Name: 사회적 공간에 영향을 미치는 조건 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: 학습하세요 Drosophila melanogaster의 사회적 거리 선호도를 사회적 공간 챔버를 사용하여 정량화하는 방법을. 이 기법은 유전적 및 환경적 요인이 사회 행동에 미치는 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

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저자는 이 원고를 준비할 수 있도록 격려해 준 Tadmiri Venkatesh 박사, 건설적인 의견을 제시해 준 Dova Brenman과 Selwyn Chui, 모든 비행 간 거리와 최근접 이웃 거리에 대해 ImageJ에서 매크로를 설계한 Elyssa Burg와 Wayne Rasband에게 감사를 표합니다. 저자는 또한 건설적인 의견을 제시해 준 검토자에게도 감사를 표하고 싶습니다.
A.A.A, M.C.C. 및 AFS는 연구 설계를 담당했습니다. S.N.J., A.A.A, M.N., Z.R. 및 A.J.M.이 실험을 수행했습니다. A.A.A, M.N., A.J.M. 및 M.C.C 및 AFS가 데이터를 분석했습니다. A.R.M.과 A.F.S.가 원고를 썼다.
이 연구는 The Professional Staff Congress와 The City University of New York이 공동으로 A.F.S.에 자금을 지원하는 PSC-CUNY 연구상, Western University에서 A.F.S.에 대한 내부 자금, 연수 교사를 위한 수학, 생물학, 화학 및 지질학 전공 장학금, AAA에 대한 Louis Stokes Alliance for Minority Participation 장학금의 지원을 받았습니다.

