Name: 마우스에서 소성을 뒷다리 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: 배우세요 마우스 후지 이식 모델을 이용한 혈관화 복합 동종이식 연구 방법을. 비봉합 커프 기법으로 초미세혈관 문합을 수행하여 면역 반응을 분석하고 이식 수술 성공률을 높이는 데 활용할 수 있습니다.

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이 작품은 상 호 W81XWH - 13-2-0053에서, AFIRM II의 노력을 지원하기 위해 육군, 해군, NIH, 공군, VA 보건 업무에 의해 지원되었다. 미국 육군 의학 연구 수집 활동, 820 챈들러 거리, 포트 데 트릭 MD 21702-5014가 수여 및 관리 취득 사무실입니다. 의견, 해석, 결론 및 권고 사항은 저자의 것이며, 반드시 국방부에 의해 승인되지 않습니다. 저자는이 연구 기간 동안 우수한 수의학 지원 제시카 IZZI, DVM, 캐롤라인 개렛, DVM과 줄리 왓슨, DVM에게 감사의 말씀을 전합니다.

모든 실험은 관리 및 국립 보건 연구소 (NIH)의 실험 동물의 사용을위한 설명서에 따라 실시하고, 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회 (JHUACUC)에 의해 승인되었다. 구체적인 절차는 승인 ACUC 프로토콜 MO13M108 하에서 수행 하였다. 1. 기부자 운영 <ol><li> 수술하기 전에 각각의 약리학 적 제제에 대한 적절한 시점에서 진통을 관리. 0.1 mg의 프레 노르 핀의 피하의 / kg BW 1 시간 전에 피부 절개에 승인 된 동물 관리 및 사용 프로토콜 사용에 따라. </li><li> 이소 플루 란 침착 도너 4 %의 이소 플루 란 기화기에 부착 된 챔버를 통해인가; 코 콘을 통해 2 %에 진정 및 마취을 유지한다. 절차의 개시에 앞서 마취 깊이를 모니터링하도록 발가락 핀치 움츠림 반사를 수행한다. </li><li> 마스크, 일회용 절연 가운과 장갑을 착용 할 것. </li><li> 수술 아칸소 쉐이브개, 10 % 포비돈과 특히 뒷다리와 사타구니, 그리고 준비에 - 요오드. </li><li> 멸균 필드 드레이프, 멸균 장비 및 고배율 현미경 (40X)를 사용합니다. </li><li> 허벅지 중간 영역 근위 가위를 사용하여 고간 피부 절개를 원주 마우스 본체의 나머지 뒷다리를 구별하기 위해 절개를 연결한다. </li><li> 식별 및 대퇴 동맥, 정맥 신경을 해부하다. 포셉 및 마이크로 가위를 사용하여 세 가지 구조를 분리합니다. </li><li> 척추 경 혈관이 절개되면 마이크로 가위를 사용 사타구니 인대의 수준에서 혈관을 나눈다. </li><li> 다음에, 가위를 사용하여 공여체 동물의 그래프트 별도 허벅지 중간 레벨에서 근위 개별 복부 (박근 및 내측 대퇴부 근육) 및 척수 근육 그룹 (20)을 분할하는 것을 계속한다. </li><li> 대퇴골을 가로로 쪼개다 가위를 사용하여 대퇴골 간부의 중간에서 절단. </li><li> 이소 플루 란 과다 복용 FOL로 동물을 안락사자궁 전위에 의해 lowed. 심장 박동 및 호흡의 중단을 확인합니다. </li><li> 주사기에 장착 된 33 G 플러싱 바늘을 사용하여 헤파린 2 ㎖ (30 IE) 감기 (4 °에 C) 식염수 사지를 플러시 (재료 표 참조). </li><li> 각각 대퇴 정맥과 동맥에 한 폴리이 미드 커프를 배치합니다. </li><li> 삽입 할 때까지 4 ° C에서 배양 접시와 저장소에 젖은면 거즈, 장소에 이식 랩. </li></ol> 2.