Name: 흐름 열 커튼 : 효율성과 감도의 최적화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: 학습하세요 커튼 플로우 컬럼 최적화를 통해 HPLC 분리 효율성과 감도를 향상시키는 방법을. 환경과학 및 법의학 분야의 미량 샘플 분석에 적용할 수 있는 경제적이고 시간 효율적인 기술입니다.

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저자 중 한 명(DK)이 Australian Postgraduate Award 수상을 인정합니다.

주의 : (메탄올에 대한, 즉 MSDS)를 사용하기 전에 모든 재료 및 시약에 대한 물질 안전 보건 자료 (MSDS)를 참조하십시오. 용매 및 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC) 용리액을 처리 할 때 모든 적절한 안전 관행의 사용을 확인합니다. HPLC, 분석 균형과 검출기 장비의 공학적 통제의 적절한 사용을 보장하고, 개인 보호 장비 (안전 안경, 장갑, 실험실 코트, 전체 길이 바지와 폐쇄 발가락 신발)의 사용을 보장합니다. 참고 :이 프로토콜은 UV-마주 검출기와 결합 된 HPLC 시스템에 CF 열을 사용하는 방법에 대한 지침이 포함되어 있습니다. 프로토콜은 독자를 가정하는 크로마토 그래피의 기본 지식과 경험을 가지고 작성되었습니다. HPLC 기기의 1. 설치 참고 : 용매의 선택, 검출기 파장이 섹션 즉 애널리스트의 요구를 맞게 변경 될 수 유량이관심있는 샘플에 적합하다. <ol><li> 이동상으로 라인 B의 라인 A에 대한 100 % 초순수와 HPLC 기기 (예를 들면, 밀리 Q 물) 100 % 메탄올을 준비하고 제조업체의 요구 사항에 따라 펌프를 제거. </li><li> 254 nm의 자외선 마주 검출기를 설정합니다. </li><li> 설정의 사전 주입 유량 분할 모드, 또는 듀얼 펌프 유량 설정 중 하나를 선택합니다. 분할 흐름 모드의 3 단계로 진행 듀얼 펌프 모드, 2 단계로 진행합니다. </li></ol> 2. 분할 흐름 시스템 설치 <ol><li> 자동 샘플러의 분사 밸브에서 펌프 라인을 분리합니다. </li><li> 펌프 라인에 T-조각을 연결합니다. </li><li> T 개의 조각의 각 포트에 0.13 mm ID를 튜브의 15cm 조각을 연결합니다. </li><li> 자동 샘플러의 밸브를 분사기하기 위해 T-조각에서 하나의 튜브를 연결합니다. </li><li> 1.0 ml의 분에 펌프를 설정 -1. </li><li> 40 % CF 상기 컬럼의 유입구 조정 흐름의 분할 비율 펌프 라인을 연결하기 전에 6<html> 0 % (중심선 : 주변 라인)와 같은 단계 2.7에 따른다. </li><li> 스플릿 - 유동 시스템에 CF 도입 비율 조정 <ol><li> 분석 저울을 사용하여 두 개의 빈 수집 용기의 질량을 측정 한 컬렉션 중앙 용기 (주변 포트에 T-부분에서 라인 포트 하나를 중앙에 자동 샘플러에서 라인 하나) 주변 다른 하나의 레이블 . </li><li> 1.0 분, 그 질량 2.7.1 측정 하였다 수집 용기로 (컬럼에 연결되는 지점에서) 인젝터에서 나오는 줄에서 종료 이동상를 수집합니다. </li><li> 분석 규모의 회수 조를 다시 무게 수집 이동상의 질량을 결정한다. </li><li> 반복 주변 포트에 연결되는 T-부분에서 라인을 종료 용리액을 위해 2.7.3에 2.7.2 단계를 반복합니다. </li><li> 흐름의 비율을 결정 (ML 분 -1) 이하의 식에 따라 흐름의 각 행에서 1 &quot;SRC =&quot;/ 파일 / ftp_upload / 53471 / 53471eq1.jpg &quot;/&gt; </li><li> 40 % 유량비 조정 : 60 % (± 2 %) (중앙 포트 분사 장치에서 행 : 주변 포트 T 피스의 선). 중앙 포트 유동 비율로 인젝터로부터 라인이 40 % 이상이면, 튜브의 내경이 감소 또는 그 길이를 증가시킴으로써 압력 강하를 증가시킨다. 