사내 만든 1. 장비 및 시약 (다른 사람을위한 재료의 목록을 참조하십시오) <ol><li> 이전 8 설명한 바와 같이 초파리 차가운 마취 장치를 준비합니다. </li><li> 이전 13 설명 ​​된대로 플라이 흡인기를 준비합니다. </li><li> 사회적 공간 챔버와 홀더를 준비합니다. <ol><li> 주문 또는 사회적 공간 실을 만드는 데 유리 창 아크릴 스페이서를 확인합니다. 각 사회 공간 챔버는 0.3 cm의 두께로, 16.5 cm, 8.9 cm의 염기의 높이, 두 직각 삼각형 아크릴 스페이서 ((0.3 cm의 두께로, 17.6 cm하여 17.6 cm) 개의 사각형 유리창 이루어져 ) 및 2 개의 직사각형 구역 (0.3 cm의 1.5 cm 두께 의한 9cm) (도 1a). </li><li> 이도 1b에 챔버와 동일하도록 유리 및 아크릴 사회적 공간 챔버를 조립한다. 이렇게하려면하도록 유리의 한 광장 창 상단에 하나의 삼각형 스페이서 평면 배치하여 시작 직각삼각형 스페이서의 사각형 패널의 모서리 중 하나에 정렬됩니다. 다음으로, 제 1 삼각형 스페이서를 미러링, 광장 창의 상단에있는 두 번째 삼각형 스페이서 평면을 배치합니다. 참고 : 당신의 손에서 오일과 향기와 조각을 오염되지 않도록 장갑을 착용해야합니다. </li><li> 이 적용되지 않습니다 창의 측면을 따라 광장 창의 상단에 평평한 두 개의 작은 사각형 스페이서를 놓습니다. 정사각형 평면 위에 아크릴 스페이서는 이제 삼각형 경기장을 형성한다. </li><li> 이 아래 유리의 원래 창 위에 정렬되도록 아크릴 스페이서의 상단에 유리의 두 번째 사각형 창을 배치합니다. </li><li> 사회적 공간 챔버를 형성하기 위해 함께 창 및 스페이서를 확보하기 위해 네 개의 바인더 클립을 사용합니다. 유리 창 내부를 확보, 삼각형 스페이서의 각각의 긴 측면을 통해, 코너 근처에 하나의 클립을 놓습니다. 이 같은 측면에서, 그들을 확보, 직사각형 스페이서의 각을 통해, 인접한 모서리에 클립을 배치유리 창쪽으로. </li><li> 지원 스탠드와 사회적 공간 챔버는 작업 표면 위에 가장자리에 달려있다 클램프, 수직 위치에서 사회적 공간 챔버를 유지하도록 플라스크 클램프를 조립합니다. </li><li> 실험에서 각각의 반복은, 사회적 공간 챔버를 조립하고 서 지원합니다. </li></ol></li><li> 테스트 파리의 등반 능력을 확인하는 등반 분석 응답 장치를 준비합니다. <ol><li> 이전에 14,15을 설명한 바와 같이, 역류 장치를 사용합니다. </li></ol></li><li> 흰색 벤치 커버 및 흰색 배경 앞에 덮여 작업 표면에서 실험을 수행하여 균일 한 조명 조건을 확인하십시오. </li></ol> 2. 실험 전에 파리를 준비 <ol><li> 표준 초파리 들어있는 병에 파리가 음식을 비행 유지한다. 12 시간 빛 / 어둠주기에 25 ° C에서 배양 챔버에 보관하십시오. </li><li> 전자에 한 2 일 전xperiment, 수집 및 이전 8 설명한 바와 같이 섹스, 차가운 마취 파리. <ol><li> 에서 추위 마취 장치를 진정 -4 ° C ~. 장소는 50 ㎖의 플라스틱 튜브로 날아갑니다. 완전 파리가 움직이지 될 때까지 적어도 5 분 정도 기다린 절연 얼음 양동이에 얼음에 파리가 들어있는 플라스틱 튜브 잠수함. </li><li> 추위 마취 장치의 폴리에틸렌 시트에 파리를 놓습니다. 실온에서, 여성에서 남성을 분리 실체 현미경을 사용합니다. 표준 초파리를 포함하는 유리 병에, 그룹, 파리를 유지는 바이알 당 40 파리를 초과하지 않는 음식을 비행. </li></ol></li><li> 두 시간 실험 시작 전에 실험이 수행 될 실내의 온도가 24 ~ 25 ° C 사이이고 습도가 약 50 %임을 확인. </li><li> 음식을 포함하는 새로운 유리 병에 파리를 전송하고, 실험이 수행 될 작업 표면에 2 시간 동안 배치합니다. 참고 :이 experimen 들어TS, 사용 된 플라이 균주 초파리 균주했다 : 1118 와트, 고사 10 (또는 W - 광저우 - S에 10 회 outcrossed 1118 원) 광저우 - 특수 또는 광저우-S (CS), 오레곤과 사마르 칸트 파리는 우리의 실험실에서 모든했다 주식 (16); 엘우드 파리는 롱 아일랜드, 뉴욕, 미국 8, 헌팅턴의 엘우드 인근에서 2011 년 가을에 수집되었다. 달리 규정하는 경우 외에, 제시된 결과는 광저우-S는 (빨간색의 그늘에서) (으)로 운항하는 항공사로 얻었다. </li></ol> 3. 실험 수행 <ol><li> (- 빛의 발병 후 시간의 시간 - Zeitgeber 시간 ZT 4의 7) 오후 12시부터 ​​오후 3시까지 실험을 수행합니다. </li><li> 파리의 전송을위한 사회적 공간 챔버를 준비합니다. <ol><li> 당신의 몸에 가장 가까운 직사각형 스페이서를 포함하는면, 작업 표면에 사회적 공간 실 평면을 배치합니다. </li><li> O 제거네브라스카의 몸 가까운 클립은 직사각형 스페이서 사이에 약 1cm의 간격을 생성, 바깥쪽으로 한 직사각형 스페이서를 밀어 넣습니다. </li><li> 테이프 및 마커를 사용하여, 성별, 변형, 반복 번호 상단 모서리에있는 사회적 공간 챔버 레이블을 붙입니다. 내부 삼각형 경기장의 일부를 커버하지 않는 테이프를 보장하기 위해주의하십시오. </li></ol></li><li> 사회적 공간 챔버에 파리를 전송합니다. <ol><li> 전송 새, 빈 유리 병에 음식을 포함하는 자신의 병에서 파리. 대기음은 빈 유리 병에서 날아와 사회적 공간 챔버로 전송합니다. <ol><li> 흡입기의 끝으로 파리를 그려 흡입. 사회적 공간 챔버의 직사각형 스페이서 사이에 1cm 간격으로 팁을 놓고 내부 삼각형 무대로 파리를 강제로 일정한 속도로 숨을 내쉬고. </li><li> 즉시 내부 삼각형 분야의 기반을 폐쇄, 제자리에 다시 직사각형 스페이서를 밀어 다시에 바인더 클립을 배치합니다. </li></ol></lI&gt; </ol></li><li> 실험 일이 일어나는 경우는 다른 벤치에있는 두근 두근 패드에서 직사각형 스페이서가 바닥면에이되도록 직립 사회적 공간 챔버를 개최합니다. 모든 파리를 보장하기 위해 파운드 세 번 경기장의 바닥에 떨어졌다. 참고 : 파리는 바닥에 떨어진하기 위해 장치의 보안 유지를 유지하면서 작은 챔버 크기 (그림 1D)의 바깥으로 튀어 나와 아크릴 스페이서, 작업 표면에 팔꿈치를 세게 인해. </li><li> 타이머를 시작합니다. </li><li> 작업 표면에 사회적 공간 챔버를 놓고 수직을 유지하기 위해 지원 스탠드와 플라스크 클램프를 사용합니다. 