Name: 상처 스크래치 분석의 최적화 가용성 담배 연기 추출물에 의한 손상 후 쥐 중간 엽 기질 세포 이동의 변화를 감지 할 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-03T10:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: 배우세요 폐 중간엽 기질 세포의 이동 능력 변화를 담배 연기 추출물로 손상 후 스크래치 분석법으로 정량화하는 방법을. 이 기법은 폐 재생 생물학 연구에 경제적이고 맞춤화 가능한 도구를 제공합니다.

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CSE 손상 분석 개발에 대한 기술적 지원과 이 분석 개발 기간 동안 지원과 조언을 해주신 실험실의 다른 구성원들에게 감사드립니다. 또한 Nicholas Cormier를 지원해 주신 Holy Cross Fenwick Scholar Committee와 Alexander Yeo를 지원해 주신 Holy Cross College Honors 프로그램에 감사드립니다.

참고 : 사용, 말초 폐 조직에서이 연구, 폐 중간 엽 기질 세포 (LR-중간 엽 줄기 세포)의 경우 분리되었다 중 자신의 세포 표면 마커의 발현 (CD45의 NEG, CD31의 NEG, 무서-1 고,는 EpCAM의 NEG) 14, 15을 기준으로 이식편 밖으로 성장 (16), 또는 효소 소화 (17)를 사용하여. 자기편 LR-중간 엽 줄기 세포는 높은 혈당없이 글루타민, 15 % FBS, 1X / 항생제 항진균제, 2 mM의 글루타민 (이제부터는 완전한 미디어)와 DMEM에서 배양하고, 37 ℃, 5 % CO 2에서 배양 하였다. LR-중간 엽 줄기 세포 마이그레이션 분석에 대한 상대적으로 균일 한 성장 특성과 세포 집단을 보장하기 위해 3 ~ 4 번 계대 하였다. 1. 합류 단층을 준비 <ol><li> 표준 100mm 배양 접시에서 중간 엽 줄기 세포를 분리하기 위해, 37 ° C 미리 예열 PBS의 10 ㎖로 세포를 씻어 PBS를 기음과 트립신의 4 ㎖ (0.25 %)를 추가합니다. 37 °의 C 배양기에서 3 ~ 5 분을 품어. C를 대기음5 분 세포를 펠렛하는 원뿔 튜브에 ELL 학생은 300 g에서 완전한 매체와 원심 분리기의 동일한 볼륨을 추가 할 수 있습니다. 주 : 트립신 길어 배양은 세포 표면 수용체를 변경 잠재적 이동에 영향을 미칠 수있다. </li><li> 기음 미디어와 신선한 전체 미디어에 resuspend 세포. 세포를 트리 판 블루 배제 개수를 사용하여 사균을 제외하고 60mm 세포 배양 접시에 완전한 미디어의 4 ml의 50 간엽 기질 세포를 접시. 주 : 세포의 소스에 따라, 테스트는 필요한 세포의 최적의 수를 결정하는 것이 필요할 수있다. </li><li> 플레이트는 최적의 세포 부착과 증식에 90 %의 합류, 중간 엽 줄기 세포에 대한 일반적으로 48 ~ 72 시간까지 세포를 품어. 참고 : 100 % 합류가 자신의 철새 용량을 변경할 수 많은 고정 의존 세포 경험 연락처 억제하기 때문에 사용하지 않는 것이 좋습니다. 이미지 분석 소프트웨어가 갭을 해석하기 때문에 80 % 미만의 합류점과 플레이트 불가능한 포토 초래할 것처음의 둘레의 한 부분으로 세포 사이의 (그림 1D 참조). </li><li> 세포가 90 % 합류에 도달 한 후에, 애플리케이션을위한 적절한 세포를 손상. 수용성 담배 연기 추출 (CSE)에 노출 된 후 세포 손상을 평가하기 위해, 2 분 18 세 이상 뷰 흐너 플라스크에 전체 미디어의 25 ml를 통해 1 켄터키 대학의 연구 담배 (3R4F)에서 연기를 그려 100 % CSE를 생성합니다. </li><li> 전체 미디어에 희석 4 ml의 1~4%의 CSE에서 24 시간 동안 세포를 품어. 배양 후, 4 ㎖의 신선한 완전한 매체와 교체하기 전에, 따뜻한 멸균 PBS의 4 ㎖로 두 번 세포를 씻으십시오. 참고 : 담배 연기 추출물의 높은 농도 (&gt; 5 %)에 손상을 입히는 세포를 실질적으로 합류를 줄일 수 있습니다. </li></ol> 2. 스크래치 만들기 <ol><li> 무균 환경에서 손상된 중간 엽 줄기 세포의 60mm 판에서 뚜껑을 제거하고 AC (예 : 멸균 플라스틱 통치자에 대한) 직선을 마련로스 플레이트의 상부 림. 미디어를 제거하지 않고, 약 5mm 간격 판에서 1-4 병렬 긁힌 자국과 긴 50mm를 만들기 위해 멸균 직선 가장자리에 의해 인도 멸균 200 μL 피펫 팁을 사용합니다. 주 : 직선 에지는 현미경 스테이지에있을 때 판에 필요한 회전 조정의 양을 최소화한다. 이는 상처가 화면에 완전하게 수직 (또는 수평) 표시하는 것이 필수적이다. 60mm 접시에 여러 상처 생성하는 세포 이동을 (데이터는 도시하지 않음)에 영향을 미치는 방식으로 미세 환경을 변경하지 않고, 다른 종류의 세포에 대한 고려 될 수있다. 우물의 가장자리에 성장하는 세포의 변화가 더욱 두드러지고 상처의 균일 한 세대에 영향을 미칠 수 있기 때문에 작은 우물의 사용은 권장되지 않습니다. </li><li> 미디어를 대기음 부드럽게 스크래치의 중심에 부착 세포를 방지하기 위해 미리 예열 전체 미디어의 2 ㎖로 접시를 세척하고, 세포를 제거하기 위해긁힘에 의해 완화 된의. 신선한 전체 미디어의 4 ㎖로 교체합니다. </li><li> 멸균 영구 마커를 사용하여 흠집을 이미징을 간섭하지 않는 위치에서 상기 플레이트의 밑면에 각각 1-4 스크래치 라벨. 