Name: 식물에서 물고기에 적합한 빠른 공기 건조 떨어 뜨리 염색체 제조 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: 학습하세요 식물 염색체를 빠른 공기 건조 떨어뜨리기 방법으로 제조하여 FISH 분석에 적합한 고품질 유사분열 염색체를 얻는 기술입니다. 이 방법은 세포유전학 및 게놈 연구의 효율성을 높입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

재정 지원(HO 1779/21-1)을 해준 DFG와 기술적 조언을 해준 Katrin Kumke와 Dr. Veit Schubert(IPK, Gatersleben)에게 감사의 뜻을 전합니다.

1. 염색체 준비 <ol><li> 종자 발아 및 뿌리 끝의 고정 <ol><li> 22 ~ 24 ℃에서 2 일간 어두운 조건에서 배양 접시에 촉촉한 필터 종이의 두 층에 10 ~ 20 보리 씨앗을 발아. 면도날을 사용하여 시드로부터 1-2cm의 길이 격렬한 뿌리 잘라. </li><li> 분쇄 된 얼음 - 물에 차가운 수돗물을 함유하는 500 ㎖의 유리 병을 배치하여 빙 냉수를 준비한다. 빙 냉수를 폭기 및 중기 세포의 빈도를 증가시키기 위해 20 시간 동안 뿌리 끝 부분을 넣는다. </li><li> 50ml의 에탄올에 물을 뿌리 전송 : 아세트산 (3 : 1)을 고정 제 2 일 동안 실온에서이를 해결하기 위해. 갓 준비 에탄올에 보관 뿌리 : 아세트산 (3 : 1) 4 ° C에서 정착 년까지 사용할까지. </li></ol></li><li> 세탁 효소 처리 <ol><li> 5 분 50 회 mL 유리 비커를 사용하여 30 mL의 얼음처럼 차가운 수돗물로 씻어 뿌리 10-20. 쌍안 현미경을 사용합니다. 에 의해 뿌리 하나를 전송30 mL의 0.01 M 시트 레이트 완충액 (+ 0.01 M 시트르산 나트륨, 0.01 M 시트르산, pH를 4.8) 겸자를 사용하여 5 분 동안 두번 유리 비커를 흔들어 씻는다. 완전히 액체를 제거하고 차단 원하지 않는 비 분열 조직을 면도날을 사용하여 필터 종이에 뿌리를 놓습니다. </li><li> 시계 접시로 식물 조직을 부드럽게 약 50 분 (표 1), 37 ° C에서 1 ㎖의 효소 혼합물에 20 뿌리 끝까지 배양한다. 효소 혼합물 0.01 M 구연산 버퍼에 희석 0.7 % 셀룰라아제 R10, 0.7 %의 셀룰라아제, 1 % pectolyase과 1 % cytohelicase가 포함되어 있습니다. -20 ℃에서 효소 혼합물을 저장하고 다섯 번까지 재사용. </li><li> 피펫으로 효소를 제거하고 잔류 효소를 대체하기 위해 두 번 5 ml의 0.01 M 구연산 버퍼와 얼음에 뿌리 끝을 씻는다. </li></ol></li><li> 루트 침용 <ol><li> 두 번주의 깊게 같은 시계 접시에 1 ml의 96 % 에탄올로 세척 루트 팁. 갓 준비 고정액 (25 % 에탄올 75 % 아세트산)와 에탄올을 교체합니다. 10 ~ 15를 사용하여루트 팁 당 μL 정착. </li><li> 해부 바늘이나 집게로 2 ML 튜브에 정착와 함께 전송 루트 팁과 분해 루트 분열 조직. 세포 현탁액을 얻기 위해 세포를 다시 중단 튜브 20 번 눌러. 2 개월 -20 ° C 최대의 세포 현탁액을 저장합니다. </li></ol></li><li> 세포 현탁액의 적하 <ol><li> 50 ° C에서 뜨거운 접시에 물을 적신 종이 조직의 2 ~ 3 층을 놓습니다. 30 분 동안 냉장고에 얼음처럼 차가운 수돗물에 현미경 슬라이드를 담가. 