지막으로 나사의 위치를 조정하여 부착물의 기울기가 쥐의 머리에 적절하게 맞도록 조정하십시오. 마우스의 경우 더 작은 크기의 바, 동일한 고정 플레이트 및 더 작은 상자를 사용하여 동일한 설계를 적용하십시오. 먼저 바를 준비하는 것부터 시작하십시오.먼저 포트를 파라핀 필름으로 감쌉니다. 그런 다음, 파라핀의 가장자리를 아크릴 수지로 얇게 코팅합니다. 이어서 70% ethanol을 사용하여 프레임을 철저히 세척해 소독합니다.쥐를 마취시킨 후, 발가락 꼬집기(toe-pinch)를 통해 마취 상태를 확인합니다. 필요에 따라 마취 상태를 유지하기 위해 약물 칵테일을 절반 용량으로 추가 투여합니다. 쥐를 정위 고정 장치(stereotaxic frame)에 고정한 후, 안연고를 도포하고 두개골의 털을 깎습니다.그런 다음 절개 부위에 2% lidocaine을 피하 주사합니다. 이제 정중선을 따라 두피를 절개하고 골막을 완전히 긁어냅니다. 이어 여러 번 식염수로 헹구어 두개골의 깨끗한 영역을 노출시킵니다.다음으로, 두개골 가장자리 근처에 나사용 천공(burr hole)을 만듭니다. 나사를 두개골에 수직으로 삽입합니다. 삽입된 나사에서 액체가 누출되지 않아야 합니다.임플란트 부위 주변을 헹구고 준비된 부위를 공기로 건조합니다. 다음으로, 두개골 표면의 대부분에 치과용 접착제를 얇게 도포합니다. 단, 좌표 탐색을 위해 브레그마(bregma)는 노출된 상태로 둡니다.다른 전극 또는 하이퍼드라이브(hyperdrive) 이식술을 수행합니다. 그런 다음 치과용 시멘트 층 위에 아크릴 수지를 사용하여 임플란트를 고정합니다. 이때 바(bar)를 두개골에 부착할 수 있도록 마운팅 수지에 충분한 공간을 남겨두십시오.이제 두개골에서 약 5 millimeters 위에 머리 고정바를 맞춥니다. 두개골과 바의 레진 사이에 레진을 조금 더 도포합니다. 레진이 굳은 후 이어바를 제거하고 고정바 포트에서 몰드와 마운터를 꺼냅니다.절차를 마무리하기 위해 동물에게 항생제와 진통제를 주사하십시오. 그 다음, 동물을 회복 케이지로 옮기고 복와위(sternal recumbency) 상태를 회복하면 개별 사육하십시오. 머리 고정(head-fixation) 적응 훈련을 하기 전, 최소 일주일 동안 동물이 회복하도록 하십시오.순화 첫째 날에는 짧은 시간 동안 빈번하게 동물들을 핸들링하십시오. 둘째 날에는 고정 박스를 도입하십시오. 동물들이 환경을 자유롭게 탐색하도록 하십시오.탐색 기간 동안 여러 차례에 걸쳐 1~2초간 짧게 헤드 마운터를 잡도록 합니다. 셋째 날에는 머리 고정 경험을 도입합니다. 동물을 박스에 넣고 머리를 헤드 고정 바의 포트로 향하게 합니다.그 다음 헤드 마운터를 집어 고정 바에 장착합니다. 잠금 훅과 고무줄을 사용하여 머리를 고정합니다. 그런 다음, 동물을 만지지 않은 상태로 5분 동안 그대로 두십시오. 동물을 만지면 동물이 더 심하게 발버둥 칠 수 있습니다.배설 및 배변이 예상되며, 고정 장치에 더 노출됨에 따라 점차 줄어들 것입니다. 5분 후 고무줄을 제거하고 마운팅 바를 밀어내십시오. 그 다음 동물을 홈 케이지로 돌려보내고 보상으로 시리얼이나 해바라기 씨를 제공하십시오.30분 후 이 과정을 반복합니다. 고정 첫째 날에는 동물을 총 5회 고정합니다. 4일 차에는 고정 횟수를 7회로 늘립니다.이후 고정 시간을 5분에서 10분, 20분, 30분, 그리고 최종적으로 50분까지 점진적으로 늘립니다. 어느 시점에서든 동물이 보상을 받지 않는다면, 이는 높은 스트레스의 징후이므로 고정 시간을 더 이상 늘리지 마십시오. 습관화 과정 동안 매일 동물의 체중을 측정합니다.과정 중 동물의 체중이 감소하면 해당 동물은 연구에 사용해서는 안 됩니다. 8마리의 쥐를 대상으로 한 실험에서, 양측 자극 전극을 내측 전뇌 다발(medial forebrain bundle)에 배치하였습니다. M1 전지(forelimb) 영역의 쥐들에게는 마이크로드라이브와 텅스텐 와이어 전극을 장착시켰습니다.적응 기간을 거친 후, 쥐들은 머리 고정 상태에서 40분에서 60분 동안 행동 과제를 수행하였습니다. 성형된 헤드마운터는 실험 전 기간인 40일 동안 동물에게 계속 부착되어 있었습니다. 본 실험에서 동물들은 자극 보상을 받기 위해 레버를 당기도록 훈련받았습니다.4개의 전극을 이식한 마우스 실험에서 헤드 마운터가 80일 동안 부착 상태를 유지했습니다. 마우스들은 80일 동안 매일 20분에서 40분간 머리 고정 상태를 유지했습니다. 이 영상을 시청하고 나면 헤드 고정 바를 설계하는 방법과 고정된 동물을 관리하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.숙달되면 아크릴 헤드 마운터를 장착하는 작업을 몇 분 내에 완료할 수 있습니다. 이후에는 나사나 클램프가 필요하지 않으므로 머리 고정이 빠르고 간편합니다. 치과용 아크릴 레진을 사용할 때 피부 자극이 발생할 수 있음을 유의하시기 바랍니다.본 절차를 수행하는 동안에는 항상 마스크와 장갑을 착용하고 환기가 잘 되는 곳에서 작업하는 등 주의 사항을 준수해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