내부 삼각형 경기장의 모든 부분을 커버하는 자 또는 사회적 공간 챔버에 평평하게 알려진 길이의 스티커가 아닌 놓습니다. <ol><li> 수평 위치 실험을 위해, 지지대의 사회적 공간 실을 배치하지 마십시오; 대신 작업 표면에 사회적 공간 실 평면을 배치. </li></oL&gt; </li><li> 파리이 정착되면, 일반적으로 약 30 분 후, 사회적 공간 챔버의 사진을 촬영. 프레임이 전체 내부 삼각형 경기장, 통치자, 및 레이블이 포함되어 있는지 확인합니다. </li><li> 각각의 유전자형과 조건 (이상적으로 3 내부 복제 및 3 독립적 인 반복)에 대한 실험을 반복합니다. </li></ol> 4. 사회 공간 데이터를 분석 <ol><li> ImageJ에 17에서 다음과 같은 매크로를 가져옵니다 <ol><li> ImageJ에 여기에 있습니다 : http://rsbweb.nih.gov/ij/. </li><li> 당신은 매크로 하위 폴더에, 이름을 &#39;Measure_Distances.txt&#39;ImageJ에 / 플러그인 폴더에 파일에 아래의 매크로를 저장하고, 도움말&gt; 업데이트 메뉴 명령을 사용하여 플러그인 메뉴에서 &#39;측정 거리&#39;명령을 만들 수 있습니다. &#39; </li><li> .txt를 복사 보충 데이터를 제공하고, 원래 3 년에 출판 된 매크로 파일. </li></ol></li><li> 컴퓨터에 사진을 업로드 한 pictu을 엽니 다ImageJ에를 사용하고. <ol><li> 의 스티커를 위해 (동일한 방법을 그림에 눈금자 1cm 마크에 0cm에서 선을 그려 규모를 생성하고 분석 탭에서, 그 거리를 1cm의 규모를 설정하는 설정 스케일 기능을 선택 알려진 길이). 사진에 스케일을 적용하기 전에 글로벌 옵션을 선택합니다. </li><li> 가능한 한 그림의 나머지 부분만큼을 제거하는 동안, 그것은 파리 모두 포함하도록 이미지 탭에서 자르기 기능을 사용하여 사진을 자릅니다. </li><li> 이미지 탭에서 유형 옵션에서 8 비트를 선택하여 사진이 흑백으로합니다. </li><li> 이미지 탭의 조정 옵션에 임계 값 기능으로 이동하여 사진의 모든 배경 잡음을 제거합니다. 강화 또는 각각의 플라이의 본체 명확 화상의 다른 표시없이 볼 수 있도록 대비를 제거하는 슬라이더를 끌어. 되지 파리 아르 표시가있는 경우, 직사각형 도구들을 캡처하고이를 삭제. </li><li> 설정분석 탭에서 설정 측정 도구를 사용하여 측정. 지역, 질량, 무게 중심의 센터 및 표시 라벨을 선택합니다. 다음으로, 분석 입자가 파리를 대표하는 모든 검은 반점의 번호 매기기 목록을 만들 분석 탭에서 기능을 선택합니다. <ol><li> 때 입자를 분석하여, 세트 크기 0.01-0.1 (픽셀 단위를 선택하지 마십시오) 원형 0.00-1.00; 쇼 윤곽; 결과를 표시하고 관리자로 추가 할 수 있습니다. </li><li> 각각의 검은 점 (각 입자가) 원래 사진에 번호 매기기 목록을 비교하여, 원본 사진에있는 파리의 정확한 표현이 있는지 확인합니다. 참고 : 함께 매우 가까운 일부 파리는 하나의 입자로 간주되는 경우, 수동으로 바이너리 이미지에있는 두 개의 파리를 분리하는 흰색 선을 그립니다. </li></ol></li><li> EA에서, CM에, 거리를 포함하는 새로운리스트를 생성하기 위해 플러그인 탭에서 두 번째 매크로 옵션 아래 목록 거리 매크로 -리스트를 선택한 상태에서, 가장 가까운 이웃를 사용채널 자신의 가장 가까운 이웃에 도착. </li></ol></li><li> ImageJ에에서 가장 가까운 이웃 거리를 복사하여 스프레드 시트 프로그램의 컬럼에 붙여 넣습니다. <ol><li> 같은 스프레드 시트에 각 반복에서 모든 데이터를 컴파일하고 유전자형과 조건에 의해 구성 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 통계 소프트웨어를 사용하여 데이터 분석을 수행한다. 이 실험에서, 그래프 패드 프리즘 (에서라도의 버전 6, 그래프 패드 소프트웨어, 샌디에고 캘리포니아 미국, www.graphpad.com)는 일원 분산 분석하고, 크루스 칼 - 월리스 테스트, Tukey에의 및 둔넷 (Dunnet) 사후 검사를 실시 하였다. </li><li> 거리의 분포 비 파라 메트릭 분포 한 다음, 데이터는 상자와 Tukey에 수염 (특이점을 제거하기 위해)으로 표현된다. </li></ol> 5. 등반 분석 (제어 동작) <ol><li> 능력 14,15,18 등반 테스트 파리에 대조군으로 등반 분석을 사용합니다. <ol><li> 역류 장치를 사용되도록 세 가지 시험의 C병렬로 실행. </li></ol></li><li> 반대 위치에 신선한 빈 유리 병으로 역류 장치의 맨 아래에있는 1 차, 3 차에 100 순진한 파리 세 가지 테스트 튜브에 (이전에 테스트되지 않은 파리), 그 스냅로 전송 (50)와 마지막 슬롯. </li><li> 장치의 맨 아래에있는 빈 슬롯에 신선한, 빈 유리 병을 놓습니다. </li><li> 실험을 개시하기 위해, 모든 파리는 각 튜브의 아래쪽이되도록, 상기 장치를 세 번 눌러 내려. </li><li> 15 초 동안 타이머 시작 (상단 유리 병에 도달 3-7 일 이전 광저우-S의 ~ 100 % 충분한 시간을 - 그림 3F 참조). </li><li> 하나의 슬롯에 의해 상부 튜브를 변위, 역류 장치의 상부 부분을 밀어. </li><li> 바닥 유리 병에있는 모든 파리를 가지고, 아래로 장치를 활용하여 파리를 수집합니다. <ol><li> 1 차 및 2 차 튜브 (또는 3 번째, 4 번째, 5 번째 </s&gt; 6 일)까지 상단에 도달하지 않은 파리와 상단 유리 병에 도달 파리에 각각 해당합니다. </li></ol></li><li> 성능 지수 (PI)를 계산합니다. <ol><li> 각각의 유리 병에 파리의 수를 계산합니다. </li><li> PI는 상부 튜브에 오를 수 파리의 비율입니다. </li><li> PI의 수단은 정규 분포 (1)를 수행하고, 데이터는 평균 (SEM)에 평균 플러스 또는 마이너스 표준 오차의 열 그래프로 표시됩니다. 주 : 또는, PI는 이전 파리위한 하부 바이알 (의 상부에 도달 할 수 파리의 비율로 계산 될 수는, 5 초 12 일 이전에 감염된 감염된 비 사이 능력 등반 차이를 정량화하기에 충분한 시간이다 스틸 사진에서 정량화 광저우-S : 결과를 참조). 다른 사람들은 또한 능력 19-22 등반 정량화하기 적합한 놀라게 유발 부정 geotaxis 성능의 다른 조치를 사용하고 있습니다. </li></ol></li></ol>

