Name: 폐 종양 세포 모집 분석 결과 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: 학습하세요 폐 종양 세포 모집 정량화 방법을 통해 동물 모델에서 전이 메커니즘을 연구하세요. 이 기술은 GFP 발현 Lewis 폐암 세포를 사용하여 원격 기관 내 종양 세포 축적을 정확히 측정하고 흐름 세포 분석으로 정량화합니다.

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마우스를 사용 하 여 수행 하는 모든 절차는 동물 연구 위원회의 도쿄 여자의과 대학에 의해 승인 되었다.
1. 루이스 폐 암 (LLC) 세포의 꼬리 정 맥 주사
<ol><li>습도 5%에서 10 %fcs 보충 DMEM LLC 셀 유지 37 ° c.에 CO2 배양 기 세포 형광 단백질 식 시스템 (예를 들어, GFP)를 포함 해야 합니다.</li>
	<li>비 효소 세포 분리 시 약을 사용 하 여 문화 접시에서 셀을 제거 합니다. 제조 업체의 프로토콜을 따릅니다.</li>
	<li>3 분 셀 5 mL의 PBS에 pipetting, 여 Resuspend 그리고 원심 관 (400 x g, 3 분) 15 mL 튜브, 400 x g에서 원심 분리기는 세포를 수집 합니다. 그런 다음에 상쾌한을 제거 합니다.<ol>
<li>이 세척 단계를 한 번 더 반복 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>두 번째 세척 후 셀 스 트레이너 (40 µ m 기 공 크기), 세포를 통과 하 고 1 x 106 셀/mL의 최종 셀 밀도 제공 하는 PBS에 resuspend.</li>
	<li>꼬리 정 맥을 통해 각 C57BL/6 마우스 (8-10 주 오래 된 남성)에 세포 현 탁 액 (1 x 105 셀, 29 G 바늘)의 0.1 mL를 주사.</li>
</ol>2. 폐와 형광 Stereomicroscope 아래 셀 계산의 격리
<ol><li>CO2 흡입 하 여 쥐를 안락사.</li>
	<li>가 위는 가슴의 복 부 표면에 피부를 제거 합니다. 그런 다음 갈비뼈와 흉 강 폭로 막 잘라. 날개 달린된 주입 25g 바늘 및 튜브와 우 심 실을 통해 PBS (100 cmH2O, 총 15 mL)를 플러시.</li>
	<li>마음과 thymus를 잘라. 집게, 함께 기도 올려, 기관지 주위 결합 조직이 위 해 부. 폐 밖으로 dissect 하 고 PBS에 그들을 씻어.</li>
	<li>각 엽을 분리 하 고 형광 stereomicroscope에서 그것을 관찰.</li>
</ol>3. 폐 소화
<ol><li>콜라, dispase의 10 밀리 그램 및 혈 청 무료 DMEM의 10 ml에서 DNase의 10 µ g의 10 mg을 디졸브. 효소 소화 솔루션을 준비 하는 0.22 μ m 주사기 필터를 통해 필터링.</li>
	<li>가 위 고립 된 꼬리 엽 주사위. 플런저에 의해 다음 10 mL 주사기에 폐 조각을 놓으십시오.</li>
	<li>플런저에 다시 당겨 주사기로 소화 솔루션 (5 mL)을 발음. 폐는 솔루션에 싱크 될 때까지 플런저를 아래로 작동 합니다. 그런 다음 50 mL 튜브에 폐와 소화 버퍼를 놓습니다.</li>
	<li>상호 통 (150 rpm)에 37 ° C에서 15 분 동안 튜브를 흔들어. 폐 너덜이 외피 동안에 될 수 있습니다.</li>
	<li>폐 세포는 완전히 분산 될 때까지 아래로 플라스틱. 상호 통 (150 rpm)에 37 ° C에서 추가 30 분에 대 한 튜브를 흔들어.</li>
	<li>40 µ m 셀 스 트레이너를 통해 폐 세포를 전달 합니다. 3 분에 대 한 400 x g에서 셀 아래로 회전 합니다.</li>
</ol>4. Cytometry 폐 세포의
<ol><li>PBS-1 %BSA 준비 하는 0.22 μ m 주사기 필터를 통해 PBS와 필터의 10 mL에 BSA의 100 밀리 그램을 디졸브.</li>
	<li>제거 단계는 피 펫을 사용 하 여 3.6에서 얻은 샘플의 상쾌한 하 고 붉은 혈액 세포 세포의 용 해 솔루션의 2 개 mL를 추가. 다음, 회전에 3 분에 대 한 400 x g 세포 감소는 상쾌한을 삭제 합니다.</li>
	<li>PBS-1 %BSA 5 mL에 셀 pipetting, 여 resuspend 그리고 원심 관 (400 x g, 3 분). 폐기는 상쾌한.<ol>
<li>이 세척 단계를 한 번 더 반복 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>1 ml PBS-1 %BSA 세포를 중단 하 고 새로운 40 µ m 셀 여과기를 통과.</li>
	<li>교류 cytometer (를 사용 하 여 필터를 설치 FL1 GFP llc) 종양 세포를 가진 세포를 분석 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Valastyan, S., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+molecular+insights+and+evolving+paradigms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: molecular insights and evolving paradigms.</a> Cell. 147 (2), 275-292 (2011).</li>
<li>Kaplan, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFR1-positive+haematopoietic+bone+marrow+progenitors+initiate+the+pre-metastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche.</a> Nature. 438 (7069), 820-827 (2005).</li>
<li>Hiratsuka, S., Watanabe, A., Aburatani, H., Maru, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-mediated+upregulation+of+chemoattractants+and+recruitment+of+myeloid+cells+predetermines+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tumour-mediated upregulation of chemoattractants and recruitment of myeloid cells predetermines lung metastasis.</a> Nature Cell Biology. 8 (12), 1369-1375 (2006).</li>
<li>Hiratsuka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+S100A8-serum+amyloid+A3-TLR4+paracrine+cascade+establishes+a+pre-metastatic+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The S100A8-serum amyloid A3-TLR4 paracrine cascade establishes a pre-metastatic phase.</a> Nature Cell Biology. 10 (11), 1349-1355 (2008).</li>
