Name: 암 세포 회전 타원체 분석은 3D 설정에 침략을 평가하기 위해 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 34 s
Description: 학습하세요 암 세포가 3D 매트릭스로 침략하는 과정을 타원체 배양을 통해 평가하는 방법을. 생리학적으로 관련성 높은 환경에서 세포 침략 역학을 연구하고 잠재적 치료 표적을 식별할 수 있습니다.

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타원체의 1 세대 <ol><li> PBS를 사용하여 70 %의 합류 ~의 부착 암 세포 배양을 분리하여 드롭 문화를 걸려 위해 단일 ​​세포 현탁액을 준비 0.05 % 트립신 EDTA 용액에 노출 된 다음에 씻으십시오. <ol><li> 세포 배양 배지와 트립신 용액을 중화하고 세포 현탁액의 분취 량을 사용하여 세포를 카운트. 주 : 세포주에 달려 특정 세포 배양 배지는 테스트중인. 세포 배양 배지는 일반적으로 DMEM + 10 % FBS이고, ATCC 미디어 권장 사항을 따르십시오. 자세한 내용은 표 재료에서 찾을 수있다. </li><li> 세포 배양 배지를 20 μL 방울 당 500 ~ 1,000 세포 시딩 있도록 희석을 수행한다. </li></ol></li><li> 10cm 접시를 취득하고 아래로 멸균 PBS의 5 mL를 추가 할 수 있습니다. 참고 :이 단계는 교수형이 증발에서 떨어 보호합니다. 저비용 &quot;세균 등급&quot;요리, 세포 배양 등급 요리 대신에 사용될 수있는 바와 같이, 세포를 계속하지 않을 것이다문화 표면 역할을합니다. </li><li> 뚜껑의 내면에 희석 된 세포 현탁액 20 μL 방울을 전송하는 멀티 채널 피펫을 사용한다. <ol><li> 피펫 (40)는 10cm 접시의 뚜껑에 (8 방울의 5 행)을 삭제합니다. </li></ol></li><li> 배양 접시 위에 뚜껑과 장소를 반전. 스페 로이드를 생성하기 위해 72 시간 동안 37 ℃에서 배양 매달려 드롭 부화. <ol><li> 자신감, 아직 통제 된 방식으로 뚜껑을 뒤집습니다. 참고 : 너무 빠르거나 너무 느린 뚜껑을 반전하면 물방울이 이동하는 원인이 될 수 있습니다. 다른 소형 응집체를 생성하기 위해 72 개 이상의 시간을 요구할 수 있지만 어떤 세포주는 48 시간 이내에 구 상체를 형성 할 수있다. </li></ol></li></ol> 3D 매트릭스에 타원체 2. 임베딩 <ol><li> 밤새 스페 로이드를 매립하기 전에 4 ℃에서 성장 인자 - 감소 된 기저막 물질의 분취 량을 해동. <ol><li> 옵션 : 사전에 ECM와 레이어 우물은 조직 cultu 잠재적 회전 타원체의 상호 작용을 방지하기 위해표면 재. <ol><li> 24 웰 플레이트에 웰 당 ECM의 피펫 200 μL. </li><li> ECM은 전체 잘 표면을 커버하도록 판을 기울. </li><li> 조심스럽게 피펫으로 초과 ECM을 제거합니다. </li><li> 3 시간 실온에서 또는 4 박 ° C에서 : 우물이 건조 될 때까지 판을 품어. </li></ol></li></ol></li><li> 조직 배양 접시의 뚜껑을 틸팅 및 미디어를 풀링하여 타원체를 수집한다. 1.5 ml의 microcentrifuge 관에 회전 타원체와 미디어를 전송합니다. </li><li> 타원체가 microcentrifuge 관의 바닥에 정착하는 10 분을 허용합니다. 타원체는 눈으로 볼 수 있어야합니다. </li><li> . 