장소는 축축한 종이 티슈 위에 슬라이드. </li><li> 피펫 7-10 세포 현탁액의 μL와 핫 플레이트에 배치 된 냉각 슬라이드에 20cm의 거리에서 드롭합니다. 피펫 (10) 슬라이드에 세포 현탁액과 같은 장소에 아세트산 - 에탄올 혼합물의 μL 및 추가 2 분 동안 핫 플레이트에 슬라이드를 유지. 물티슈없이 핫 플레이트에 슬라이드를 배치하고 1 분 동안 건조 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 품질 관리 및 스토리지 박슬라이드의 전자 <ol><li> 염색체 스프레드의 품질을 제어하는​​ 위상차 현미경을 사용하여 슬라이드를 확인한다. -20 ° C에서 코 플린 항아리에 96 %의 에탄올에 침지하여 같은 날 또는 저장 중 슬라이드를 사용합니다. </li></ol></li><li> 물고기 전에 슬라이드 전처리; 모든 단계는 실온에서 수행 <ol><li> 배 SSC의 50 ㎖를 포함하는 코 플린 항아리에 넣어 슬라이드 5 분 (20 배 SSC는 3 M의 NaCl 300 MM의 트리 소듐 시트 레이트를 포함). 3-10 분 동안 45 % 아세트산 50 ㎖를 함유하는 코 플린 항아리 집게, 이전 슬라이드를 사용. </li><li> 전달은 10 분 동안 2 배 SSC 50 ㎖를 함유하는 코 플린 항아리에 슬라이드. 10 분 동안 (2 × SSC)에 4 % 포름 알데히드의 50 ㎖를 포함하는 코 플린 항아리로 전송 슬라이드 빠져들게 슬라이드 염색체를 해결하려면. </li><li> 50 ml의 2 배 SSC를 포함하는 코 플린 항아리, 4 분 각각의 슬라이드 3 회 세척하여 포름 알데히드를 제거합니다. 수직에서 70 %의 시리즈에서 2 분, 90 %, 100 % 에탄올, 각각 건조 슬라이드의 코 플린 항아리에 슬라이드를 탈수위치. </li></ol></li></ol> 제자리 하이브리드 2. 형광 (물고기) <ol><li> 각 슬라이드에 대해, 탈 포름 아미드 10 μL, 4X 혼성화 완충액 5 μL를 사용하여 총 20 μL의 혼성화 용액을 제조 하였다 (200 ㎕를 완충액 80 ㎕의 20 배 SSC, 8 ㎕의 1 M 트리스 -HCl pH가 8.0를 포함 1.6 ㎕의 0.5 M EDTA, 11.2 μL 10 μg의 / μL 연어 정자와 99.2 μL의 DNase를없는 물), 프로브의 3 μL와 DNase를없는 물 2 μL. </li><li> 24 X 32mm 커버 슬립과 슬라이드 커버 당 혼성화 용액 20 μl를 추가하고 고무 시멘트와 커버 슬립을 체포. 핫 플레이트에서 2 분 동안 80 ℃에서 프로브와 동시에 슬라이드 변성. </li><li> 전송 습기 챔버에 슬라이드와 37 ° CO / N 피 빛 슬라이드를 품어. 배 SSC와 코 플린 항아리에 슬라이드를 세척하여 커버 전표를 제거합니다. 그리고 55-60 ° C의 2 배 SSC를 포함하는 코 플린 항아리에 넣어 슬라이드 20 분 동안 품어. </li><li> 실온에서 2 분 동안 코 플린 항아리에 SSC를 2 배 슬라이드를 놓습니다. 각각 70 %, 90 %, 100 % 에탄올, 일련의 2 분 동안 코 플린 항아리 슬라이드 탈수. </li><li> 강렬한 빛을 방지, antifade 설치 매체에 / ㎖ 4 &#39;, 6 diamidino-2-phenylindoline 1 μg의 (DAPI)과 슬라이드와 Counterstain과를 공기 - 건조. </li></ol> 3. 현미경 분석 및 저장 <ol><li> 표면 형광 현미경을 사용하여 슬라이드를 분석한다. 필터의 선택은 라벨 프로브 형광 색소 사용에 의존한다. 필요한 경우, 1 년까지 어두운 조건에서 4 ° C에서 저장 슬라이드. </li></ol>