<li>Tomita, T., Sakurai, Y., Ishibashi, S., Maru, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imbalance+of+Clara+cell-mediated+homeostatic+inflammation+is+involved+in+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Imbalance of Clara cell-mediated homeostatic inflammation is involved in lung metastasis.</a> Oncogene. 30 (31), 3429-3439 (2011).</li>
<li>Deguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+amyloid+A3+binds+MD-2+to+activate+p38+and+NF-%CE%BAB+pathways+in+a+MyD88-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Serum amyloid A3 binds MD-2 to activate p38 and NF-κB pathways in a MyD88-dependent manner.</a> Journal of Immunology. 191 (4), 1856-1864 (2013).</li>
<li>Erler, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-induced+lysyl+oxidase+is+a+critical+mediator+of+bone+marrow+cell+recruitment+to+form+the+premetastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-induced lysyl oxidase is a critical mediator of bone marrow cell recruitment to form the premetastatic niche.</a> Cancer Cell. 15, 35-44 (2009).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+destabilization+in+the+premetastatic+phase+facilitates+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular destabilization in the premetastatic phase facilitates lung metastasis.</a> Cancer Research. 69 (19), 7292-7237 (2009).</li>
<li>Sceneay, J., Smyth, M. J., Möller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pre-metastatic+niche%3A+finding+common+ground%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Reviews%22%5BJournal%5D)">The pre-metastatic niche: finding common ground.</a> Cancer Metastasis Reviews. 32 (3-4), 449-464 (2013).</li>
<li>Castle, J., Shaker, H., Morris, K., Tugwood, J. D., Kirwan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+significance+of+circulating+tumor+cells+in+breast+cancer%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Breast%22%5BJournal%5D)">The significance of circulating tumor cells in breast cancer: A review.</a> The Breast. 23, 552-560 (2014).</li>
<li>Wolf, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+CCR2+signaling+induced+by+colon+carcinoma+cells+enables+extravasation+via+the+JAK2-Stat5+and+p38MAPK+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Endothelial CCR2 signaling induced by colon carcinoma cells enables extravasation via the JAK2-Stat5 and p38MAPK pathway.</a> Cancer Cell. 22 (1), 91-105 (2012).</li>
<li>Hiratsuka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+tumours+modulate+innate+immune+signalling+to+create+pre-metastatic+vascular+hyperpermeability+foci%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Primary tumours modulate innate immune signalling to create pre-metastatic vascular hyperpermeability foci.</a> Nature Communications. 4, 1853(2013).</li>
<li>Deguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eritoran+inhibits+S100A8-mediated+TLR4%2FMD-2+activation+and+tumor+growth+by+changing+the+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Eritoran inhibits S100A8-mediated TLR4/MD-2 activation and tumor growth by changing the immune microenvironment.</a> Oncogene. 35 (19), 1445-1456 (2016).</li>
<li>Ieguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAM12-cleaved+ephrin-A1+contributes+to+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">ADAM12-cleaved ephrin-A1 contributes to lung metastasis.</a> Oncogene. 33 (17), 2179-2190 (2014).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