중앙 포트 유동 비율로 인젝터로부터 라인이 40 % 미만이면, 튜브의 내부 직경을 증가 시키거나 튜브의 길이를 감소시킨다. </li><li> 유동 비율이 조정되면 펌프가 꺼져 흐름십시오. </li><li> 컬럼 입구의 중앙 포트와 컬럼 입구의 주변 포트에 T-조각의 라인에 인젝터에서 선을 연결합니다. </li><li> 1.0 mL를 천천히 분당 유량 -1 100 % 광고 B.에서 진입로 </li><li> 시킴으로써 컬럼 (4.6 mm ID × 100 mm 길이) 평형화100 % 메탄올 (선 B)의 이동상은 1.0 ml를 분으로 컬럼을 통과하는 -1을 10 분 동안. 이 시간은 사용자가 사용할 수있다 다른 컬럼의 크기에 따라 조정됩니다. </li><li> CF 콘센트의 튜닝을 위해 4 &#39;CF 출구 흐름의 조정을&#39;단계로 이동합니다. </li></ol></li></ol> 3. 듀얼 펌프 시스템 설치 <ol><li> 인젝터에 HPLC 시스템 펌프를 연결 한 후 컬럼의 중앙 입구 포트에 분사에서 선을 연결합니다. </li><li> 컬럼의 입구 주변 포트에 직접 추가 펌프를 연결합니다. 이 제 2 펌프 인젝터를하여이-전달합니다. </li><li> 0.4 ml의 분 -1을 100 % 메탄올 (라인 B)에서 (1.0 ml를 분 -1의 총 유량의 40 %를 나타낸다)로 중앙 포트에 연결된 시스템의 펌프의 유량을 램프. </li><li> 단계 3.3과 동시에, 총 유량의 60 % 용액의 0.6 분 -1 (담당자 주연 펌프의 유량을 램프1.0 ml의 분 -1) 100 % 메탄올 (라인 B)에서. </li><li> 1.0 ml를 분으로 컬럼을 통과 -1을 10 분 동안 100 % 메탄올 (라인 B) 이동상시킴으로써 컬럼 (4.6 mm ID × 100 mm 길이) 평형화. 이 시간은 사용자가 사용할 수있다 다른 컬럼의 크기에 따라 조정됩니다. </li><li> CF 콘센트의 튜닝을 위해 4 &#39;CF 출구 흐름의 조정을&#39;단계로 이동합니다. </li></ol> CF 아울렛 흐름 4. 조정 <ol><li> 0.13 mm ID를 튜브의 15cm 조각을 사용하여 UV-마주 검출기에 중앙 출구 포트를 연결합니다. </li><li> CF 컬럼의 주변 출구 포트에 0.13 mm ID를 튜브의 15cm 조각을 연결합니다. </li><li> 분석 균형에 두 개의 빈 수집 용기의 질량을 달아 하나의 용기 중앙과 다른 주변 레이블을 붙입니다. </li><li> 1.0 분, 질량 4.2 측정 하였다 중앙 수집 용기 라벨에 UV-마주 검출기 (중앙 흐름)에서 ​​종료 이동상를 수집합니다. </li><li> 분석 규모 수집 된 용출액을 함유하는 수집 용기를 다시 무게 수집 이동상의 질량을 결정한다. </li><li> 반복 4.4 주변 출구에서 줄을 종료 용리액 4.5 단계를. </li><li> 다음 식에있어서의 흐름의 각 라인에서의 흐름 비율을 결정 : <img alt="식 (2)" src="/files/ftp_upload/53471/53471eq2.jpg" /></li><li> 자외선 비스에서 중앙 유량 비율이 21 % 이상이면, 압력 손실을 증가시킨다. : 79 % (± 2 %) (라인에서 주연 출구 유동 UV-비스로부터 중앙 배출구 흐름 ​​:) 21 %로 유량비를 조정 자외선 비스 검출기의 출구에 부착 된 튜브의 내부 직경을 감소시킴으로써, 또는 그 길이를 증가시킨다. 자외선 비스에서 중앙 유량 비율이 21 % 미만인 경우, UV-비스 검출기의 출구에 부착 된 튜브의 내부 직경을 증가 시키거나 튜브의 길이를 감소시킨다. 튜브의 길이가 변경 될 때마다, 반복4.7-4.3 단계를 반복합니다. 참고 : &#39;가상&#39;2.1 mm 아이디 모드에서의 CF 열 분석을위한 준비가되어 있습니다. </li></ol>

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</ol>

이 작업은 UWS와 ThermoFisher Scientific의 지원을 받았습니다.