<ol><li>Geber, G., Schweizer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochemical+heterochromatin+differentiation+in+Sinapis+alba+%28Cruciferae%29+using+a+simple+air-drying+technique+for+producing+chromosome+spreads%5BTitle%5D)+AND+%22Pl+Syst+Evol%22%5BJournal%5D)">Cytochemical heterochromatin differentiation in Sinapis alba (Cruciferae) using a simple air-drying technique for producing chromosome spreads.</a> Pl Syst Evol. 158 (2-4), 97-106 (1988).</li>
<li>Andras, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+drop-spreading+technique+to+produce+cytoplasm-free+mitotic+preparations+from+plants+with+small+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosome+Res%22%5BJournal%5D)">A drop-spreading technique to produce cytoplasm-free mitotic preparations from plants with small chromosomes.</a> Chromosome Res. 7 (8), 641-647 (1999).</li>
<li>Rothfels, K. H., Siminovitch, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+air-drying+technique+for+flattening+chromosomes+in+mammalian+cells+grown+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+Technology%22%5BJournal%5D)">An air-drying technique for flattening chromosomes in mammalian cells grown in vitro.</a> Stain Technology. 33 (2), 73-77 (1958).</li>
<li>Martin, R., Busch, W., Herrmann, R. G., Wanner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+preparation+of+plant+chromosomes+for+high-resolution+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosome+Res%22%5BJournal%5D)">Efficient preparation of plant chromosomes for high-resolution scanning electron microscopy.</a> Chromosome Res. 2 (5), 411-415 (1994).</li>
<li>Kato, A., Albert, P. S., Vega, J. M., Birchler, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+fluorescence+in+situ+hybridization+signal+detection+in+maize+using+directly+labeled+probes+produced+by+high+concentration+DNA+polymerase+nick+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech.+Histochem%22%5BJournal%5D)">Sensitive fluorescence in situ hybridization signal detection in maize using directly labeled probes produced by high concentration DNA polymerase nick translation.</a> Biotech. Histochem. 81 (2-3), 71-78 (2006).</li>
<li>Kirov, I., Divashuk, M., Van Laere, K., Soloviev, A., Khrustaleva, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+easy+%27SteamDrop%27+method+for+high+quality+plant+chromosome+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cytogenet%22%5BJournal%5D)">An easy 'SteamDrop' method for high quality plant chromosome preparation.</a> Mol. Cytogenet. 7, 21(2014).</li>
<li>Spurbeck, J. L., Zinsmeister, A. R., Meyer, K. J., Jalal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+chromosome+spreading%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Genet%22%5BJournal%5D)">Dynamics of chromosome spreading.</a> Am J Med Genet. 61 (4), 387-393 (1996).</li>
<li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synteny+between+Brachypodium+distachyon+and+Hordeum+vulgare+as+revealed+by+FISH%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosome+Res%22%5BJournal%5D)">Synteny between Brachypodium distachyon and Hordeum vulgare as revealed by FISH.</a> Chromosome Res. 18 (7), 841-850 (2010).</li>
<li>Kato, A., Lamb, J. C., Birchler, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+painting+using+repetitive+DNA+sequences+as+probes+for+somatic+chromosome+identification+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Chromosome painting using repetitive DNA sequences as probes for somatic chromosome identification in maize.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 101 (37), 13554-13559 (2004).</li>
<li>Pan, W. H., Houben, A., Schlegel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+effective+cell+synchronization+in+plant-roots+by+hydroxyurea+and+amiprophos-methyl+or+colchicine%5BTitle%5D)+AND+%22Genome%22%5BJournal%5D)">Highly effective cell synchronization in plant-roots by hydroxyurea and amiprophos-methyl or colchicine.</a> Genome. 36 (2), 387-390 (1993).</li>
<li>Kim, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+karyotyping+of+sorghum+by+in+situ+hybridization+of+landed+BACs%5BTitle%5D)+AND+%22Genome%22%5BJournal%5D)">Integrated karyotyping of sorghum by in situ hybridization of landed BACs.</a> Genome. 45 (2), 402-412 (2002).</li>
<li>Lapitan, N. L. V., Brown, S. E., Kennard, W., Stephens, J. L., Knudson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FISH+physical+mapping+with+barley+BAC+clones%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">FISH physical mapping with barley BAC clones.</a> Plant J. 11 (1), 149-156 (1997).</li>
<li>Aliyeva-Schnorr, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytogenetic+mapping+with+centromeric+BAC+contigs+shows+that+this+recombination-poor+region+comprises+more+than+half+of+barley+chromosome+3H%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Cytogenetic mapping with centromeric BAC contigs shows that this recombination-poor region comprises more than half of barley chromosome 3H.</a> Plant J. 84, 385-394 (2015).</li>
</ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