감기 (4 ° C를) 100 ㎕ 내가 별도의 사전 냉각 튜브에 콜라겐 유형의 기저막 재료의 100 μl를 혼합 조기 응고에서 중 젤을 방지하기 위해 4 ° C에서 혼합물을 유지합니다. <ol><li> 작은 볼륨을 전송하는 경우 사전 냉장 피펫 팁을 사용합니다. </li><li> 때주의를 줘I가 기포 형성을 방지하기 기저막 재료 및 콜라겐 형 혼합. 주 :이 겔에 매립 될 경우 기포 프로토콜 뒷부분 이미징을 방해 할 수있다. </li></ol></li><li> microcentrifuge 관의 40 μL 바닥 부분에서 타원체를 대기음, 나는 혼합물을 콜라겐 기저막 재료 / 유형과 결합. 혼합 할 때 기포 형성을 방지하기 위해주의해야합니다. 주 : 용액 100 μL 콜라겐 유형 I 및 타원체 40 μL 4 3D 배양 독립적 충분한 물질을 생성, 100 μL 기저막 재료 함유. 이 스케일 업 또는 다운 할 수 있습니다. </li><li> 피펫 24 웰 플레이트에 웰의 중심에 점성 혼합물의 40 μl를 삭제합니다. 웰의 측면에 실행 혼합을 방지하기 위해 플레이트를 수평으로 유지. 참고 : 24 웰 플레이트에 하나의 열 - 4 웰 - 각 조건 테스트 할 것을 권장합니다. </li><li> 판 INT 배치OA 37 ° C 배양기에서 30 분 동안 그대로 둡니다. 3D 문화는이 기간 동안 중합합니다. </li><li> 서서히 세포 배양 배지 1 ㎖로 3 차원 배양 잠수함. <ol><li> 또한 겔 중합을 촉진하기 위해 우물에 그것을 추가 할 때 미디어가 따뜻한 있는지 확인합니다. </li><li> 중요한 단계 : 부드럽게 3D 문화에 미디어를 추가 할 수 있습니다. 우물에 너무 빨리 미디어를 피펫은 조직 배양 표면에서 3D 문화의 분리로 이어질 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 3. 모니터링 및 회전 타원체 침공 분석 <ol><li> 연구자에 의해 결정 시간 지점에서 주변의 3D 매트릭스로 회전 타원체에서 이미지 침공. 20 배 대물 렌즈와 거꾸로 현미경을 사용하여 사진을 획득. 주의 : 이상적 시간 - 포인트는 테스트되는 세포주에 따라 다를 것이다. 더 침습적 세포주는 곧 도금 후 타원체에서 자신의 출구를 시작하고, 따라서, 초기 사진을 취할 것입니다도금 후 몇 시간 이내의. 일반적으로, 사진은 (도금 후) 0 시간, 24 시간, 48 시간에서 가져옵니다. 침략은 일반적으로 도금 후 24 시간 내지 48을 마칩니다. </li><li> 이미지 J. 같은 영상 분석 소프트웨어를 사용하여 침입 능력을 정량 <ol><li> 회전 타원체의 가장자리에서 셀 거리로 침략을 분석합니다. <ol><li> 반경 및 / 또는 최대 침략 거리를 표시하기 위해 직선 그리기 도구를 사용합니다. </li><li> 길이 측정을 표시하는 &quot;측정&quot;을 상단 메뉴의 &quot;분석&quot;을 선택한 후 클릭합니다. </li></ol></li><li> 회전 타원체 외부 총 침략 영역으로 침략을 분석합니다. <ol><li> 회전 타원체 및 / 또는 총 침략 영역의 경계를 추적 자유형 그리기 도구를 사용합니다. </li><li> 지역 측정을 표시하는 &quot;측정&quot;을 상단 메뉴의 &quot;분석&quot;을 선택한 후 클릭합니다. </li></ol></li><li> 이미지의 스택에 대한 측정을 만드는 데 투자 수익 (ROI) 관리자 도구와 같은 플러그인을 사용합니다. </li></ol>
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저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

