Name: ALS의 SOD1-G93A 마우스 모델에서 질병의 진행을 평가하기위한 빠른 표현형 신경 채점 시스템 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: 학습하세요 SOD1-G93A 마우스 모델에서 신경근 기능을 평가하는 빠른 표현형 신경 채점 시스템을 통해 ALS 질병 진행을 관찰하는 방법을. 이 기법은 치료 개입의 효능을 판별하는 데 도움이 됩니다.

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원고를 비판적으로 검토해 주신 Beth Levine님, 유전형 분석 프로토콜을 개발해 주신 Valerie Tassinari님, 탁월한 동물 관리를 해주신 Matt Ferola님과 Carlos Maya님께 감사드립니다.

모든 실험은 관리 및 동물의 사용을위한 건강 가이드의 국립 연구소에 의해 기술 된 프로토콜에 따라 수행하고 ALS TDI의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었다. 1. 동물, 주택 및 연구 설계 참고 :. SOD1-G93A 마우스 식민지가 원래 들것 등 7에 의해 생성 된 높은 사본 B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur 균주에서 유래되었다. 식민지는 현재 야생 형 C57BL / 6 SJL F1 암컷과 유전자 변형 C57BL / 6 SJL 남성 교차에 의해 유지되고있다. F1의 동물 B6 여성과 SJL 남성 교차에 의해 생성됩니다. 마우스는 나이 35~45일에서 루게릭 병의 TDI 매주로 제공됩니다. <ol><li> 마우스 적어도 하나의 주 연구에 할당하기 전에 (18 ~ 23 ° C와 40 % -60 % 습도의 온도에서 12 시간의 빛 / 어둠주기) 동물 시설에 적응하도록 허용합니다. </li><li> 주택의 남성 SOD1-G93A 마이크그룹이 남성은 싸움을하는 경향이 보관되어 있기 때문에 케이지 당 전자 하나의 마우스. 케이지 당 두 개의 최대 하우스 여성 SOD1-G93A 마우스. 플라스틱 오두막의 형태로, 환경 농축을 제공합니다. 쥐가 물 / 음식을 마시는 약물 투여를 필요로하는 연구의 일부가 아닌, 음식과 물을 광고 무제한을 제공합니다. 이러한 경우, 배급 및 기록 음식과 물. </li><li> 연령 하루 약 50 약물 효능 연구를 시작하고 64 쓰레기 일치 성 균형 마우스 (코호트 당 32)를 포함한다. 마지막으로, 연구를 수행하는 연구자는 실험 조건에 눈을 멀게되어 있는지 확인합니다. 참고 : 일반적인 약물 효능 연구는 그러나 그것은 이전 또는 이후 연구를 시작하는 것이 바람직 수 있습니다 치료 개입의 유형에 따라 연령 하루 50에서 시작하는 것이 좋습니다. 참고 : 코호트 당 32 마우스 성별 특정 약물 효과를 검출하기 위해 전원과 연구. 성별 별 비교가 필요없는 경우, 코호트 당 24 마우스는 전반적으로 약물 효과를 검출하기 위해 충분하다.</li></ol> 2. 체중 <ol><li> 매일 그램의 10 분의 정밀도와 연구의 모든 마우스 녹음 체중. 참고 : 체중은 질병의 진행 및 만성 약물 치료에서 발생할 수있는 불안감의 민감한 지표이다. </li><li> 마우스 체중 따라서, 아침에 더 높은되고, 하루의 과정 동안 상당히 다양 매일 같은 시간에 주위를 기록한다. </li></ol> 3. 