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<li>Fujii, S., Krishnan, P., Hardin, P. E., Amrein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nocturnal+male+sex+drive+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Nocturnal male sex drive in Drosophila.</a> Curr Biol. 17, 244-251 (2007).</li>
<li>Pellegrino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weather+forecasting+by+insects%3A+modified+sexual+behaviour+in+response+to+atmospheric+pressure+changes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Weather forecasting by insects: modified sexual behaviour in response to atmospheric pressure changes.</a> PLoS One. 8, e75004(2013).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

이 프로토콜에서, 사회적 공간의 정량화에 대한 자세한 절차는 설명했다. 실험을 보장하기 위해 몇 가지 중요한 단계는 성공 : 1) 청소 및 2) 파리 전에 적어도 일일를 수집하고 확인 장치의 내부 챔버 떨어져 자신의 오일과 향을 유지하기 위해, 장치를 설정할 때 항상 장갑을 사용 실험이 차가운 마취 미치는 영향을 줄이기 위해, 3) 실험 전에 2 시간이 파리 굶어되지 않고, 자신을 청소 한 보장하기 위해 신선한 음식을 포함하는 새로운 튜브를 제공, 4)이 2 시간 동안하자 파리에 순응 자신의 실험을 수행 할 때 새로운 환경, 5)의 온도 및 습도 조건을주의; 6) 실험을 실행하는 동안 사회적 공간 챔버를 방해하지 있는지 확인 24 ~ 25 ° C와 50 %의 습도 사이의 일관성을 유지하려고 7) 바람직 Zeitgeber 시간 ZT4 사이에, 하루 중 같은 시간에 실험을 수행 및 ZGT7. <p class=파리의 전반적인 체력 및 등반 능력이 허용하는 경우 &quot;jove_content&quot;&gt; 우리는 수직 ...