항 체, 약물, 높은 지방 다이어트 또는 종양 세포 주입 전에 종양 조절 중간 마우스의 전처리 가능 하다. 이 분석 결과 가장 어려운 단계가입니다 꼬리 정 맥 주입. 불완전 주입 결정적 데이터에서 발생합니다. C57BL/6에서 꼬리 정 맥은 실패 한 주사에 따른 식별, 특히 어렵습니다. 생리대 (37 ° C)에 쥐를 배치 도움이 되도록 주입 쉽게 꼬리 정 맥 팽창.
이 분석 결과 환자의 혈액에서 관찰 된 것 보다 훨씬 더 큰 큰 숫자 (1 x 104 -1 x 105) 종양 세포를 사용 합니다. 셀 등 다 수의 1 회 주사를 호스트 동물에서 원치 않는 응답에 대 한 가져올 수 있습니다. 형광 스테레오 현미경 검사 법, 종양 세포 깊은 안쪽에서 조직을 탐지 하기 어려운 있습니다. 교류 cytometry 분석, 폐는 폐에 있는 종양 세포를 완전히 소화 된다. 이 프로세스는 종양 세포 위치 (내부 또는 혈관 외부)에 대 한 귀중 한 정보를 발생합니...

종양 전이 암 관련 질병에 높은 사망률을 차지 한다. 분자 수준에서 조사 관점에서 전이 여러 단계로 분할 될 수 있다: 기본 종양 사이트, 기본 종양 성장 및 주변 조직, intravasation, 혈관을 통해 순환으로 침공에 종양 개시 먼 장기에 종양이 다시 성장을 넘쳐 흐름. 각 단계는 분자/신호1의 다른 세트를 포함 한다.
종양 세포는 또한로 알려져 미리 전이성 단계2,3,,45, 혈액에서 회람 시작 전에 먼 장기에 발생 하는 이벤트와 우려는 최신 연구 6. 우리의 마우스 모델 연구 밝혔다 미리 전이성 단계 폐에 지속적인 저수준 염증 반응을 만들어 폐 전이 촉진 한다. 미리 전이성 단계 themicrovasculature의 hyperpermeability, 파생 하는 골 수 세포 (BMDC)의 신규 모집 그리고 S100A8 및 SAA33,4 를 포함 하 여 cytokine/chemokine 같은 분자의 upregulation 특징 이다 . 그것은 그 lysyl 산화 효소 BMDCs7을 폐에서 세포 외 매트릭스 수정 보고 되었습니다. 또 다른 보고서는 미리 전이성 단계8에서 Angpt2, MMP3, 및 MMP10의 중요성을 밝혔다. 즉, 1 차 종양, 골 수, 및 원격 기관 간의 복잡 한 상호 작용 해야 이해 하 고 제대로 (예를 들어, 사용 하 여 이러한 상호 작용에 관련 된 단백질을 대상으로 마약) 변조 미래 전이9 방지 하기 위해 . 미리 전이성 단계 규제를 그것은 해야 먼저 시각화 되며 진단 또는 치료 개입에 대 한 평가. 여기, 우리는 폐 종양 세포 모집 분석 결과 폐에 미리 전이성 위상의 연구를 가능 하 게 보고 합니다.
