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침략 유학을위한 처리 제거하는 새로운 접근하고 "낙오자"효과 초파리
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JoVE Journal Neuroscience
A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the “Loser” Effect in Drosophila melanogaster

침략 유학을위한 처리 제거하는 새로운 접근하고 "낙오자"효과 초파리

Full Text
10,145 Views
07:19 min
December 30, 2015

DOI: 10.3791/53395-v

Severine Trannoy1, Budhaditya Chowdhury1, Edward A. Kravitz1

1Department of Neurobiology,Harvard Medical School

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

과일 동안 행동 패턴은 역학 싸움, 관찰 및 관련 학습과 기억은 실험 조건에 의해 영향을 받는다, 싸움을 비행. 여기에 제시된 프로토콜은 전체 실험 기간 동안 파리의 처리를 제거하는 새로운 절차를 설명합니다. 이 싸움 역학을 개선하고 강력한 "패자"효과의 형성을 할 수 있습니다.

이 방법의 전반적인 목표는 행동 절차에서 파리 취급을 제거함으로써 초파리, 멜라닌, 가스터에서 패자 및 승자 효과의 형성을 도입하는 것입니다. 실험실 환경에서 수행되는 대부분의 동물 행동 연구는 동물을 다루는 것과 관련이 있습니다. 동물을 다루는 것은 일반적으로 동물에게 스트레스를 유발하고 스트레스는 스트레스가 많은 동물을 다루지 않기 위해 수행하려는 행동 연구를 방해할 수 있습니다.

우리는 초파리에 대한 공격성 연구를 위한 새로운 챔버를 개발하여 실험 전, 실험 중 또는 실험 후에 동물을 다루는 것을 완전히 제거했습니다. 이 새로운 챔버를 사용하여 우리가 측정한 모든 행동 매개변수가 더 나은 것으로 판명되었습니다. 이 방법을 사용하여 개인의 행동 생존 가능성을 최소화합니다.

명확한 지배 관계를 형성하는 데 필요한 시간을 단축하고 강력한 패자 및 승자 심리를 유도할 수 있었습니다. 이 챔버는 사용하기 쉬우며 다양한 초파리의 행동을 연구하는 데 다용도로 사용할 수 있습니다. 실험을 시작하려면 섭씨 25도, 상대 습도 50%의 12시간 라이트 다크 사이클 인큐베이터에서 플라이 스톡을 키우고 유지합니다.

다음으로, 신선한 파리 음식이 녹을 때까지 가열하여 절연 바이알을 준비합니다. 파스티 피펫을 사용하여 약 1.5ml의 녹은 파리 식품을 하나의 빈 유리 시험관에 옮기고 미세한 페인트 브러시로 식품을 응고시킵니다. 스톡 바이알에서 후기 수컷 번데기를 부드럽게 꺼내 갓 준비한 음식이 들어 있는 시험관 옆에 놓습니다.

면으로 절연 바이알을 닫고 절연 바이알을 인큐베이터에 보관하십시오. 격리 후 파리는 칠할 준비가 되었습니다. 이산화탄소로 파리를 마취한 다음 미세한 이쑤시개로 파리를 마취하십시오.

흉부에 아크릴 페인트를 한 작은 점을 찍고 머리, 날개, 복부 또는 다리에 페인트를 칠하지 마십시오. 페인트를 약 10초 동안 건조시키고 파리를 원래의 격리 바이알로 부드럽게 다시 옮깁니다. 분리 바이알을 인큐베이터에 다시 넣습니다.

신선한 파리 음식이 녹을 때까지 가열하여 장치 준비를 계속하십시오. 후방 피펫을 사용하여 0.8ml의 음식을 나사 뚜껑 바이알의 뚜껑으로 옮기고 음식을 식힙니다. 음식이 식으면.

