Name: 마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: 학습하세요 마우스에서 가슴 벽, 흉선 및 심장을 이식하는 새로운 혈관화 복합 동종이식 모델을 이용한 면역 관용 연구 방법입니다. 이 기술은 재건 이식 및 장기 이식 분야에서 장기 생존 향상을 위한 치료 전략 개발에 기여합니다.

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이 연구는 미국 성형 외과 의사 협회 2014 학술 학자 상(American Association of Plastic Surgeons 2014 Academic Scholar Award)의 지원을 받았습니다.

모든 수술 절차는 존스 홉킨스 대학과 미국 농무부와 보건 서비스에 대한 요구 사항을 준수 완료했다. 이 프로토콜은 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회를 다음과 제도적 검토 보드 (프로토콜 번호 M013M490) 가이드 라인을 승인했다. 최종 생존 데이터는 후술하는 수술 절차에 대해 기록 하였다. 모두 기증자와받는 사람 동물 0.1 밀리그램에서 부 프레 노르 핀을 사용하여 선제 마취를 수신 / kg SC 일시간 수술 전에 수신자 동물 프레 노르 핀에 이식 한 후 동일한 용량으로 투여 다시 첫 번째 48 시간 동안 필요에 따라 다시 투여한다 수술 후. 1. 기증자 동종 이식 복구 주 : 수신자 마취 시간을 최소화하기 위해 이전보다받는 이식 이식 40 분의 공여 부분을 시작하고 동시에 종료 시간 또는 약간 귀를 용이받는 사람 준비 대 Lier의 종료 시간. <ol><li> 절차는 표준 멸균 미세 수술기구 및 멸균 장갑을 사용합니다. 우리 연구실은 미세 수술기구의 오토 클레이브 멸균을 사용합니다. </li><li> 4 % 이소 플루 란으로 유도 기화기를 사용 도너 마우스 (수컷)을 마취. 사용 외상성 기계 가위는 자궁 경부, 흉부에서 머리와 복부를 제거합니다. 앙와위에서 동물을 놓고 코 콘을 통해 1 ~ 2 %에 이소 플루 란을 유지한다. 주기적으로 발가락 핀치 철수 반사를 평가하여 절차 전반에 걸쳐 적절한 마취를 확인합니다. </li><li> 피부 절개에 앞서, 널리 멸균 면봉을 사용하여, 이소 프로필 알코올이어서 방부제 포비돈 요오드를 적용하여 동작을 준비한다. </li><li> 자궁과 복부 피부에서 가위로 표면 가로 피부 절개로 시작합니다. 양측 midaxillary 라인을 따라 모두 절개를 연결합니다. </li><li> 미세 수술 집게를 사용하여6-0 실크 봉합사와 가위 외부 경정맥을 식별 결찰 및 분할 양측 자궁 지역을 해부하다. 그런 다음 사용하는 전기 소는 양자, 내부 경정맥과 경동맥을 노출 흉쇄 근육을 나눕니다. 왼쪽면과 일괄 방식으로 경동맥 내부 경정맥 오른쪽 양면에서 6-0 실크 봉합사를 전달합니다. 참고 : 그들은 묶여 단계 1.9 이후에 구분됩니다. </li><li> 급격히 자궁 지역의 나머지 첨부 파일을 무료로 가위를 사용하여, 기관에 전방에 위치한 스트랩 근육과 관련된 느슨한 유륜 조직을 나눕니다. </li><li> 양극성 전기 소와 날카로운 해부를 사용하여 쇄골 하 혈관 결찰 (6-0 실크 봉합사)를 노출하고 근위 분할 pectoralis 주요 근육과 쇄골을 나눕니다. </li><li> 다음, 부드럽게 잡고 동물의 성기를 철회. 음경의 배부 함께 음경의 배부 정맥을 시각화 및 소독이소 프로필 알코올과 지역. 30 G 바늘을 사용하여, 정맥 등의 정맥을 통해 헤파린의 30,000 단위를 주입하고 성기가 다시 원래의 위치로 반동 할 수 있습니다. 주변 조직에 헤파린 솔루션의 일부 누수가 발생할 수 있습니다. </li><li> 경동맥과 경정맥 주위의 이전 배치 대량의 관계를 이용하여, 양자, 결찰 및 구조를 나눕니다. </li><li> 다음 사용 가위는 가로 intrabdominal 절개를합니다. infrahepatic 하대 정맥을 노출하고 infrahepatic 하대 정맥에 감기 유로 콜린스 심정지 용액 2 ㎖를 주입하는 장을 절개. 