본 연구는 회전 타원체 침윤 분석 (표 1) 암 세포주 패널의 성능을 평가 하였다. 일반적으로, 우리는 회전 타원체 형성 세포 간 접합이 존재 타원체 형상 구조의 형성을 촉진 더 상피 생긴 세포주에서 향상되는 것을 발견한다. MDA-MB-231 세포와 같은 상피 - 간엽 전환을받은 알려진 세포주, 그들의 감소 E-, N- 및 P-cadherin의 발현 16에 가장 가능성이 매달려 드롭 문화 타원체를 형성하지 않는다. 회전 타원체 침공 분석의 단계 중 일부는 프로토콜에 가까운 부착을 필요로한다. 그것은 기저막 콜라겐 혼합물을 피펫 팅 할 때 빨리 작동하도록 절대적으로 중요하며, 이것은 하나의 상온에서 고화하기 시작하므로 작동하면서 4 ° C 부근의 혼합물을 유지하는 것이 중요하다. 또한, 수용성 콜라겐 제제는 산성이며, 되어온 겔에 의해 유도수산화 나트륨 염 및 소량의 이온을 37 ℃로 가온 하였다. 우리 손에 단순히 기저막 물...

그것은 암 세포의 운동성이 같은 행동이 순환 시스템 1에 기저막과 항목을 통해 침입을 용이하게 주어진, 전이 가능성의 예측이라고 설정됩니다. 운동성에 가장 연구가 광범위하게 3 차원 매트릭스에서 세포의 이동 것 실제로 방법이 동일 세포보다 대표 인 것으로 인식되고있다하더라도 세포가, 2 차원 (2D) 환경에서 동작하는 방법에 초점을 맞추었다 생체 2에서 작동합니다. 3 차원 배양 시스템은 점차 성장 역학 및 약물 감수성 3, 세포 형태의 범위 셀룰러 동작을 연구하기 위해 사용된다. 3 차원 환경의 컨텍스트 내에서 암 세포 침입을 모니터링하는 욕구는 3 차원 세포 내로 이러한 타원체 매립 하였다 매달려 드롭 배양법 (4)를 통해 3 차원 세포 집합체 (타원체)의 생성을 포함하는 이전에 확립 된 기술을 합성하게되었다 매트릭스 (ECM) 콜라겐과 기저막 재료 (5)으로 구성. 이 방법은 쉽게 실험 다양한 조건 하에서 내습과 비교하기 위해 이용 될 수있는 간소화 된 방법을 제공함으로써 이전에 확립 된 기술을 개선하고자한다. 체외에서 세포 운동성을 평가하는 전통적인 방법은 스크래치 상처 분석 및 트랜스 웰 분석 (6)이다. 전 분석은 2 차원 환경에서 세포 운동성을 도시 한 생체 침입에 중요한 다양한 기능, 예를 들면 프로테아제 활성 7 그러므로 독립적이다. 트랜스 웰 분석은 웰 인서트가 대향 막 표면에 세포의 모양, 즉 ECM 기재하지만, 단 하나의 파라미터를 더 모델 세포 침윤 코팅 할 수있을 때를 측정하고, 세포 침윤의 많은 뉘앙스 따라서 용이하게 관찰 할 수없는된다. 이러한 기술, 암세포 침윤 타원체 분석 (도 1 &lt;대조적/ 강해&gt;) 만 생리 관련이없는 환경에서 세포 침윤의 실시간 모니터링을 허용하지만, 또한 이러한 집단 대 개인 세포 이동 8로서 가시화 될 중요한 세포주 특정 기능을 허용한다. 이 방법은 표준 3 차원 배양 성장 분석보다 이점을 제공한다. 세포는 이러한 제한이 해제 된 후 침입하는 인센티브되도록 매달려 드롭 방법을 통해 세포 응집체의 생성은 처음에 세포의 움직임을 제한한다. 그 제약 조건이 해제되면 또한, 세포 출구는 편리하게 정량 할 수있는 일정한 방향으로 진행됩니다. 암세포 타원체 분석법에 가장 널리 사용되는 재료는 ECM의 Matrigel하고 이러한 구성 요소들의 각각은 전이 거동에 영향을 미치는 중요한 역할과 구별 갖는 경우 타입 I 콜라겐. 마트 리겔은 Engelbreth-Holm이 운집 마우스 육종 세포에 의해 생산 된 단백질의 분비 혼합물이며, baseme에 충실이러한 라미닌, entactin 및 제 4 형 콜라겐 (9)와 같은 NT를 막 단백질. 이 때문에 마트 리겔은 이제부터라고 &quot;기저막 물질.&quot;이 기저막 물질은 세포의 행동 (11) 상에 다양한 효과를 발휘하는 다른 많은 단백질 외에 암세포 침윤 (10) 중 접착 인테그린에 필요한 필수적인 리간드를 제공한다. 비교하면, 일반적으로 힘줄 등 치밀한 콜라겐 구조 (12)의 산으로부터 제조 다이제스트 I 형 콜라겐은, 본체의 결합 조직과 기질지지 조직과 기관의 주요 구조적 요소로서 기능 훨씬 단순 매트릭스 물질이다. 이것은 콜라겐의 물리적 특성은 세포 운동성의 기능의 수를 조절할 수 있음을 입증되었다; 예를 들어, 종양 - 기질 계면에서 콜라겐 섬유의 배향은 기질 (13)에 침입 할 때 그 다음에 피 브릴을 따라 이동하는 암세포를 허용. 여기에 제시된 분석에서는 두 종류의 난 콜라겐과 기저막 재료는 3D 암 세포 - 기질 상호 작용을 연구하는 도구로 사용된다. 세포를 3 차원 매트릭스에 매립 한 후 침입이 모니터링 될 수 제어 경로의 억제 또는 자극의 효과. 세포 매달려 방울 또는 긴 치료가 침공을 조절해야합니다 여부에 따라 3D 문화로 전송시 성장하는 동안 전처리 할 수​​ 있습니다. 짧은 치료를 들어, 약물이 컬렉션 후 타원체 서스펜션뿐만 아니라 셀에 충분한 약물 노출을 용이하게하기 위해, 3 차원 배양을 둘러싸 매체와 혼합하는 것을 추천합니다. 다음에, 정상 또는 종양 - 관련 기질 세포는 종양 세포의 침윤을 변조에서의 역할을 평가하는 방법 또는자가 분비 및 주변 분비 신호의 영향 세포 행동 결정하는 매트릭스 물질과 혼합 될 수있다. 이 아이디어는 연구에 나타내었다 곳 (COL)의 공 배양암 매달려 방울의 내피 세포에 회전 타원체 (14) 내의 혈관 네트워크되었다. 암세포 침윤이 다른 기판 (15)에 의해 영향을 마지막으로, ECM 성분은 또한 변경 될 수있다. 아래에 제시된 방법에 따라서 다양한 조건 하에서 암 세포의 침윤을 평가하기위한 프레임 워크를 제공한다. 일반적으로 모든 세포주가 걸려 방울에 타원체를 생성하고 상피 보이는 세포주는 일반적으로 일반 구를 형성하지 않는 것이 발견되었다.

