Name: 공막 래빗 모델에 축 방향 근시의 예방 리보플라빈 및 자외선-A 방사선을 사용하여 교차 결합 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 56 s
Description: 학습하세요 공막 교차결합 기법을 통해 축 방향 근시를 유도하는 방법을 New Zealand 토끼 모델에서 연구합니다. 리보플라빈과 UVA 방사선을 이용한 이 수술법은 안과 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

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저자는 실험실에서 자신의 전문적이고 우수한 기술 작업 양 달리아 셀라 씨와 에미 샤론에 감사합니다.

동물 연구에서 동물들의 사용에 ARVO 해상도에 따라 처리 하였다. 연구 프로토콜은 실험 동물 연구를위한 제도적위원회 (.; 021211 승인없이 022-4598-2)에 의해 승인되었다. 수술 # 1 1. 준비 <ol><li> 무게와 케타민 염산염 100 ㎎ / ㎖ (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 하이드로 클로라이드 25 ㎎ / ㎖ (12.5 ㎎ / ㎏)의 근육 내 주사로 13 일 된 뉴질랜드 흰 토끼를 마취. 이러한 투여 량으로 인해 수술의 길이로 사용된다. 고통 반사의 부족에 의해 마취의 적절한 수준을 보장. </li><li> 멸균 면봉을 사용하여,이 건조 각막을 방지하기 위해 비 작동 눈 안연고 소량을 적용한다. 건조에서 각막을 방지하기 위해 작업 중에 생리 식염수가 운영하는 눈의 각막에 떨어 0.9 %를 적용합니다. </li><li> oxybuprocain (국소 마취 후 각각의 눈에 세 개의 축 방향 길이 측정을 수행다음 예 염산염 0.4 %), 초음파 A-스캐너를 사용하고 측정을 평균. 중앙 각막에 수직으로 프로브를 적용합니다. </li></ol> 2. 수술 # 1 - 사전 가교 단계 <ol><li> 안과 운영 현미경 수술 안과 집게와 가위를 사용하여, 수술 안과 집게와 가위로 360 ° 결막 절개를합니다. </li><li> 각진 집게 또는 근육 후크 네 개의 안구 직근 근육을 확인하고 2-0 꼰 실크 비 바늘로 봉합으로 그들을 분리를 사용하여. 주 : 실크 봉합사가 원하는 방향으로 세계를 움직이는 데 도움이됩니다. 안구는 네 개의 직근 근육 (사 사분면) 사이의 사분면으로 나누어 져 있습니다. <ol><li> 피부 마커 각 사분면에서 두 영역, 적도 공막 하나와 후방 공막 하나와 마크. 이러한 조사 영역이다. </li></ol></li><li> 0.1 % 덱스 트란없는 리보플라빈 -5- phosphat을 함유하는 5 ㎖ 주사기로 3 ㎖를 준비이자형. 26 G 눈물 정맥 또는 25 G 테이퍼 hydrodelineator에 주사기를 연결합니다. </li><li> 하향 경사 주문품 광섬유에 연결된 UV A (370 ㎚) 광원을 포함하는 조사 장치를 준비한다. 에너지 전력 및 교정의 측정에 따라 (아래 참고 참조), 57 mW의 / cm²에 장치를 설정합니다. 주 : 교정 제조업체에서 상업적으로 실시 하였다. 