전에 다음 단계로 진행에 간 변색과 심장 박동의 정지를 시각화하여 적절한 주사를 확인합니다. 참고 : 유로 콜린스 솔루션은, 우리의 실험실에서 제조 된 특정 시약 및 장비의 표를 참조한다. </li><li> 사용 가위는 양자 diaph를 통해 흉부 공동 액세스노출 된 복부에서 ragmatic 절개. 늑간 근육과 갈비뼈를 통해 cephalad 절개를 확장 할 수 있습니다. 동시에 가슴 벽을 따라 내부 흉부 혈관의 보존을 보장하면서 심장, 흉선, 큰 혈관을 노출 가슴 벽을 반영한다. </li><li> 감기 유로 콜린스 심정지 액 4 mL로 suprahepatic 하대 정맥 주입한다. </li><li> 대동맥의 루트를 확인하고 하행 대동맥에 원심 추적. 급격하게 하행 대동맥 (최대 길이 보존)를 잘라. </li><li> 폐 트렁크를 확인하고 (최대 길이 보존)의 분기점에 바로 인접 나눕니다. 냉간 유로 콜린스 심정지 용액 2 ㎖를 사용하여, 폐동맥의 루멘으로 부드러운 플라스틱 카테터 팁을 배치하여 폐동맥 심장 플러시. </li><li> 6-0 실크 봉합, 결찰을 사용하고, 폐 혈관의 합류를 하대 정맥을 분할하고, 양자 간 상대 정맥의 액세서리 분기합니다. 그런 다음 상승그리고기도를 입력하지 않도록주의 주요 줄기 기관지와 기관에 따라 첨부 파일에서 심장 cephalad을 해부하다. 날카로운 양극성 전기 소를 사용하여 가슴 벽, 흉선, 심장이 완전히 기증자 마우스에서 해방 해부. </li><li> 마지막으로, 흉골 및 측면 costae 함께 가위를 사용하여 작은 크기로 이식 가슴 벽 생체 트림주의 내흉 혈관 (그림 1A)을 방해하지. 재관류 다음과 출혈을 최소화하기 위해, osteomusculocutaneous 흉골의 경계를 따라 바이폴라 electrocauterization를 사용합니다. </li><li> 받는 사람이 삽입을 위해 준비되어 있지 않은 경우 유로 콜린스 솔루션을 초기 (4 오 섭씨) 10 ㎖의 동종 이식을 놓습니다. 수신자가 삽입을위한 준비한다면, 바로받는 수술 분야에 동종 이식을 전송합니다. </li></ol> 2.받는 사람 준비 참고 :받는 사람 마취 시간을 최소화하기 위해,별도의 수술 역에서 전에 기증자 이식 수확의 완료까지 약 40 분을받는 준비를 시작합니다. <ol><li> 표준 멸균 미세 수술기구 및 절차에 대한 멸균 장갑의 별도의 세트를 사용합니다. </li><li> 4 %에서 이소 플루 란 유도 기화기를 사용하여 (남성 또는 여성)받는 사람 마우스를 마취. 외상성 기계 가위를 사용하면 오른쪽 자궁 경부와​​ 흉부 지역에서 머리를 제거합니다. </li><li> 부정사 위치와 각도 오른쪽 상지 약간 하방 머리와 우측 상지 사이에 110도 각도를 형성 마우스를 놓습니다. 코 콘을 통해 1 ~ 2 %의 이소 플루 란에 마취를 유지한다. </li><li> 면 팁 어플리케이터를 사용하여 마우스 눈에 석유 안과 연고를 놓습니다. 피부 절개에 앞서, 이소 프로필 알콜 널리이어서 방부제 포비돈 요오드를 사용하여 수술 부위를 준비한다. </li><li> 가위를 사용하면, 오른쪽 열등한 BOR 따라 중간 선에서 피부 절개를하악의 데르 오른쪽 흉부 지역 infero-측면 절개를 확장 할 수 있습니다. 미세 혈관 집게로 무딘 절개를 사용하여, 부드러운 조직과 외막에서 원주 자유로운 선박에 의해 외부 경정맥을 동원. 전기 소를 사용하여 모든 지점을 분할하고, 동종 이식을위한 여유 공간에 날카로운 해부 및 전기 소를 사용하여 악하선의 오른쪽 엽을 제거합니다. </li><li> 커프를 통해 에버트하기 위해 외부 경정맥의 충분한 길이를 확인하고 6-0 실크 봉합사를 사용하여 정 맥 외부 경정맥을 결찰. 미리 절단 폴리이 미드 커프의 루멘을 통해 정맥을 삽입하고 장소에 용기 즉석 복잡한 문제를 해결하기 위해 불독 미세 혈관 클램프를 사용합니다. 그런 다음 근위 에버트 커프를 통해, 외부 경정맥을 분할하고, 10-0 나일론 봉합사와 장소에 고정, 가위를 사용하여. (그림 1B) </li><li> 경동맥을 노출 양극성 전기 소와 오른쪽 흉쇄 근육을 나눈다. 