신경 학적 채점 시스템 (NeuroScore) <ol><li> 매일 다음 세 가지 조건 마우스를 관찰하여, 각 마우스 평가 신경 스코어 (NS)을 순차적으로 수행 : b) 마우스) 도보시키고, 마비 (c)의 개시 이후) 마우스 꼬리에 의해 일시 중지된다 마우스 측면에 배치됩니다. <ol><li> 꼬리 서스펜션 테스트를 위해, 식품 분지에서 멀리, 1-2 초 동안 자신의 홈 케이지의 와이어 상단을 통해 꼬리의 기지에서 마우스 약 1.5」를 개최 OBS 동안뒷다리를 어빙. 서스펜션 시험을 3 회 반복하고, 가장 일관된 결과를 기록한다. </li><li> 보행 테스트를 들어, 일부 견인과 25cm의 도보 거리를 제공하는 깨끗한 표면에 마우스를 위치 (예 :., 종이 타월 미끄럼 방지하기 위해서 테이프). 그 걸음 걸이를 관찰하면서 마우스가 75cm 총 (종이 타월의 3 배 길이)을 돌​​아 다닐 수있다. </li><li> &quot;바로 잡고 반사&quot;시험을 위해, 그것의 왼쪽 또는 오른쪽에 마우스를 위치시키고 정지 시계가 양측으로부터 도움없이 자체를 오른쪽으로 소요 시간을 측정하여. 참고 :이 테스트의 하나의 시험이 필요합니다. </li></ol></li><li> 0 ~ 4 주에 독립적 규모에 (왼쪽 또는 오른쪽) 각 사지의 NS를 결정 오른쪽 뒷다리 NS 1 동안 예를 들어 0의 점수, 1, 왼쪽 뒷다리 NS 0을 나타냅니다. </li><li> (표 1에서 제공하는 요약) 관찰의 다음 세트에 해당하는 신경 학적 점수 (0-4)를 지정합니다 :<ol><li> 다음이 관찰되는 경우 NS 0 (프리 증상) 할당 : 마우스 꼬리에 의해 중단되는 경우, 뒷다리는 정상 스플레이 예를 제시이를 충분히 멀리 측 방향 중심선으로부터 연장하고 2 초 동안이 위치에서 유지되거나 이상. 마우스가 걸어 허용되는 경우, 정상 보용은 관찰된다. </li><li> 마우스가 꼬리에 의해 중단되는 경우, 뒷다리가 이상 스플레이, 예를 제시,이 붕괴 또는 부분적 측면 중간 선으로 축소하거나 꼬리 서스펜션 동안 떠는 또는이 후퇴되어 관찰되는 다음과 같은 경우 NS 1 (첫 번째 증상) 지정 / 쥐는. 마우스가 걸어 허용되는 경우, 정상 또는 약간 느린 보용이 관찰된다. </li><li> 다음이 관찰된다면 (2) NS (마비의 발병) 할당 : 마우스 꼬리에 의해 중단되는 경우, 뒷다리 훨씬 연장하지 않는 부분적으로 또는 완전히 붕괴이다. (여전히 관절 운동이있을 수 있습니다). 마우스가 걸어 허용되면 뒷다리 앞으로 MOT에 사용이온 그러나 발가락은 90cm의 산책하는 동안 두 배 이상 아래로 말려 있거나 다리의 어떤 부분은 케이지 바닥 / 테이블을 따라 드래그합니다. 마우스의 좌우 측에 배치 될 때, 양측에서 10 초 이내에 스스로를 잘 할 수있다. </li><li> 다음이 관찰되는 경우 (3) NS (마비)를 할당 : 마우스 꼬리에 의해 중단되는 경우, 최소의 뒷다리 OR 관절 운동 마비 강성이있다. 마우스가 걸어 허용하면 앞으로 그러나 사지가 전진 운동을 위해 사용하지 않는 움직임이있다. 마우스의 좌우 측에 배치 될 때, 양측에서 10 초 이내에 스스로를 잘 할 수있다. 참고 : 드물게 마비의 발병 후, 소변 습기가 뒷다리에 표시되지 않을 수 있습니다. 왼쪽 치료 소변 수분이 소변에 &quot;굽기&quot;피부 병변이 발생할 수 있습니다. 