이 방법은 57 J / cm²의 총 UVA 광 용량을 제공합니다. (0.2 cm (2)에 57 mW의 / cm 2 2.2 J 0.2 cm 당 2 스폿의 누적로드 200 초 동안 11.4 mW의 / 0.2 cm (2)를 사용하여 11.4 mW의 / 0.2 cm 2이다) </li></ol> 3. 수술 # 1 - 가교 <ol><li> 선택한 사분면의 반대 방향으로 실크 봉합사를 당겨 안구를 움직여 처리 수 (하부 시간 사분면을 처리 할 때 예를 위로 당기고 코). 2-0 꼰 실크 비 니들 봉합사를 사용하여 안구 운동을 수행하는 전각 직근을 solates. </li><li> 조사가 시작되기 전에 조사 영역 20 초에 0.1 % 덱스 트란없는 리보플라빈 -5- 인산을 포함하는 감광제 솔루션을 적용합니다. </li><li> 200 초 조사 기간 동안 하향 경사 주문품 광섬유를 사용하는 조사 영역을 조사한다. 4mm의 반경 0.2 cm² 각 영역의 면적을 측정한다. </li><li> 200 초 조사 기간 동안 조사 영역에 20 초마다 0.1 % 덱스 트란없는 리보플라빈 -5- 인산염을 함유하는 감광제 용액을 적용한다. 주 : 조사 및이 외과 의사에 의해 동시에 리보플라빈의 낙하를 수행합니다. </li><li> 반복 네 개의 안구 사분면의 각 3.1-3.4 단계를 반복합니다. </li></ol> 4. 수술 # 1 - 포스트 크로스 연결 단계 <ol><li> 눈 주위의 털을 면도. 외과 안과 가위를 사용하여 뚜껑 마진을 손질하고 부드럽게 상부와 4-0 꼰 실크 아이보리 색상을 사용하여 아래 눈꺼풀 봉합 - 3/8 원 재절 커팅 - 13mm 길이 C-3 바늘 (안검 봉합). 절차 (클로람페니콜 5 %)의 단부에 뚜껑 가장자리에 안연고 소량을 적용한다. </li></ol> 5. 수술 # 1 - 포스트 수술 케어 <ol><li> 복구하는 동안 가열 램프 아래에있는 동물을 유지합니다. 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. </li><li> 완전히 복구 될 때까지 새로운 침대와 깨끗한 새장에 동물을 배치합니다. 복구 후, 동물은 동물의 방으로 돌아갑니다. 경우에만 깨어 자신의 어머니에게 동물을 돌려줍니다. </li><li> 처음 48 시간 동안 일반 조건 및 질병이나 감염의 징후에 관한 동물을 검사합니다. 토끼의 행동에 변화가 관찰되는 경우 필요에 따라 섹션 1. 관리]의 진통에 따라 진통제를 관리 할 수​​ 있습니다. (설피 린은 50 ㎎ / kg마다 6 시간 방울). </li></ol> 6. 수술 # 2 <ol><li> 오십 오일의 후urgery # 1, 무게와 케타민 히드로 클로라이드 100 ㎎ / ㎖ (100 ㎎ / ㎏)와 자일 라진 하이드로 클로라이드 25 ㎎ / ㎖ (12.5 밀리그램 / kg)을 근육 주사하여 마취 된 토끼. </li><li> 안과 운영 현미경 수술 안과 가위를 사용하여 안검 봉합을 제거합니다. 국소 마취 (oxybuprocaine 염산염 0.4 %), 초음파 A-스캐너를 사용한 후 각각의 눈에 세 축 방향 길이 측정을 수행하고 측정 값을 평균. 중앙 각막에 수직으로 프로브를 적용합니다. </li><li> 복강 페노바비탈 나트륨 하였다 (200 mg / 15 kg 체중)로 토끼를 안락사. </li></ol>