원주 폭도자궁 경부 영역 내에서 말단 가장 포인트로 cephalad 동맥을 ilize. 이것은 부드러운 조직과 주변의 외막을 제거하기 위해 집게로 선박의 무딘 절개를 사용하여 수행 할 수 있습니다. </li><li> 6-0 실크 봉합사를 이용하여 결찰 및 경동맥을 나눈다. 미리 절단 폴리이 미드 커프의 루멘을 통해 동맥을 전달하고 가능한 한 흉부 입구에 가까운 불독 미세 혈관 클램프와 장소에 고정합니다. 부드럽게 에버트 커프 이상, 미세 수술 확장기를 이용하여 혈관을 팽창, 말단 혈관을 나누고 10-0 나일론 봉합사 제자리에 고정합니다. (그림 1B) 주 : 특정 미세 수술 확장기는 특정 시약 및 장비의 표에 설명되어 있습니다. </li></ol> 3. 동종 이식 삽입 된 <ol><li> 거꾸로 및 경사 위치에받는 사람 자궁 지역 내 동종 이식을 배치하는 표준 멸균 계측 및 멸균 장갑을 유지한다. </li><li> 이어서, 상기 도너 하강 AOR 배치받는 사람의 동맥 커프 구조를 통해 TIC 루멘과 10-0 나일론 봉합사 (그림 1C 및 1D)와 장소를에 고정합니다. </li><li> 기증자 폐동맥과받는 사람 마우스 (그림 1C 및 1D)의 everted 외부 경정맥 즉석 구조 사이의 단계 3.2에서와 같은 문합을 패션. </li><li> 먼저 정맥 미세 혈관 클램프 (외부 경정맥 클램프)를 제거하고 동맥 클램프 (경동맥 클램프)를 놓습니다. 동맥 재관류 동안 어떤 출혈을 해결하기 위해 동종의 전체를 검사한다. 출혈이 가시화되면, 혈액 손실을 최소화하고 바이폴라 전기 소를 이용하여 출혈의 원인을 완화 동맥 클램프를 다시 적용. </li><li> 이식을 검사하고 지혈을 보장합니다. 해제하고 완전히 동맥 미세 혈관 클램프를 제거합니다. 심장 챔버의 급격한 부피 팽창으로 즉시 알 수있을 것이다 재관류의 흔적을 표시하는 마음을 관찰하고, B 기다립니다0.5 분 이내에 시작하는 식사. 마음을 축축 따뜻한 식염수 (35 ° 섭씨)를 사용합니다. </li><li> 문합에 어떠한 꼬임이나 긴장감을 유발하지 않도록 해부학 적 위치로 흉벽 드레이프. 6-0 연속 나일론 봉합사 (그림 1E)를 사용하는 수술 상처의 피부를 닫습니다. </li></ol> 4. 수술 후 케어 <ol><li> 유체 교체를 위해 즉시 수술 후 0.3 ml의 생리 식염수를 복강 액 덩어리를 관리. </li><li> 그리고 피하 각각 통증과 감염 예방을 위해 프레 노르 핀 (를 0.1 mg / kg)와 enrofloxacin (5 ㎎ / ㎏)을 주입. </li><li> 마취에서 각성 할 때까지 가열 램프 아래에있는 동물을 놓고 흉골 드러 누움로 돌아갑니다. 복구하는 동안, 적절한 동종 이식 관류을 보장 동종 이식의 피 브릴 하트 비트를 시각화하기 위해 목을 검사합니다. </li><li> 일단 깨어 누운 위치에, 다른 마우스의 회사없이 별도의 케이지 (마우스를 반환)는 음식과 임의 량의 물을 수신 할 수있는. 때문에 우측 상지의 임시 약간의 제한적인 움직임, 새장 바닥에 젤라틴 음식 소스를 둡니다. </li><li> 수술 후 1 시간 동안받는 마우스를 관찰 한 다음이 음식과 물을 임의로을받을 수 있으며, 활동과 영양 섭취에 대한 첫 24 시간 동안 하루에 세 번 검사하는 케이지 시설로 돌아갑니다. 처음 72 시간 동안 필요에 따라 하루에 두 번 피하 통증과 고통과 부 프레 노르 핀 (를 0.1 mg / kg)와 재 투여의 징후 마우스를 모니터링합니다. 매일 그 후 동물을 검사하고 매주을 단다. </li><li> 어떤 마우스는 고통, 고통의 흔적을 표시하거나 사료 섭취량이 감소하면 수의학 직원에게 문의하십시오. 초기 안락사를 고려 (우리의 프로토콜에서 안락사 기술은 자궁 경부 전위 다음, 7 분 동안 이산화탄소 과다 복용을 사용). </li><li> 동종 이식 심장 박동의 정지는 S로 마우스를하라는​​ 특정 엔드 포인트로 정의된다acrificed. </li></ol>