본 연구는 효율 및 감도의 측면에서 분석 성능을 테스트하기 위해 CF 크로마토 그래피 컬럼 간 실험실 분석을 포함했다. 3 &#39;섹션에 설명 된대로 CF 열은 이중 펌핑 시스템으로 설정했다. (: 주변 센터)가 CF 컬럼의 입구에 이중 펌프 시스템은 40:60의 흐름 비율을 달성하기 위해 &#39;설정합니다. 40:60 (중앙 말초) 유량의 비율은 각각 40 % 및 총 유량의 60 %를 나타내는 값으로, 각 펌프의 유량을 설정하여 수행 하였다. CF 컬럼 출구 &quot;절에 설명 된 절차에 따라 2.1 mm의 ID와 &#39;가상&#39;항목에 동조 4-. CF 배출 유량 조정 &#39;. 페 네톨, 부틸 벤젠 및 펜틸을 포함하는 시료 액 4.6 mm 아이디 CF 컬럼 (22:78) 및 종래의 4.6 및 2.1 mm의 ID 컬럼 사이의 분리 성능 비교 시험 표준으로 사용 하였다.도 4은 chromatograp의 오버레이이다테스트 혼합물의 HIC 분리는 세 개의 열 각각을 사용하여 수행. 이 ...

최근에는 고속 액체 크로마토 그래피 (HPLC) 컬럼을위한 기술이 크게 발전하고있다; 최대 용량은 주로 작은 입자 크기를 사용하고,보다 효율적으로 코어 쉘 입자 상당히 확실히 증가하고있다. 분리는 일반적으로 더 효율적이기 때문에 피크가 지금 선명하고 1-8 따라서 키가 있기 때문에, 플로우에 대한 효과는 감도가 증가하고있다. 그럼에도 불구하고, 방사 층 얼룩이 모든 컬럼의 성능에 제한 요소가 여전히 있지만, 이것은 크로마토 그래피 수년이 알려진 이후 새로운 스토리 아니다. 열 침대 반경 방향 9-12 모두에서 이질적이며, 10,12-15 축 열을 따라. 벽 효과, 특히 분리 성능 7,16-18 손실에 중요한 공헌자이다. Shalliker와 리치 7 최근에 열 침대 이질성의 측면을 검토하고, 따라서이 discusse 할 필요는 없다D 여기에 추가. 충분할 말하고 있지만, 열 베드 패킹 밀도의 변동과 벽 효과 밴드 부분적 스프 충전과 유사한 플러그의 컬럼을 통해 용출되도록 용질 플러그의 왜곡을 초래할 오히려있는 얇은 평평한 고체 디스크 7보다 그릇 일반적으로 기본 교육 텍스트에 묘사. 실험 베드를 통하여 용질 이동이 가시화 될 수 있도록 수행 될 때 열 내부 플러그 프로필 부분적 중공이었고 밴드의 테일링 부는 주로 샘플 플러그의 벽 컴포넌트이다. 최종 결과는 디스크가 고체 12,14,17 평면 인 경우 요구되는 것보다 이들 &#39;부분적으로 중공&#39;플러그를 분리하는 많은 판을 소요한다는 것이다. 벽 효과 반경 패킹 밀도의 변화와 관련된 문제를 확대 대역을 극복하기 위해, 액티브 플로우 기술 (AFT)라는 열 기술의 새로운 형태가 7,19 설계 하였다. 이러한 설계의 목적이었다컬럼 (19)의 방사상 중심 영역에 용출 이동상과는 벽 영역을 따라 용출 용매의 물리적 분리 벽을 통해 효과를 제거한다. AFT 열 두 가지 유형이있다; 병렬 분단 흐름 (PSF) 열 및 커튼 흐름 (CF) 열 일곱. 이 프로토콜은 CF 컬럼의 최적화를 대상으로하기 때문에, PSF 열은 더 이상 설명되지 않을 것이다. 커튼 흐름 (CF) 커튼 흐름 (CF)가 열 형식 입구 및 컬럼의 출구 모두에서 AFT 엔드 피팅 이용한다. AFT 최종 피팅은 멀티 피팅 내부에있는 환상 프릿으로 구성되어 있습니다. 프릿은 세 부분으로 구성된다 : 부속 단부의 중앙 포트 피팅 단부의 주연 포트 (들)과 정렬되는 다공성 외측 부분, 및 배리어 링과 정렬 다공성 방사상 중앙부 그 어떤 단면을 막는 다공질 두 부분을 분리. 상기 유리 재 (19)의 반경 방향의 중앙과 외측부 사이 -flow 하나는 AFT 프릿의 설계를 도시한다도 2는 CF 칼럼 포맷을 나타낸다. 