염색체 준비 실험 잔디 가족 (벼과)에 속하는 시리얼 어린 뿌리를 이용하여 수행되었다. 모든 분석 종은 이배체 게놈 세트 14 상대적으로 긴 유사 분열 중기 염색체 (11 ~ 15 μm의)가 큰 게놈 종 (5.1-7.9 GBP)에 속한다. 발아 한 뿌리의 길이가 세포 분열 조직의 최대치를 얻기 위해 2 cm 이상이 아니었다. 분열하는 세포의 동기화 유사 분열 중기의 수량이 10 퍼 향상 20 시간 긴 빙수 처리에 의해 달성되었다. (I) 상대 습도 50 % -55 %와 효소 처리 (II) 시간 : 두 단계 고품질 염색체 제제의 제조를 위해 중요하다. 첫번째 점은 유리 슬라이드의 근접 열판에서 젖은 종이 조직을 배치함으로써 달성되었다. 상대 습도는 습도로 측정 하였다. 공장의 제조를위한 최적의 습도염색체 키로프 등에 의해보고 습도 유사 하였다. 6. 최적의...

계내 혼성화 (FISH)의 형광은 염색체 수준에서 단일 및 높은 복사 서열의 물리적 맵핑에 대한 효과적인 도구이다. 전제 조건은 높은 품질의 염색체 스프레드의 준비입니다. 동물과 식물 세포에 대한 동등하게 적합 할 것이 더 일반적인 염색체 준비 프로토콜이 없습니다. 식물 염색체의 준비로 인해 다른 종 내에서 단단한 세포벽과 각종 세포질의 일관성에 특히 도전이다. 식물 염색체의 제조를위한 바람직한 방법 중 하나는 드롭 확산 기법 및 공기 - 건조 기술로 알려진 1,2 소위 드롭 기술이다. 이 방법은 처음 체외 성장 포유 동물 세포 3 Rothfels과 Siminovitch에 의해 1958 년에 도입되었다. 나중에 마틴 등 알. 4 카토 등. 5는 식물이 방법을 적용. 최근 방법이라는 &#39;SteamDrop &amp;# 39; 비 중첩 염색체 (6)의 제조에 수증기를 사용하는 개발되었다. 높은 습도의 긍정적 인 영향은 이전 관찰되었지만 7 &#39;SteamDrop&#39;는 고품질 염색체 제제 (6)의 제어 흐름을 제공한다. 증기 처리는 아마도 염색체 단백질의 일부​​ 수정에 접속 염색체 연신시킨다. 전체 중기의 충분한 수의 고정 후속 물고기 실험은 기술적 인 전문 지식을 필요로 확산 있지만 중기 스프레드 결과의 품질은 매우 높다. 여기에서 우리는 단일 및 높은 사본 프로브 5,8의 물고기 검출에 적합한 유사 분열 시리얼 염색체의 제조를위한 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 카토 50 % -55 %의 상대 습도 하에서 수행 (9) (도 1)에 의해 설명 풍건 적하 법의 개선 된 변이체이다. 이 프로토콜은 감소 된 수를 포함그 적용이 쉽고 효율적이고 재현하게 세척 단계. 우리가 Hordeum vulgare의, 수평 bulbosum, 수평 marinum, 수평 murinum, 수평 pubiflorum 및 Secale의 cereale 높은 품질의 염색체 확산과 물고기 결과를 얻었다이 프로토콜을 사용.