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</ol>

저자는 선언할 이해 상충이나 재무 공개가 없습니다.

포함 동종 이식의 면역 학적 조사에 고려하지만, 급성 및 만성 거부, 직접 및 간접 항원 제시받는 사람 과민성, 또는 혼합 키 메리 즘의 유도 메커니즘에 한정되지 않는다 현상의 다수가있다. (19) 동물 모델이되고있다 이식 면역학의 연구를위한 황금 표준 및 마우스 모델은 대중적으로 인해 상대적으로 낮은 수의학과 주택 수요를 감소 비용, 형질 전환 유전자 녹아웃 마우스의 가용성, 상업적으로 이용 가능한 단일 클론 항체, 및 복제의 용이성에 구현된다. 지금까지 여러 심장 이식 모델은 고체 장기 이식을 연구하기 위해 설계되었습니다. 19,22-27을 마찬가지로, 마우스 모델의 과다는 혈관 복합 동종 이식을 연구하기 위해 개발되었다. (28) 그러나, 결합 고체 장기 및 혈관 복합 동종 이식의 연구를 , 제한및 기술은 아직 마우스에 설립되어야한다. 여기에 제시된 EN 블록 가슴 벽, 흉선, 심장 이식 쥐 모델은 효과와 결합 된 고체 기관 및 혈관 복합 동종 이식의 면역 학적 ...

심장 이식은 말기 심부전에 대해 선택되는 치료법입니다. 기술 발전과 약리학적 혁신으로 인해 이 분야는 조기 이식 합격률이 90% 이상으로 높아졌습니다. 12,13 그럼에도 불구하고 이식편의 5년 생존율 60-80%는 정체되어 있으며 이식 혈관병증을 특징으로 하는 만성 거부 반응은 불가피합니다. 14-16 또한, 환자는 흉벽 기형, 의학적 후유증 및 독성과 관련된 여러 수술 및 평생 면역 억제를 받습니다. 동종이식의 생존을 연장하고, 면역억제 요구 사항을 최소화하며, 해부학적 기형에 대한 재건 옵션을 제공하기 위한 혁신적인 접근 방식의 필요성이 시급합니다.
혈관 복합 동종 이식은 면역학적 측면뿐만 아니라 재건적 관점에서도 심장 이식 결과를 개선하기 위한 독특한 전략을 제공합니다. 17 혈관화된 복합 동종이식편은 또한 기증자 유래 조혈 줄기세포의 고유한 공급원을 가지고 있다는 점에서 독특하며, 이는 면역 억제를 감소시키고 혼합 키메라를 유도 및 유지하는 유리한 능력을 보여주었습니다. 1-8 또한, 흉선의 동시 이식은 고형 장기 이식과 혈관 복합 동종이식편의 생존을 연장하는 것으로 나타났습니다. 2,9-11 이러한 전략을 심장 이식과 결합하면 앞서 언급한 심장 이식이 직면한 문제에 대한 새로운 해결책을 얻을 수 있습니다. 18분
Murine 모델은 항체와 잘 정의된 근친 및 녹아웃 균주의 가용성으로 인해 기계론적 생체 내 연구를 위한 훌륭한 플랫폼 역할을 합니다. 19-21 생쥐의 심장 이식은 일반적으로 이종외 복강내 미세수술 봉합사 이식 모델22-25를 사용하여 연구되지만, 이종, 경추, 비봉합 커프 기술 모델은 매우 복제 가능하고 신뢰할 수 있으며 혈전증 발생률이 더 낮은 것으로 나타났습니다. 19,26,27 이 연구의 목표는 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 결합된 고체 장기 및 혈관 복합 동종 이식의 면역학적 메커니즘을 연구하기 위해 마우스에서 이종외 골근 피부 흉벽, 흉선 및 심장 이식 기술을 개발하는 것입니다. 이 클러스터 동종이식편은 공여자의 문합을 통해 대동맥을 오른쪽 총경동맥으로 하강하고 기증자 폐동맥을 오른쪽 외부 경정맥으로 관류합니다. 내부 흉관 및 관련 흉선 가지를 보존하는 것은 흉벽(흉골, 갈비뼈, 근육 및 피부)과 흉선을 관류하는 데 가장 중요합니다.