추가 이동상의 방사상 중심 영역을 통해 용질의 이동 &#39;커튼&#39;의 입구의 주변 포트를 통해 유입되는 동안 동작 모드 (CF)의 샘플은 피팅의 입구의 직경 중심 포트에 주입 기둥. 그러므로 시료는 그것을 통과 이동상을 갖는 컬럼의 외측 영역과 열 방사상 중심 영역에 침대 들어간다. (말초 포트 중앙)을 4.6 mm 내부 직경 (ID) 칼럼의 최종 피팅 입구 최적 6,7,16 인 연구는 약 40:60의 용적 유량비는 것을 보여 주었다. CF 열의 AFT 출구 상대 부 중앙과 주변 유동의 조정이 가능하고 거의 모든 소정 rati로 변화 될 수있다압력 관리를 통해 오. CF 컬럼의 최적화 등이 크게 분리 효율이나 검출 감도 열 기술의 다양한 기능적 측면을 개선 할 수있다. 이러한 방식으로는 &#39;벽없는&#39;, &#39;무한 직경&#39;또는 &#39;가상&#39;열은 6,10,18,20를 설립한다. CF 열 목적 적극적 벽 영역에 도달하는 샘플을 방지하기 위해 칼럼을 통해 샘플의 이동을 관리하는 것이다. 따라서, 검출기 종료시의 용질 농도는 자외선 (UV) 검출부 (16)를 사용하는 경우에도 질량 스펙트럼 검출 6을 이용하여 더 큰 경우, 종래의 열 형식보다 약 2.5 배 이상의 감도 증가를 극대화한다. 검출 감도가 향상되므로 CF 컬럼은 이상적으로 낮은 농도의 시료에 적합하다. 이러한 질량 분석기 (MS) (6)과 같은 속도 제한 검출기를 흐르게하도록 결합 될 때, 또한 그들은 이상적이다. 하는 A예를 들어, 4.6 mm 자료 형식 FT 칼럼은 21 %의 중심 흐름을 종료 조정함으로써, 동일한 선 속도로 작동 할 경우 표준 2.1 mm ID 포맷 열로 검출기에 용매를 동일한 볼륨을 제공하도록 조정될 수있다. 마찬가지로 AFT 칼럼은 43 %의 중심 흐름을 종료 조정함으로써 3.0 mm ID 항목으로서 검출기 동일한 용적 부하를 제공하도록 튜닝 될 수있다. 실제로 임의의 &quot;가상 &#39;열 형식 분석 6,18,22 요구에 맞게 제조 될 수있다. 입구에서이 특별히 디자인 된 최종 피팅을 사용하고, 출구는 진정한 벽없는 열이 설립되는 것을 보장한다. 입구의 중추 및 말초 포트 용매 전달 시스템 설정하는 방법은 두 가지가 있습니다. 분할 흐름 시스템 (6)와 두 개의 펌프 시스템의 6,7 3이 CF 시스템 세트 업의 각을 보여줍니다. 분할 유동 시스템 나는NA 분할 유동 시스템 (도 3a) 인젝터로 이어지는 펌프 유량은 이동상 이상의 유동 스트림은 다음에 접속하는 인젝터에 연결된 제로 데드 볼륨 T 피스를 이용하여 분할 전 인젝터이고 컬럼의 입구 단부 피팅 중앙 포트. 이동상의 제 2 유동 스트림 인젝터 작성자는-통과하여 컬럼 입구의 주변 포트에 연결된다. 중앙과 주변에 펌프 분사기로부터 라인 컬럼에 접속되기 전에, 즉 : 흐름의 분할 중에 유동 흐름 비율은 40:60 (주연 센터)로 조정된다. 두 펌프 시스템 CF 컬럼은 컬럼의 입구 단부 피팅 두 유동 스트림을 필요로한다. 설정된 HPLC 기기, 분할 흐름 오토 샘플러 / 인젝터의 종류에 따라 불가능할 수있다, 따라서 CF는 2 펌프 (도 21 (b))를 통해 달성 될 수있다. 각 펌프는 할당 중앙 또는 주변 장치 포트 및 유량 중앙 포트의 유량의 40 % 및 주변 포트에 대해 60 %를 나타 내기 위해 설정된 어느 하나에 접속된다. 총 유량은 1.0 ml의 분 -1 인 경우, 예를 들어, 중앙 펌프 유속을 0.4 mL의 분 -1로 설정하고, 주변 펌프는 0.6 ml의 분 -1로 설정된다. 동작 모드의 선택은 HPLC 계측 및 동작 모드 크로마토 그래피에 크게 의존한다. 