<table><tbody><tr><td>핫 플레이트</td><td>MEDAX GmbH</td><td>12603</td><td></td></tr><tr><td>셀룰라제 R10</td><td>Duchefa</td><td>C8001</td><td></td></tr><tr><td>셀룰라제&nbsp;</td><td>CalBioChem</td><td>219466</td><td></td></tr><tr><td>Pectolyase</td><td>Sigma</td><td>P3026</td><td></td></tr><tr><td>Cytohelicase</td><td>Sigma</td><td>C8274</td><td></td></tr><tr><td>Texas Red-12-dUTP</td><td>Invitrogen</td><td>C3176</td><td>직접 형광색소&nbsp;</td></tr><tr><td>Fluor488-5-dUTP</td><td>Invitrogen</td><td>C11397</td><td>직접 플루오로크롬&nbsp;</td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>Olympus BX61</td><td>BX61</td><td></td></tr><tr><td>CCD 카메라</td><td>Orca ER, Hamamatsu</td><td>C10600</td><td></td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)&nbsp;</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td>형광 염료</td></tr></tbody></table>

식물에서 물고기에 적합한 빠른 공기 건조 떨어 뜨리 염색체 제조 방법

A Fast Air-dry Dropping Chromosome Preparation Method Suitable for FISH in Plants

염색체 스프레드의 제조 현장 하이브리드에 형광의 성공적인 성능 (FISH)을위한 전제 조건이다. 높은 품질의 식물 염색체 스프레드의 준비로 인해 단단한 세포벽에 도전한다. 식물 염색체의 제조를위한 승인 방법 중 하나는 소위 드롭 제제, 또한 드롭 확산 또는 공기 - 건조 기술로 알려져있다. 여기, 우리는 유사 분열 염색체의 빠른 준비를위한 프로토콜은 단일 및 높은 사본 DNA 프로브의 물고기 검출에 적합한 확산 제시한다. 이 방법은 50 % -55 %의 상대 습도 하에서 수행 풍건 드롭 방식의 개선 된 변이체이다. 이 프로토콜은 그 적용이 쉽고 효율적이고 재현하게 세척 단계의 감소 된 수를 포함한다. 이 방법의 명백한 이점은 성공적인 FISH 분석을위한 완벽한 전제 조건으로서 잘 확산, 손상되지 않은 수많은 중기 염색체이다. 이 프로토콜을 이용하여, 우리는 높은 품질을 얻을 CHROMosome 스프레드와 Hordeum vulgare의, 수평 bulbosum, 수평 marinum, 수평 murinum, 수평 pubiflorum 및 Secale의 cereale에 대한 재현 물고기 결과.

유사 분열 중기 스프레드 현미경 슬라이드는 전술 빠른 공기 건조 적하 염색체의 제조 방법에 의해 제조 하였다 (SUPPL.도 1). FISH 분석은 모두, 반복적이고 단일 - 카피 시퀀스를 사용하여 수행 하였다. 이미지는 대응하는 형광체의 여기를 가능 필터 세트 표면 형광 현미경에 의해 얻은 고감도 CCD 흑백 카메라에 의하여 촬영되었다. 화상 획득을 위해 우리는 화상 취득 소프트웨어가 설치된 컴퓨터를 이용했다. 5S rDNA의 [CTT] (10), 및 단일 복사 프로브를 사용하여 유사 분열 중기 염색체에 물고기 실험의 결과는 별개 있었다 Hordeum vulgare의에 대한 높은 품질의 (Figre 2A, B), H. bulbosum (그림 2C), H. marinum, 수평 murinum, 수평 pubiflorum 및 Secale의 cereal...