사회적 상호 작용은 전체적으로 그룹 내의 개인의 적절한 발달과 건강에 매우 중요하며, 이러한 초파리 (Drosophila의 melanogaster의) 5,6- 같은 단순한 유기체 인간 (호모 사피엔스)에서, 다수의 종에 걸쳐 관찰 될 수있다. 청각, 시각, 후각, 촉각, 또는 맛보기 : 개별 초파리 또는 인간 공유 일반적인 방법은 감각이다는 이러한 상호 작용 동안 정보를 처리합니다. 우리와 다른 사람은 사회적 상호 작용에 진화 될 수 관련된 신경 세포 및 유전자 (7)을 보존하는 행동 반응의 기초가 잠재적으로 공유 neurocircuitry이 있다는 가설. 초기 상호 작용이 발생되면, 상호 작용하는 개인들 사이의 사회적 공간 것 중 하나 증가 (사회 회피 8) 또는 감소 (그룹 형성 / 통합 5). 더 복잡한 상호 작용은 침략 또는 구애처럼, 다음 자리를 차지할 수 있습니다. 1-4,9에서 사용 된 초파리 melanogaster의 안정적 그룹 사회적 상호 작용을 평가하기 위해, 간 비행 거리, 또는 사회적 공간을 정량화 간단한 프로토콜을 설명한다. 사회적 공간 플라이 가장 가까운 인접 열 사이의 거리의 측정 값을 의미한다. 사회 공간은 D의 특정 인구에 대한 일치 실험 조건 (약 1-2 본체 내의 길이를 평균) 보존, 및 개별 분리가 1로 유지되고있는 경우 증가 파리의 소셜 체험에 대하여 변화된다 melanogaster의. 적당한 비전 고전 취기 또는 CVA 인식 한 정상적인 사회 거리를 유지하기 위해 필요한 것이 아니라. 사회적 공간의 측정은 이렇게 될 수 있습니다사회적 상호 작용을 분석 및 D의 사회적 행동을 정량화 할 수있는 진단 도구로 사용 melanogaster의 1. 우리는이 정량을 수행하고, 어느 정도 공통의 실험 변수는이 동작에 영향을 미치는 방법에 대한 자세한 여기에 대해 설명합니다. 범위 - - 수행 사회적 공간에 영향을 우리는 상기 분석이 수행되는 챔버뿐만 아니라 초파리의 수의 방향을 보여준다. 그것은 이전에 실 형상은 파리 11, 12의 자발적인 탐구 운동에 영향을 미치는 것으로 나타났다, 그들이 정착하기로 결정 곳이 현상은 궁극적으로 영향을 미칠 수 있습니다. 그러나, 긴 비행 밀도 (플라이 / ㎠) 및 챔버 방향으로 동일하게 유지되어, 파리의 사회적 공간은 일정하게 유지된다. 이 분석의 견고성은 독립된 실험실 WH의 돌연변이에 의해 표시된 결과를 복제 할 수있는 다른 챔버 크기, 형상을 이용하여, 자세는 사실에 의해 설명된다증가, 사회적 공간이다 ITE 유전자 (눈의 색소 침착에 영향을 미치는), (1 수직 삼각형 또는 수평 원을, 3의 공기 흐름과 수평 광장). 우리 수컷, 암컷은 아니지만, 상기 이격 밤인지를 보여 우리의 결과는 또한, 사회적 공간 실험이 수행되는 시간을 유지하는 결과의 일관성에 결정적임을 나타낸다. 그러나, 낮과 저녁 시간 사이에 보이는 차이는 파리의 활동의 차이에 기인하지 않고, 우리는 사회적 공간과 관련되지 않은 활동 수준을 나타내는 인수에 대해 설명합니다. 마지막으로, 거기에 흰색 돌연변이로 표시된 바와 같이 사회적 공간의 결정에 유전 적 토대는 이미 1,3를 설명하고, 우리가 여기서 제시 파리의 여러 근친 및 자연산 균주의 차이. 따라서, 이러한 분석은 우수한 공구 F를 만든다또는 유전의 효과뿐만 아니라 환경 적 요인을 연구.

<table><tbody><tr><td>스테레오 줌 현미경&nbsp;</td><td>니콘&nbsp; &nbsp;</td><td>SMZ-645</td><td>다른 표준 스코프는 플라이 핸들링에 사용할 수 있습니다</td></tr>. 작은 <tr><td>페인트 브러시&nbsp;</td><td></td><td></td><td>파리를 밀기 위해</td></tr><tr><td>Jazz-mix</td><td>Fisher</td><td>33545</td><td>다른 표준 드로소필라 음식이 작동할</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> 것입니다<tr><td>. 미니 알람 타이머/스톱워치</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Sharpie 펜</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>접착 테이프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>중간 크기의 바인더 클립</td><td>챔버를 함께 고정하는 스테이플: 1-1/4" (32mm) 중간 클립과 5/8" 용량의</td><td></td> 작은 지지대 Carolina&nbsp;<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>챔버를 수직 방향으로 유지하는</td> <td>707161</td></tr><tr><td>Buret 클램프</td><td>Carolina</td><td>707362</td><td></td></tr><tr><td>디지털 카메라</td><td>Nikon</td><td>&nbsp; 쿨픽스 S8000&nbsp;</td><td>정지 사진을 촬영하려면</td></tr><tr><td>그림의 크기를 조정할 수 있는</td> <td>작은 눈금자</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>삼중 보드와 흰색 벤치 커버</td><td></td><td></td><td>를 사용하여 흰색 배경과 균일한 조명을 제공합니다.</td></tr><tr><td>두드리는 패드</td><td></td><td></td><td>모든 마우스 패드가 작동합니다.</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>프리즘 6</td><td>GraphPad 소프트웨어 Inc.</td><td>Mac OS X용 Prism 6</td><td>t-test, one-way 및 two ANOVA가 있는 모든 통계 분석 소프트웨어가 작동합니다</td></tr></tbody></table>.