샘플 부하 위치와 샘플 사이의 압력의 변화 위치가 분할 유량비를 방해가 발생할 수 있으므로,이 경우에 설정 이중 펌프 최적 CF 성능을 위해 권장된다 주입 일부 자동 시료 주입기, 예를 들어. 상관없이 CF 컬럼의 입구에 대해 선택된 설정 용매 전달 시스템은 CF 출구 최적화는 동일하게 남아있다. CF 컬럼의 출구 중앙 포트는에 작은을 가진 자외선 - 가시 (UV-비스) 검출기에 부착튜브의 가능한 볼륨 않도록 후 열 죽은 볼륨의 영향을 최소화합니다. , CF 열이 좁은 구멍 열을 에뮬레이트하기 때문에, 열 배출구와 상기 검출기 사이의 데드 볼륨은 CF 증류탑의 분리 성능에 불리하다. 중앙 포트 및 효율 및 감도 대역 넓혀 손실 데드 볼륨의 영향을 최소화 할 수있는 UV-비스 검출기 사이의 배관 용적의 작은 양을 보장하기 위해 중요하다. 따라서, 좁은 보어 튜빙 (0.1 mm의 ID)의 사용을 용이 부적절한 데드 볼륨을 첨가하지 않고, 압력 조정을 허용하도록 의뢰한다. 튜브는 주변 포트에 연결된 폐기물에 관한 것이다. CF 컬럼의 출구에, 분할 비율은 분석의 목적에 적합한 임의의 비율로 조절할 수있다. 4.6 mm 아이디 CF가 사용되는 경우, 예를 들면, 어느 43:57 또는 21:79 (중앙 말초)와 같은 비율로 설정하는 것이 편리한 &#39;가상&#39;3.0 mm ID 열 또는 2.1 mm ID 열 에뮬레이션을공손히. 그 방법은 분리 성능은 쉽게 벤치 마크입니다. 분할 비율은 상기 중앙 포트에 접속되고,주기 시간 동안 상기 주변 포트를 빠져 나가는 유동되는 검출기로부터 나오는 유량을 계량에 의해 측정된다. 각 포트를 통해 유동 비율은 측정 할 수 있고, 비율이 튜브 장착의 길이를 변경하거나, 다른 내부 직경 (ID)을 갖는 튜브를 사용하여 조정될 수있다. 이 비디오 프로토콜은 향상된 크로마토 그래피 성능을 위해 CF 칼럼의 운영 및 최적화 과정을 자세히 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>HPLC 기기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 펌프 CF 시스템 설정을 사용하는 경우</td> <td>추가 펌프</td><td></td><td></td>가 필요합니다.</tr><tr><td>커튼 플로우 HPLC 컬럼</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>정의되지 않음</td><td>곧 상업화</td></tr><tr><td>예정 메탄올</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td>HPLC 등급</td></tr><tr><td>PEEK 튜빙</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td>다양한 길이와 내경</td></tr>;<tr><td>PEEK 튜브 절단기</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td></td></tr><tr><td>분석 저울 저울 모든</td><td>브랜드</td><td></td><td></td></tr><tr><td>스톱워치</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td></td></tr>의 <tr><td>용리액 수집 용기</td><td>모든 브랜드</td><td></td>의 <td>1-2ml 샘플 바이알을 용리액 수집 용기로 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>T-piece</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