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저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

우리는 리보플라빈 및 UVA 조사로 가교 결합 기술을 사용하여 토끼 모델에서 축 근시 예방 생체 내 연구에서 최초로 제시한다. 다른 실험 동물 연구는 이러한 유형에 사용될 수 있지만, 우리는 주로 인해 눈의 크기와 공막 표면 상에 가교 결합을 수행 할 필요로 토끼를 선택 하였다. 우리는 토끼 공막을 노출하고 윗 눈꺼풀과 아랫 눈꺼풀을 봉합하는 까다로운 절차로 것으로 나타났습니다. 우리는 뚜껑 마진 트리밍과 눈꺼풀이 제대로 정정에 대한 필요없이 주어진 기간 동안 닫혀 ​​있는지 확인하기 위해 우리의 프로토콜에 언급 된 봉합사를 사용하는 것이 좋습니다. 고려해야 할 중요한 것은 조사 장치 및 필요한 전력 에너지 광섬유를 보정 할 필요가있다. H &amp; E 조직 학적 슬라이드는 가교 절차를 시행 눈에 망막에 독성 변화를 보이지 않았다. 또한, 조사 에너지 및 ...

근시는 굴절 장애의 가장 보편적이다. 미국과 유럽에서 근시의 유병률은 약 30 %로보고하고, 아시아 국가에서 일반 인구의 1, 2의 60 %까지 영향을줍니다. 근시 진행은 보통 2 년 간격으로 3 위에 약 -0.5 디옵터의 속도로, 근시의 최대 50 %에서 발생합니다. 근시에 의해 부과 된 건강 비용은 안경에 대한 비용, 콘택트 렌즈 및 굴절 수술과 녹내장, 백내장, 망막 박리 및 시각 장애 4 ~ 6의 증가 된 건강 위험과 관련된 비용을 포함, 상당한 수 있습니다. 근시의 동물 연구에서 시력 감소는 눈과 각막 문신 (11)에서 짧은 거리에서 눈꺼풀 봉합 7-10, occluder에의 배치에 의해 유도된다. 인공 근시는 이들 연구에서 발생하도록하지만, 폐색 처리가없는 시력 상실 실험 카 같이 매우 어린 동물에서 수행되어야성인 표본에 밖으로 폭발물 공격이 성​​공 증명했다. 심한 근시의 중요한 기능 중 하나는 Ehlers- 같이 인해 공막의 일부 대사 장애로 인해 시각적 박탈 12 후 emmetropization의 방해 피드백 메커니즘에 아마 공막의 진보적 인 숱과 공막의 병리학 적 변화 Danlos 증후군 13. 궁극적으로, 두 메커니즘으로 인해 이러한 fibrillogenesis (16)의 감소 콜라겐 섬유 직경 14, 15 및 장애와 근시 공막의 구조적 이상에 스트레칭과 공막, 망막 및 맥락막의 숱로 이어집니다. 몇몇 연구는 손상된 콜라겐 가교 근시 공막 17-18 약화 과정에서 중요한 요소가 있음을 보여 주었다. WOLLENSAK 외. 19-21 리보플라빈 및 자외선 A (UVA) 조사에 감광제를 도포하여 콜라겐 가교를 유도 (370 ㎚)체외 (19)의 돼지와 인간의 공막의 강성을 크게, 157 % 증가 및 생체 내에서 토끼 공막 강성의 465% 증가 (탄성 계수) (20)를 언급했다. 강성 4 개월 3 일 후, 320.4 %, 277.6 %로 증가, 8 개월 (영률) 후 22 5백2퍼센트 : 가교 결합은 생체 내 토끼 공막의 장기적 효과가 있었다. 근시 진행을 체포 ​​치료 시도가 23-26 발표되었다 그러나이 방법의 성공은 논쟁의 여지가있다. 진행성 근시 방지의 어떠한 효과적인 수단은 지금까지 발견되지 않았다. 근시의 원인은 아직 논란, 그 처리는 도전을 포즈. 이러한 발견에 기초하여, 그 공막 가교 근시 진행 공막 기반 치료를위한 수단으로서 역할을 할 수 있다고 가정한다. 이 연구의 목적은 공막 콜라겐 crosslinki 검사하는시각적 축 폐색에 의해 유도 축 근시의 개발에 영향을 ng를.

<table><tbody><tr><td>2-0 꼰 실크 비바늘 봉합사&nbsp;</td><td>ETHICON</td><td>W193</td><td></td></tr><tr><td>4-0 브레이디드 실크 아이보리 컬러&nbsp;</td><td>ETHICON</td><td>W816</td><td></td></tr><tr><td>0.1% 덱스트란-프리 리보플라빈-5-포스페이트 1 mg:1 ml</td><td>Concept for Pharmacy Ltd</td><td>D2-5025</td><td></td></tr><tr><td>UV A (370 nm) 광원&nbsp;</td><td>O/E LAND Inc</td><td>NCSU033B</td><td></td></tr><tr><td>맞춤형 섬유 광학 베벨 다운;</td><td>Prizmatix Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26 G 눈물샘 캐뉼라&nbsp;</td><td>비버-visitec 인터내셔널 주식회사&nbsp;</td><td></td><td></td>REF581276</tr><tr><td>25G 테이퍼드 하이드로델리네이터 [블루멘탈]&nbsp;</td><td>비버-visitec 인터내셔널 주식회사&nbsp;</td><td></td><td></td>REF585107</tr><tr><td>13일 된 토끼</td><td>할란&nbsp;</td><td>1NZWR40</td><td></td></tr><tr><td>초음파 생체 계계</td><td>Allergan-Humphrey</td><td>820-519</td><td></td></tr><tr><td>스킨 마커</td><td>Devon</td><td>4237101664X</td><td></td></tr></tbody></table>