<table><tbody><tr><td>Matrigel 성장 인자 감소</td><td>Corning</td><td>CB-40234</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 타입 I, 랫 테일, 100 mg</td><td>Millipore</td><td>08-115</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 중간&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>0.05% 트립신-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청, 열 비활성화</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-12</td><td></td></tr><tr><td>100mm TC 처리 접시</td><td>Corning Incorporated</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>24웰 TC 처리 플레이트</td><td>NEST 생명공학학</td><td>702001</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX-71 도립 현미경</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>세포주는 RPMI + 10% FBS에서 mantained 된 BT-474 및 LNCaP 세포를 예상하여 DMEM + 10% FBS에서 유지되었습니다.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

암 세포 회전 타원체 분석은 3d 설정에 침략을 평가하기 위해

A Cancer Cell Spheroid Assay to Assess Invasion in a 3D Setting

암 세포주의 침습적 특성은 전이 가능성과 상관관계가 있는 것으로 생각됩니다. 그러나 대부분의 기존 분석은 3차원 환경에서 이러한 침입 특징을 검사하지 않으며 결과 데이터는 생물학적 적용 가능성이 감소합니다. 여기에서는 생리학적으로 관련된 환경에서 세포주의 침습 능력을 시각화하기 위한 접근 방식이 제시됩니다. 암세포 스페로이드 침입 분석은 먼저 중력을 활용하여 세포 배양 접시의 뚜껑에 매달려 있는 배지 방울 내에서 스페로이드를 생성합니다. 다음으로, 이러한 스페로이드는 기저막 재료와 I형 콜라겐의 혼합물로 구성된 3D 매트릭스에 내장되어 있습니다. 그런 다음 스페로이드에서 주변 기질로의 암세포 침투를 시간이 지남에 따라 모니터링합니다. 여기에 설명된 방법은 서로 다른 세포 유형의 공동 배양, 약물/억제제의 포함 또는 세포외 기질(ECM) 구성 요소의 변형 후 침입을 조사하기 위해 수정할 수 있습니다.