참고 : 스크래치 폭의 변화가있을 수 있기 때문에 그것은, 같은 처음부터 이미지가 이전과 마이그레이션 후 비교하는 것이 중요하다. </li></ol> 3. 스크래치의 초기 이미지를 촬영 참고 : 스크래치 분석 여러 판에서 수행되는 경우,이 상처는 다음 접시에되기 전에 하나의 접시에 모든 상처의 초기 이미지를 촬영하는 것이 좋습니다. <ol><li> 분석에 필요한 이미지를 생성하는 카메라 역 위상차 현미경을 사용한다. </li><li> 현미경의 문화 판을 놓고 스크래치 번호를 찾기 위해 낮은 전력 목적 (10X)를 사용하여 1. 배양 접시의 뚜껑에 응축 맑은 IMAG을 방해하는 경우세포의 전자는 37 ℃로 가열 된 무대 세트를 사용합니다. </li><li> 필요한만큼의 화상을 얻기 완전히 수평 시야의 중심에 스크래치를 유지하는 스크래치의 길이의 90 %를 포함한다. 이미지 사이에 중복으로 스크래치의 서로 다른 부분의 이미지를 얻습니다. 참고 : 배양 접시의 가장자리에 빛의 굴절을 분석하기가 불가능하고, 이미지를 overexposes. 따라서, 처음부터 이미지를 가지고 스크래치의 길이의 5 %를 지속되지 않습니다. </li><li> 별도의 폴더에 각각 처음부터 이미지를 저장합니다. </li><li> 반복 흠집 2, 3 3.2-3.4, 4 단계를 반복합니다. </li><li> 즉시 초기 이미징 후 인큐베이터에 접시를 돌려줍니다. 세포가 4-7 시간 동안 이동하자. 참고 : CSE와 손상 중간 엽 줄기 세포를 평가할 때 7 시간이 최적입니다. 세포 증식은 세포의 이동에 대한 혼란 변수로 작용할 수 있기 때문에보다 7 시간 동안 세포를 배양 (아래 옵션 참고 8.2 참조)하지 않는 것이 좋습니다. </li></ol><p클래스 = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. 초기 스크래치 이미지 분석 <ol><li> (재료 / 장비의 표 참조) ImageJ에 다운로드 및 상처 치유 도구 플러그인을 설치합니다. </li><li> ImageJ에있는 이미지 파일을 연 다음 상처 치유 도구 스크래치 영역 (그림 2B)을 계산하기위한 스크래치를 둘러싸고있는 세포를 강조하기 위해 &quot;가장자리 찾기&quot; &quot;프로세스&quot;를 클릭합니다. 다음, &quot;이미지&quot;, &quot;조정&quot;, &quot;컬러 임계 값&quot;과 &quot;임계 값 색상&quot;이라고 표시된 드롭 다운 메뉴에서 값 변경을 클릭합니다 &quot;B &amp; W를.&quot; </li><li> 스크래치 및 세포 앞 사이의 최적의 대비가 달성 될 때까지 &quot;컬러 임계 값&quot;메뉴 내에서 모두 밝기 임계 값 슬라이더를 조정합니다. 이미지의 대비를 만들 수있는 권리 (완전히 검은 이미지) 완전히 바닥 슬라이더를 이동 한 다음 최대 대비를 생성하기 위해 상단 슬라이더를 조정하려는 가장 큰 범위를 허용합니다. </li><li> 천천히 상단 BRI를 조정이미지가 깨끗하게 스크래치 (그림 2C)의 윤곽이 표시 될 때까지 왼쪽에서 오른쪽으로 ghtness 슬라이더. 스크래치의 가장자리가 확인되고 나면, 스크래치 영역을 강조하기 위해, 드롭 다운 메뉴에서 &quot;MRI_Wound_Healing_Tool&quot;를 선택하고 &quot;M&quot;버튼 (즉 ImageJ에 도구 모음에 나타납니다)를 누르면 ImageJ에 툴바에서 &quot;추가 도구&quot;를 클릭 출력 결과 팝 아웃 창 (그림 2D)에서 계산 된 영역입니다. </li><li> 복사 및 엑셀 스프레드 시트에 결과 창 (그림 2E)의 모든 번호를 붙여 넣습니다. 개인의 상처에서 데이터를 분리해야합니다. </li></ol> 5. 스크래치의 최종 이미지를 촬영 <ol><li> 세포 (4-7 시간) 마이그레이션 한 후, 반복 3.2-3.4 단계를 반복합니다. 이미지 각 접시에 세포가 이동하는 동일한 시간을 준 있도록 그들이 긁힌 것과 같은 순서로 판. 주 : 세포를 여러 시점에서 이미징 될 수있는, 그들의 SENSI에 따라모두 온도와 pH를 변화 tivity. 대안 적으로, 생균 촬상 그들이 마이그레이션 실시간으로 세포를 수행하는데 사용될 수있다. </li></ol> 6. 최종 스크래치 이미지 분석 <ol><li> 반복 최종 스크래치 이미지 4.2-4.5 단계를 반복합니다. </li></ol> 7. 마이그레이션을 정량화하기 위해 스크래치 영역을 계산 <ol><li> 각 스크래치의 초기 면적 값을 평균함으로써 평균 사전 이주 면적을 계산한다. </li><li> 평균 사전 이주 영역 (단계 7.1)에서, 단계 6에서 계산 된 각 이미지에 대한 최종 이동 영역을 빼서 이주의 총량을 계산한다. 마이그레이션의 변화를 나타내는 각 스크래치의 값의리스트를 생성한다. </li><li> (즉, 셀의 모든 판과 모든 상처 0 %에 노출 CSE) 동일한 시험 군 내에서 여러 상처로부터 데이터를 풀. 실험 그룹 간의 차이를 분석하기 위해 분산 시험의 분석을 사용한다. </li><li> 세포는 이동 속도가 느린 경우및 (보다 10-12 시간 이하) 긁 후 긴 배양 시간을 필요로, 세포 이동 분석법이 발생하는 기간 중에 증식을 겪고 있는지의 BrdU 또는 듀 혼입 분석 (19)를 결정하기 위해 수행. 상당한 세포 증식을 방지하기 마이그레이션 분석 시간을 선택한다. </li></ol> 선택 (8) <ol><li> 중요한 세포 노화가 찰 절차의 결과로 발생 여부를 평가하기 위해, 19 긁힘 후 미리 정해진 시간에 시험 접시에 노화 관련 베타 - 갈 락토시다 분석을 수행합니다. </li></ol>