사회적 공간에 영향을 미치는 조건<em&gt; 초파리</em

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

또는 다른 작은 곤충 - - 간단한 방식으로 기재되어있는 사회적 공간 분석은 초파리 melanogaste 연구 사회적 상호 작용을 정량화하는데 사용될 수있다. 우리는 이전에 1 있듯이, 이차원 챔버에서는 먼저, 꽉기를 형성 파리 강제이어서 이들을 서로 그들의 바람직한 거리를 취하도록 허용한다. 파리에 정착 한 후, 우리는 무료 온라인 소프트웨어 (ImageJ에)와 정지 화면을 처리하는, 가장 가까운 이웃 (사회 공간)까지의 거리를 측정한다. 잠재적 교란 요인 제어하면서 가장 가까운 이웃 거리의 분석은 연구자들이 사회적 상호 작용에 대한 유전 적 및 환경 적 요인의 영향을 결정하도록 허용한다. 이러한 등반 능력, 일, 섹스의 시간, 파리의 수와 같은 다양한 요인, 파리의 사회적 간격을 수정할 수 있습니다. 따라서 우리는 이러한 교란 효과를 완화하기 위해 실험 컨트롤 시리즈을 제안한다. 이 분석 할 수적어도 두 가지 목적으로 이용 될 수있다. 첫째, 연구자들은 (예 : 분리, 온도, 스트레스 나 독소 등) 자신이 좋아하는 환경 변화가 사회 간격 1,2에 영향을 줄 방법을 결정할 수 있습니다. 둘째, 연구자들은 사회적 행동 1,3의 기본적인 형태의 유전 적, 신경 토대를 해부 할 수 있습니다. 구체적으로, 우리는 인간 4 자폐증 후보 유전자와 같은 다른 생물체에 사회적 행동에 관여하는 것으로 생각 orthologous 유전자의 역할을 연구하기 위해 진단 도구로 사용된다.

사회적 공간 챔버는 초파리의 사회적 행동을 정량화하는 도구로 사용될 수있다. 아크릴 스페이서 및 유리 창은 많은 잠재적 혼동 큐의 존재없이 안정한기를 형성 할 수 날아간 이차원 영역을 제공 경기장 내부 삼각형을 형성하도록 함께 클립핑된다. 파리는 수직 분야로 전송되면, 그들은 아래로 도청 됨으로써 깜짝, 그들은 탈출 동작으로 응답되어 부정적인 geotaxis. 그들은 꽉 그룹으로 강제 직립 삼각형의 정점에 올라 다음 더 이동 서로를 형성하고, 경기장을 탐구하는 시간을 제공한다. 20 내지 40 분 후, 움직임이 정지 한 안정한기를 형성한다. 각 플라이 사이의 최근 접 거리를 선호하는 사회적 공간의 정량화를 제공하기 위해 사진에서 측정 할 수있다. 파리는 가까운 그들이 그들의 이웃에 더 사회적으로 간주됩니다. 파리밀도 하에서 용량의 점까지 챔버에서 사회적 공간에서 역할을하지 않는다. 더 큰 수직 지향 챔버에 20-70 파리의 큰 그룹의 경우, 사회적 공간은 그룹...

Drosophila melanogaster의 사회적 공간에 대한 유전자와 환경의 영향은 강력하지만 간단한 분석 패러다임을 통해 정량화할 수 있습니다. 우리는 여기에서 이 사회적 공간에 영향을 미칠 수 있는 다양한 요인을 보여주므로 이 패러다임에서 실험을 설계할 때 고려해야 합니다.