회전 타원체 침입 분석을 이용하여 (도 1), 암 세포주의 패널뿐만 아니라, 기저막 재료 및 타입 I 콜라겐으로 이루어진 3 차원 매트릭스로 주입 후에 나타나는 셀 출구의 양 구 상체를 형성하는 능력에 대해 시험 하였다 (표 1). 이 결과는 모든 암 세포주가 시험 관내 상피 형태를 갖는 세포주 정규 매끄러운 골재를 생산하는 경향이 잘 형성된 타원체를 생성 함을 입증한다하지. 검정에 침입하는 상이한 세포주의 능력은 또한 변수였다. 4T1, E0771, 및 U-87 MG 같은 침습적 인 것으로 확립 세포주를 분석에서 회전 타원체 출구의 높은 정도를 나타낸다. 예상 된 바와 같이 덜 공격적인 세포주, MCF-7과 같이, BT474 및 MCF10DICS.com가 침입하지 않았다. 예기치 그러나, A-431, 357 COLO P​​L 세포 침윤에 의해 디스플레이의 부재였다. 이들 중 일부에 대한 데이터의 일례선 (그림 2) 표시...

이 방법은 스페로이드에서 주변 3D 매트릭스로의 암세포 침입을 평가합니다. 스페로이드는 행잉 드롭 배양 방법을 통해 생성된 다음 기저막 재료와 I형 콜라겐으로 구성된 매트릭스에 내장됩니다. 이후에 스페로이드 외부로의 침입이 모니터링됩니다.

암 세포 회전 타원체 분석은 3D 설정에 침략을 평가하기 위해

The invasive nature of cancer cell lines is thought to correlate with their metastatic potential.  Most traditional assays, however, do not examine these ...