<ol><li>Gough, W., Hulkower, K. I., Lynch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative%2C+facile%2C+and+high-throughput+image-based+cell+migration+method+is+a+robust+alternative+to+the+scratch+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol.+Screen%22%5BJournal%5D)">A quantitative, facile, and high-throughput image-based cell migration method is a robust alternative to the scratch assay.</a> J. Biomol. Screen. 16 (2), 155-163 (2011).</li>
<li>Ridley, A. J., Schwartz, M. A., Burridge, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration%3A+integrating+signals+from+front+to+back%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cell migration: integrating signals from front to back.</a> Science. 302 (5651), 1704-1709 (2013).</li>
<li>Sharma, R. R., Pollock, K., Hubel, A., McKenna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+or+stromal+cells%3A+a+review+of+clinical+applications+and+manufacturing+practices%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem or stromal cells: a review of clinical applications and manufacturing practices.</a> Transfusion. 54 (5), 1418-1437 (2014).</li>
<li>Booth-Gauthier, E. A., Du, V., Ghibaudo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome+alters+nuclear+shape+and+reduces+cell+motility+in+three+dimensional+model+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol.+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Hutchinson-Gilford progeria syndrome alters nuclear shape and reduces cell motility in three dimensional model substrates.</a> Integr. Biol. (Camb). 5 (3), 569-577 (2013).</li>
<li>Keese, C. R., Wegener, J., Walker, S. R., Giaever, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+wound-healing+assay+for+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Electrical wound-healing assay for cells in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (6), 1554-1559 (2004).</li>
<li>Pinco, K. A., He, W., Yang, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha4beta1+Integrin+Regulates+Lamellipodia+Protrusion+Via+a+Focal+Complex%2Ffocal+Adhesion-Independent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Alpha4beta1 Integrin Regulates Lamellipodia Protrusion Via a Focal Complex/focal Adhesion-Independent Mechanism.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (9), 3203-3217 (2002).</li>
<li>Fronza, M., Heinzmann, B., Hamburger, M., Laufer, S., Merfort, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+wound+healing+effect+of+Calendula+extracts+using+the+scratch+assay+with+3T3+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Determination of the wound healing effect of Calendula extracts using the scratch assay with 3T3 fibroblasts.</a> J. Ethnopharmacol. 126 (3), 463-467 (2009).</li>
<li>Justus, C. R., Leffler, N., Ruiz-Echevarria, M., Yang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro cell migration and invasion assays.</a> J. Vis. Exp. (88), (2014).</li>
<li>Walter, M. N., Wright, K. T., Fuller, H. R., MacNeil, S., Johnson, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-conditioned+medium+accelerates+skin+wound+healing%3A+an+in+vitro+study+of+fibroblast+and+keratinocyte+scratch+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-conditioned medium accelerates skin wound healing: an in vitro study of fibroblast and keratinocyte scratch assays.</a> Exp. Cell Res. 316 (7), 1271-1281 (2010).</li>
<li>Goetsch, K. P., Niesler, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+scratch+assay+for+in+vitro+skeletal+muscle+wound+healing+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Optimization of the scratch assay for in vitro skeletal muscle wound healing analysis.</a> Anal. Biochem. 411 (1), 158-160 (2011).</li>
<li>Chung, C. A., Chen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cell+sedimentation+on+measuring+chondrocyte+population+migration+using+a+Boyden+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Theor.+Biol%22%5BJournal%5D)">The effect of cell sedimentation on measuring chondrocyte population migration using a Boyden chamber.</a> J. Theor. Biol. 261 (4), 610-625 (2009).</li>
<li>Fabbri, M., Bianchi, E., Fumagalli, L., Pardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+lymphocyte+traffic+by+adhesion+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of lymphocyte traffic by adhesion molecules.</a> Inflamm. Res. 48 (5), 239-246 (1999).</li>
<li>Saez, A., Ghibaudo, M., Buguin, A., Silberzan, P., Ladoux, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rigidity-driven+growth+and+migration+of+epithelial+cells+on+microstructured+anisotropic+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Rigidity-driven growth and migration of epithelial cells on microstructured anisotropic substrates.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (20), 8281-8286 (2007).</li>
<li>Paxson, J. A., Gruntman, A. M., Davis, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+Dependence+of+Lung+Mesenchymal+Stromal+Cell+Dynamics+Following+Pneumonectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Age Dependence of Lung Mesenchymal Stromal Cell Dynamics Following Pneumonectomy.</a> Stem Cells Dev. 22 (24), 3214-3225 (2013).</li>
<li>McQualter, J. L., Brouard, N., Williams, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+fibroblastic+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+lung+are+highly+enriched+in+the+sca-1+positive+cell+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Endogenous fibroblastic progenitor cells in the adult mouse lung are highly enriched in the sca-1 positive cell fraction.</a> Stem Cells. 27 (3), 623-633 (2009).</li>
<li>Hoffman, A. M., Paxson, J. A., Mazan, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung-Derived+Mesenchymal+Stromal+Cell+Post-Transplantation+Survival%2C+Persistence%2C+Paracrine+Expression%2C+and+Repair+of+Elastase-Injured+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Lung-Derived Mesenchymal Stromal Cell Post-Transplantation Survival, Persistence, Paracrine Expression, and Repair of Elastase-Injured Lung.</a> Stem Cells Dev. 20 (10), 1779-1792 (2011).</li>
<li>Beane, O. S., Fonseca, V. C., Cooper, L. L., Koren, G., Darling, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+aging+on+the+regenerative+properties+of+bone+marrow-%2C+muscle-%2C+and+adipose-derived+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impact of aging on the regenerative properties of bone marrow-, muscle-, and adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells.</a> PLoS One. 9 (12), e115963(2014).</li>
<li>Chen, L., Ge, Q., Tjin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cigarette+smoke+extract+on+human+airway+smooth+muscle+cells+in+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Effects of cigarette smoke extract on human airway smooth muscle cells in COPD.</a> Eur. Respir. J. 44 (3), 634-646 (2014).</li>
<li>Itahana, K., Campisi, J., Dimri, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+detect+biomarkers+of+cellular+senescence%3A+the+senescence-associated+beta-galactosidase+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods to detect biomarkers of cellular senescence: the senescence-associated beta-galactosidase assay.</a> Methods Mol. Biol. 371, 21-31 (2007).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