머리를 클리핑하여 소변의 수분을 치료, 따뜻한 물이 소변을 제거하기 위해 젖은 적용하고 부드럽게 건조시킨다. 피부 병변이있는 경우에 적용 antibio틱 연고. </li><li> 다음이 관찰되는 경우 (4) NS (애호 종점)를 할당 : 마우스 꼬리에 의해 중단되는 경우, 경질의 뒷다리가 마비. 마우스가 걸어 허용되면, 더 전진 운동이 없다. 마우스의 왼쪽과 오른쪽에 배치 될 때 어느 측에서 10 초 이내에 자체를 잘 할 수 없습니다. 즉, 반사를 바로 잡고의 부재. </li></ol></li></ol> 4. 데이터 입력 및 분석 <ol><li> 약물 효능 연구의 과정에서, 실험실 정보 관리 시스템 (LIMS)에 각 마우스 또는 시판 스프레드 시트 소프트웨어에 수집 된 데이터를 입력합니다. 주 : ALS TDI 개발 LIMS 소프트웨어는 내부 연구에서 수집 된 모든 데이터에 대한 중앙 저장소입니다, ALS TDI 조사관에 대한 시간에이 데이터를 편리하게 접근 할 수 있도록. LIMS는 모든 연구 일에 다시 혈통, 체중 또는 신경 학적 점수, 고유 ID로, 개인 마우스를 추적그 수명 기간 동안 언급 한 다른 관측을 포함한다. LIMS 궁극적 후속 분석을 위해 사용되는 스프레드 시트를 생성한다. </li><li> 약효 조사, 즉, 모든 마우스는 인간 종점에 도달 할 때, 사용 된 스프레드 시트 소프트웨어 (자재 표 참조) 좌우 뒷다리 NS을 평균하여 매일 각 마우스 결합 NS를 계산의 완료시 . 다음, 각각의 마우스와 각 마우스가 특정 NS에서 보낸다 일 수에 대한 각 NS의 평균 연령을 계산한다. </li><li> 통계 소프트웨어를 스프레드 시트 소프트웨어에서 데이터를 가져 와서 시간이 지남에 NS 전반적인 변화를 분석 (재료의 표 참조). 회귀의 영향과 중간 NS 연령과 약물 치료, 예상 NS 추정 순서 로지스틱 회귀 모델을 사용하여 이러한 데이터를 맞 춥니 다. 로그 - 랭크 카이 스퀘어 테스트를 사용 효과 우도 확률을 추정하고 NS 진행에 약물 치료 효과가 있는지 여부를 결정하는 통계LY 중요한 (단계별 지침에 대한 보충 코드 파일을 참조하십시오). 참고 : p- 값 &lt;0.05는 통계적으로 유의 한 것으로 간주됩니다. 주 : 통계 분석이 방법은 NS 데이터와 개별 마우스에 대한 NS 궤도의 변수 자연의 서수 본질을 존중합니다. 각각의 NS 궤도 충분히 NS 응답을 반영하지 않은 NS 시간 연관된 그룹 평균 결과 현저히 상이 할 수 있기 때문에 바람직하다. 또한, 경우에 따라서는 NS 특히 영 - 일 범위에서 변동될 수있다. </li><li> 마지막으로, 사용 그래프 소프트웨어는 약물 치료 및 제어 동물 그래프 &quot;서수는 NS에서 중간 나이 대 NS를 예상&quot;생성 (재료의 표 참조) (그림 2, 보충 코드 단계별 지침에 대한 파일 참조). 편리 y 축에서 질병 발병 (I의 평균 연령을 보간하여 약물 처리 군과 대조군 사이의 변화를 추정하기 위해이 그래프를 사용합니다.E., X 축상의 2 NS). 주 : 두 그룹 간의 평균 연령의 차이는 약물 - 유도 변화를 나타내고, 효과의 크기의 실제 측정 값으로 취급된다. 참고 : 증상이 질병의 진행을 둔화 나타내는 예상 NS 대 평균 연령 곡선에서 오른쪽으로 이동합니다. 반대로, 예상 NS 대 평균 연령 곡선의 좌측 이동은 증상이 질병의 진행을 가속 나타냅니다. </li></ol>