받는 사람 운영 <ol><li> 뒷다리의 제거 <ol><li> 수술하기 전에 각각의 약리학 적 제제에 대한 적절한 시점에서 진통을 관리. 승인 된 동물 관리 및 사용 프로토콜 사용 부 프레 놀핀 SC 1 시간 이전에 피부 절개 0.1 ㎎ / ㎏ BW에 따라. </li><li> 이소 플루 란 침착 도너 4 %의 이소 플루 란 기화기에 부착 된 챔버를 통해인가; 코 콘을 통해 2 %에 진정 및 마취을 유지한다. 부서를 모니터링 발가락 핀치 철수 반사를 수행절차의 개시에 앞서 마취 H. </li><li> 마취 동안 건조를 방지하기 위해 마우스의 눈에 수의학 연고를 사용합니다. </li><li> 특히, 10 % 포비돈와 뒷다리와 사타구니 준비를 외과 영역을 면도 - 요오드. </li><li> 허벅지 중간 영역 근위 가위를 사용하여 고간 피부 절개를 원주 마우스 본체의 나머지 뒷다리를 구별하기 위해 절개를 연결한다. </li><li> 포셉 및 마이크로 가위를 사용하여 세 가지 구조를 확인하고 대퇴 동맥, 정맥 신경을 해부와 구분합니다. </li><li> 척추 경 혈관이 절개되면 사타구니 인대 레벨 대퇴부 혈관 클램프. </li><li> 표면 상복부 동맥의 수준에서 말초 혈관을 잘라. </li><li> 다음으로, 고유 뒷 리튬을 분리 근위 대퇴부의 중간 레벨에서 개별 복부 (박근 및 내측 대퇴부 근육) 및 척수 근육 그룹 (20)을 분할 계속가위를 사용하여 동물로부터받는 MB. </li><li> 가위를 이용하여 대퇴골 축의 중간 대퇴골 횡단면. </li><li> 절개 부위의 출혈 때문에받는 혈액 손실을 방지하기 위해 이전에 횡단 허벅지의 근육을 소작. </li></ol></li><li> 심기 <ol><li> 따뜻한 식염수 (37 °에 C)와 수술 필드를 관개하고 이전에 0.3 ml의에게 따뜻한 식염수를 주입하고 수술 후 유체 손실을 최소화합니다. </li><li> 받는 사람과 이식의 대퇴골 뼈를 정렬하고 골수로드로 20 G 척추 바늘을 사용하여 연결하여 기본 뒷다리의 정확한 해부학 적 위치를 반영하는 방법으로 이식을 놓습니다. </li><li> Coapt 흡수성 봉합사 (6-0 Polysorb)을 이용하여 복부 및 척수 근육 그룹. </li><li> 비 봉합 커프 기술을 사용하여 대퇴 혈관 연결; 커프 이전 용기에 장착 위에 상세히, 그라프 끝 용기의 수신자 측 당겨티. 10-0 나일론 봉합사를 사용하고 팔목에받는 용기를 해결하기 위해 원주 넥타이를 수행합니다. </li><li> 다음 클램프를 놓습니다. 이 단계에서 시각적 커프 회전 용기의 오 회전 및 꼬임을 방지하는 최적의 위치를​​ 확인. </li><li> 근육받는 도너 인터페이스 뼈 단부에 특히 초점을 전기 소작을 사용 세심한 지혈을 수행한다. </li><li> 비 흡수성 나일론 봉합사 (6-0 에틸 론)를 사용하여 피부를 닫습니다. </li><li> 동물이 가열 램프 아래의 새장에 복구 할 수 있도록하여 정상 체온 조건을 설정합니다. 주택 시설에 반환하기 전에 적어도 4 시간 동안 정기적 인 모니터링을 계속합니다. </li><li> 3 일간를 0.1 mg / kg SC마다 6 ~ 8 시간의 용량 부 프레 놀핀와 수술 후 진통제를 제공합니다. </li></ol></li></ol>