흐름 열 커튼 : 효율성과 감도의 최적화

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

Active Flow Technology(AFT)는 특별히 제작된 멀티포트 엔드 피팅을 사용하여 HPLC 컬럼의 분리 성능을 향상시키는 컬럼 기술의 한 형태입니다. 커튼 흐름(CF) 컬럼은 AFT 컬럼 제품군에 속하며, 특히 CF 컬럼은 샘플이 베드의 방사형 중앙 영역에 주입되고 용질 주입을 둘러싼 이동상의 커튼 흐름이 샘플이 벽으로 방사형 분산되는 것을 방지하도록 설계되었습니다. 컬럼은 '무한 직경' 컬럼으로 기능합니다. 이 설계의 목적은 컬럼 베드의 방사형 이질성을 극복하는 동시에 컬럼 베드의 방사형 중앙 영역으로의 샘플 부하를 최대화하여 검출 감도를 높이는 것입니다. 여기에 설명된 프로토콜은 최적화된 무한 직경 '가상' 컬럼에 대한 시스템 및 CF 컬럼 설정과 튜닝 프로세스를 간략하게 설명합니다.

AFT 열은 열 상 이성을 극복하고 분리 성능을 향상시키기 위해 멀티 컬럼 엔드 피팅 전문 프릿 디자인 (도 1)를 사용하여 개발되었다. CF 크로마토 그래피 컬럼 (그림 2)의 분리 성능에 간 실험실 연구는이 프로토콜 (23)의 3 절에 설명 된대로 (그림 3B)를 설정 이중 펌프 시스템을 실시 하였다. 세 컴포넌트 테스트 혼합물은 CF 열의 중앙 출구 흐름의 21 %가 검출기에 관한 한 &#39;가상&#39;2.1 mm ID를 통해 하에서 분석 하였다. 세 컴포넌트 테스트 혼합물의 분리는 표준 열로 CF 칼럼 상대 효율 및 감도의 측면에서 개선 된 성능을 나타낸다. 세 가지 구성 요소 테스트 혼합물 페 네톨, 부틸 벤젠 및 펜틸을 포함하고 기존의 4.6 및 2.1 mm ID 컬럼과 4.6 분석 하였다<html> 22:78 (중앙 : 주변)의 분할 비율 mm...

여기에서는 분리 성능 향상을 위해 CF(Curtain flow) 모드에서 AFT(Active Flow Technology) 컬럼의 작동 및 최적화를 위한 프로토콜을 제시합니다.

