miRNA의 뇌의 특정 최저 대한 정위 주입하는 간단한 대안

여기에서 우리는 쥐의 뇌에서 마이크로 RNA를 특이적으로 녹다운하기 위해 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드와 함께 세포 침투 펩타이드를 사용하는 것을 보여줍니다. 이것은 5월 29일에 대한 안티고를 설계함으로써 달성되었습니다. 이 연구에서는 antigo 수컷을 사용하여 microRNA를 표적으로 삼아 핵산 변형을 가두었습니다.

즉, LNA 수정은 5개의 다른 위치에 통합되었습니다. 이 경우, LNA 변형의 통합은 마이크로 RNA에 대한 결합 친화도를 향상시킵니다. 또한 핵 저항성을 부여하여 microRNA 표적화 효율성을 향상시킵니다.

펩타이드를 함유한 ANTIGO MAR의 복합체를 시험관내(in vitro)에서 제조하고 꼬리 정맥을 통해 마우스에 주입했습니다. micro RNA의 knockdown은 행동 변화를 일으켰으며, 이는 치료 후 3회 연속 주사로 이 microRNA가 운동 실조에 눈에 띄는 변화를 유도하기에 충분했음을 시사하는 행동 변화를 일으켰고, 뇌 조직을 채취하여 microRNA의 knockdown을 확인했습니다. CPP 또는 자가 침투 펩타이드는 최근 핵산 전달을 위한 매력적인 운반체로 부상하고 있습니다.

여기에서 우리는 LNA와 함께 전하 기반 복합체를 겪을 수 있는 아르기닌이 풍부한 신경성 펩티드 중 하나를 사용했으며, 이는 전신 순환계에 투여되면 이 경우 신경 세포인 지정된 표적 부위에 도달하고 이러한 세포로 LNA가 적절하게 방출되도록 합니다. ME 29 패밀리 구성원의 서열은 mease에서 검색하고, 16 MER 안티센스를 5개의 균일한 간격의 위치에서 lock 핵산 변형으로 합성하여 복합체를 준비했습니다. 적절한 농도의 펩타이드 및 안티고 용액을 멸균 10% 포도당에서 별도로 제조했습니다.

무균 조건에서. Antigo 용액을 부드러운 교반으로 펩타이드 용액에 천천히 적가하였다. 느린 첨가 및 부드러운 교반은 크기가 tric scale인 mono 분산 복합체의 형성에 중요합니다.

안티고는 매번 3등분으로 첨가되어 혼합을 위해 1분을 허용한 다음 혼합하지 않고 1분 동안 배양했습니다. 급격한 첨가는 복합체와 강수량의 집합으로 이어질 수 있습니다. 이제 Antigo 복합체를 주입할 준비가 되었습니다.

이 복합체는 꼬리 정맥 주사를 통해 투여되었습니다. 쥐들은 같은 우리로 되돌려 보내졌습니다. 운동실조에 대한 행동 분석은 주사 후 3시간 후에 매일 수행되었습니다.

쥐는 꼬리를 잡고 주변 물체에 닿지 않도록 했습니다. 뒷다리가 10초 동안 벌어지는 방식을 주목하십시오. 선반 테스트에서 쥐는 케이지의 얇은 선반을 따라 걸어야 했습니다.

생쥐는 얇은 수로를 통해 걸어 다니며 두꺼운 흡수성 종이 조각에 잉크가 묻은 발로 발자국을 남기고 뒷발에만 잉크를 묻힙니다. 혼란스러운 데이터를 피하기 위해 네 팔다리에서 안티고 치료의 효과를 살펴 보겠습니다. 우리는 치료되고 통제된 쥐로부터 뇌와 다른 조직을 분리했습니다.

우리는 R VG 펩타이드가 형광 표지된 siRNA를 뇌에 특이적으로 전달하지만 간과 같은 다른 조직에는 전달하지 않는다는 것을 발견했습니다. 비신경친화성 대조군 펩타이드 RVM은 siRNA를 간으로 전달했습니다. ANTIER 29를 투여한 마우스는 뒷다리에 결함을 보였다.

스크램블 앤메로 처리된 Clasping Controlled Mouse는 난간을 협상할 수 있었지만 MARE 29에 대해 anme로 처리한 후 이 분석에서 경미한 결함을 보였습니다. 발자국 분석(footprint Assay)에서, 처리된 마우스에서 보폭 길이가 현저하게 짧아졌습니다. 또한, Micro NNA 기반 치료제 개발을 위해 29A 중반 및 29B 중반 수치가 하향 조절되었음을 QR tpcr을 통해 확인했습니다.

항 microRNA의 뇌 특이적 전달은 혈액 뇌 장벽으로 인해 어려운 문제입니다. 여기에 제시된 기술을 사용하면 항 microRNA를 뇌로 전달하는 기존의 방법을 피할 수 있습니다. 이 방법은 microRNA의 knockdown을 기술적으로 실현 가능하게 하고 조직 특이성을 증가시킵니다.