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</ol>

저자는 경쟁적인 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

혈관 복합 동종 이식은 이러한 파괴적인 조직 결손의 재건을위한 상지 및 얼굴 이식으로, 기존의 재건 절차를 수정할 수있는없는 환자에 대한 올바른 치료 옵션으로 진화하고있다. 재건 미세 분야의 기술 발전뿐만 아니라 강력한 면역 억제 및 고체 장기 이식에서 면역 조절 성 치료와 광대 한 경험은 지금이 독특한 환자 인구 3,21에서 장기 이식 생존 할 수 있습니다. 그러나, 동종 이식 유지 보수 및 생존에 필요한 장기 면역 억제의 중요한 부작용은 여전히 개선이 아닌 재건 양식 3,22,23을 생명을 구하는 이들의 삶의 광범위한 응용 프로그램을 제한합니다. 또한, 고형 장기 이식 달리 VCA를 성공은 또한 운동 기능 모두 근육 정신 자극 재뿐만 아니라,하기에 이식받는 신경의 재생에 따라 적절터치 및 온도 감각에 대한 감각 요소는 기능을 회복한다. 면역 학적 관점에서 의약품 이식 모두에서와 같이, 재건 이식에서 지배적 목적은 장기간 유지 면역 (23)를 필요로하지 않고 동종의 ...

90년대 후반은 1998년 프랑스에서 최초로 손 이식 수술이 성공적으로 진행되면서 재건 이식의 개척 시대를 알렸습니다. 그 이후로, 파괴적인 조직 결손의 재건을 위한 VCA의 사용은 광범위한 환자들에게 성공적으로 적용되었습니다. 현재까지 전 세계에는 112개의 상지와 31개의 1-3 얼굴 이식자가 76명으로 집계되어 있습니다. 또한, 복벽 4, 후두 5, 기관 6, 혈관 관절7, 심지어 음경 8과 같은 몇 가지 다른 유형의 VCA가 수행되었습니다. 더욱이, 최근 자궁이식 후 아기가 출생한 사례가 보고되었다 9. 이러한 증가하는 세계 경험은 기존의 재건 및 수복 수술 및 치료로 수정할 수 없는 심각한 기능적 조직 결함으로 고통받는 환자에게 재건 이식이 어떻게 유효한 치료 옵션이 되었는지를 보여줍니다. 
"like 를 like로 대체한다는 아이디어는 임상적 열정을 불러일으켰지만, 동종이식과 그 기능을 유지하는 데 필요한 기존 고용량 면역억제의 부작용에 관해서는 여전히 초기의 회의론이 우세합니다 10,11. 그러나 Lee 등의 독창적인 연구에서 알 수 있듯이 이러한 복합 이식편은 개별 구성 요소보다 거부 반응이 발생할 가능성이 낮으며, 더 나아가 혈관화된 뼈 구획과 같은 일부 조직 구성 요소는 면역 수용 및 거부 반응의 균형에 독특한 면역학적 효과를 발휘할 수 있기 때문에 낙관론을 불러일으켰습니다 12. 
우리 그룹은 고형 장기 이식을 위한 여러 미세 수술 동물 모델과 혈관 복합 동종 이식 13-19을 개척했습니다. 여기에서는 정형외과성 마우스 뒷다리 이식 모델에서 초미세 혈관 문합을 수행하기 위해 비봉합 커프 기술을 사용하는 새로운 수술 절차에 대해 설명합니다. 이 이식 모델은 면역 수용 및 거부 메커니즘을 조사하는 데 유용한 도구를 제공할 뿐만 아니라 마우스 종의 면역학적으로 다재다능한 환경에서 내성 유도를 위한 혈관화된 골수 구획과 같은 개별 조직 구성 요소의 역할을 조사하는 데 유용한 도구를 제공합니다. 또한 사지의 정립성 배치는 VCA 설정에 매우 중요한 신경 재생 및 기능적 결과 연구의 가능성을 열어줍니다.