여기에 설명 된 프로토콜을 수행하고 스크래치 시험 법을 정량적으로 분석 할 수있는 견고하고 표준화 된 방법을 제공한다. 간단한 스크래치 분석은 정기적으로 세포의 이동을 조사하는 연구의 다양한 분야에서 사용된다. 그러나 전통적으로 스크래치 분석은 재현성 7,10에 문제하게되었다 표준화 된 설정 및 정량 프로토콜을 결여하고있다. 변형 및 스크래치 시험을 향상 최적화 많은 개별 라이브 세포 이미징 표준화 스토퍼 기반 분석법, 및 입체 마이크로 필러 분석법 4,8,10 포함한 이러한 문제를 감소시켰다. 그러나 이러한 분석은 사용자 또는 열을 적용하기 어려울 수 있고, 몇몇 응용을 위해, 이러한 기술들은 엄청난 비용이 될 수있다. 표준화 된 스크래치 분석 프로토콜을 생산하는 세포의 invol에 대한 특정 정보를 필요로 여기에 제시된 프로토콜의 몇 가지 중요한 단계가 있습니다중요한 세포 특성에 기초하여 분석의 VED 및 최적화....

세포 이동은 조직 개발, 수리 및 재생뿐만 아니라, 암의 전이 및 동맥 경화 1과 병리학 적 과정 등 많은 생리 학적 과정에 매우 조정 및 중요합니다. 세포 이동의 이해는 손상된 조직을 복구하고 세포 이식 기술과 인공 조직 2 접목을 포함한 병리학 적 조건을 치료하는 데 사용 신흥 치료에 특히 관련이있다. , 조직 복구 3을 매개 엄격 정량화 적응 및 경제적 인 관심의 분석을 이용하여 이들 세포의 이주 능력을 정량화 간엽 기질 세포 (MSC들)의 역할에 관심을 주어 현재. 중요한 것은, 이러한 분석은 손상 후 세포의 철새 용량 상대적으로 미묘한 변화를 감지 할 수있을만큼 충분히 민감해야합니다. 스크래치 분석, 트랜스 웰 마이그레이션 분석을, 세포 이동을 정량화 포함한 현재의 방법 (보이든의 채널ambers) micropillar 어레이 및 셀 배제 영역 분석법은 재현성, 커스터마이즈, 정량화 및 경제성 1,4,5 한계의 범위를 갖는다. 여기에 설명 된 최적화 된 스크래치 분석은 강력한 결과, 정량화 및 이미지 기반 분석 기능, 비용 효율성 및 기타 응용 프로그램에 대한 적응성을 보여줍니다. 스크래치 분석은 다른 실험 조건 하에서 5 세포 이동과 증식을 평가하기 위해 여러 용량으로 사용되어왔다. 분석은 또는 가까운 합류를 완료하기 위해 그들을 성장, 지정된 세포를 파종하고, 멸균 바늘 또는 피펫 팁 6 결과 단층를 긁적 수반한다. 분석은 가장 일반적으로 무작위로 위치 7-9에서 여러 시간 지점 위에 스크래치의 폭을 비교함으로써 수행된다. 그것의 저명한 사용에도 불구하고, 스크래치 분석은 재현성과 정량 문제에 의해 혼동된다. 의 변동성흠집의 발생뿐만 아니라, 세포의 미세 환경을 변화뿐만 아니라, 플레이트 표면과 기저 세포 외 매트릭스 (5)의 손상에 의해 세포 이동을 저해 할 수있다. 분석법 빈번 그러나 느린 이동 및 더 긴 분석 시간을 표시하는 세포주에 대해, 12 시간에 걸쳐 진행되는 7, 증식 교란 변수 7,10된다. 마지막으로, 찰과 공정에 의해 생성 된 노화 세포는 단층 1 격차를하는데 필요한 세포 외 신호에 방해 요인을 해제 할 수있다. 스크래치 시험을 최적화하면 분석 시간 길이를 최소화하고, 조작 동안 원치 않는 세포 사멸을 방지하는 표면 특성을 방해하지 않는 일관 갭의 생성을 필요로한다. 스토퍼 기재 분석법은 세포 배제 영역 분석법의 최적화이다. 이 분석은 세포 성장을 배제 웰의 중앙에 배치 된 스토퍼를 이용하지만, 세포가 배제 중앙 영역의 주위에 도금 될 수있다.마이그레이션을 평가하기 위해, 스토퍼가 제거되며, 생성 된 배타 존은 마이그레이션이 발생하기위한 표면을 제공한다. 그러나 이러한 분석은 사용자 또는 10 적응 어렵고 일부 애플리케이션의 경우,이 기술은 엄청난 비용이 될 수있다. 스크래치 시험 법 및 이들의 유도체, 트랜스 웰 마이그레이션 분석 (또는 보이든 챔버 분석법) 대조적 화성 제 8,11 함유 챔버에, 미 공성 여과막을 통해, 하나의 챔버로부터 이동 세포 수를 정량함으로써 마이그레이션을 평가 (12). 다공성 막을 통한 마이그레이션 다음, 세포가 주 화성 제제에 노출 막 측에 부착하고 정확하게 정량화하기 어려울 수 있기 때문에 이러한 기술은 중간 엽 줄기 세포에 대한 부착 성 등 유틸리티를 한정 하였다. 분석은 어떤 입체 이주 패턴을 검사 할 수 있지만, 제한된 세포 유형은 그것을 정확하게 세포 이동 한계는 유틸리티를 정량화 할 수있다 (10). 스크래치 시험 법에 대한 다른 대안은 변형 및 대리 배열에 마이그레이션하는 세포의 능력을 이용하여 3 차원 공간을 통해 세포 운동성을 측정 마이크로 필러 배열을 사용한다. Polydimethlysiloxane (PDMS) 엘라스토머는 정밀 몰드 위에 경화와 오존으로 처리하고 피브로넥틴이 균일 및 비 분해성 미세 환경을 생성한다. 어레이 (4)를 입력하는 세포의 능력을 측정하기 위해 필요에 따라 마이크로 필러 간격 또한 변경 될 수있다. 주형은 높은 종횡비의 어레이 (13)의 음의 버전을 생성하도록 실리콘 웨이퍼의 깊은 반응성 이온 에칭을 통해 생성된다. 그 분석은 커스터마이즈에 의해 강화되지만, 이주 능력 세포 직접적인 시각화를 통해 입체 마이그레이션 및 분석을 모델링하는, 마이크로 필러 어레이를 생성하는데 어려움이 경제적으로 널리 사용을 방해한다. 이 프로토콜에 설명 된 최적화 스크래치 분석은 효율적 COS를 제공자유롭게 사용 가능한 소프트웨어를 사용하여 분석 될 수 일관된 흠집 제조 t 효율적인 방법. 대신 전 세포 이동 후 스크래치 걸쳐 만든 단순한 폭 측정, 소프트웨어는 마이그레이션 전과 후의 총 스크래치 영역을 결정하기 위해 사용자를 가능하게한다. 이 진보가 여기서 폭 측정들이 취해 져야한다 스크래치 판단하려고하는 문제를 제한하고, 스크래치의 폭의 여부의 길이를 따라 균일하다. 또한, 세포 수, 세포 유형과 합류하고 세포에 가해진 손상의 정도는 더욱 신중한 최적화 분석을 최적화하기 위해 논의된다.

<table><tbody><tr><td>DMEM (고포도당, 글루타민 미첨가)</td><td>Life Technologies</td><td>31053-036</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청, Thermo Scientific HyClone</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3091002</td><td></td></tr><tr><td>항생제/항진균제, Thermo Scientific HyClone&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>SV3007901</td><td></td></tr><tr><td>글루타민, 200 mM, Thermo Scientific HyClone</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3003401</td><td></td></tr><tr><td>TypeLE 세포 해리 시약</td><td>Life Technologies</td><td>12563-01</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline, Thermo Scientific HyClone&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3002802</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 표준 60mm 조직 배양 접시</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772B</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile 200 &mu; l 피펫 팁</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-502</td><td></td></tr><tr><td>카메라 부착 기능이 있는 반전광 현미경</td><td>Variable</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ 소프트웨어&nbsp;</td><td>http://imagej.nih.gov/ij/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MRI_Wound_Healing 플러그인</td><td><a href="http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool">http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>통계 분석 소프트웨어</td><td>Microsoft Excel</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

