ALS의 SOD1-G93A 마우스 모델에서 질병의 진행을 평가하기위한 빠른 표현형 신경 채점 시스템

이 비디오 프로토콜은 근위축성 측삭 경화증의 형질전환 마우스 모델에서 신경근 결손을 평가하기 위한 민감하고 신뢰할 수 있으며 빠른 방법을 설명합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 간단한 표현형 신경학적 채점 시스템을 사용하여 뒷다리 기능을 매일 평가하여 SOD one G 93 마우스의 신경근 기능을 빠르고 안정적으로 평가하는 것입니다. 이것은 먼저 쥐의 뒷다리를 관찰하면서 꼬리로 매달아 놓음으로써 이루어집니다. 두 번째 단계는 쥐가 걸음걸이를 관찰하면서 걸을 수 있도록 하는 것입니다.

다음으로, 쥐를 옆으로 눕혀 쓰기 반사의 유무를 테스트합니다. 마지막 단계는 마우스 코호트의 신경학적 점수 데이터를 순서 로지스틱 회귀 모델에 피팅하여 데이터 분석을 수행하는 것입니다. 궁극적으로, 당사의 표현형 신경학적 점수 시스템은 치료 개입의 효능을 식별하기 위해 LS의 마우스 모델인 SOD one G 93에서 질병 진행을 평가하는 데 사용됩니다.

기존의 다른 모든 기술에 비해 이 방법의 주요 장점은 빠르고, 간단하고, 신뢰할 수 있고, 생쥐에게 최소한의 스트레스를 준다는 것입니다. 이 방법의 의미는 신방성 측삭 경화증 또는 LS의 치료로 확장되는데, 이는 질병의 가장 흔한 마우스 모델에서 치료 개입을 신속하게 평가할 수 있기 때문입니다. 신경학적 차이가 미묘할 수 있기 때문에 신경학적 채점 방법을 배우기 어렵기 때문에 시각적 시연이 중요합니다.

수컷 SOD 1 G 93 A 마우스를 수용하여 케이지 하우스당 1개의 마우스, 암컷 SOD 1개의 G 93 A 마우스를 케이지당 최대 2개까지 수용합니다. 플라스틱 오두막의 형태로 생쥐에게 환경 풍요로움을 제공하십시오. Lido 기록에서 쥐에게 음식과 물을 제공합니다.

모든 마우스와 연구의 체중을 동시에 측정합니다. 일일 체중은 질병 진행과 만성 약물 치료로 인해 발생할 수 있는 불쾌감의 민감한 지표입니다. 연구 기간 동안 순차적으로 수행되는 세 가지 테스트 요법을 통해 매일 각 마우스의 신경학적 점수를 평가합니다.

첫 번째 테스트에서는 표현형 전이 지점에서 점수를 설명하는 것이 매우 어렵으므로 주의 깊게 관찰하십시오. 테일 서스펜션 테스트는 홈 케이지의 와이어 상단 위로 꼬리 바닥에서 약 1.5인치 떨어진 곳에서 마우스를 잡습니다. 1-2초 동안 뒷다리의 기능을 관찰하고 테스트를 3회 반복합니다.

걷기 테스트용. 약간의 견인력을 제공하고 도보 거리가 25cm 이상인 깨끗한 표면에 마우스를 놓습니다. 마우스가 ga를 관찰하는 동안 최대 75cm까지 걸을 수 있습니다.

쓰기 반사 테스트의 경우 마우스를 옆으로 눕히고 스톱워치를 사용하여 양쪽에서 도움 없이 스스로 쓰는 데 걸리는 시간을 측정합니다. 이 테스트는 한 번의 시험만 필요합니다. 세 가지 표현형 관찰 테스트의 집합적 결과를 기반으로 0에서 4까지의 척도로 각 뒷다리의 왼쪽 또는 오른쪽에 독립적으로 점수를 매깁니다.

부비동 점수가 0이면 마우스가 증상이 없음을 나타냅니다. 서스펜션 테스트 중에 뒷다리는 측면 정중선에서 완전히 펴지고 2초 이상 이 위치를 유지합니다. 또한 보행 테스트 중에는 정상적인 걸음걸이가 관찰됩니다.

첫 번째 증상의 출현을 나타내는 1의 점수를 할당합니다. 서스펜션 테스트 중에 뒷다리가 측면 정중선 쪽으로 무너지거나, 측면 정중선 쪽으로 부분적으로 무너지거나, 떨리거나, 다른 방식으로 비정상적으로 벌어지는 경우. 방금 보여준 서스펜션 테스트 증상 외에도, 1점을 받아야 하는 마우스의 걸음걸이는 여전히 정상으로 보이거나 약간 낮게 보여야 합니다.

Parsis의 시작을 나타내는 점수 2를 할당합니다. 서스펜션 테스트 중에 뒷다리가 부분적으로 또는 완전히 무너지고 보행 테스트 중에 뒷다리가 전진 동작에 사용되는 경우. 그러나 75cm를 걷는 동안 발가락이 최소 두 번 아래로 말리거나 발의 일부가 2점을 얻기 위해 끌립니다.

또한 마우스는 10초 이내에 양쪽에 놓은 후에도 스스로 쓸 수 있어야 합니다. 부비동 점수가 3이면 마비를 나타냅니다. 서스펜션 테스트 중에 마우스가 뒷다리에 경직된 마비를 보이거나 관절 움직임이 미미한 경우 마우스는 보행 테스트 중에 뒷다리를 사용하지 않고 여전히 앞으로 나아갈 수 있습니다.

3점의 부비동 점수 외에도 마우스는 10초 이내에 양쪽에 놓인 후에도 여전히 스스로 글을 쓸 수 있어야 합니다. 마지막으로, 4점의 점수로, 현탁 기간 동안 마우스가 경직된 마비를 보일 때마다 인도적 종점을 정의합니다. 뒷다리를 이용한 보행 테스트 중 테스트 결과 전진 동작이 나타나지 않았으며, 양쪽에 눕힌 후 10초 이내에 스스로 글을 쓸 수 없었다.

수컷 마우스는 일반적으로 암컷 마우스보다 더 공격적인 질병 진행을 보이며, 이는 암컷에 비해 신경학적 점수 1로 분류될 수 있는 증상을 나타내는 수명 중 더 많은 비율로 입증되었습니다. 증상이 신경학적 점수가 2 또는 3 범위로 증가함에 따라 각 점수에서 보낸 일수는 성별에 따라 빈도가 동일합니다. 여기에 표시된 것은 방금 설명한 neuroco 프로토콜을 사용하여 생성된 순서 물류, 통계 분석 그래프입니다.

이러한 데이터는 약물 효능 약리학 연구에서 발췌한 것으로, 테스트 화합물 TDI 1 73을 투여받은 마우스인 SOD 1 G 93 코호트를 비히클 투여받은 마우스 코호트와 비교한 것입니다. 성별을 별도로 분석했을 때는 통계적으로 유의한 차이가 관찰되지 않았지만, 성별을 병합했을 때 통계적으로 유의성에 도달했습니다. 카플란 마이어(Kaplan Meyer)의 생존 분석은 비슷한 경향을 보였지만, 성별을 통합했을 때에도 유의미한 차이를 드러낼 만큼 민감하지 않았다.

일단 마스터하면 점수 시스템이 제대로 수행되면 마우스당 1분 이내에 적용할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 Neuroco 시스템을 사용하여 LS의 마우스 모델인 SOD one G 93에서 질병 진행을 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.