프로토콜은 단일 및 고 복제 DNA 프로브의 FISH 검출에 적합한 빠른 공기 건조 낙하 방법으로 고품질 유사 분열 식물 염색체 확산을 준비하기위한 것으로 설명됩니다.

Preparation of chromosome spreads is a prerequisite for the successful performance of fluorescence in situ hybridization (FISH). Preparation of high ...

이 방법의 전반적인 목표는 단일 및 고복제 DNA 프로브를 사용하는 형광 인시튜 하이브리다이제이션(fluorescence in situ hybridization) 기술에 적합한 식물 염색체를 준비하는 것입니다. 이 방법은 염색체 재배열 검출, 염색체 상의 유전자 마커 순서 결정, 서로 다른 종 간의 비교 분석과 같이 세포유전학 및 게놈 연구의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 절차의 주요 장점은 염색체 도말 표본 제작이 빠르고 쉽고 효율적으로 이루어진다는 점입니다.세포 현탁액은 -20°C에서 최대 2개월까지 보관할 수 있으며, 필요시 염색체 준비에 사용할 수 있습니다. 우리는 이 방법의 아이디어를 처음 얻었는데, 인간의 일수에 따라 적절한 염색체의 품질과 수가 급격히 증가하는 것을 관찰했기 때문입니다. 22~24°C의 암조건에서 페트리 접시 내의 습윤한 여과지 두 층 위에 보리 씨앗 10~20개를 2일 동안 발아시킵니다. 2일 후, 면도날을 사용하여 씨앗에서 길이가 1~2cm인 활력 있는 뿌리를 절단합니다.다음으로, 차가운 수돗물이 담긴 500 milliliter 유리병을 분쇄 얼음물에 넣어 얼음처럼 차가운 물을 준비합니다. 이 냉수를 폭기하고 뿌리 끝을 20시간 동안 담가 중기 세포의 빈도를 높입니다. 이후 뿌리를 물에서 50 milliliter의 에탄올 아세트산 고정액으로 옮겨 실온에서 이틀 동안 고정합니다.50 mL 유리 비커에 30 mL의 ice-cold 수돗물을 넣고 10~20개의 뿌리를 5분 동안 두 번 세척합니다. 핀셋을 사용하여 뿌리를 하나씩 30 mL의 citrate buffer로 옮깁니다. 유리 비커를 흔들어 뿌리를 5분 동안 두 번 세척합니다.그 다음, 현미경 하에서 뿌리를 거름종이 위에 올려 액체를 완전히 제거합니다. 면도날을 사용하여 원치 않는 비분열조직을 잘라냅니다. 이 절차에서 가장 중요한 단계는 종마다 다를 수 있는 적절한 소화 시간을 결정하는 것입니다.최대 20개의 뿌리 끝을 1 mL의 효소 혼합액에 넣고 37 °C에서 약 50분 동안 배양합니다. 현미경 하의 시계접시 내에서 식물 조직을 연화시킨 후, 피펫으로 효소를 제거하고 5 mL의 0.01 M 시트르산 완충액으로 얼음 위에서 뿌리 끝을 세척하여 잔류 효소를 제거합니다. 동일한 시계접시에서 1 mL의 96% ethanol로 뿌리 끝을 두 번 더 주의 깊게 세척합니다.그 후 뿌리 끝당 10 to 15 µL의 갓

a-fast-air-dry-dropping-chromosome-preparation-method-suitable-for

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이것은 zebrafish에 대한 높은 처리량 정자 cryopreservation 프로토콜입니다. 정자는이 프로토콜을 사용하면 이후의 체외 수정에 25 % 다산의 평균을 가지고 있으며, 수년 동안 안정 cryopreserved.

높은 처리량 Zebrafish의 정자 Cryopreservation에 대한 방법과 체외에서 수정

형광성의<em&gt; 현장에서</em모기의 Mitotic의 염색체에&gt; 하이브리드

이 기사는 제브라피시 꼬리 클립에서 DNA를 추출하는 방법에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 제브라피시 유전자형을 빠르고 효율적으로 분석하는 방법을 보여줍니다.