상처 스크래치 분석의 최적화 가용성 담배 연기 추출물에 의한 손상 후 쥐 중간 엽 기질 세포 이동의 변화를 감지 할

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

세포 이동은 조직 발달, 복구 및 재생, 암 전이 및 염증 반응을 포함한 많은 생리학적 및 병리학적 과정에 필수적입니다. 조직 복구를 매개하는 중간엽 기질 세포의 역할에 대한 현재의 관심을 감안할 때, 우리는 이러한 세포의 이동 능력을 정량화하고 손상 후 이동 능력이 어떻게 변경될 수 있는지 이해하는 데 관심이 있습니다. 맞춤화가 쉽고 비용 효율적으로 수행할 수 있는 엄격한 정량적 이동 분석의 최적화는 다양한 자극에 대한 반응으로 인한 세포 이동의 변경과 관련된 질문에 답하는 데 중요합니다. 스크래치 분석, 트랜스웰 이동 분석(Boyden chambers), 마이크로필러 어레이 및 세포 배제 영역 분석을 포함한 세포 이동을 정량화하는 현재 방법은 재현성, 맞춤화 가능성, 정량화 및 비용 효율성에 있어 다양한 한계를 가지고 있습니다. 스크래치 분석법은 두드러진 용도에도 불구하고 세포 미세환경의 손상, 세포 이동 장애, 주변 노화 세포의 영향, 세포 증식과 관련된 재현성 문제, 엄격한 정량화 부족으로 인해 혼란스러워합니다. 여기에 설명된 최적화된 스크래치 분석은 강력한 결과, 정량화 가능한 이미지 기반 분석 기능, 비용 효율성 및 다른 응용 분야에 대한 적응성을 보여줍니다.

여기에 제시된 스크래치 분석은 쥐의 폐 상주 중간 엽 기질 세포를 (LR-중간 엽 줄기 세포)를 사용하여 수행 및 프로토콜 노트에서 참조로 분리되었다. LR-엽 줄기 세포는 60mm 조직 배양 접시에서 500,000 세포의 밀도로 시딩하고, 48 시간에 90 % 합류로 성장시켰다. 손상을 생성하기 위해 4 % CSE는 (상술 한) 초기 시드 기간 다음 24 시간 동안이지만 스크래치 시험 전에 세포와 함께 배양 하였다. 각각의 분석을 위해, 처음에는 200 μL 피펫 팁을 사용하여 생성 하였다. 스크래치가 발생했다 후 초기 이미지를 촬영하고, 느슨한 세포와​​ 파편이 완료 미디어 씻겨했다. 도 1A 및 B에 도시 된 바와 같이, 적절한 합류 이미징 소프트웨어가 정확하게 스크래치의 경계를 식별 할 수 있도록하는 것이 중요하다. 도 1C에 도시 된 바와 같이, 셀 (어느 인해 불충분 파종 밀도 불충분 INC 충분히 합류하지 않은. 쉽게 이미징...

이동 능력은 중간엽 기질 세포(MSC)를 포함한 다양한 세포 유형의 핵심 기능입니다. 그러나 피해 후 이동 능력의 변화를 정량화하는 것은 어려운 일입니다. 이 프로토콜은 엄격한 통계를 사용하여 손상 후 MSC 이동 용량의 변화를 정량화하는 쉽게 적용할 수 있는 이동 분석을 설명합니다.