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</ol>

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이 보고서에서 우리는 제대로 적용하는 경우, 안정적으로 SOD1-G93A 마우스에서 질병의 진행을 평가하고 약물 유발 변경을 식별 할 수있는, 빠르고 간단하게 비디오 프로토콜을 설명합니다. 다른 그룹은 SOD1-G93A 마우스 8-10에 대한 표현형 점수 시스템을 개발하는 동안, 그들은 종종 절차에 대한 충분한 정보를 제공하고 복제 부적절하지 않습니다. 따라서, 채점 시스템은 거의들을 개발하고 특정 그룹 밖에 사용되지 않는다. 이 보고서에서 비디오와 상세한 원고의 조합에 따라서 다른 실험실에 의해 채택 될 프로토콜을 허용하고 다른 설정에서 일어나고 연구 사이의 비교를 가능하게 득점 모호성 간 실험자의 변동성을 최소화 할 수 있습니다. NeuroScore 라이 보고서에 기재 신경 학적 점수 시스템은 정확한 수치는 표적과 SY의 집합에 기인 서수 데이터를 생성mptoms은 위 질환의 심각성을 수립 외의 의미가 없다. 이 경우, NS는 0 이상의 심각한 질병 상...

1990 년대 중반에 개발 SOD1-G93A 형질 전환 마우스 모델은 근 위축성 측삭 경화증 (ALS) 1의 가장 널리 사용되는 동물 모델되었습니다 이래. 이 형질 전환 마우스 모델은 유 전적으로 아미노산 93 (G93A)에 알라닌 돌연변이 ALS 관련 글리신을 품고 인간의 구리 / 아연 슈퍼 옥사이드 디스 뮤 타제 1 (SOD1) 유전자의 돌연변이 형태를 과발현하도록 설계되었다. G93A 돌연변이 일괄 메이크업 가족 ALS 사례 2의 약 5 분의 1 SOD1 유전자에 많은 변이 중 하나입니다. SOD1-G93A 모델, 그것은 궁극적으로, 이러한 운동 신경 손실, 점진적 근육 약화 및 위축 등 인간 루게릭 병의 병리학 적 특징의 많은 되풀이되었습니다 때문에 루게릭 병에 그것의 명백한 유전 링크에 추가 루게릭 병 치료제 개발 연구의 주력이되었다 마비와 사망 3. 종종 트랜스 제닉 동물 모델의 경우에서와 같이 비록, 고유 BI 존재SOD1-G93A 마우스와 관련된 학적 변화. 스콧 등. 최소 24 쓰레기 일치 성 균형 잡힌 쥐의 동료가 4 생물 다양성에 의해 생성 된 소음을 극복하기 위해 약물 효능 연구 설계에 필요하다고 결정했다. 공격적인 질환 진행과 매일 모니터링에 대한 필요성과 함께 이러한 연구에 필요한 동물의 다수의 신경 근육 강도 및 기능을 측정하기위한 정교한 시간 소모적 잠재적 스트레스 기법의 사용을 금지한다 (예를 들면, 근전도, 악력, 로토 등). 대신에, 확실하게 빠른 SOD1-G93A 마우스의 신경 근육 기능을 평가 생체 내 선별 도구의 필요성을 강조한다. ALS TDI에서 프로토콜은 평균에 마우스 미만 30 초에 SOD1-G93A 마우스의 신경 근육 기능의 신뢰성 평가를 허용하는 개발되었다. 이 프로토콜 encompa언론 및 비디오에서이 보고서에 설명되어있는 간단한 신경 학적 평가 시스템 (NeuroScore)를 사용하여 사지 기능의 일일 평가를 SSES. 뒷다리 적자는 초기가 SOD1-G93A 마우스 5,6에서 질병의 신경 학적 기호를보고 있기 때문에 NeuroScore는 뒷다리의 기능에 초점을 맞추고 있습니다. 또한, ALS TDI에 의해 개발 된 프로토콜은 마비 (약간 또는 부분 마비), 진행과 마비의 정도 발병의 공정한 평가를 제공하며 질병의 진행에 약물 유발 변경 사항을 식별 할 정도로 민감하다.