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

이 방법의 전반적인 목표는 커튼 흐름 컬럼(curtain flow column)의 최적화를 통해 분리의 효율성과 민감도를 향상시키는 것입니다. 이 방법은 효율적이고 매우 민감한 분리 기술이 필요한 환경 과학, 법의학 및 미량 샘플 분석 분야의 핵심 질문을 해결하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 기존의 HPLC 분리 방법에 비해 분리 효율과 분석 민감도를 높일 수 있다는 점입니다.이 방법은 경제적이고 시간 효율적인 방식으로 분리능과 그에 따른 처리 속도를 높이는 수단을 제공할 수 있습니다. 커튼 흐름 컬럼(curtain flow column)은 HPLC 사용자들에게는 새로운 개념이지만, 사용법이 복잡하지는 않습니다. 단순히 적절한 유량 비율을 최적화하는 과정만 필요합니다.먼저, HPLC 장비의 이동상 A와 B로 사용할 100% 초순수와 100% 메탄올 병을 준비합니다. 제조사의 요구 사항에 따라 펌프를 퍼지합니다. 퍼지가 완료되면 오토샘플러의 인젝터 밸브에서 펌프 라인을 분리합니다.연결이 끊어진 라인에 T-피스를 부착합니다. T-피스의 각 포트에 내경 0.13 millimeter, 길이 15 centimeters의 튜브를 부착합니다. T-피스에서 연결된 튜브 하나를 오토샘플러의 주입 밸브에 연결합니다.마지막으로, 펌프의 유속을 1 mL/min으로 설정하십시오. 빈 수집 용기 두 개를 사용하여 영점을 조절하고 각각 '중앙'과 '말초'로 라벨을 붙입니다. 60초 동안 인젝터에서 나오는 라인으로부터 유출되는 이동상을 '중앙' 라벨이 붙은 용기에 수집하십시오.중앙 용기의 무게를 다시 측정하여 수집된 이동상의 질량을 결정하십시오. 주변부 포트의 유출액을 주변부라고 표시된 용기에 수집하여 이 과정을 반복하십시오. 제시된 식을 사용하여 각 라인의 유량 백분율 또는 분당 밀리리터(mL/min)를 결정하십시오.중앙 포트는 약 40%, 주변부 포트는 약 60%가 되어야 합니다. 값이 2% 이상 차이 나는 경우, 튜브의 길이 또는 직경을 변경하여 유량비를 조정하십시오. 그 다음 수집 및 계산 단계를 반복하십시오.다음으로, 펌프 흐름을 끄고 인젝터 라인을 컬럼 입구의 중앙 포트에 연결합니다. 또한 T-피스에서 나오는 라인을 컬럼 입구의 주변 포트에 연결합니다. 흐름 속도를 100% 이동상 B를 사용하여 분당 1 mL까지 천천히 올립니다. 시스템 튜닝을 마무리하기 위해, 컬럼을 평형화하도록 100% 메탄올을 분당 1 mL로 10분 동안 흘려줍니다.먼저, 튜브를 사용하여 중앙 배출 포트를 UV-Vis 검출기에 연결하십시오. CF 컬럼의 주변부 배출 포트에도 동일한 종류와 길이의 튜브를 연결하십시오. 그 다음, 펌프의 유속을 분당 1 mL로 설정하십시오.빈 수집 용기 두 개의 무게를 0점 조절하고, 하나는 중앙 수집용으로, 다른 하나는 주변부 수집용으로 다시 라벨을 붙입니다. UV-Vis 검출기에서 나오는 이동상을 중앙 수집용 용기에 60초 동안 수집합니다. 수집 용기의 무게를 다시 측정하여 용출된 용액의 질량을 결정합니다.말단 배출 포트와 라벨이 부착된 수집 용기를 사용하여 이 과정을 반복하십시오. 이제 이전에 유입 유량에서 수행한 것과 동일하게 각 라인의 유량 백분율을 결정하십시오. UV-Vis 라인은 21%여야 하며, 말단 배출 유량은 79%여야 합니다.유량 비율이 크게 벗어나는 경우, UV-Vis 검출기 출구에 연결된 튜빙의 크기를 조정하여 중앙 유량 백분율을 변경하십시오. 커튼 흐름 컬럼의 최적 성능을 보장하려면 컬럼 입구와 출구의 중앙 및 주변 유량 비율이 이 프로토콜을 따르는 것이 중요합니다. 액티브 플로우 기술 컬럼은 컬럼 베드의 불균일성을 극복하고 분리 성능을 개선하기 위해 멀티포트 컬럼 엔드 피팅의 특수 프리트 설계를 사용하여 개발되었습니다.페네톨(phenetole), 부틸벤젠(butylbenzene) 및 펜틸벤젠(pentylbenzene)이 포함된 테스트 혼합물을 일반적인 4.6 및 2.1 mm 내경 컬럼과 4.6 mm 내경 커튼 플로우(curtain flow) 컬럼으로 분석하였습니다. 이 혼합물의 분리 결과는 표준 컬럼과 비교하여 커튼 플로우 컬럼의 효율성과 민감도 측면에서의 성능 향상을 보여줍니다. 커튼 플로우 컬럼을 사용함으로써 피크 부피가 감소했음에도 불구하고 부틸벤젠의 신호가 증가하였습니다.이 기술을 완전히 익히면, 적절하게 수행할 경우 30분 이내에 설정을 완료할 수 있습니다. 커튼 흐름 컬럼 설정은 반복해서 재사용할 수 있지만, 흐름 비율은 정기적으로 확인해야 합니다. 이 절차를 수행할 때는 규정된 흐름 비율에 최대한 가깝게 맞추는 것이 중요함을 기억하십시오.커튼 흐름 컬럼(curtain flow column)은 HPLC 분야의 연구자들이 분리 성능을 저해하지 않으면서 더 빠른 시료 분석을 수행할 수 있도록 컬럼과 UPLC 기기의 한계를 확장하는 길을 열어주었습니다. 이 영상을 시청한 후, 커튼 흐름 컬럼이 기존의 HPLC 컬럼보다 더 우수한 분리를 제공할 수 있다는 점에서 갖는 중요성을 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

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