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

이 분석의 전반적인 목표는 수용성 담배 연기 추출물로 손상을 입힌 후 폐 중간엽 기질 세포의 이동 능력 변화를 검출하는 것입니다. 이 방법은 폐 전구 세포의 이동 능력을 어떻게 개선하여 폐 재생을 도울 수 있는지 등 폐 재생 생물학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 사용될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 경제적으로 수행 가능하고 맞춤 설정이 쉬우면서도, 세포 이동에 대해 더 나은 정량적 측정값을 제공하도록 최적화되었다는 점입니다.본 시연에서는 스크래치 분석(scratch assay)을 사용하여 마우스 폐 중간엽 기질 세포(mesenchymal stromal cells, MSCs)의 이동 능력을 정량화합니다. 수용성 담배 연기 추출물에 노출된 후, MSCs를 60 mm 플레이트의 완전 배지에서 배양하고 프로토콜 텍스트에 기술된 대로 손상을 입힙니다. 스크래치 분석에서는 적절한 합쳐짐(confluence) 정도가 중요한데, 이는 이미징 소프트웨어가 스크래치의 경계를 정확하게 식별할 수 있도록 하기 때문입니다.이 예시는 멸균 환경에서 스크래칭(scratching)에 적합하도록 95% confluence 상태에 도달한 MSCs를 보여줍니다. 손상된 MSCs가 담긴 플레이트의 뚜껑을 제거하고, 멸균된 플라스틱 자와 같은 직선 도구를 플레이트의 상단 가장자리에 가로질러 놓습니다. 이렇게 직선 도구를 사용하면 나중에 이미징을 위해 플레이트를 현미경 스테이지에 올렸을 때 필요한 회전 조정 횟수를 최소화할 수 있습니다.배지를 제거하지 않은 상태에서, 멸균된 직선 가이드를 따라 멸균된 200 microliter 피펫 팁을 사용하여 플레이트에 약 5 millimeters 간격으로 50 millimeters 길이의 평행한 긁힘(scratch)을 4줄 만듭니다. 60 millimeter 플레이트에 여러 개의 긁힘을 만드는 것은 MSCs의 세포 이동에 영향을 줄 만큼 미세환경을 변화시키지 않으나, 다른 세포 유형의 경우에는 고려 사항이 될 수 있습니다. 배지를 흡입하여 제거하고, 미리 데워둔 2 milliliters의 완전 배지로 플레이트를 부드럽게 세척합니다.이렇게 하면 세포가 스크래치 중앙에 부착되는 것을 방지하고 스크래치로 인해 떨어진 세포들을 제거할 수 있습니다. 4 mL의 신선한 완전 배지로 교체한 후, 멸균된 네임펜을 사용하여 플레이트 바닥면의 이미징에 방해가 되지 않는 위치에 각 스크래치를 1번부터 4번까지 표시하십시오. 스크래치 너비에 차이가 있을 수 있으므로, 동일한 스크래치의 이동 전후 이미지를 비교하는 것이 중요하며, 따라서 각 스크래치의 초기 이미지를 반드시 촬영해야 합니다.스크래치 분석을 여러 개의 플레이트에서 수행하는 경우, 다음 플레이트에 스크래치를 만들기 전에 단일 플레이트 내의 모든 스크래치에 대한 초기 이미지를 먼저 촬영하는 것이 좋습니다. 분석에 필요한 이미지를 획득하기 위해 카메라가 장착된 도립 위상차 현미경을 사용하십시오. 배양 플레이트를 현미경 위에 놓고 저배율 대물렌즈를 사용하여 스크래치 위치를 찾으십시오.첫 번째 단계입니다. 스크래치가 화면상에서 완전히 수평으로 나타나도록 하는 것이 매우 중요합니다. 스크래치를 완전히 수평 상태로 유지하며 시야 중심에 둔 채, 스크래치 전체 길이의 90%를 포함할 수 있도록 필요한 만큼의 이미지를 획득하십시오. 이미지 간에 중첩되는 부분이 없도록 스크래치의 서로 다른 영역에서 이미지를 획득하십시오.배양 접시 가장자리에서의 빛 굴절로 인해 이미지가 과다 노출되어 분석이 불가능해지므로, 스크래치 길이의 처음과 마지막 5% 영역에서는 이미지를 촬영하지 마십시오. 