<table><tbody><tr><td>B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur 균주</td><td>The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME</td><td>002726</td><td>이 연구에 사용된 마우스의 균주</td></tr><tr><td>Breeders</td><td>Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA</td><td></td><td>Colony maintainance</td></tr><tr><td></td><td>Scale Navigator OHAUS, Parsippany, NJ</td><td>Model N14120</td><td>마우스</td></tr><tr><td>Nutra-GelH</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>#S4798</td><td>습식 사료의 무게를 측정하는 데 사용됩니다. 아픈 쥐에게 제공</td></tr><tr><td>방사선 처리된 실험실 동물 식단</td><td>Harlan, Indianapolis, IN</td><td>2918-111914M</td><td>Chow 다이어트</td></tr><tr><td>실험실 등급 Sani-chips</td><td>Harlan Teklad, Indianapolis, IN</td><td>7090</td><td>침구</td></tr><tr><td>JMPH&nbsp;</td><td>SAS Institute, Inc., SAS 캠퍼스 드라이브, 캐리, 노스캐롤라이나</td><td>&nbsp; v10.0.2</td><td>통계 소프트웨어</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA</td><td>Excel 2013 (v 15.0)</td><td>스프레드시트 소프트웨어</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 5</td><td>GraphPad 소프트웨어 Inc., La Jolla, CA</td><td>v5.4</td><td>그래프 소프트웨어</td></tr><tr><td>Mouse Huts</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>K3272</td><td>환경 강화를 위해</td></tr></tbody></table>

als의 sod1-g93a 마우스 모델에서 질병의 진행을 평가하기위한 빠른 표현형 신경 채점 시스템

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

SOD1-G93A 형질전환 마우스는 근위축성 측삭 경화증(ALS)의 가장 널리 사용되는 동물 모델입니다. ALS TDI에서는 SOD1-G93A 마우스의 신경근 기능을 신속하게 안정적으로 평가하는 표현형 스크리닝 프로토콜을 개발했으며, 이는 본 비디오에서 입증되었습니다. 이 프로토콜은 뒷다리 기능을 평가하도록 설계된 간단한 신경학적 점수 시스템(NeuroScore)을 포함합니다. NeuroScore는 뒷다리 결손이 SOD1-G93A 마우스에서 가장 초기에 보고된 질병의 신경학적 징후이기 때문에 뒷다리 기능에 초점을 맞추고 있습니다. ALS TDI에서 개발한 프로토콜은 마비의 시작(경미한 또는 부분적인 마비), 마비의 진행 및 중증도에 대한 편견 없는 평가를 제공하며 약물에 의한 질병 진행의 변화를 식별할 수 있을 만큼 민감합니다. 이 보고서에서 상세한 원고와 비디오의 조합은 채점 모호성과 실험자 간 변동성을 최소화하여 다른 실험실에서 프로토콜을 채택할 수 있도록 하고 다른 환경에서 수행되는 연구를 비교할 수 있도록 합니다. 우리는 이 비디오 프로토콜이 현재와 미래의 ALS 연구자를 위한 훌륭한 교육 도구가 될 수 있다고 믿습니다.

2014 평가 하였다 동안 90 남성과 94 여성 비 처리 SOD1-G93A 마우스의 신경 학적 점수 데이터는 ALS TDI에서 공부했다. 결과는 여성에 비하여 NS 1에서 그들의 수명의 큰 비율에 의해 입증 수컷 마우스는 일반적으로, 암컷 마우스보다 더 공격적인 질환 진행을 보여준다. NS 2, NS 3 성별에 걸쳐 거의 동일한 빈도로 발생합니다. 이 &quot;정상&quot;표현형 간주되기 때문에 NS 0은 분석에서 제외 하였다. NS (4) 또한 만 SOD1-G93A 마우스의 수명 (표 2와 그림 1)에 한 번 발생할 수 있기 때문에 정의에 의해 제외되었다. NS 데이터는 SOD1-G93A 마우스에서 시험 화합물의 TDI173의 루게릭 병의 진행 효능 약리학 연구에서 제시 (N = 성 / 처리 당 16 64 총 마우스). 데이터 (C)의 순서 회귀 분석에 의하여 촬영 된 바와 같이도 2에서, 신경 학적 질환 진...

이 비디오 프로토콜은 근위축성 측삭 경화증의 형질전환 마우스 모델에서 신경근 결손을 평가하기 위한 민감하고 신뢰할 수 있으며 빠른 방법을 설명합니다.