마우스의 혈관에 직접 주입 하는 종양 세포는 배양된 세포 사이 차이가 있을 수 있지만 암 환자에서 종양 세포를 순환 하 고 순환 종양 세포에 비슷합니다. 순환 종양 세포 스스로 받 다 몇 가지 특성 변경을 기본 종양에서 순환 들어가면. 그럼에도 불구 하 고, 배양된 세포 형성할 수 있다 종양 immunodeficient 쥐에서 꼬리 정 맥에 주사 하는 경우. 또한, 마우스 모델 시스템에서 종양 세포를 분류 하는 형광 사용할 수 있습니다 본문에이 셀의 추적을 허용 하는. 순환 종양 세포의 행동은 암 환자10에 궁극적인 결과 결정할 때 중요 합니다. 혈액 종양 세포2의 생존에 대 한 좋은 곳이 아니다. 그들은 숙주 면역 체계에 의해 공격에서 탈출 필요 실제 지원의 부족 때문에 apoptosis를 방지 하기 위해 안티-apoptotic 신호를 해야 합니다. 종양 세포에서 전이성 종양 개시의 높은 능력을 가진 더 많은 종양 작은 혹을 생성합니다. 종양 세포가 특정 기관 차 있는 굴곡 운동, 보여주면 그 특정 장기에 전이 관찰 해야. 이 분석 결과에서 전이성 캐스케이드 (기본 종양의 성장 및 내 습)의 초기 단계는 포함 하 고 그래서 초점은 순환 종양 세포 및 stromal 세포 (내 피 세포, 상피 세포와 혈액 세포) 사이 상호 작용에. 기존의 종양 세포 주입 분석 실험에서 연구팀은 종양 혹 전이 검출 하는 확실 한 크기에 성장 될 때까지 기다려야 했습니다. 이 경우에 혈관에 종양 세포의 정확한 수는 측정할 수 없는. 또한,이 과정에는 종양 세포에 있는 다른 요소는 결과 영향을 미칠 지 수를 나타내는 종양 자라나 단계를 포함 됩니다.
계산 간단한 과정은 종양 세포에서 형광 stereomicroscope 표시. stereomicroscope 전체 폐 스캔 수 있도록 넓은 시야를 제공 합니다. Cytometry 즉시 조직에서 종양 세포의 정확한 수를 제공 하는 유용한 도구 이기도 합니다. Confocal 현미경 조직에 형광 셀 계산도 가능 하 고 전이성 종양 세포의 가장 정확한 사진을 표시 하지만 시간이 많이 걸리는 이며 선택된 영역을 계산 하는 경우에 치우치는 결과 줄 수 있습니다. 이 분석 결과의 궁극적인 목표는 종양 세포는 폐에 축적 하는 방법을 쉽게 관찰 하는. 보고 이전3,4, 미리 전이성 단계 기본 종양에서 염증 신호 때문에 폐가 하는 경우, 주입 된 종양 세포 폐 전이의 더 높은 기회를 암시 하는 따라서 폐에 축적 하는 경향이 있다. 다른 조건 (류 마티스 관절염, 천식, 등), 및 (안티-TNFα) 같은 항 염증 제 대리인 그들의 치료는 폐 전이 감소 수 있습니다. 따라서, 우리는이 분석 결과 폐 전이의 가능성을 평가 하는 강력한 도구입니다 결론.