신선한 이스트 페이스트를 한 방울 떨어뜨려 음식 컵 표면 중앙에 바릅니다. 매번 사용하기 전에 장치와 개별 전투실을 물로 씻고 종이 타월로 말리십시오. 다음으로, 음식 컵에 퍼티 한 방울을 바르고 각 전투실의 중앙에 놓습니다.

장치 덮개로 전투실을 덮으십시오. 덮개가 있는 장치를 광원 아래에 놓고 구조물 위에 비디오 카메라를 설치합니다. 각 전투실에 플라스틱 칸막이를 삽입하여 행동 실험을 시작하십시오.

격리 튜브에서 면 플러그를 제거하고 장치 측면의 열린 구멍 아래에 튜브를 놓습니다. 파리가 음의 지리 축으로 전투실에 들어갈 수 있도록 합니다. 그런 다음 슬라이딩 벽을 닫습니다 파리가 챔버에 들어간 후 절차를 반복하여 두 번째 플라이를 장치 반대쪽의 전투실에 도입합니다.

그런 다음 장치를 조명이 켜진 비디오 녹화 위치로 다시 놓습니다. 비디오 녹화를 시작하고 플라스틱 칸막이를 제거하여 파리가 패자 효과 실험을 위해 상호 작용할 수 있도록 합니다. 강력한 지배 관계를 형성하기 위해 20분 동안 첫 번째 전투를 기록하십시오.

20분 후, 플라스틱 칸막이를 전투실로 부드럽게 교체하여 파리를 분리하고 비디오를 중지합니다. 따라서 강한 패배자 심리를 유도하기 위해, 첫 번째 싸움에서 파리가 지배 관계를 확립하고 유지하도록 한 다음, 파리를 분리하기 위해 칸막이를 삽입할 때 파리의 방해를 최소화해야 합니다. 10분 동안 휴식을 취한 후 녹음을 시작하고 플라스틱 칸막이를 부드럽게 제거합니다.

파리가 20분 더 상호 작용할 수 있도록 내버려 둡니다. 20분 후에 녹음을 중지하고 실험을 마칩니다. 첫 번째 싸움을 관찰하기 위해 새로운 방법을 사용하기 전에 설명한 절차를 반대로 하여 음의 지리축으로 행동 챔버에서 파리를 제거합니다.

평균적으로 첫 번째 만남은 2분 후에 관찰됩니다. 첫 번째 런지는 4분 후에 발생하며, 파리는 8분 후에 우세 관계를 형성합니다. 남은 12분 동안에는 지배 관계가 강화됩니다.

승자는 점점 더 돌진하고 패자는 점점 더 후퇴합니다. 새로운 접근 방식은 두 번째 싸움에서 두 번째 싸움에서 진 패배자의 비율인 패자 효과를 정량화하는 데 사용되었습니다. 이전의 패자가 두 번째 시합에서 익숙한 승자와 짝을 이루거나 익숙하지 않은 승자와 짝을 이룰 때 상당한 효과가 관찰됩니다.

이 절차를 시도하는 동안, 사회적으로 고립된 상태에서 자라고 있던 생후 6-7일 된 수컷 파리를 사용하여 공격성을 수행하는 것을 기억하는 것이 중요하다. 따라서 일단 이 챔버를 마스터하면 전혀 다루지 않고도 파리를 쉽게 소개, 모니터링, 상호 작용 및 분리할 수 있으며 이는 강력한 패자 효과를 유발합니다. 첫 번째 싸움 후에 파리를 분리하기 위해 칸막이를 사용하면 실험 프로토콜에 변화를 줄 수 있습니다.

승자를 유지하고 두 번째 싸움에서 다른 상대와 짝을 이루어 승자 효과를 유도할 수 있습니다.약간의 조정으로 동일한 방을 사용하여 초파리의 구애, 운동 및 기타 사회적 행동을 연구할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 공격성 분석을 수행하는 방법과 실험 전과 실험 중에 파리를 조작하지 않고 느슨한 효과를 유도하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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