작은 오염 물질의 면역 학적 분석을위한 물 샘플의 자동화 된 고체상 추출을위한 간단한 방법

이 시료 전처리 방법의 전반적인 목표는 사용자 친화적이고 비용 효율적이며 자동화된 방식으로 물 시료에서 소량의 유기 오염 물질을 사전 농축하는 것입니다. 이 방법은 웰 플레이트 면역 분석 또는 바이오 센서와 같은 면역 검출 방법을 사용하여 물 샘플의 오염을 연구할 때 표준 SPE 프로세스를 대체할 수 있습니다. 이 기법의 주요 장점은 SPE 절차가 자동화되고 기기의 설치 공간과 비용이 기존 접근 방식에 비해 낮다는 것입니다.

또한, 농축 공정의 성능은 낮은 용매 함량과 사전 농축 효율 측면에서 면역분석 분석 요구 사항과 일치합니다. 먼저 영점 2마이크로미터 주입 크기 필터로 100mm 물 샘플을 걸러냅니다. 여과된 샘플을 GL 45 나사산이 있는 유리병에 넣습니다.

탈이온수에 메탄올을 희석하여 단단한 튜브에서 50% 부피로 300마이크로리터의 용리액을 준비합니다. 다음으로, 유리 바이틀에 1, 600 마이크로 리터의 메탄올 1, 400 마이크로 리터의 탈 이온수를 40 밀리그램의 역상 흡착제에 첨가하여 옥타데실 실리카 흡착제 입자의 20 밀리그램 현탁액을 준비한다. 뚜껑을 단단히 닫고 와류 믹서로 교반합니다.

모공 크기가 11마이크로미터인 나일론 멤브레인을 방진 조직의 이중층에 놓습니다. 직경 3mm의 펀치로 멤브레인에서 두 개의 작은 부분을 자릅니다. 그런 다음 평평한 끝 필터 집게로 작은 멤브레인을 잡고 컬럼의 한쪽에 놓습니다.

그런 다음 평평한 바닥 커넥터를 튜브로 나사로 조이고 조입니다. 그런 다음 멤브레인이 배치된 끝을 가리키는 기둥 몸체에 화살표를 그립니다. 이 시점에서 화살표가 바닥을 가리키도록 홀더의 기둥을 고정합니다.

하단 잠금 커넥터를 사용하여 빈 10ml 일회용 주사기를 컬럼 튜브 끝에 부착합니다. 와류 믹서로 흡착제 현탁액을 교반하고 컬럼 중앙에 100마이크로리터를 빠르게 피펫팅합니다. 주입하는 동안 다른 손으로 주사기를 사용하여 멤브레인을 통해 피펫 용액을 부드럽게 흡인합니다.

SPE 컬럼 준비는 매우 중요합니다. 주사기를 사용하여 멤브레인을 통해 용액을 적절하게 흡인하는 동시에 컬럼에 입자 현탁액을 주입해야 합니다. 그렇지 않으면 입자가 조밀하게 채워지지 않습니다.

모든 피펫팅 단계 사이에 스톡 현탁액을 교반하여 이전 프로세스를 두 번 더 반복하여 용액 내 입자의 균일한 현탁액을 보장합니다. 주사기로 흡입하여 전체 서스펜션을 로드하고 건조시킨 후 주사기를 제자리에 유지하고 다른 손으로 집게를 사용하여 두 번째 나일론 멤브레인을 상단에 놓습니다. 그런 다음 튜브로 두 번째 커넥터를 나사로 조이고 주사기를 폐기합니다.

이 시점에서 하단 잠금 커넥터를 사용하여 SPE 장치의 컬럼을 조입니다. 샘플이 들어 있는 병을 연결합니다.amp제공된 GL 45 안전 캡을 나사로 조여 장치에 연결합니다. 용리액 저장조에 200마이크로리터의 용리액을 로드합니다.

그런 다음 희석 탱크에 800마이크로리터의 탈이온수를 로드합니다. 더 이상 움직일 수 없을 때까지 압력 조절기를 시계 반대 방향으로 돌려 압력 조절기가 닫힌 위치에 있는지 확인합니다. 프로토타입을 켠 후 pset에 값 580을 입력하고 delta pset에 값 30을 입력합니다.

압력 조절기를 조정하려면 펌프를 시작하십시오. 그런 다음 preg에 대한 판독 값이 열등하지만 320mbar에 가까워질 때까지 압력 조절기를 수동으로 돌립니다. 펌프를 정지한 후 자동 모드 코너에서 시작을 눌러 SPE 절차를 시작합니다.

SPE 절차가 완료되면 작은 시료를 닫고 ELISA 분석이 완료될 때까지 섭씨 4-5도의 어두운 곳에서 보관합니다. 시스템을 청소하려면 GL 45 나사산이 있는 유리병에 70% 메탄올의 10밀리리터 용액을 준비합니다. SPE 컬럼을 분리하고 커넥터로 튜브를 꽂습니다.

자동 모드에서 클리닝 파일을 선택하고 이전에 pset, delta pset 및 preg에 사용된 것과 동일한 압력 설정으로 시작합니다. 흡착제 패킹의 재현성은 피펫 처리된 흡착제를 유리 바이올에서 건조하고 계량하여 평가했습니다. 주입 시간의 재현성은 100 밀리리터 샘플에 대해 테스트되었습니다.

초기 및 사전 농축 스파이크 샘플의 농도는 17 베타 에스트라디올의 상용 ELISA 키트를 사용하여 측정되었습니다. 검량선에서 농축된 샘플의 메탄올 비율이 면역분석법의 감도에 영향을 미치지 않는다는 것이 분명합니다. 128, 플러스 마이너스 22%, 107 플러스 마이너스 6%의 회수율은 각각 탈이온수와 인공 해수에 대해 계산되었습니다.

일단 숙달되면 SPE 컬럼 준비는 제대로 수행될 경우 5분 이내에 완료할 수 있습니다. 전체 SPE 절차는 1시간 이내에 완료할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 환경 과학 분야의 연구자들이 작은 유기 오염 물질을 모니터링하기 위한 면역 검출 방법의 개발을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

이 동영상을 시청한 후에는 면역 분석에 의한 오염 물질 분석을 위한 비용 효율적인 자동화 기기를 사용하여 물 샘플을 준비하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 유기 오염 물질 및 용제와 함께 작업하는 것은 위험할 수 있으므로 이 과정을 수행할 때 항상 적절한 장갑과 보호 고글을 착용하는 것과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.