<table><tbody><tr><td>콜라겐 분해 효소</td><td>Sigma</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Gibco</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Sigma</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>칼슘 없음, 마그네슘</td></tr><tr><td>없음 Deoxyribonuclease I</td><td>Sigma</td><td>DN-25</td><td>미량</td></tr><tr><td>RBC 용해 완충액</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>셀 여과기</td><td>BD</td><td>352340</td><td>40 마이크로미터 메시</td></tr><tr><td>형광 라벨링 키트</td><td>Sigma</td><td>MIN26-KIT</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu; m 주사기 필터</td><td>sartorius</td><td>17597K</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. 화합물</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>4% 파라포름알데히드 인산염 완충액</td><td>Wako</td><td>163-20145</td><td></td></tr></tbody></table>

폐 종양 세포 모집 분석 결과

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

종양 전이 경 세 하는 분자 메커니즘을 조사, 다양 한 분석 실험 모델 동물로 마우스를 사용 하 여 제안 되었습니다. 여기, 종양 세포 넘쳐 흐름 또는 micrometastasis를 평가 하기 위해 간단한 분석 결과 보여 줍니다. 이 분석 결과에서 종양 세포 꼬리 정 맥을 통해 주입 했다 고 짧은 기간 후 폐 해 부 되었고 누적된 레이블이 지정 된 종양 세포를 소화. 이 분석 결과 혈관으로 기본 종양의 초기 단계를 건너뛰고 먼 기관 종양 전이 발생 하는 위치에 있는 이벤트의 연구를 촉진 한다. 제한 된 수의 전이 관찰 하는 혈관에 주입 하는 셀의 수를 최적화할 수 있습니다. 그것은 알려졌다 stromal 셀 먼 장기에 전이에 기여. 따라서,이 분석 결과 잠재적인 치료 약물 이나 종양 전이의 방지를 위한 장치를 탐구 하는 유용한 도구 일 수 있었다.

폐 주사 (그림 1A) 후 많은 GFP LLC 셀 2 시간을 제공합니다. 그것은 또한 빨간 필터에 검출 형광 명소 셀 번호 개수에서 제외 되어야 주목 한다. LLC는 세포의 대부분 주사 (그림 1C) 후 폐 24 h에서에서 사라집니다.
폐에 GFP LLC의 번호를 확인 하는 돌출부의 흐름 cytometric 분석 (그림 2)에 대 한 사용할 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/53172/53172fig1.jpg"><...

이 원고 종양 전이의 동물 모델에서 폐에 종양 세포 축적을 계량 하는 방법을 설명 합니다.