ALS의 SOD1-G93A 마우스 모델에서 질병의 진행을 평가하기위한 빠른 표현형 신경 채점 시스템

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

이 절차의 전반적인 목표는 단순한 표현형 신경학적 점수 체계를 사용하여 SOD1-G93A 마우스의 뒷다리 기능을 매일 평가함으로써, 이들의 신경근 기능을 빠르고 신뢰성 있게 평가하는 것입니다. 이는 먼저 꼬리를 잡고 마우스를 매달아 뒷다리 상태를 관찰함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 마우스가 걷게 하여 보행 상태를 관찰하는 것입니다.다음으로, 마우스를 옆으로 눕혀 라이팅 리플렉스(writing reflex)의 유무를 테스트합니다. 마지막 단계는 마우스 코호트의 신경학적 점수 데이터를 순서형 로지스틱 회귀 모델에 적합시켜 데이터 분석을 수행하는 것입니다. 최종적으로, 본 표현형 신경학적 점수 체계는 치료적 개입의 효능을 식별하기 위해 ALS 마우스 모델인 SOD1-G93A의 질병 진행 상황을 평가하는 데 사용됩니다.기존의 다른 모든 기술과 비교했을 때 이 방법의 주요 장점은 빠르고 간단하며 신뢰할 수 있고, 마우스에 가해지는 스트레스가 최소화된다는 점입니다. 이 방법은 해당 질환의 가장 일반적인 마우스 모델에서 치료적 개입을 빠르게 평가할 수 있게 해주므로, 근위축성 측삭 경화증(LS) 치료 연구로 그 활용 범위가 확장됩니다. 신경학적 차이가 미세할 수 있어 신경학적 점수 산정법을 익히기가 어렵기 때문에, 시각적 시연이 매우 중요합니다.수컷 SOD1-G93A 마우스는 케이지당 한 마리씩, 암컷 SOD1-G93A 마우스는 케이지당 최대 두 마리까지 수용하는 것으로 시작합니다. 마우스에게 플라스틱 은신처 형태의 환경 풍부화를 제공하십시오. 마우스에게 자유롭게 섭취할 수 있도록 먹이와 물을 제공하십시오.모든 마우스의 체중을 동일한 시간에 측정하십시오. 일일 체중은 질병의 진행 상황과 만성 약물 치료로 인해 발생할 수 있는 전신 쇠약 상태를 나타내는 민감한 지표입니다. 연구 기간 동안, 순차적으로 수행되는 세 가지 테스트 체계를 통해 매일 각 마우스의 신경학적 점수를 평가하십시오.첫 번째 테스트에서는 표현형 전환 시점의 점수를 구분하는 것이 매우 어려우므로 주의 깊게 관찰하십시오. 꼬리 매달기 테스트에서는 홈 케이지의 와이어 상단 위에서 꼬리 기저부로부터 약 1.5 inches 떨어진 지점을 잡아 마우스를 고정합니다. 1~2초 동안 뒷다리의 기능을 관찰하고, 이 테스트를 3회 반복합니다.보행 테스트를 위해, 마찰력이 있고 최소 25 centimeters의 보행 거리가 확보된 깨끗한 표면 위에 마우스를 놓습니다. 마우스의 보행을 관찰하면서 최대 75 centimeters까지 걷게 합니다.정위 반사 테스트를 위해 마우스를 옆으로 눕히고, 스톱워치를 사용하여 도움 없이 스스로 몸을 바로 세우는 데 걸리는 시간을 양측 모두 측정합니다. 이 테스트는 한 번의 시험만 수행하면 됩니다. 세 가지 표현형 관찰 테스트의 종합적인 결과에 따라 각 후지(좌측 또는 우측)를 0에서 4까지의 척도로 독립적으로 점수화합니다.부비동 점수가 0점인 경우 마우스가 증상 발현 전 단계임을 나타냅니다. 