이 암세포 스테로이드 침습 분석의 전반적인 목적은 세포 덩어리(cellular bolus)로부터 주변의 3차원 매트릭스로 암세포가 침습하는 과정을 모니터링하는 것입니다. 이 방법은 세포 침습을 촉진하거나 억제하는 조건의 식별과 같이 암 생물학의 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 세포가 침습하는 방식의 다양한 세부 사항들을 체외(in vitro)에서 보다 생리학적으로 연관된 환경 하에 평가할 수 있다는 점입니다.먼저, 부착성 암세포가 포함된 배양 접시를 인큐베이터에서 꺼냅니다. PBS로 세포를 한 번 세척하고 0.05% trypsin EDTA 1.5 milliliters를 첨가합니다. 그 다음, 세포를 37 degrees Celsius에서 3분 동안 배양합니다.세포가 떨어져 나오면, tryps-처리된 세포를 5 mL 피펫으로 옮겨 단일 세포 부유액을 만들고, 플라스크에 세포 배양액 8.5 mL를 추가합니다. 세포 계수기를 사용하여 세포 부유액의 수를 셉니다. 세포 부유액을 20 µL당 500~1000 cells가 되도록 희석합니다.배양 배지에서 멀티채널 피펫을 사용하여 10 cm 디쉬 뚜껑의 내면에 20 µL 방울을 형성합니다. 피펫팅을 통해 8개 방울씩 5줄로 총 40개의 방울을 만듭니다. 다음으로, 10 cm 디쉬 바닥에 멸균된 PBS 5 mL를 피펫팅합니다. 뚜껑을 조심스럽게 뒤집어 10 cm 디쉬 위에 덮습니다.그 다음, 스테로이드를 형성시키기 위해 현수 적하 배양물을 37°C, 5% CO2 조건에서 최대 72시간 동안 배양합니다. 3D 매트릭스를 생성하기 위해, 성장 인자가 포함된 reduced basement membrane solution의 분주액을 4°C에서 하룻밤 동안 해동합니다. 그런 다음 10 cm 디쉬의 뚜껑을 기울여 액적들을 한데 모아 스테로이드를 수집합니다.배지를 1.5 milliliter 원심분리 튜브로 옮기고, OID가 바닥에 가라앉을 수 있도록 10분 동안 둡니다. 다음으로, 미리 냉각된 1.5 milliliter 원심분리 튜브에 해동된 basement membrane 솔루션 100 microliters와 2.3 milligrams per milliliter의 차가운 Type one collagen 솔루션 100 microliters를 혼합합니다.세포외 기질 또는 ECM 혼합물을 얼음 위에서 배양합니다. 1.5 mL 원심분리 튜브 바닥에서 암세포 스테로이드 40 µL를 피펫으로 취해 ECM 혼합물과 결합시킨 후, 이 점성 혼합물을 24웰 세포 배양 플레이트의 각 웰 중앙에 40 µL씩 떨어뜨립니다. 플레이트의 수평을 유지한 상태로 37 °C 세포 배양 인큐베이터에 넣고 30분 동안 그대로 둡니다.3D 배양이 중합되면, 각 웰에 따뜻한 세포 배양액 1 mL를 천천히 피펫팅하여 배양물을 잠기게 합니다. 그 후 3D 배양물을 인큐베이터로 옮깁니다. 도립 현미경의 20배 대물렌즈를 사용하여 미리 정해진 시점에 침습하는 암세포를 관찰합니다.디쉬를 37 °C에서 배양합니다. 데이터 분석을 위한 이미징 시점 사이마다, Image J와 같은 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 스페로이드 가장자리로부터의 세포 거리를 측정함으로써 세포의 침습 능력을 정량화합니다. 직선 그리기 도구를 사용하여 반지름을 표시합니다.그런 다음 상단 메뉴에서 analyze를 클릭하고, 이어서 measure를 클릭하여 길이 측정값을 표시합니다. 스페로이드의 침습 영역을 결정하려면, freehand draw 도구를 사용하여 스페로이드의 경계와 침습 세포의 영역을 각각 따라 그립니다. 다시 상단 메뉴에서 analyze를 클릭하고, 이어서 measure를 클릭하여 면적 측정값을 표시합니다.다양한 암 세포주 패널을 테스트한 결과, 대부분의 세포주가 hanging drop 배양법을 통해 스페로이드를 형성하는 것이 관찰되었습니다. 그러나 일부 세포주는 이 배양법을 사용했을 때 스페로이드를 형성하지 못했습니다. 또한, 스페로이드를 형성하는 암 세포주 그룹 내에서도 주변 ECM으로 침습하는 능력에 차이가 있었습니다.이러한 데이터는 테스트한 여러 세포주에서 24시간까지 세포 침습이 뚜렷해지는 것을 시각적으로 통해 확인되었습니다. 이 기술을 숙달하면 5일에 걸쳐 단 몇 시간의 작업만으로 수행할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때는 신속하게 작업하고 3D 배양을 구성할 혼합물에 공기 방울이 갇히지 않도록 주의하는 것이 중요합니다. 이 기술은 약물, 세포 공동 배양 또는 서로 다른 ECM 성분이 암세포 침습에 미치는 영향을 조사하도록 수정하여 적용할 수 있습니다.이 영상을 시청한 후, 여러분은 3D 환경에서 암세포 침습을 평가하고 정량화하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

a-cancer-cell-spheroid-assay-to-assess-invasion-in-a-3d-setting

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

양적 성장 인자 (TGF) - β - 유도 3 차원 콜라겐 젤의 침공을 변형 측정하는 분석이 설명되어 있습니다. 이 분석은 유방암 개발의 다른 단계를 나타내는 세포 라인의 MCF10A 시리즈의 활용합니다. 이 방법은 다른 세포 라인과 함께 사용하는 다른 가능성 activators 또는 침해의 억제제를 조사하기 위해 사용될 수 채택 수 있습니다.

TGF - β - 유발 침략을 측정하는 회전 타원체 분석

이 동영상은 3차원 종양 스페로이드와 T 세포 공동 배양을 확립하는 방법을 보여줍니다. 종양 스페로이드를 함유하는 마이크로웰이 있는 아가로스 캐스트를 준비한 후 T 세포를 첨가합니다. 배양 후 이 설정을 통해 통제된 3차원 환경에서 T 세포와 종양 스페로이드의 상호 작용을 연구할 수 있습니다.

종양 스페로이드에 침투하는 T 세포의 3차원 공동 배양 모델

출처: Guyon, J., et al. 교모세포종에 대한 3D 스페로이드 모델. J. Vis. Exp. (2020)이 비디오는 종양 세포 침입의 3차원 스페로이드 모델의 생성을 보여줍니다. 스페로이드는 인간의 뇌종양 세포에서 형성되며 콜라겐 매트릭스에 내장되어 있습니다. 스페로이드 말초의 종양 세포는 침습적 표현형을 채택하여 프로테아제를 분비하여 콜라겐을 분해하고 전진하여 주변 기질을 침범합니다.