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

이 방법은 전이의 분자 기계장치에 관하여 종양 생물학 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 원격 기관 내의 종양 세포의 모집이 수량일 수 있다는 것입니다. 표준 프로토콜에 따라 배양 용기에서 형광 단백질 발현 루이스 폐 암종 또는 LLC세포를 제거하기 위해 비 효소 세포 해리 시약을 사용하여 시작합니다.결과 세포 용액을 원심분리 전에 15밀리리터 원원형 튜브로 옮기고, 원심분리기는 세척당 PBS의 5밀리리터에서 펠릿을 두 번 세척합니다. 두 번째 세척 후, 40 마이크로미터 모공 세포 스트레이너를 통해 세포를 필터링하고, 현탁액을 밀리리터 농도당 6세포로 10배로 희석한다. 그런 다음 29 게이지 바늘이 장착 된 1 밀리리터 주사기에 세포를로드하고 8- 10 주 된 C57-Black-6, 수컷 마우스의 꼬리 정맥에 100 마이크로 리터의 셀을 주입하십시오.적절한 실험 적 끝점에서 가위를 사용하여 각 마우스의 복부 표면에서 피부를 제거하고 갈비뼈와 횡격막을 잘라 흉부 구멍을 노출시하십시오. 25 게이지 날개 주입 바늘과 튜브를 사용하여 오른쪽 심실을 통해 PBS의 15 밀리리터를 플러시하고 심장과 흉통을 제거하십시오. 집게로 기관을 잡고, 당겨, 기관 주위의 결합 조직을 해부, 폐를 수확.그런 다음 PBS에서 폐를 세척하고 형광 현미경으로 시상에서 형광 세포의 시각화를 위해 하나의 엽을 분리합니다. 폐 조직을 소화하기 위해, 먼저 가위로 caudal 엽을 주사위, 10 밀리리터 주사기에 폐 조각을 배치. 플런저로 주사기를 닫고 소화용액 5밀리리터를 주사기에 흡인시키고, 플런저를 주사기 샤프트 안팎으로 이동하여 폐 조직이 용액 전체에 보급될 때까지 주사기 샤프트 안팎으로 이동합니다.폐 슬러리를 50 밀리리터 튜브에 분배하고, 섭씨 37도와 150rpm에서 15분 동안 상호 셰이커에 티슈를 소화합니다. 인큐베이션의 끝에서, 폐 세포가 완전히 분산 될 때까지 나머지 조직을 삼각하고, 추가 30 분 동안 셰이커에 튜브를 반환합니다. 그런 다음 40 마이크로미터 모공 스트레이너를 통해 세포를 필터링하고 원심 분리에 의해 세포를 수집합니다.혈중 세포측정에 의해 고립된 폐 세포를 분석하기 위해, 실온에서 1분 동안 적혈구 용해 완충제 의 2밀리리터에서 펠릿을 재보중단하고 원심분리에 의해 세포를 수집한다. 그런 다음 신선한 PBS의 5 밀리리터에서 펠릿을 두 번 원심 분리하여 세척당 1 %소 세럼 알부민으로 보충합니다. 두 번째 원심 분리 후, 신선한 PBS 플러스 BSA의 1 밀리리터에서 펠릿을 재연하고, 혈동 세포에 의해 종양 세포의 정량화를 위한 새로운 40 마이크로미터 모공 스트레이너를 통해 세포를 필터링한다.폐는 주입 후에 2 시간 많은 GFP-LLC 세포를 제출합니다, 세포의 대다수는 24 시간 안에 폐에서 사라지고 있습니다. 빨간색 필터 내에서 감지되는 형광 반점은 셀 수에서 제외되어야 합니다. 폐내GFP-LLC의 수를 확인하기 위해, 로브 중 하나는 입증된 바와 같이 유동 세포 측정 분석에 사용될 수 있다.이 절차를 시도하는 동안, 냉동 단면 절차는 종양 세포의 정확한 위치를 관찰하기위한 보다 정확한 방법입니다 기억하는 것이 중요합니다.

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라이브 셀 이미징 분석 실험 연구 세포종 뇌 종양 줄기 세포 이동과 내 습을

여기서, 우리는 림프절 (LN) 저온 절에 접착제 종양 세포의 정량화를 허용하는 간단하고 저렴한 방법을 설명합니다. LN 부착 종양 세포는 가벼운 현미경 검사법에 의해 용이하게 규각되고 형광 기반 방법에 의해 확인되며, LN parenchyma에 종양 세포 결합 친화도를 드러내는 접착 지수를 제공합니다.

림프절 저온 절에서 종양 세포 접착의 정량화

제시된 접근은 3D 스페로이드 ascy 및 T 세포 세포 독성에 있는 암 세포 침략을 동시에 평가합니다. 스페로이드는 비계가 없는 아가로즈 멀티 마이크로웰 캐스트에서 생성됩니다. I형 콜라겐 매트릭스에 공동 배양 및 포함은 암세포 침입 및 T세포 중재 세포 독성을 모니터링할 수 있는 동일한 장치 내에서 수행된다.

3D 배양에서 암 세포 침략 및 T 세포 세포 독성 을 감시

CtC를 배양하면 특정 마커 발현을 속이고 약물 내성과 다른 가능성 중 간을 식민지화하는 능력을 평가함으로써 암의 더 깊은 기능적 특성을 허용합니다. 전반적으로 CTC 문화는 환자 결과를 개선하기 위해 개인화 된 의학을위한 유망한 임상 도구가 될 수 있습니다.

순환 종양 세포 주: 근본적이고 번역적인 연구를 위한 혁신적인 도구

학습하세요 폐 종양 세포 모집 정량화 방법을 통해 동물 모델에서 전이 메커니즘을 연구하세요. 이 기술은 GFP 발현 Lewis 폐암 세포를 사용하여 원격 기관 내 종양 세포 축적을 정확히 측정하고 흐름 세포 분석으로 정량화합니다.

폐 종양 세포 모집 분석 결과

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