현수 검사 중 뒷다리가 외측 중앙선에서 완전히 펴진 상태로 2초 이상 유지될 때에 해당합니다. 또한, 보행 검사 중에 정상적인 보행이 관찰됩니다.첫 증상이 나타나는 경우 1점을 부여합니다. 현수 테스트(suspension test) 동안 뒷다리가 외측 중앙선으로 붕괴되었거나, 외측 중앙선으로 부분적으로 붕괴되어 떨리는 경우, 또는 다른 방식으로 비정상적으로 벌어진 경우에 해당합니다. 앞서 보여준 현수 테스트 증상 외에도, 1점을 부여받아야 하는 마우스의 보행은 여전히 정상으로 보이거나 약간 낮아진 상태여야 합니다.파레시스(Parsis)의 시작을 나타내는 점수 2점을 부여합니다. 현수 검사 중 후지가 부분적으로 또는 완전히 무너지고, 추가로 보행 검사 중에 후지가 전진 운동에 사용되는 경우입니다. 다만, 75 centimeter 보행 동안 발가락이 최소 2회 이상 아래로 말리거나 발의 어느 부분이라도 끌리는 경우에 2점을 부여합니다.또한 마우스는 양옆으로 눕혀진 후 10초 이내에 스스로 몸을 바로 세울 수 있어야 합니다. 시누스 점수(sinus score) 3점은 마비 상태를 나타냅니다. 현수 테스트(suspension test) 중에 마우스의 뒷다리에 경직성 마비가 나타나거나 관절 움직임이 최소한인 경우, 보행 테스트 중에는 앞으로 이동할 수 있으나 이는 뒷다리를 사용한 것이 아닙니다.사이너스 점수가 3점인 것 외에도, 마우스는 양쪽 옆으로 눕혔을 때 10초 이내에 스스로 몸을 바로 세울 수 있어야 합니다. 마지막으로, 현수 상태 동안 마우스가 강직성 마비를 보일 때마다 인도적 종료 시점으로 정의하는 4점 기준이 있습니다. 해당 테스트에서 마우스는 뒷다리를 이용한 보행 테스트 중 전진 운동을 보이지 않으며, 어느 쪽으로 눕히더라도 10초 이내에 스스로 몸을 바로 세우지 못합니다.수컷 생쥐는 암컷 생쥐에 비해 질병 진행이 일반적으로 더 공격적으로 나타나는데, 이는 신경학적 점수 1점으로 분류될 수 있는 증상을 보이는 수명 비율이 암컷보다 더 높다는 점에서 입증됩니다. 증상이 신경학적 점수 2점 또는 3점 범위로 증가함에 따라, 각 점수에서 머무는 일수는 성별에 관계없이 빈도가 동일합니다. 여기에는 앞서 설명한 neuroco 프로토콜을 사용하여 생성된 서수 로지스틱 통계 분석 그래프가 표시되어 있습니다.이 데이터는 테스트 화합물 TDI 1 73을 투여받은 SOD one G 93 a 마우스 코호트와 vehicle을 투여받은 마우스 코호트를 비교한 약물 효능 약리학 연구 결과입니다. 성별을 분리하여 분석했을 때는 통계적으로 유의미한 차이가 관찰되지 않았으나, 성별을 통합하여 분석했을 때는 통계적 유의성에 도달했습니다. 생존율에 대한 Kaplan Meyer 분석에서도 유사한 경향을 보였으나, 성별을 통합했을 때조차 유의미한 차이를 드러낼 만큼 민감하지는 않았습니다.숙달되면, 제대로 수행할 경우 마우스 한 마리당 1분 이내에 점수 산출 시스템을 적용할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 Neuroco 시스템을 사용하여 ALS 마우스 모델인 SOD one G 93의 질병 진행 상황을 평가하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