첫 번째 스크래치에서 얻은 이미지를 하나의 폴더에 저장하십시오. 두 번째, 세 번째, 네 번째 스크래치에 대해서도 동일한 방법으로 이미지를 획득하고, 각 스크래치의 이미지를 별도의 폴더에 저장하십시오.초기 이미징 직후 플레이트를 즉시 인큐베이터로 되돌립니다. 이 분석을 시작하기 전, 세포가 4~7시간 동안 이동하도록 둡니다. Image J 소프트웨어를 다운로드하고 wound healing tool 플러그인을 설치합니다.ImageJ에서 이미지 파일을 연 다음, Process를 클릭하고 Find Edges를 선택하여 상처 치유 도구를 위한 스크래치 주변의 세포들을 강조합니다. 스크래치 면적을 계산하려면 Image Adjust와 Color Threshold를 클릭하고, Color Threshold 메뉴의 Threshold Color라고 표시된 드롭다운 메뉴에서 값을 BNW로 변경합니다. 하단 슬라이더를 완전히 오른쪽으로 이동시켜 이미지를 완전히 검은색으로 만든 다음, 상단 슬라이더를 조정하여 스크래치와 세포 전선(cell front) 사이의 대비를 최대화합니다.이미지에 스크래치의 윤곽이 명확하게 표시될 때까지 상단의 밝기 슬라이더를 왼쪽에서 오른쪽으로 천천히 조정하십시오. 스크래치의 가장자리가 확인되면 'more tools'를 클릭하십시오. Image J 툴바의 드롭다운 메뉴에서 'MRI wound healing tool'을 선택하고 M 버튼을 눌러 스크래치 영역을 강조 표시하고 계산된 면적을 출력하십시오.결과 팝업 창에서 모든 숫자를 복사하여 Excel 스프레드시트에 붙여넣으십시오. 각 스크래치별로 데이터를 분리하여 정리해야 합니다. 세포가 4~7시간 동안 이동한 후, 스크래치 이미지 획득 절차를 반복하십시오. 이때 각 플레이트의 세포가 동일한 시간 동안 이동할 수 있도록 스크래치를 낸 순서와 동일한 순서로 플레이트를 촬영하십시오.세포는 온도 및 pH 변화에 대한 민감도에 따라 여러 시점에서 이미징할 수 있습니다. 이후 최종 스크래치 이미지는 초기 스크래치 이미지에 대해 시연된 것과 동일한 방식으로 Image J를 사용하여 분석합니다. 또한, 이동 거리를 정량화하기 위해 스크래치 면적을 계산할 수 있습니다.합쳐짐(Confluence)은 스크래치 분석의 성공에 매우 중요합니다. 여기서는 95% 합쳐짐 상태에서 마우스 폐 MSCs의 스크래치가 성공적으로 이루어진 모습이 나타나 있습니다. 반면, 70% 합쳐짐은 성공적인 스크래치를 수행하기에 너무 낮으며, 잘못된 경계를 형성할 수 있습니다.이는 이미징 소프트웨어로 정의된 해당 스크래치 영역 경계가 표시된 대표적인 이동 전 및 이동 후 원본 이미지입니다. 이 그래프들은 95% 밀도로 배양된 마우스 폐 MSC 플레이트에 만든 4개의 스크래치 각각에 대하여, 0% 또는 4% 궐련 연기 추출물에 노출시킨 후 이동 전후의 평균 계산 스크래치 영역을 픽셀 단위로 나타낸 것입니다. 계산된 평균 스크래치 영역 변화를 비교한 결과, 4% 궐련 연기 추출물에 노출된 후 마우스 폐 MSC의 이동이 더 적게 일어났음을 확인하였습니다.이 절차를 수행할 때는 사용하는 특정 세포 유형에 맞게 세포 합류도(confluence)를 최적화하고 주의 깊게 모니터링하는 것이 중요하며, 스크래치가 최대한 균일하게 생성되도록 연습하는 것이 중요합니다. 이 절차 이후에는 면역조직화학(immunohistochemistry)과 같은 다른 기술을 수행하여 세포 이동에 영향을 줄 수 있는 변화 및 단백질 발현에 관한 추가적인 질문에 대한 답을 얻을 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

조기 내피 세포(EEC) 이동에 대한 조사는 특정 질병의 병태생리학을 이해하고 잠재적으로 치료 개입을 위한 새로운 전략을 식별하는 데 중요합니다. 다음 프로토콜은 EEC 조사에 맞게 조정된 세포 이동을 평가하는 기술을 설명합니다.

