모세관 튜브 및 Creamatocrit에 의한 우유 지방 함량의 평가를 사용하여 쥐의 우유 컬렉션

이 절차의 전반적인 목표는 우유 조성에 대한 실험실 분석을 위해 수유생쥐에서 수동으로 우유를 채취하는 방법을 설명하는 것입니다. 이 방법은 모성 식단이 모유 구성에 어떤 영향을 미칠 수 있는지와 같은 모자 건강 분야의 주요 질문에 답하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 특수 진공 또는 흡입 장비 없이 한 명의 조사자가 수행할 수 있다는 것입니다.

시작하기 No.To 착유하기 전에 최소 5 분 동안 댐을 자손과 분리하십시오. 다음으로, 여기에 표시된대로 착유 절차에 필요한 모든 재료를 수집하십시오. 그런 다음 가열된 수술 테이블 위에 흡수성 벤치 패드를 놓거나 별도의 열 패드를 사용하여 착유 절차 중 댐의 열 손실을 방지합니다.

다음으로, 시술 전에 시스템에 충분한 산소와 이소 불소가 있는지 확인하기 위해 마취 시스템을 점검합니다. 그런 다음 초기 마취 유도에 사용할 마스크를 기계에 부착하고 유지 관리 마스크를 근처에 놓습니다. 산소 탱크를 열고 유량을 분당 1리터로 설정합니다.

그런 다음 불소의 흐름을 켜고 흐름을 5%로 설정합니다.마취가 완료되면 댐을 유지 관리 마스크로 전환합니다. 페달 반사가 없는지 확인하여 충분한 마취 수준을 확인하십시오. 그런 다음 댐을 흡수 벤치 패드의 누운 위치에 놓습니다.

불소의 흐름을 2-3%로 줄입니다.절차 전반에 걸쳐 댐을 지속적으로 모니터링하고 통증과 호흡 억제를 피하기 위해 필요에 따라 불소의 흐름을 조정합니다. 다음으로, 멸균 알코올 물티슈 또는 클렌징 패드를 사용하여 25게이지 바늘이 장착된 1ml 주사기를 사용하여 옥시토신 바이알을 소독하고 0.1ml의 옥시토신을 추출합니다. 그런 다음 바늘이 머리를 향하도록 바늘이 머리를 향하도록 댐 복부의 오른쪽 하단 사분면에 바늘을 삽입하고 약 0.5cm 깊이

주입 전에 음압을 보장하기 위해 플런저를 뒤로 당깁니다. 유체가 흡입되지 않으면 옥시토신을 주입하고 바늘과 주사기를 즉시 생물학적 위험 용기에 버리십시오. 옥시토신이 우유를 자극할 때까지 약 5분에서 15분 정도 기다립니다.

이 시간 동안 실망하고 우유를 수집 할 텟을 선택하십시오. 털은 샘플 수집에 어려움을 줄 수 있으므로 트리머를 사용하여 선택한 젖꼭지 주변의 털을 부드럽게 제거합니다. 그런 다음 미지근한 물로 텟을 청소하십시오.

우유 수집을 위해 두 개 이상의 사이트가 필요할 수 있으므로 최소 두 개의 사이트를 준비하십시오. 우유가 내려가면 Tet의 바닥을 부드럽게 짜서 수동으로 우유를 배출합니다. 수집을 위해 우유 방울을 50마이크로리터 모세관 튜브에 모으십시오.

가득 차면 젖꼭지에서 우유를 추출하는 데 사용된 튜브의 끝을 마이크로 원심분리기 튜브 측면으로 터치하여 모세관 튜브의 우유를 멸균 마이크로 원심분리기 튜브로 분배합니다. 그런 다음 1밀리리터 주사기에 부착된 18게이지 바늘을 사용하여 튜브로 빨려 들어가지 않은 우유를 불어냅니다. 우유 수집을 반복하고 충분한 우유가 수집될 때까지 마이크로 원심분리기 튜브로 옮깁니다.

선택한 분석의 경우 댐이 마취되는 총 시간을 1시간 미만으로 제한하십시오. 착유가 완료되면 불소와 산소의 흐름을 끄고 댐에서 마스크를 제거합니다. 댐이 흉골 누운 상태를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 댐을 계속 모니터링하십시오.

추가 분석이 필요하지 않은 경우 우유를 마이너스 80도에서 불어 넣습니다. CCR 측정을 준비하려면 Tet에서 직접 15-20마이크로리터의 우유를 마이크로 헤마토크릿 튜브에 로드합니다. 그런 다음 점토 밀봉제로 튜브 끝을 밀봉합니다.

밀봉 움푹 들어간 곳이 바깥쪽을 향하도록 모세관 튜브를 헤마토크릿 스피너에 넣고 원심분리기가 균형을 이루는지 확인합니다. 그런 다음 2분 동안 G를 13, 700회 회전시킵니다. 샘플이 회전을 마치면 원심분리기에서 튜브를 제거합니다.

샘플 분리를 크림 층과 투명 층으로 관찰하십시오. 튜브에 있는 액체의 총 길이와 지방 또는 크림 층의 길이를 자 또는 캘리퍼를 사용하여 측정하고 기록합니다. 이 정보를 사용하여 임신 및 수유 중 다이어트가 모유 구성에 어떤 영향을 미치는지 확인하기 위해 함께 제공되는 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 CCR을 계산하십시오.

우유 샘플은 고단백, 높은 프리바이오틱 섬유질 또는 통제된 식단을 먹인 우스터 댐에서 젖을 뗄 때 수집되었습니다. 높은 프리바이오틱 섬유질 식단을 섭취한 댐에서 채취한 우유는 수치적으로 가장 높은 C 헤마토크릿, 나쁜 농도 및 에너지 값을 가졌습니다. 그러나 이러한 차이는 단백질에 관해서는 통계적으로 유의하지 않았습니다.

그러나 고단백 식단의 댐에서 수집된 우유는 단백질 농도가 가장 높았습니다. 다시 말하지만, 이 차이는 통계적으로 유의하지 않았습니다. 일단 숙달되면 이 기술은 올바르게 수행되면 댐의 초기 마취 지점에서 한 시간 이내에 수행할 수 있습니다.

이 절차를 시도할 때 이 절차를 따라 마취 상태에서 호흡 억제가 발생하지 않도록 댐을 지속적으로 모니터링하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 질량 분석법과 같은 다른 방법은 우유의 올리고당 조성 측정과 같은 추가 질문에 답하는 데 사용할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 수유하는 쥐에서 수동으로 우유를 수집하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.