선동 우울 증상, 행동 변화 및 ​​설치류에 부정적인 건강 성과에 대한 예측할 수없는 만성 가벼운 스트레스 프로토콜

다음 실험의 전반적인 목표는 설치류 균주를 무작위로 결정되는 일련의 만성적이고 예측할 수 없는 스트레스 요인에 노출시켜 동물이 우울 증상의 심각성이 증가함에 따라 효과적으로 보상할 수 없도록 하는 것입니다. 이것은 스트레스를 주지만 동물에게 해를 끼치거나 해를 끼치지 않도록 고안된 가능한 자극 목록 중 하나에 매일 노출됨으로써 달성됩니다. 동물들은 8주 동안 일주일에 5-6일 동안 일정한 간격으로 스트레스 요인에 노출되며, 코드 상태와 자당 스프레이 테스트와 같은 자극을 가하기 위한 동물의 반응을 평가하여 동물의 우울 증상 발병을 모니터링한다.

그 결과, 만성적이고 무작위적이고 해결할 수 없는 스트레스 요인이 동물의 환경에 가해지는 것은 동물의 적응 능력을 방해하고 몇 주에 걸쳐 우울 증상을 유발한다는 것을 보여줍니다. 이 방법은 만성 우울 증상이 어떻게 다른 조직이나 장기 시스템에서 부정적인 건강 결과로 이어질 수 있는지와 같은 만성 질환 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 우리는 임상 인구 집단에서 진행성 심혈관 질환과 질병 위험 사이의 깊은 동반 질환 관계와 심각한 우울 질환이 동시에 제시된다는 사실을 알게 되었을 때 이 방법을 활용하기 위한 아이디어를 처음 떠올렸습니다.

이 절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 Mr.Steven Brooks와 Ms.Kayla Brannon 박사 과정 학생들입니다. 별도의 케이지에서 가벼운 스트레스 하우스 마우스를 생산하고 각 스트레스 요인에 대해 최소 3-4시간 동안 하루에 하나 또는 두 개의 스트레스 요인에 쥐를 노출시키기 위해 다음 스트레스 요인 목록을 축축한 침구 스트레스 요인에 대해 무작위 일정으로 수행해야 합니다. 표준 케이지에 10-20온스의 깨끗한 물을 부어 침구를 적십니다.

3-4시간 동안 젖은 케이지에 마우스를 보관하십시오. 3-4시간 동안 케이지에서 침구를 제거한 후 마우스를 빈 케이지가 필요한 다른 스트레스 요인으로 전환하거나 새 침구가 있는 깨끗한 케이지에 넣습니다. 쥐가 케이지 안을 돌아다닐 때 제자리에 남아 있는 튼튼한 물체를 사용하여 3-4시간 동안 침구가 없는 케이지를 약 45도로 기울입니다.이 스트레스 요인에 대해 일반적인 12시간 조명, 12시간 다크 주기를 30분 간격으로 연속적으로 변경하여 총 8시간 동안 지속합니다.

마우스를 홈 케이지에서 3시간의 스트레스 요인 기간 동안 제거된 이웃 마우스의 케이지로 옮깁니다. 케이지에서 침구를 제거하고 마우스의 경우 약 0.25인치 깊이까지 물을 추가하고 마우스를 약 4시간 동안 그대로 두십시오. 간단히 말해서, 물 노출이 끝나면 부드러운 수건으로 마우스를 말리십시오.

자연 포식자 종의 무작위로 분포된 다발 또는 10-20밀리리터의 소변을 케이지에 추가하여 쥐를 포식자, 냄새 또는 소리에 노출시키고 3-4시간 동안 그대로 두십시오. 또는 매일 스트레스 기간이 끝날 때마다 3시간 동안 자연 포식자 종인 ENC가 케이지에 근접하여 으르렁거리는 소리나 포식자 소리를 재생합니다. 쥐를 깨끗한 우리에 넣고 매일 사육 시설로 돌려 보냅니다.

일주일에 한 번 수의학적 치료가 필요할 수 있는 상처나 염증이 있는지 각 동물을 검사하고, 코드 그루밍을 평가하기 위해 훈련을 받은 두 명의 조사관을 고용합니다. 각 동물을 검사하고 0에서 1까지의 척도로 주간 코드 점수를 할당합니다. 8개의 신체 부위 각각에 0은 깨끗함을 의미하거나 1은 더러움을 의미하는 개별 점수를 할당하여 각 개인 점수를 추가합니다.

머리, 목, 등쪽 털, 복부 털, 꼬리, 네 다리, 뒷다리 및 생식기 부위. 화장솜이나 수건을 깐 깨끗한 우리에 동물을 넣어 털에 침구가 달라붙지 않도록 합니다. 그런 다음 각 동물의 머리와 등털에 10% 자당 용액을 뿌리고 5분 동안 전체 그루밍 행동을 기록합니다.

이 기간 동안 얼굴 그루밍 활동의 대기 시간과 빈도를 측정합니다. 잠복기는 첫 번째 스프레이와 얼굴 그루밍 시작 사이의 시간이며, 빈도는 얼굴 그루밍을 한 횟수로 측정해야 합니다. 8주 동안 예측할 수 없는 만성 경미한 스트레스를 받은 후, 만성 스트레스를 받은 설치류는 스트레스를 받지 않은 대조군에 비해 행동 및 생리학적 결과 모두에 상당한 변화가 있었습니다.

생쥐는 예측할 수 없는 만성 가벼운 스트레스 후 우울증과 유사한 증상이 발생했으며 털 손질 점수가 점진적으로 감소하는 것으로 나타났습니다. 이러한 털의 신체적 상태의 현저한 저하감은 그루밍 활동이 감소했음을 시사하며 동기 부여의 부족과 병행할 수 있습니다. 최근의 증거는 수컷 마우스와 암컷 마우스 사이에 예측할 수 없는 만성 경미한 스트레스에 대한 반응에 상당한 양적 차이가 있음을 시사합니다.

구체적으로, 데이터는 연령이 일치하는 수컷과 동일한 스트레스 프로토콜에 노출 된 암컷 쥐가 수컷보다 프로토콜에 대해 더 심각한 행동 반응을 보인다는 것을 시사합니다. 이 절차에 따라 만성 우울 증상의 존재가 관심 기관 시스템의 정상적인 기능에 어떤 영향을 미칠 수 있는지와 같은 추가 질문에 답하기 위해 장기 특정 기능에 적합한 다른 방법을 쉽게 수행할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 설치류 모델에서 우울 증상이 증가하는 조건을 점진적으로 만들기 위해 UCMS 프로토콜의 다양한 단계와 절차를 활용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.