공막 래빗 모델에 축 방향 근시의 예방 리보플라빈 및 자외선-a 방사선을 사용하여 교차 결합

Scleral Cross-linking Using Riboflavin and Ultraviolet-A Radiation for Prevention of Axial Myopia in a Rabbit Model

근시 개인, 심한 근시 특히 사람들은, 백내장, 녹내장, 망막 박리와 맥락 망막 이상 높은 정상보다 위험이 있습니다. 또한, 병적 근시는 시각 장애인 1-3의 일반적인 원인은 비가 역적이다. 본 연구는 토끼 모델에서 축 근시의 개발 리보플라빈 및 자외선 방사선을 사용하여 가교 공막의 효과를 보여준다. 안구 축 길이는 십삼일 (암수) 세 뉴질랜드 흰 토끼에 주사 초음파에 의해 측정 하였다. 눈은 안검 봉합을 다음 공막 가교와 360 ° 결막 절개를을 시행 하였다. 축 방향 신장은 자신의 오른쪽 눈의 눈꺼풀 (안검 봉합을) 봉합에 의해 십삼일 된 뉴질랜드 토끼 유도 하였다. 눈은 사분면으로 분할하고, 사분면마다 0.2 cm²의 면적 4 mm의 반경이 공막 조사 영역 각각 있었다. 가교는 0.1 %를 놓는 방법으로 수행 하였다덱스 트란없는-A 자외선 조사 전, 조사 영역이 20 초 및 200 초의 조사 시간 동안 매 20 초 상 리보플라빈 -5- 인산염. UVA 방사선 (370 나노 미터)은 57 mW의 / cm² (총 UVA 광 용량, 57 J / cm²)에서 공막에 수직으로 적용되었다. Tarsorrhaphies 반복 축 길이를 측정 한 후, 하루 55에 제거 하였다. 이 연구는 리보플라빈 자외선-A 방사선 공막 가교 효과적으로 토끼 모델에서 폐색에 의한 축 방향 신장을 방지 함을 보여줍니다.

도 1 및도 2에 그래픽으로 두 ​​군의 축 길이 측정 값을 보여준다. 왼쪽 눈은 (그림 1)에서 운영하지 않는 동안 그룹 1 토끼는 오른쪽 눈에 공막 가교 및 안검 봉합을 시행 하였다. 왼쪽 눈은 (그림 2)에서 운영하지 않는 동안 2 군 토끼는 오른쪽 눈에만 절개를하고 안검 봉합을 시행 하였다. 공막 가교 및 안검 봉합을 시행 한 1 군으로, 오른쪽 눈 축 길이를 평균 3.61 ± 0.76 mm의 평균 차이를 나중에 눈꺼풀 봉합 전 10.68 ± 0.74 mm와 14.29 ± 0.3 mm 오십오일를 측정 하였다. unsutured / 작동이되지 않는 왼쪽 눈에 해당하는 값은 4.44 ± 0.81 mm <st...

우리는 축 신장 토끼 눈에 리보플라빈과 UVA와 공막 가교의 효과를 보여줍니다. 축 방향 신장은 오른쪽 눈의 눈꺼풀 (안검 봉합을) 봉합하여 (남성과 여성) 십삼일 된 뉴질랜드 토끼 유도 하였다.

공막 래빗 모델에 축 방향 근시의 예방 리보플라빈 및 자외선-A 방사선을 사용하여 교차 결합

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal ...