<table><tbody><tr><td>Euro-Collins 솔루션</td><td></td><td></td><td>이 솔루션은 상업적으로 구매되는 것이 아니라 실험실에서 준비됩니다. 500ml 용액을 만들려면 330ml의 이중 증류수에 아래 나열된 성분을 첨가하십시오. 잘 섞은 다음 용액에 이중 증류수 170ml의 나머지 부분을 500ml의 최종 부피로 채웁니다. 성분: 1.02g KH2PO4, 3.66g K2HPO4, 0.56g KCl, 0.42g NaHCO3 및 17.52g의 포도당.</td></tr><tr><td>봉합사</td><td>에틸론</td><td>MWI 72667</td><td>6-0 에틸론

https://www.mwivet.com (MWI - 수의학 용품)</td></tr><tr><td>폴리이미드 커프 정맥(21G)</td><td>벤션 메디컬</td><td>141-0043</td><td>http://www.ventionmedical.com/products-and-services/polyimide-tubing/</td></tr> <tr><td>폴리이미드 커프 동맥(24G)</td><td>벤션 메디컬</td><td>141-0027</td><td>http://www.ventionmedical.com/products-and-services/polyimide-tubing/</td></tr> <tr><td>소프트 플라스틱 팁 카테터</td><td>테루모</td><td>SR*OX2419CA</td><td>24G x 3/4"&nbsp;</td></tr><tr><td>미세수술 확장기</td><td>S& T</td><td>D-5a.1</td><td>확장기, 11cm, FH, 0.1mm AT10d</td></tr></tbody></table>

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

동종이식의 생존을 연장하고 장기적인 유지 면역억제의 필요성을 최소화하기 위한 장기 이식의 새로운 전략을 모색해야 합니다. 혈관화된 골수 이식과 흉선 동시 이식을 사용하면 다양한 동물 모델에서 이와 관련하여 가능성이 있는 것으로 나타났습니다. 1-11 혈관화된 골수 이식은 보존된 기증자 미세환경 내에서 기증자 골수 세포의 중단 없는 이동을 가능하게 하며, 혈관 골수 이식과 흉선 조직의 통합은 궁극적으로 면역 조절 유도에 지지적인 역할을 하는 T 세포 키메라를 증가시키는 것으로 나타났습니다. 고형 장기와 혈관화된 복합 동종이식의 조합은 새로운 이식 모델의 형태로 이러한 전략을 고유하게 결합할 수 있습니다. 쥐 모델은 급성 및 만성 거부 반응, 키메라 및 내성 유도의 메커니즘을 탐구하기 위한 훌륭한 패러다임 역할을 하여 더 큰 동물 모델 및 향후 임상 적용을 위한 우수한 동종이식 생존 전략을 전파하기 위한 기반을 제공합니다. 본 연구에서는 경추 비봉합 커프 기법을 사용하여 생쥐에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 개발했습니다. syngeneic 및 allogeneic 이식 환경에서의 경험은 교육용 원고 및 비디오 보충 자료를 통해 향후 광범위한 면역학 연구를 위해 설명됩니다.