우리는 mm에 걸쳐하고 뇌의 염증없이 몇 달 동안 안정 마우스 두개골에 이미지 창을 형성하는 방법을 제시한다. 이 방법은 잘 두 광자 현미경을 사용하여 혈류, 세포 역학 및 세포 / 혈관 구조의 종방향 연구에 가장 적합합니다.

마우스 뇌의 장기 이미징을위한 세련된와 철근 Thinned-해골 창

이 비디오는 쥐 모델의 헤드포스트 이식 수술을 보여줍니다. 헤드포스트는 머리를 고정하여 실험 중에 마우스를 구속하는 데 사용될 뿐만 아니라 자유롭게 움직이는 동물에 머리 장치를 안전하게 부착하는 데에도 사용됩니다.

마우스 헤드포스트 이식: 설치류의 머리 고정 방법

출처: Lee, H. et. al., Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Vihaving Mouse(자유롭게 행동하는 마우스의 편도체에서 헤드 마운트 소형 현미경을 사용한 성공적인 생체 내 칼슘 이미징). J. Vis. Exp. (2020)이 비디오는 구배 굴절률 또는 GRIN 렌즈와 소형 현미경을 사용하여 마우스의 생체 내 칼슘 이미징을 보여줍니다. 이 설정은 마찰이 없는 이동식 케이지 시스템 내에서 머리를 고정하여 뉴런을 자극하고 칼슘 이온 유입을 유발합니다. GRIN 렌즈는 뇌의 칼슘 신호를 포착하여 신경 활동을 실시간으로 시각화할 수 있습니다.

자유롭게 움직이는 마우스의 실시간 미세내시경 칼슘 이미징

소설 고해상도<em&gt; 생체 내</em종양의 성장과 치료학에 두개 내 구조물의 동적 응답을 공부하기&gt; 이미징 기술

이 작품은 optogenetic 단일-단위 맞춤 유리 optrode를 사용 하 여 깨어 마우스에서 안정적으로 녹화를 수행 하는 방법을 소개 합니다.

깨어 있는 쥐에 유리 Optrode 신경 형식의 Optogenetics 식별

제시 프로토콜 장기 학습을 공부 하기 위한 실험에 대 한 영구적인 감각 충돌을 생성 합니다. 영구적으로 그들의 머리에 고정된 장치를 입고, 쥐 집 연습장에서 자유롭게 이동 하면서 시각과 vestibular 입력 사이 감각 불일치에 지속적으로 노출 됩니다.

자유롭게 행동 하는 쥐에 장기 감각 충돌

특정 신경 인구 또는 뇌 영역의 광유전학 적 조작으로, 행동은 자유롭게 움직이는 동물에 있는 높은 시간 및 공간 해상도로 수정될 수 있습니다. 만성 이식 된 광섬유와 함께 다른 광유전학 도구를 사용하여 다양한 신경 변조 및 행동 테스트를 수행 할 수 있습니다.

자유롭게 움직이는 마우스에 있는 행동을 조절하기 위하여 신경 활동의 광유전학 조작

생체 내 미세 엔도스코픽 칼슘 이미징은 자유롭게 행동하는 동물의 신경 활동을 실시간으로 모니터링 할 수있는 귀중한 도구입니다. 그러나, 편도체에 이 기술을 적용하는 것은 어려웠습니다. 이 프로토콜은 마우스에 있는 소형화된 현미경으로 편도체 세포를 성공적으로 표적으로 하기 위한 유용한 지침을 제공하는 것을 목표로 합니다.

자유롭게 행동하는 마우스의 편도체에 있는 머리 산 소형 현미경을 가진 성공적인 생체 내 칼슘 화상 진찰

깨어 있는 머리 고정 쥐의 기능적 이미징을 위한 상세한 새로운 절차가 설명됩니다.

깨어 있는 머리 고정 쥐의 신경 영상을 위한 머리 임플란트

여기에서는 설치류의 만성 전기 생리학을 위한 가볍고 비용 효율적인 프로브 임플란트 시스템을 소개하며, 사용 편의성, 프로브 회수율, 실험적 다양성 및 행동과의 호환성에 최적화되어 있습니다.

DREAM Implant: 머리가 고정되고 자유롭게 행동하는 마우스의 만성 전기생리학을 위한 가볍고 비용 효율적인 모듈식 임플란트 시스템

이 기사에서는 마우스에서 일반적으로 사용되는 선형 추적 가상 현실(VR) 패러다임에 대한 실험 절차를 설명하고 Y자형 신호 식별 작업을 테스트하여 복잡한 VR 작업을 실행할 수 있는 타당성을 결정합니다.

마우스의 머리 고정 가상 현실을 위한 행동 훈련 절차

학습하세요 설치류 행동 연구를 위한 아크릴 수지 기반 헤드 고정 기법. 금속 프레임 없이 뇌 접근이 가능하며 다양한 실험실에서 활용할 수 있는 혁신적인 방법론입니다.

설치류에 아크릴 수지 성형 기반 헤드 고정 기법

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