흐름 열 커튼 : 효율성과 감도의 최적화

이 방법의 전반적인 목표는 커튼 흐름 기둥의 최적화를 통해 분리의 효율성과 감도를 향상시키는 것입니다. 이 방법은 환경 과학, 법의학 분야 및 효율적이고 고감도의 분리 기술이 필요한 미량 시료 분석이 필요한 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 기존의 HPLC 분리 방법에 비해 분리 효율성과 분석 감도를 증가시킨다는 것입니다.

이 방법은 경제적이고 시간 효율적인 방식으로 분리 파워를 증가시켜 용량을 가속화할 수 있는 수단을 제공할 수 있습니다. 커튼 플로우 칼럼은 HPLC 실무자에게 새로운 개념이지만 사용법은 복잡하지 않습니다. 단순히 적절한 유속비의 최적화가 필요합니다.

먼저, 100% 초순수와 100 메탄올이 담긴 병을 HPLC 기기의 이동상 A 및 B에 대해 준비합니다. 제조업체 요구 사항에 따라 펌프를 퍼지합니다. 퍼지 후 자동 샘플러의 주입기 밸브에서 펌프 라인을 분리하십시오.

분리된 라인에 T 피스를 부착합니다. T 피스의 각 포트에 내경 0.13mm, 길이 15cm의 튜브를 부착합니다. T 피스에서 하나의 튜브를 자동 샘플러의 인젝터 밸브에 연결합니다.

마지막으로 펌프를 분당 1밀리리터의 유량으로 설정합니다. 두 개의 빈 수집 용기의 무게를 측정하고 중앙 및 주변부로 표시합니다. 60초 동안 중앙 표지된 용기를 사용하여 주입기에서 나오는 라인에서 나가는 이동상을 수집합니다.

중앙 용기의 무게를 다시 측정하고 수집된 이동상의 질량을 측정합니다. 주변 장치 레이블이 지정된 vessel이 있는 주변 포트의 흐름을 수집하여 이 프로세스를 반복합니다. 표시된 방정식을 사용하여 각 라인의 유량 또는 분당 밀리리터의 백분율을 결정합니다.

중앙 포트는 약 40%이고 주변 장치 포트는 약 60%여야 합니다. 값이 2% 이상 차이가 나면 튜빙 길이 또는 지름을 변경하여 유량 비율을 조정하십시오. 그런 다음 수집 및 계산 단계를 반복합니다.

그런 다음 펌프 흐름을 끄고 주입기 라인을 컬럼 주입구의 중앙 포트에 연결합니다. 또한 T 피스의 라인을 컬럼 입구의 주변 포트까지 연결합니다. 시스템 조정을 완료하기 B.To 유속을 100% 이동상의 분당 1밀리리터로 천천히 증가시키고, 10분 동안 분당 1밀리리터의 속도로 100% 메탄올을 유동시켜 컬럼을 평형화합니다.

시작하려면 튜브를 사용하여 중앙 배출 포트를 UV-Vis 검출기에 연결합니다. 동일한 유형과 길이의 튜빙을 CF 컬럼의 주변 출구 포트에 연결합니다. 그런 다음 펌프를 분당 1밀리리터의 유량으로 설정합니다.

두 개의 빈 수집 용기에 용기를 싣고 하나는 중앙 수집용, 다른 하나는 주변 장치용으로 다시 레이블을 지정합니다. 60초 동안 중앙 표지 용기를 사용하여 UV-Vis 검출기에서 나가는 이동상을 수집합니다. 수집된 용기의 무게를 다시 측정하여 회피된 용액의 질량을 확인합니다.

주변 출구 포트와 레이블이 지정된 수집 용기에 대해 이 과정을 반복합니다. 이제 입구 흐름에 대해 이전에 수행한 대로 각 라인의 백분율 흐름을 결정합니다. UV-Vis 라인은 21%여야 하고 주변 출구 흐름은 79%여야 합니다.

유속비가 크게 벗어나면 UV-Vis 검출기의 출구에 부착된 튜브의 크기를 조정하여 중심 유동 비율을 변경합니다. 컬럼의 입구와 출구에서 중앙과 주변 사이의 유속 비율은 커튼 흐름 컬럼의 최적 성능을 보장하기 위해 이 프로토콜을 따르는 것이 중요합니다. 액티브 플로우 기술 칼럼은 컬럼 베드 불질성을 극복하고 분리 성능을 개선하기 위해 멀티포트 컬럼 엔드 피팅에 특수 프릿 설계를 사용하여 개발되었습니다.

페네톨, 부틸벤젠 및 펜틸벤젠을 포함하는 테스트 혼합물을 기존의 4.6 및 2.1mm 내경 컬럼과 4.6mm 내부 직경 커튼 플로우 컬럼에서 분석했습니다. 혼합물의 분리는 표준 컬럼에 비해 커튼 플로우 컬럼의 효율성과 민감도 측면에서 성능이 향상되었음을 보여줍니다. 커튼 플로우 컬럼을 사용하면 피크 부피가 감소했음에도 불구하고 부틸벤젠에 대한 신호가 증가했습니다.

이 기술을 마스터하면 제대로 수행되면 30분 이내에 설정할 수 있습니다. 커튼 흐름 기둥 설정은 반복해서 재사용할 수 있지만 유동 비율은 정기적으로 확인해야 합니다. 이 절차를 시도하는 동안 가능한 한 규정된 유량 비율에 가깝게 유지하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

커튼 플로우 컬럼은 HPLC 분야의 연구자들이 컬럼 및 UPLC 기기의 한계를 뛰어넘어 분리 성능을 저하시키지 않으면서 더 빠른 시료 분석을 얻을 수 있는 길을 열었습니다. 이 동영상을 시청한 후에는 기존 HPLC 컬럼보다 더 나은 분리를 제공할 수 있는 커튼 플로우 컬럼의 중요성을 이해해야 합니다.