동계 C57BL가 / 6 이식 장기의 생존을 달성했다. 동종 이식 (도 1)의 설계는 동물 생존 관점 지속적인 동종 이식 생존을 평가하는 능력에서 성공적인 것으로 판명되었다. 이것은 가능한 액티브 지속 동종 육모 나머지 상부 피부를 통해 입증하고, 하트 비트는 시각화 및 손가락 촉진 평가 될 수 있었다. 생존 데이터는 동계 이식 된 쥐 그림 2에 표시됩니다. 평균 생존 시간은 초과 1백9일이었다. 생존 데이터에 기초하여, 동종 이식의 기술적 특징은 흉벽, 흉선, 심장 전체를 관류하도록 설계되는 것을 추정하는 것이 합리적이다. 또한, 장기 생존 동계 동물의 능력이 상기 마우스 모델뿐만 아니라 가능하지만 복제 할 수 있음을 지원한다. 이 개념 증명 블록 가슴 벽, 흉선, 심장 이식 EN은 일의 유효성을 검사전자 쥐 모델은 고체 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합 연구에. <img alt="그림 1" src="/files...

고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합하기 위해 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 설명합니다.

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식의 새로운 쥐 모델을 도입하여 기증자 유래 혈관 조혈 및 원발성 림프 조직이 면역 관용 및 동종 이식 생존 연장에 미치는 영향을 조사하는 것입니다. 이 방법은 내성 유도에 대한 혈관화된 뼈와 흉선의 역할과 같은 재건 이식 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 처음으로 혈관화된 골수와 흉선을 결합한 것이 단단한 장기, 심장 및 면역학적으로 다재다능한 질량 모델 시스템에 이식된다는 것입니다.이 기술의 의미는 기본적인 면역학 연구에서 복잡한 조직 결함을 치료하고 동시에 고형 장기 이식의 장기 생존을 개선하기 위한 임상 분야로의 치료 번역으로 확장됩니다. 이 절차를 시연하는 사람은 존스 홉킨스 대학의 성형 및 재건 외과의 박사 후 연구원인 BC Oh 박사와 Georg Furtmuller 박사입니다. 먼저 텍스트 프로토콜에 따라 수컷 기증자 마우스를 마취한 후 멸균 장갑을 착용한 상태에서 기계식 가위를 사용하여 경추, 흉부 및 복부 부위의 털을 제거합니다.멸균된 수술 표면에 동물을 누운 자세로 눕힙니다. 콧방울을 붙이고 이소플루란을 1-2%로 유지피부 절개 전에 멸균 면봉을 사용하여 포비돈 요오드 소독제를 도포한 후 이소프로필 알코올을 바르는 등 절개 부위를 넓게 정돈합니다. 가위를 사용하여 경추와 복부 피부를 가로질러 피부 절개를 표재성으로 옮깁니다.양쪽 절개 부위를 겨드랑이 중간선을 따라 양측으로 연결합니다. 미세겸자로 경추 부위를 양측으로 절개하여 외부 경정맥을 확인합니다. 그리고 6-0 실크 봉합사로 가위를 사용하여 나누기 전에 혈관을 접합합니다.그런 다음 전기 소작술을 통해 흉쇄유돌근을 나누어 내부 경정맥과 총경동맥을 양측으로 노출시킵니다. 6 0 실크 봉합사를 왼쪽과 오른쪽 총경동맥과 내부 경정맥 아래에 각각 대량으로 통과시킵니다. 양극성 전기 소작법과 날카로운 박리를 사용하여 대흉근과 쇄골을 나누어 쇄골하 혈관을 노출시킵니다.6-0 실크 봉합사를 사용하여 혈관을 근접하게 접합하고 분할했습니다. 다음으로, 동물의 음경을 부드럽게 잡고 빼냅니다. 음경의 등쪽을 따라 등쪽 정맥을 찾고 이소프로필 알코올을 사용하여 해당 부위를 소독합니다.그런 다음 30 게이지 바늘을 사용하여 등쪽 정맥을 통해 30, 000 단위의 헤파린을 정맥 주사하고 음경이 원래 위치로 되돌아가도록합니다. 총경동맥과 내부 경정맥 주위에 이전에 배치된 벌크 타이를 사용하여 구조를 양측으로 접합하고 분할합니다. 이제 가위를 사용하여 복강에 접근하기 위해 가로 절개를 만듭니다.장을 절제하여 간내 하대정맥을 노출시키고 2ml의 차가운 EuroCollins 심정지 용액을 간내 하대정맥에 주입합니다. 간 변색과 심장 박동의 멈춤을 시각화하여 적절한 주사를 보장합니다. 가위를 사용하여 노출된 복부에서 양측 횡격막 절개를 통해 흉곽내강에 접근하여 늑간 근육과 갈비뼈를 통해 절개 두부를 확장합니다.EuroCollin 용액을 사용하여 폐간과 심장을 치실로 사용하는 것은 관상 동맥 순환 내부에 미세 혈전 색전증이 남아 있는 것을 방지하는 데 중요합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 고간 하대정맥에 차가운 EuroCollins 용액을 주입한 후 대동맥의 뿌리를 확인하고 하행 대동맥까지 원위부로 추적합니다. 하행 대동맥을 날카롭게 잘라 최대 길이를 보존합니다.이제 폐 줄기를 확인하고 최대 길이를 유지하면서 분기 지점에 근접하게 분할합니다. 그런 다음 2ml의 차가운 EuroCollins 심정지 용액을 사용하여 부드러운 플라스틱 테이프 카테터를 폐 줄기 내강에 삽입하여 폐간과 심장을 씻어냅니다. 6-0 실크 봉합사를 사용하여 하대정맥, 폐정맥의 합류 및 양측 상대정맥의 부속 가지를 접합하고 분할합니다.