본 절차의 전반적인 목표는 토끼 모델에서 축성 근시를 유도한 후, 리보플라빈과 자외선-A(UVA) 조사를 이용한 공막 가교술의 효과를 관찰하는 것입니다. 이 방법은 UVA 조사를 어떻게 특정 공막 부위에 집중시킬 수 있는지와 같이 공막 가교술 분야의 핵심적인 질문에 대한 해답을 찾는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 UVA 조사, 광섬유 및 수술을 통해 관심 있는 공막 부위에 도달할 수 있다는 점입니다.수술 절차는 Rabin Medical Center 안과 부문의 레지던트인 Orly Gal-Or가 보조할 것입니다. 절차를 시작하기 전, 통증 반사 반응이 없는지 확인하고 멸균 면봉을 사용하여 수술하지 않는 눈에 안연고를 소량 도포하십시오. 그런 다음, 각 눈에 국소 마취제를 도포하십시오.프로브를 각막 중심과 수직이 되도록 배치하고, 초음파 A-스캐너를 사용하여 안구의 안축장 측정을 세 번 수행합니다. 그다음, 안과 수술용 현미경 하에서 안과 수술용 핀셋과 가위를 사용하여 360도 결막 절개를 실시합니다. 근육 갈고리를 사용하여 4개의 외안근 직근의 위치를 확인합니다.그 후, 0번 꼬임 실크 무침 봉합사 두 개를 사용하여 근육을 분리해 4개의 분면을 만듭니다. 피부 마커를 사용하여 각 분면의 적도 공막에 조사 구역 하나를, 후방 공막에 조사 구역 하나를 지정합니다. 그런 다음, 0.1% 덱스트란-프리 리보플라빈 5-인산 광감작제 용액을 3~5mL 주사기에 충전하고 26게이지 누관 캐뉼라를 장착합니다.이제 경사지게 제작된 맞춤형 광섬유가 연결된 370 nanometer UVA 광원의 조사 장치를 켜고, 장치를 57 mW/cm²로 설정하십시오. 조사를 시작하기 20초 전에 처리할 사분면의 반대 방향으로 실 봉합사를 당겨 안구를 이동시키고, 조사 영역에 광감각제 용액을 도포하십시오. 그다음, 맞춤형 광섬유를 사용하여 선택한 영역을 200초 동안 조사하며, 20초마다 해당 영역에 광감각제 용액을 도포하십시오.네 개의 사분면을 모두 조사한 후, 가위로 눈꺼풀 가장자리를 다듬습니다. 그다음 4-0 상아색 편조 실크사를 사용하여 상하 눈꺼풀을 조심스럽게 봉합합니다. 눈꺼풀 가장자리에 안연고를 소량 도포하고, 토끼를 가열 램프 아래에 둡니다.동물이 완전히 회복되면 새 깔짚이 깔린 깨끗한 케이지에 넣습니다. 가교 결합 후 55일이 지나면, 수술용 안과 가위를 사용하여 tarsorrhaphy(안검 봉합) 상태를 제거합니다. 그 후, 방금 시연한 것과 같이 각 눈에 대해 세 번의 안축장 측정을 수행합니다.공막 가교 결합 및 안검 봉합술을 받은 동물에서는 안검 봉합 후, 수술하지 않은 눈과 비교하여 평균 안축장이 감소했습니다. 그러나 주변절개술과 안검 봉합술만 받은 동물에서는 실험군 눈의 평균 안축장이 증가했습니다. 실제로 공막 가교 결합을 받은 눈은 주변절개술만 받은 눈에 비해 전반적으로 안축장 증가 폭이 더 낮았습니다.수술을 받지 않은 눈의 평균 안축장 길이에서 군 간 차이는 통계적으로 유의미하지 않았습니다. 이 절차를 수행할 때는 필요한 모든 장비를 미리 준비하는 것이 중요합니다. 이 기술이 개발된 이후, 근시 분야의 연구자들은 리보플라빈과 UVA 조사가 망막, 맥락막 및 공막에 미치는 영향을 탐구하는 길을 열었습니다.이 영상을 시청한 후에는 관심 있는 특정 공막 영역을 시각화하고, 집중적인 UVA 방사선 치료를 적용하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 섬세한 직근이 있는 아주 작은 안구를 대상으로 수술을 수행하는 것은 매우 까다로울 수 있으며, 기술을 완벽하게 익히기까지의 학습 곡선을 감수해야 한다는 점을 잊지 마십시오. 이 기술의 응용 범위는 병적 근시 합병증의 예방까지 확장됩니다.이 방법은 축성 근시의 예방에 대한 통찰을 제공할 뿐만 아니라, 공막의 얇은 부위와 같은 다른 상태에도 적용될 수 있습니다.

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Medicine

의학

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