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 초파리 사회적 행동의 한 측면인 선호 사회적 거리를 정량화하는 것입니다. 이는 먼저 사회적 공간 챔버를 조립함으로써 수행됩니다. 그동안 초파리 그룹을 새로운 바이알에 옮겨 환경이 제어된 분석실에 적응시킵니다.2시간 후, 초파리 무리를 사회적 공간 챔버로 옮깁니다. 초파리들을 아래로 가볍게 톡톡 쳐서 내린 후, 클램프 스탠드를 이용해 수직으로 배치합니다. 초파리들이 안정되면 그 위치를 기록하고, 촬영된 사진을 소프트웨어를 통해 분석하여 초파리 간의 거리를 계산합니다.궁극적으로, 소셜 스페이스 분석(social space assay)은 사회적 행동의 한 형태를 정량화하며, 이는 해당 행동에 영향을 미치는 환경적 요인과 신경유전학을 연구하는 데 활용될 수 있습니다. 컴퓨터 보조 비디오 추적과 같은 기존 방법에 비해 이 기법의 주요 장점은 정교한 도구나 방법이 필요하지 않으며, 시간과 교육에 많은 투자를 할 필요가 없다는 점입니다. 이 방법은 사회적 행동 분야의 핵심적인 질문들에 대한 답을 찾는 데 도움을 줄 수 있습니다.우리는 이 방법을 사회적 행동에 관여하는 것으로 생각되는 상동 유전자 및 인간의 자폐 스펙트럼 장애 후보 유전자와 같은 다른 유기체의 역할을 연구하기 위한 진단 도구로 사용해 왔습니다. 제가 UCLA에 있을 때, 보관실의 바이알 속에 있는 초파리들이 무작위로 분포하지 않고 그 사이에 찢어진 간격을 둔 응집체를 형성하고 있다는 점을 발견했을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 얻었습니다. 이 절차는 장갑을 착용한 상태에서 사회적 공간 챔버를 조립하는 방법부터 설명합니다.정사각형 판 위에 삼각형 스페이서를 놓고 한쪽 모서리를 맞춘 다음, 첫 번째 스페이서와 대칭이 되도록 두 번째 삼각형 스페이서를 배치합니다. 이어서, 정사각형 판의 덮이지 않은 두 가장자리를 따라 두 개의 작은 직사각형 스페이서를 올려놓아 네 개의 스페이서가 삼각형 경기장을 형성하도록 합니다. 그런 다음 다른 정사각형 판으로 스페이서들을 덮어 샌드위치 구조로 만들고, 네 개의 클립을 사용하여 조립체를 고정합니다.정확한 조립을 위해 삼각형 스페이서 모서리부터 시작하여 네 모서리에 클립을 고정합니다. 챔버의 바닥 가장자리가 벤치에 닿도록 수직으로 세웁니다. 실온은 초파리 사육 온도와 동일해야 하며, 본 실험에 사용되는 초파리와 유사한 습도 조건에서 실험 1~2일 전부터 표준 조건의 병에 넣어 사육해야 합니다. 이후 냉각 마취 하에 초파리를 수집하고 성별을 구분하여 옮깁니다.40마리의 초파리를 새로운 초파리 바이알에 나누어 실험군 집단을 구성합니다. 이후 실험 시작 2시간 전에 초파리들을 새로운 바이알로 옮기고, 2시간 뒤에 아레나가 배치될 벤치 위에 둡니다. 실험을 시작합니다.가장 가까운 클립을 제거하고 직사각형 스페이서를 밀어내어 스페이서 사이에 1 cm 간격을 만듭니다. 챔버의 왼쪽 상단 모서리에 라벨을 붙여 테스트 중인 초파리 집단을 식별할 수 있습니다. 다만, 테스트 아레나의 어느 부분도 가리지 않도록 주의하십시오.이제 코호트를 새로운 빈 바이알로 옮기고 바이알에서 파리들을 흡입하십시오. 다음으로, 흡입기의 팁을 틈새에 넣고 일정한 힘으로 천천히 숨을 내뱉으십시오. 파리들이 모두 아레나 안으로 배출되어야 합니다.즉시 직사각형 스페이서를 원래 위치로 밀어 넣고 클립을 다시 끼웁니다. 세 번 두드려 모든 초파리를 아레나 바닥으로 떨어뜨립니다. 타이머를 시작하고 아레나를 제어 챔버 내부로 옮깁니다.아레나(arena)를 플라스크에 수직으로 부착합니다. 제어 챔버의 가장자리를 따라 클램프로 고정하되, 아레나 위를 덮지 않도록 합니다. 초파리를 넣은 후 길이를 알고 있는 자나 스티커를 부착합니다.약 30분 동안 안정시킵니다. 자가 보이도록 아레나 전체를 촬영하여 기록합니다. 이것으로 실험을 마칩니다.각 조건당 3회 반복 실험을 수행해야 합니다. 아레나에서 파리를 꺼내려면, 아레나를 냉동고에 5~10분 동안 둔 후 냉동된 파리를 파리 사체 수거함(fly morgue)에 쏟아붓습니다. Image J에서 분석에 필요한 모든 사진을 엽니다.자(ruler)를 사용하여 분석(analyze) 탭 아래의 센티미터 표시로 스케일을 생성하십시오. set, scale을 선택하고 안내 메시지를 따르십시오. 단, 스케일을 적용하기 전에 반드시 global 옵션을 선택해야 합니다.자르기 기능을 사용하여 이미지에 아레나 공간만 포함되도록 조정하십시오. 그런 다음 유형 옵션을 선택하고 8비트를 선택하여 이미지를 흑백으로 렌더링하십시오. 다음으로, 이미지 탭의 조정 옵션 아래에 있는 임계값 기능을 사용하여 배경 노이즈를 제거하십시오.배경에 자국이 생기지 않도록 각 초파리의 몸체가 명확하게 보일 때까지 슬라이더를 드래그하십시오. 초파리가 아닌 자국을 제거하려면 사각형 도구로 캡처한 후 삭제하십시오. 이제 분석 탭에서 측정 도구를 설정하십시오.사용 가능한 옵션에서 질량 중심 Centro 영역을 선택하고 레이블을 표시합니다. 그런 다음 분석(analyze) 탭에서 입자 분석(analyze particles) 기능을 선택합니다. 이렇게 하면 모든 초파리의 번호 매겨진 목록이 생성됩니다.번호가 매겨진 목록을 원본 사진과 비교하여 이 도구가 정확하게 작동하는지 확인하십시오. 이제 목록을 선택합니다. 그런 다음 플러그인 탭으로 이동하여 매크로 옵션을 선택하십시오.이어서 nearest neighbor list distances라고 불리는 매크로를 선택합니다. 기술된 프로토콜을 사용하여 스프레드시트나 통계 패키지에서 이 값들을 분석하십시오. 최근에 확립된 야생형 라인인 Elwood를 근친 교배된 실험실 계통인 Canton S 일부와 비교하였으며, 초파리 계통 간에 기관의 사회적 간격이 다르게 나타나 행동에 유전적 요인이 있음을 시사하였습니다.이 절차를 수행할 때, 실험 전과 실험 전 과정 동안 통제된 환경 조건을 유지하는 것이 중요하다는 점을 기억해야 합니다. 하지만 일단 정향(orientation)이 이루어지면, 경기장의 크기와 모양은 개발 이후 일정하게 유지되는 한 행동에 영향을 미치지 않으므로 중요하지 않습니다. 이 기술은 행동 신경과학 분야의 연구자들이 사회적 공간에 미치는 환경 요인의 영향을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다.Joseph La Melanogaster에서 이 영상을 시청한 후, 파리 준비부터 소셜 공간 아레나(social space arena)의 설정 및 사용, 그리고 이미지 분석에 이르기까지 소셜 공간 분석(social space assay)을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Drosophila melanogaster은 한 세기 이상에서 많은 중요한 생물 학적 과정의 분자 및 세포 기초를 이해하기 위해 사용되었습니다 유전자와 behaviorally 다루기 쉬운 모델 시스템이다. Drosophila 잘 플라이 행동의 유전적 기초에 대한 통찰력을 얻기 위해 악용되었습니다.