그런 다음 기도로 들어가지 않도록 조심스럽게 주줄기, 기관지, 기관을 따라 부착물에서 심장 두부를 평가하고 해부합니다. 날카롭고 양극성 전기 소작으로 흉벽, 흉선 및 심장을 절개하여 기증자 마우스로부터 완전히 해방시킵니다. 마지막으로, 가위를 사용하여 내부 흉관을 방해하지 않도록 주의하면서 흉골과 외측 늑골을 따라 생체 외 동종이식 흉벽을 더 작은 크기로 다듬습니다.혈관재생술 후 출혈을 최소화하려면 골근육 피부 흉골의 경계를 따라 양극성 전기 소작술을 사용하십시오. 텍스트 프로토콜에 따라 수신자 마우스를 준비한 후 마우스를 누운 위치에 놓고 오른쪽 상지를 약간 아래쪽 방향으로 각도를 조정하여 머리와 오른쪽 상지 사이에 110도 각도를 형성합니다. 하악골의 오른쪽 하악 경계를 따라 정중선에서 절개하고, 절개 부위를 하측으로 오른쪽 흉부까지 연장합니다.미세혈관 겸자를 사용한 둔기 박리로 연조직과 외막에서 혈관을 둘레로 분리하여 외부 경정맥을 동원합니다. 전기 소작을 사용하여 모든 가지를 나누고 날카로운 절개와 전기 소작으로 턱밑샘의 오른쪽 엽을 제거하여 동종 이식편을 위한 공간을 확보합니다. 경정맥이 커프 위로 올라갈 수 있도록 충분한 길이를 확보하고 6-0 실크 봉합사를 사용하여 외부 경정맥을 접합합니다.그런 다음 미리 절단된 폴리아미드 커프의 내강을 통해 정맥을 삽입하고 불독 미세혈관 클램프를 사용하여 혈관 커프 복합체를 제자리에 고정합니다. 커프에 에버트를 걸치고 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 제자리에 고정합니다. 양극성 전기 소작술을 수행하는 동안 오른쪽 흉쇄유돌근을 나누어 총경동맥을 노출시킵니다.겸자와 둔기 박리를 사용하여 연조직과 주변 외막을 제거하여 경추 부위 내의 가장 원위 지점까지 동맥 두부를 원주방향으로 동원합니다. 6-0 실크 봉합사를 사용하여 총경동맥을 접합하고 분할합니다. 미리 절단된 폴리아미드 커프의 내강을 통해 동맥을 통과시키고 불독 미세혈관 클램프를 사용하여 흉부 입구에 최대한 가깝게 제자리에 고정합니다.그런 다음 혈관을 원위로 나눕니다. 미세수술용 확장기를 사용하여 혈관을 부드럽게 확장하고, 커프 위로 고정한 다음 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 제자리에 고정합니다. 멸균 상태를 유지하면서 기증자의 동맥 커프 구조물 위에 기증자 하행 대동맥 내강을 놓고 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 제자리에 고정합니다.기증자 폐동맥과 수혜자 마우스의 외측 경정맥 커프 구조 사이에 유사한 문합을 형성합니다. 그런 다음 비너스 미세혈관 클램프를 제거한 다음 동맥 클램프를 제거합니다. 다음으로, 전체 동종이식편에서 출혈을 검사하고, 출혈이 있는 경우 텍스트 프로토콜에 따라 출혈을 완화합니다.동맥 미세혈관 클램프를 풀고 완전히 제거하기 전에 이식편을 검사하고 지혈을 확인하십시오. 심장을 관찰하여 재관류의 징후를 식별하고, 이는 심실의 빠른 부피 확장으로 즉각적으로 나타나며 30-60초 이내에 구슬 형성이 시작될 때까지 기다립니다. 따뜻한 식염수를 사용하여 심장을 적신 다음 문합에 꼬임이나 긴장을 유발하지 않도록 흉벽을 해부학적 위치에 놓습니다.마지막으로 6-0 나일론 봉합사를 사용하여 수술 상처의 피부를 봉합하고 텍스트 프로토콜에 따라 수술 후 관리를 수행합니다. 종단 간 비봉합 커프 문합을 수행하고, 재관류 중 전기 소작으로 세심한 지혈을 유지하고, 복합 조직 그래프의 모든 구성 요소를 관류하는 것이 절차의 가장 중요한 단계입니다. 결합된 VCA와 고체 장기 동종이식편은 수혜자의 목에 이전에 배치된 폴리아미드 커프 위에 장착되어 최적의 이식 위치와 커프의 구조에 기증자 혈관의 세심한 장착을 보여줍니다.여기에 시연된 동종이식편의 설계는 수용 동물에 대한 영향을 최소화하면서 흉벽까지 관류를 지속할 수 있는 것으로 승인되었습니다. 여기에 제시된 것은 syngeneic 이식된 마우스의 생존 데이터입니다. 평균 생존 기간은 109일 이상이었으며, 이는 이식된 동종이식편의 기술적 측면이 흉벽, 흉선 및 심장 전체를 관류하도록 설계되었음을 시사합니다.또한 이 마우스 모델은 실현 가능할 뿐만 아니라 복제할 수 있습니다. 이 기술을 마스터하면 두 팀 접근 방식으로 수행할 경우 90분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 전체 절차에 걸친 지혈이 가장 중요하며 동종이식 삽입 중 꼬임을 최소화하는 것도 매우 중요하다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이 기술은 재건 수송 및 고형 장기 수송 분야의 연구자들이 동종이식 생존을 개선하기 위해 고형 장기 수송의 잠재적 보조물로서 혈관화된 골수와 흉선의 역할을 탐구할 수 있는 길을 열어줍니다. 이 비디오를 시청한 후에는 이종성 차단 해제 흉벽, 흉선 및 심장 이식을 통해 고형 장기와 혈관화된 복합 동종 수송을 결합한 쥐 모델을 구축하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

