미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

이 수술 절차의 전반적인 목표는 쥐의 자궁 내, 일시적인 전신 저산소증, 허혈 및 양수 내 염증의 유도를 통해 극도의 조산과 관련된 뇌 손상의 재현 가능한 모델을 제공하는 것입니다. 이 방법은 자궁 내 과정에서 발생하는 주산기 뇌 손상의 발병에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 지시된 치료 전략의 개발을 촉진합니다. 이 기술의 주요 장점은 감염과 저산소증으로 인한 자궁 내 모욕을 모방한 전신 손상을 유발하며, 허혈은 성숙한 쥐에서 기능적 신경학적 결손을 유발

이 모델은 염증과 관련된 부상 메커니즘을 해부하는 데 특히 적합합니다. 저산소증, 허혈 및 감염성 자극은 개별적으로 또는 결합된 손상으로 테스트할 수 있으므로 절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 기술자인 Lindsey Chan이 할 것입니다. 절차를 시작하기 전에 작은 동물 이발기를 사용하여 배아 날의 하복부 부위의 모든 털을 제거합니다.

18 직사각형 패턴의 임신 한 쥐, 젖꼭지에 흠집이 나거나 면도기 발진이 생기지 않도록주의하십시오. 다음으로, 멸균 면봉을 사용하여 포비돈 요오드와 70% 에탄올을 세 번 번갈아 가며 피부를 문지릅니다. 피부가 건조하면 발가락으로 적절한 마취 깊이를 확인하고 동물을 꼬집고 드레이프합니다.

그런 다음 메스를 사용하여 동물의 복부를 3cm 정중선으로 절개한 다음 가위로 복부 근막의 피부층을 둔기로 절개합니다. 집게와 수술용 가위를 사용합니다. 복부 근막층을 들어 올리고 무혈관 선형 팔꿈치를 절개합니다.

복막강이 노출되면 절개 부위 바깥쪽에 수술용 거즈를 놓고 거즈에 멸균 식염수를 적십니다. 그런 다음 뭉툭한 집게와 복부에 대한 외부 압력을 사용하여 복막강에서 자궁 뿔을 부드럽게 제거하고 적신 거즈에 뿔을 배열합니다. 얽히거나 장에 닿지 않도록 주의하면서, 개별 양막낭 사이의 근육 조직만을 사용하여 태아를 배열한다.

그런 다음 둔기 박리를 사용하여 4개의 자궁 동맥을 노출시키고 격리합니다. 동맥이 분리되었을 때 모계 혈관이 손상되지 않도록 주의하십시오. 각 혈관에 30게이지 쥐 동맥류 클립을 놓습니다 클립을 적용하기 전에 주변의 모든 조직이 완전히 깨끗한지 확인하는 것이 중요합니다.

클립을 배치할 때 뭉툭한 집게로 고정한 다음 평행하게 배치하십시오. 맥박의 정지를 관찰하는 것은 모든 클립이 배치되었을 때 완전한 저산소증 허혈을 보장하는 데 중요합니다. 근위부 및 원위 맥박의 중단과 개별 태반을 포함한 자궁 혈관의 어두워짐을 확인합니다.

그런 다음 거즈로 전체 수술 부위를 덮고 멸균 식염수로 조직을 세척합니다. 60분 후 1시간 동안 10분마다 거즈를 제거하고 다시 밭에 관개합니다. 자궁 뿔과 혈관이 충분히 촉촉해지면 겸자를 사용하여 각 동맥류 클립을 부드럽게 제거하되 혈관에 외상을 입히지 않도록 주의하고 조직의 무결성을 유지합니다.

그런 다음 뿔과 밭에 철저히 관개하십시오. 마지막으로 한 번, 양막에서 흩어진 거즈 실을 조심스럽게 제거합니다. LPS로 태아를 치료하려면 뭉툭한 집게를 사용하여 각 양막을 안정시키고 회전시켜 각 양막의 기저부가 보이도록 합니다.

그런 다음 부착된 8mm 31 게이지 바늘에 LPS 용액이 부착된 초미세 0.3ml 인슐린 주사기 1개를 로드하고 각 태반 플레이트 바로 앞에 용액 100마이크로리터를 주입합니다. 바늘을 제거할 때 양막에 직접 압력을 가하여 체액 누출을 막습니다. 양수 주머니 바닥에 초미세 31 게이지 바늘을 삽입하는 것은 양수가 빠져나가지 않도록 적절한 LPS 전달을 위해 매우 중요합니다.

멸균 식염수를 자궁 뿔에 세 번 세척한 후 집게를 사용하여 뿔을 복강으로 되돌립니다. 그런 다음 런닝 쓰리 실크 봉합사를 사용하여 자루 안팎으로 봉합하지 않고 근막층 가장자리를 근사화한 다음 다른 러닝 3.0 실크 봉합사로 피부를 봉합합니다. 그런 다음 26 게이지 바늘을 사용하여 피하합니다.

0.125%부피바카인 1ml를 상처 가장자리에 주사합니다. 필요에 따라 쥐를 수건으로 말리고 목덜미에 부프레노르핀 1kg당 0.1mg을 주사합니다. 동물이 완전히 회복될 때까지 모니터링하면서 깨끗한 가정용 케이지에 동물을 넣습니다.

배아 18일째에 일시적인 전신 저산소증 허혈 및 LPS 투여 후, 방금 입증된 바와 같이 HET 및 에오신 염색은 태반과 뇌 모두에서 심각한 조직병리학적 이상을 나타냅니다. 실제로, 배아 19일과 21일에 검사한 태반은 십이지와 미로 전체에 걸쳐 미세 출혈과 괴사를 동반한 심하게 방출됩니다. 상당한 염증성 침윤과 증가된 혈관성도 관찰됩니다.

출생 후 2 일째에 검사 한 추가 뇌는 심실 magaly뿐만 아니라 백질 및 subplate 뉴런 손실이 가짜에 비해 일시적인 전신 저산소증, 허혈 및 LPS에 비해 현저하게 감소했다 염화칼륨 공동 수송체 2 단백질, 출생 후 15 일째에 피질에서 GABAergic 억제의 발달에 중심적인 염화물 공동 수송체, 이는 회로 성숙의 중요한 출생 후 기간 동안 관찰되는 손상된 발달 상향 조절과 일치합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 임신한 쥐에서 이 수술을 수행하는 방법과 지질다당류 용액의 양수 내 주사를 통해 자궁 내 염증과 함께 자궁 동맥 폐색을 통해 태아 일과성 저산소증 허혈을 유도하는 방법에 대해 확실히 이해하게 될 것입니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 90분 안에 완료할 수 있습니다.