유해 화학 물질에 노출 된 후 내피 세포 이동의 평가

이 연구 보고서의 세포 침입과 마이그레이션 분석에 대 한 두 가지 방법: Boyden 챔버 분석 결과 및 체 외에서 비디오 현미경-기반 상처 치유 분석 결과. 이 두 실험에 대 한 프로토콜 설명, 그리고 그들의 장점과 단점 비교 됩니다.

셀 침공 및 마이그레이션 프로세스의 평가: 비디오 현미경-기반 스크래치의 비교 분석 결과 및 Boyden 챔버 분석 결과 상처

이 원고 방법 절 개 같은 병 변 배양된 상피 세포 monolayers에 편리 하 게 모델 치료 생체 외에서이미징 confocal 의해 상처 또는 레이저 스캔 현미경, 고는 높은 품질을 제공할 수 있습니다. 공부 셀 동작 및 마이그레이션에 관련 된 메커니즘에 대 한 양적 및 질적 데이터입니다.

현미경 기반 방법을 생체 외에서 상처 치유 중 상피 세포 이동의 평가 대 한

여기, 선물이 기관지 상피 세포의 마이그레이션에 펩 티 드의 효과 평가 하는 프로토콜. 이 메서드는 셀 마이그레이션 및 상처 폐쇄의 속도에 양적 데이터의 신속 하 고 재현성 높은 획득에 대 한 수 있습니다.

상처 치유 분석 결과 셀 마이그레이션 평가 하는 새로운 체 외에

여기는 자동된 광학 카메라 현미경으로는 셀 마이그레이션에서 생체 외에서 테스트 하는 절차에 설명 합니다. 스크래치 분석 결과 널리 사용 되었습니다 어디 스크래치의 폐쇄는 세트 기간에 대 한 다음. 광학 현미경 세포 이동의 신뢰할만 하 고 저렴 한 감지 수 있습니다.

체 외에서 세포 마이그레이션 자동화 된 광학 카메라의 테스트에 대 한 스크래치 분석 결과 최적화

이 연구는 상처 치유 (스크래치 분석 결과의) 메커니즘으로 비소 영향 세포 마이그레이션 등 어떻게 환경 오염 물질을 결정 하기 위한 생체 외에서 모델에 중점을 둡니다. 결과이 체 외 분석 결과 제공 신속 하 고 초기 징후 vivo에서 실험 전에 셀룰러 마이그레이션에 대 한 변경 하는 방법을 보여 줍니다.

생체 외에서 피부 세포 마이그레이션에 비소의 효과 설명 하기 위해 분석 결과 스크래치

여기서, 우리는 1차 섬유아세포를 이용한 시험관내 스크래치 분석및 마우스에서 의 피부 상처 치유 분석실험을 위한 프로토콜을 제시한다. 두 방법 모두 시험관 내 및 생체 내 상처 치유를 평가하는 간단한 방법입니다.

스크래치 마이그레이션 분석 및 등갈 피부 접기 챔버 에서 생체 외 및 상처 치유의 생체 내 분석

당사는 장비 집약적 방법을 사용하지 않고 세포 마이그레이션을 결정하는 새로운 접근 방식을 제공하는 스크래치 마이그레이션 분석법에 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 섬유아세포가 이 프로토콜에 사용되었지만, 세포 이동에 대한 추가 세포 유형과 영향을 연구하기 위해 적응하고 활용할 수 있습니다.

비용 효과적이고 적응 가능한 스크래치 마이그레이션 분석

상호 작용 경험 설계 및 사용자 요구 사항 분석의 통합을 통해 재현성, 신뢰성, 실용성, 세포 무결성 및 사용자 경험 측면에서 세포 상처 치유 분석을 향상시키는 혁신적인 세포 스크레이퍼를 소개합니다.

Cell Wound Healing Assay의 신뢰성을 개선하기 위해 안정적이고 재현 가능한 cell-free gaps를 자동으로 생성하는 도구

이 연구는 2차원(2D) 스크래치 상처 이동 분석 및 3차원(3D) 스페로이드 발아 분석과 함께 RNA 추출 및 면역세포화학을 포함한 각각의 다운스트림 분석 방법과 함께 in vitro 혈관 신생을 연구하는 데 적합한 분석법으로 제시합니다.

Scratch Wound Migration Assay와 Spheroid Sprouting Assay를 활용하여 기능적, 분자적 수준에서 혈관신생을 조사합니다.

여기에서는 만성 담배 연기 추출물(CSE)에 대한 적응에 초점을 맞춘 쥐 기도 상피 세포를 분리하고 분화하기 위한 시험관 내 모델을 설명합니다. 이 모델은 CSE의 다중 오믹스 영향을 종합적으로 특성화하는 데 활용될 수 있으며, 이는 만성 연기 노출 시 세포 반응에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.

담배 연기 추출물로 자극된 쥐 기도 상피 세포에서 다중-오믹스의 분화 및 변화를 연구하기 위한 시험관 내 모델

배우세요 폐 중간엽 기질 세포의 이동 능력 변화를 담배 연기 추출물로 손상 후 스크래치 분석법으로 정량화하는 방법을. 이 기법은 폐 재생 생물학 연구에 경제적이고 맞춤화 가능한 도구를 제공합니다.

상처 스크래치 분석의 최적화 가용성 담배 연기 추출물에 의한 손상 후 쥐 중간 엽 기질 세포 이동의 변화를 감지 할

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