a-novel-microsurgical-model-for-heterotopic-en-bloc-chest-wall-thymus

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.  여기서, 우리는 비디오를 보충하기위한이 기술의 추가 정보를 제공합니다.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

여기에서, 우리는 새로운 심장 보호 전략을 조사하기 위하여 확고하게 확립되고 이용된 정형포피성 심혼 이식의 전임상 대형 동물 (돼지) 모형을 기술합니다.

정형외 심장 이식의 전 임상 돼지 모델

이성애 복부 마우스 심장 이식 모델에서 혈액 회로 재건을 위한 새로운 기술이 입증된다.

복부 마우스 심혼 이식 모형에 있는 혈액 회로 재건

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

이 프로토콜은 마우스에서 커프가 없고 봉합 기반인 경추 이종성 심장 이식 기법을 제시하여, 이물질 간섭이 최소화된 생리학적 조건에서 기증자 특이적 면역 관용을 평가하기 위해 두 번째 이종성 심장 이식편을 신뢰성 있게 배치할 수 있도록 설계되었습니다.

마우스의 기증자 특이적 면역 내성을 평가하기 위한 2차 이종성 심장 이식을 위한 커프스 없는 봉합선 기반 자궁경부 모델

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

학습하세요 마우스에서 가슴 벽, 흉선 및 심장을 이식하는 새로운 혈관화 복합 동종이식 모델을 이용한 면역 관용 연구 방법입니다. 이 기술은 재건 이식 및 장기 이식 분야에서 장기 생존 향상을 위한 치료 전략 개발에 기여합니다.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

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