종양세포 침입의 3차원 스페로이드 모델 생성

주변 정상 조직의 침입은 악성 종양을 정의하는 특징입니다. 우리는 여기에서 여러 진행성 인간 암 모델로 예시된 자연 3D 바이오매트릭스로의 침입에 대한 간단한 반자동 마이크로 플레이트 분석을 제공합니다.

3 차원 (3D) 종양 회전 타원체 침공 분석

종양 미세 환경은 암 성장과 침략의 필수적인 부분입니다. 암의 진행을 모방 하기 위해 생물학적으로 관련 된 인간 매트릭스가 필요 합니다. 이 프로토콜은 인간 평활 근 종 기반 매트릭스를 적용 하 여 시험관 내 3 차원 세 포스 페 로이드 침입 검정에 대 한 개선을 도입 한다. 이 프로토콜은 또한 컴퓨터 기반 세포 침입 분석을 소개 합니다.

3 차원 세 포스 페 로이드 침입 분석에서 완전 한 인간 종양 기반 매트릭스

이 프로토콜의 목표는 면역 형광, 전사와 같은 다른 분석 시스템에서 해결 될 수있는 종양 벌크와 같은 환경에서 암 관련 섬유 아세포 (CAFs)의 분화를 연구하는 3D 체외 모델을 확립하는 것입니다. 분석 및 생명 세포 화상 진찰.

3D 스페로이드 모델은 시험관 내 암 관련 섬유아세포 분화 및 침입을 위한 보다 생리적 시스템으로

제시된 접근은 3D 스페로이드 ascy 및 T 세포 세포 독성에 있는 암 세포 침략을 동시에 평가합니다. 스페로이드는 비계가 없는 아가로즈 멀티 마이크로웰 캐스트에서 생성됩니다. I형 콜라겐 매트릭스에 공동 배양 및 포함은 암세포 침입 및 T세포 중재 세포 독성을 모니터링할 수 있는 동일한 장치 내에서 수행된다.

3D 배양에서 암 세포 침략 및 T 세포 세포 독성 을 감시

여기에 제시된 스페로이드 이미징 장치의 제조를 위한 프로토콜이 있습니다. 이 장치는 암 세포 스페로이드의 동적 또는 세로 형광 이미징을 가능하게합니다. 이 프로토콜은 또한 암세포 침입의 분석을 위한 간단한 화상 처리 절차를 제공합니다.

3D 스페로이드 모델에서 암세포 침입의 시간 해결 형광 화상 진찰 및 분석

침습은 암의 발병과 진행에 있어 중요한 생물학적 현상입니다. 이 과정은 비종양 세포와 종양 미세환경의 구성 요소에 의해 영향을 받습니다. 이 연구의 목적은 3차원(3D) 배양을 사용하여 종양 세포 침입을 in vitro 분석하는 대체 방법을 설명하는 것입니다.

3D 배양의 In vitro 세포 침입을 분석하기 위한 대안 전략

여기에서는 3차원(3D) 콜라겐 I 매트릭스에서 1차 인간 단핵구 유래 대식세포와 종양 스페로이드의 상호 작용을 조사하기 위한 프로토콜을 제시하며, 미세환경의 용해성 및 물리적 특성이 세포 침입에 미치는 영향을 비교할 수 있습니다.

대식세포-종양 스페로이드 동시 침습 분석

암 전이를 연구하기 위해 이세포성 누화를 캡처하는 3D 암 모델이 매우 필요합니다. 우리의 연구는 침입 및 세포 공간 분포를 연구하는 데 사용할 수 있는 골격 및 골격이 없는 환경에서 이종 다세포 기질-상피의 생성을 제시합니다.

상피암 세포의 스캐폴드가 없는 3D 배양에서 이종다세포 기질 세포(Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion)

학습하세요 암 세포가 3D 매트릭스로 침략하는 과정을 타원체 배양을 통해 평가하는 방법을. 생리학적으로 관련성 높은 환경에서 세포 침략 역학을 연구하고 잠재적 치료 표적을 식별할 수 있습니다.

암 세포 회전 타원체 분석은 3D 설정에 침략을 평가하기 위해

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