a-quick-phenotypic-neurological-scoring-system-for-evaluating-disease

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 소뇌 운동 장애의 마우스 모델에서 질병 심각도의 신속하고 민감한 부량을위한 프로토콜을 설명합니다. 조치는 뒷다리 clasping, 레지 테스트, 보행 및 kyphosis가 포함되어 있습니다. 이 프로토콜은 효율적으로 영향 않은 영향을 개인 간의 차별, 그리고 시간이 지남에 따라 영향을받는 개인의 진행을 감지합니다.

소뇌 운동 실조증의 마우스 모델을 평가하기위한 간단한 복합 표현형 점수 시스템

루게릭병 (ALS)에 대한 마우스 모델은 임상 및 behaviorally 면밀히 검토합니다. 동반 immunohistological 분석을위한 전제 조건으로서 척수의 준비가 상세하게 그려져 있습니다.

루게릭병에 대한 마우스 모델 (ALS)의 임상 시험 및 척수 제거

이 백서에서는 TMEV에 감염된 마우스의 진행성 신경 장애를 측정하는 데 사용되는 Rotarod 성능 테스트에 대한 최적화된 테스트 프로토콜을 제시합니다.

다발성 경화증의 마우스 모델에서 진보적 인 신경 학적 장애를 측정

여기에는 β- 아밀로이드증 및 타우 병증 유전자 변형 마우스 모델에서인지 및 기능 운동 행동에 대한 생체 내 효능을 나타내는 화합물을 스크리닝하는데 사용될 수있는 단계적 행동 스크리닝 방법이 기재되어있다. 이 방법은 단기 및 작업 메모리 작업에서 활동을 위해 화합물을 스크리닝하기 위해 최적화됩니다.

아밀로이드 -β 및 타우 신경 병증의 유전자 변형 마우스 모델에서 자발적 교대, 새로운 대상 인식 및 사지 걸림의 평가

이 논문은 이식 된 원격 장치를 통해 전신 혈량 측정법 및 근전도와 질병 진행에 걸쳐 자유롭게 행동 근 위축성 측삭 경화증 (ALS) 마우스 모델에서 인공 호흡기 근육 활동의 측정을 반복하는 방법을 소개한다.

신경 근육 질환의 마우스 모델에서 호흡 근육 활동 및 환기의 반복 측정

신경 유도의 측정 neurodegeneration의 마우스 모델을 평가 하는 유용한 도구 이지만 그것은 자주 hindlimbs에 좌 골 신경을 자극에 적용 됩니다. 여기, 복합 근육 활동 전위 (CMAP) vivo에서 상 완 신경 총에 의해 innervated 마우스 forelimb 근육에서 측정 하는 기술을 설명 합니다.

Vivo에서 모터 신경 퇴보의 마우스 모델에서 앞 발에서 복합 근육 활동 전위의 electrophysiological 측정

실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 다발성 경화증의 동물 모델 역할을 합니다. 이 기사에서는 EAE에서 척수 염증, 탈수초화 및 축삭 손상을 채점하는 접근 방식을 설명합니다. 또한, 생쥐 혈청에서 용해성 신경 필라멘트 광 수준을 정량화하는 방법이 제시되어 살아있는 생쥐의 축삭 손상 평가를 용이하게 합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염에서 중추신경계 염증, 탈수초화 및 축삭 손상 채점

실험적 자가면역 뇌척수염은 다발성 경화증에서 가장 널리 사용되는 쥐 모델 중 하나입니다. 현재 프로토콜에서는 남녀 모두의 C57BL/6J 마우스에 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드를 면역하여 주로 꼬리와 팔다리의 상행 마비를 초래합니다. 여기서는 EAE 유도 및 평가 프로토콜에 대해 논의합니다.

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

이 글은 대형 스트로크 마우스에서 고도로 번역되고 독립적으로 입증된 마우스 mSU(Stroke Unit) 개념을 실행하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 또한 생쥐에서 초점 실험 뇌졸중 척도를 실행하기 위한 표준화된 프로토콜을 제공하며, 이는 장기간 감지된 뇌졸중 국소 결손을 평가합니다.

중개 마우스 스트로크 연구를 위한 표준화된 신경학적 점수를 사용한 마우스 스트로크 단위 프로토콜

이 글에서는 성체 마우스에서 CNS 표적 치료제의 테스칼 내 전달 방법을 자세히 설명하며, 프로토콜의 정확성과 반복 주사 허용에 중점을 둡니다. 이 연구에는 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 SOD1-ALS 모델 마우스에서 돌연변이 SOD1 발현을 감소시킨 검증 연구 결과가 포함되어 있어, 신경퇴행성 질환 전임상 연구에서 이 접근법의 유용성을 뒷받침합니다.

SOD1-ASO의 요추 수막내 주사, 인간 SOD1-G93A ALS 마우스에서 정밀한 중추신경계 표적 지정과 예측 효능을 위한 방법

학습하세요 SOD1-G93A 마우스 모델에서 신경근 기능을 평가하는 빠른 표현형 신경 채점 시스템을 통해 ALS 질병 진행을 관찰하는 방법을. 이 기법은 치료 개입의 효능을 판별하는 데 도움이 됩니다.

ALS의 SOD1-G93A 마우스 모델에서 질병의 진행을 평가하기위한 빠른 표현형 신경 채점 시스템

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