테일 클립에서 DNA 추출: 제브라피시 유전형 분석에 사용되는 방법

고해상도 용융 분석 (르마)와 함께 PCR은 제브라 피쉬의 유전자형에 신속하고 효율적인 방법으로 보여줍니다.

고해상도 용융 분석과 PCR을 이용하여 신속하고 효율적인 Zebrafish의 유전자형

염색체 페인팅은 세포 핵의 조직과 카요타입의 진화를 연구하는 데 유용한 방법입니다. 여기서, 우리는 이후 시상 혼성화(FISH)에서 2차원 및 3차원 형광에 사용되는 단일 폴리텐 염색체로부터 관심 있는 특정 영역을 분리하고 증폭시키는 접근법을 시연한다.

말라리아 모기의 2D 및 3D 염색체 페인팅

Zebrafish 최근 연구 개발 하는 동안 DNA 복제 타이밍을 vivo에서 모델 시스템으로 사용 되었다. 여기 상세한 프로필 복제 타이밍에 zebrafish 태아를 사용 하기 위한 프로토콜. 이 프로토콜 돌연변이, 개별 세포 유형, 질병 모델, 그리고 다른 종에서 복제 타이밍을 공부 하기 쉽게 적응 될 수 있다.

DNA 복제 타이밍 Zebrafish Vivo에서 모델 시스템으로 사용 하 여 프로 파일링

공동 기존 방법의 어려움을 극복 하기 위해 공장에서 여러 공상 형광 성 융해 단백질을 표현 하기 위한 새로운 방법을 개발 했습니다. 그것은 단백질 공동 식 달성 하기 위해 카세트를 표현 하는 여러 기능적으로 독립적인 단백질을 포함 하는 단일 식 플라스 미드를 사용 하 여 활용 합니다.

식물에는 효율적인 방법으로 여러 공상 형광 성 융해 단백질의 공동 식

Zebrafish는 유전자 편집 기술의 출현으로 특히 생물 의학 연구에서 안정적인 유전자 모델 생물으로 사용 되었습니다. 애벌레 고기 예상 되는, DNA 추출 및 유전자 식별 전하실 수 있습니다. 여기, 꼬리 자르기, 빠르면 72 h 후 수정 하 여, zebrafish 애벌레에 대 한 효율적인 유전형 절차를 설명 합니다.

높은 처리량 DNA 추출 및 지 느 러 미 클리핑에 의해 3dpf Zebrafish 애벌레의 유전형

여기서, CRISPR/Cas9 게놈 녹아웃 전기 물고기를 생산하고 후방에 프로토콜이 제시된다. 상세히 설명된 것은 체육관 및 모르미리드 모두에 필요한 분자 생물학, 사육 및 축산 요구 사항, 및 Cas9-유도 인델 F0 애벌레를 생산하는 주입 기술이다.

불꽃을 침묵 : 약한 전기 물고기에서 CRISPR / Cas9 게놈 편집

핵 표면 퍼짐은 만피증 도중 염색체 사건을 공부하기 위한 필수적인 공구입니다. 여기서 우리는 제브라피쉬 정자세포로부터 의한 1단계 진행 중에 메오성 염색체를 준비하고 시각화하는 방법을 시연한다.

제브라피쉬 정자세포에서 메오틱 염색체 스프레드 의 준비

이 프로토콜은 과립세포 세포가 없는 제브라피시에서 깨끗한 I기 난모세포를 신속하게 분리하기 위한 수정된 절차를 설명하여 난모세포별 연구를 위한 편리한 방법을 제공합니다.

과립 세포가 없는 제브라피시에서 Stage I 난모세포의 신속한 분리

학습하세요 식물 염색체를 빠른 공기 건조 떨어뜨리기 방법으로 제조하여 FISH 분석에 적합한 고품질 유사분열 염색체를 얻는 기술입니다. 이 방법은 세포유전학 및 게놈 연구의 효율성을 높입니다.

식물에서 물고기에 적합한 빠른 공기 건조 떨어 뜨리 염색체 제조 방법

더 많은 동영상 탐색