분석의 방법 Drosophila 행동

초파리 melanogaster의는 자발적인 운동 활성 등의 행동에 영향을 미치는 유전 적 또는 환경 적 조작을 공부에 유용하다. 여기에서 우리는 적외선 빔과 자발적인 운동 활성을 정량화하는 데이터 분석 소프트웨어와 함께 모니터를 활용하는 프로토콜을 설명합니다.

의 자발적인 운동 활성의 결정<em&gt; 초파리</em

여기에서는 스트레스를 받는 개인의 회피를 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 패러다임은 강력하면서도 사용자 친화적이며 Drosophila melanogaster의 한 종류의 사회적 상호 작용에 대한 유전자와 환경의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석 초파리

과일 동안 행동 패턴은 역학 싸움, 관찰 및 관련 학습과 기억은 실험 조건에 의해 영향을 받는다, 싸움을 비행. 여기에 제시된 프로토콜은 전체 실험 기간 동안 파리의 처리를 제거하는 새로운 절차를 설명합니다. 이 싸움 역학을 개선하고 강력한 "패자"효과의 형성을 할 수 있습니다.

침략 유학을위한 처리 제거하는 새로운 접근하고 &quot;낙오자&quot;효과<em&gt; 초파리</em

무균 및 무균 조건에서 초파리 melanogaster의를 양육하는 방법이 제공된다. 플라이 배아는, 차아 염소산 나트륨에 dechorionated 멸균 다이어트에 무균 적으로 전송하고, 밀폐 용기에 양육된다. 박테리아와식이 요법과 배아를 접종은 무균 협회에 이르게하고, 세균의 존재는 전신 초파리 균질 도금에 의해 확인된다.

과일 비행을 양육<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 무균 및 무균 조건에서

우리는 초파리 Drosophila melanogaster 에서 짝짓기 행동에 영향을 미치는 환경 및 유전 신호를 분석하는 분석법을 시연합니다.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

여기 우리는 자동으로 시간과 공간에 신속 하 고 정확한 온도 변화를 생성 하는 프로그래밍 가능 온도 제어 경기장을 사용 하 여 온도 변화에 초파리 의 운동 성능을 결정 하는 프로토콜을 제시.

시간과 공간에서 온도 변화에 대 한 응답에서 초파리 의 성능을 결정 하는 자동화 된 방법

내분비 파괴 물질 (EDC)은 유기체와 자연 환경에 심각한 문제를 나타냅니다. 드로소필라 멜라노가스터는 생체 내에서 EDC 효과를 연구하는 이상적인 모델을 나타낸다. 여기에서, 우리는 Drosophila에 있는 내분비 중단을 조사하는 방법을 제시합니다, fecundity에 EDC 효력을, 비옥, 발달 타이밍 및 비행의 수명을 해결하.

초파리 멜라노가스터에서 내분비 장애를 테스트하는 방법

자폐 스펙트럼 장애(ASD)는 사회적 및 의사소통 행동의 장애 및 반복적 행동의 출현과 관련이 있습니다. 초파리 모델에서 ASD 유전자와 행동 결핍 사이의 상관 관계를 연구하기 위해 이 논문에서는 사회적 간격, 공격성, 구애, 그루밍 및 습관화 행동을 분석하기 위한 5가지 행동 패러다임을 설명합니다.

자폐 스펙트럼 장애의 초파리 모델에서 행동 평가를 위한 패러다임

이 프로토콜은 전통적인 포유류 모델에 대한 대안으로 운동 기능 장애의 정량화를 통해 초파리의 신경 독성을 평가하기 위한 고처리량, 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 민감하고 재현 가능하며 윤리적으로 유리한 모델을 사용하여 제약 화합물, 환경 제제 또는 유전자 변형의 신경독성 영향을 평가하는 것을 목표로 합니다.

신경독성에 대한 판독으로서의 Drosophila melanogaster 의 운동 기능 장애에 대한 행동 분석

학습하세요 Drosophila melanogaster의 사회적 거리 선호도를 사회적 공간 챔버를 사용하여 정량화하는 방법을. 이 기법은 유전적 및 환경적 요인이 사회 행동에 미치는 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

사회적 공간에 영향을 미치는 조건

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