<table><tbody><tr><td>봉합사, 6-0 나일론</td><td>MWI</td><td>31849</td><td></td></tr><tr><td>봉합사, 6-0 폴리소브</td><td>MWI</td><td>72667</td><td></td></tr><tr><td>봉합사, 10-0 나일론</td><td>에어로 서지컬</td><td>TK-107038</td><td></td></tr><tr><td>폴리이미드 튜브, 사이즈 25</td><td>Vention Medical</td><td>141-0023</td><td></td></tr><tr><td>폴리이미드 튜브, 사이즈 27</td><td>Vention Medical</td><td>141-0015</td><td></td></tr><tr><td>미세혈관 클램프(단일)</td><td>Synovis</td><td>00396</td><td></td></tr><tr><td>미세 혈관 클램프 (더블)</td> <td>Synovis</td><td>00414</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>Synovis</td><td>SAS-18</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 집게</td><td>Synovis</td><td>FRS-15 RM-8</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 확장기</td><td>Synovis</td><td>FRS-15 RM-8d.1</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 니들 드라이버</td><td>Synovis</td><td>C-14</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 클램프 애플리케이터</td><td>Synovis</td><td>CAF-4</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 플러싱 니들</td><td>Hamilton</td><td></td><td>10MM, 30°C;, 33G</td></tr><tr><td>젖산 링거 솔루션</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9968051</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td></td><td></td><td>DEA 번호 필요; 병원 약국에서 얻습니다.</td></tr><tr><td>엔로플록사신; Baytril</td><td>Bayer Health Care</td><td>186599</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td></td><td></td><td>호스피탈 약국에서 취득</td></tr></tbody></table>

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

생체 내 동물 모델 시스템, 특히 마우스 모델은 이식 의학 분야의 기초 및 중개 연구에 필수적인 강력하고 다재다능한 과학 도구로 발전했습니다. 다양한 시약이 이 환경에서만 독점적으로 사용할 수 있으며, 여기에는 진단 및 중재적 응용 분야를 위한 단클론 및 다클론 항체가 포함됩니다. 또한 수많은 유전자형 분석, 근친 교배, 형질 전환 및 녹아웃 균주를 통해 면역 반응의 복잡한 상호 작용에 대한 체액성 및 세포 구성 요소의 개별 기여도를 자세히 조사할 수 있으며 마우스를 면역학 연구의 황금 표준으로 만들 수 있습니다. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA)은 외상성 또는 선천적 조직 상실을 겪는 환자에서 "like with like"를 대체하기 위해 동종이식을 사용하는 새로운 이식 분야를 설명합니다. 이 수술 방법론적 프로토콜은 정형외과성 마우스 뒷다리 이식 모델에서 초미세혈관 문합을 위한 비봉합 커프 기술의 사용을 보여줍니다. 이 모델은 특히 고형 장기 이식에 대해 확립된 패러다임과 다양한 조직 구성 요소로 구성된 새로운 형태의 이식을 비교할 수 있도록 합니다. 독특하게도, 이 모델은 면역 수용과 거부 반응의 균형에 유익한 효과를 발휘할 수 있는 잠재력을 가진 실행 가능한 혈관화된 골수 구획과 틈새의 이식을 허용합니다. 이 기술은 동종항원 인식과 동종이식 거부 및 수용을 조사할 수 있는 도구를 제공할 뿐만 아니라 기능적 신경 재생 연구를 추구하여 이 새로운 이식 분야를 더욱 발전시킬 수 있습니다.

비 봉합 커프 기술을 사용하여, 마우스 모델에서 혈관 복합 동종 이식을 수행하는도 1에 도시 된 바와 같이 우수한 장기 이식 동물의 생존을 달성 할 수있다. 또한,이 혈관 복합 점진적 동종 이식 거부 반응의 재현 가능한 결과를 수득하는 신뢰할 수있는 방법을 나타낸다 동종 이식도 2에 도시 이미지에 의해 설명 된대로. 거절 더이 쥐 모델에서 동종 이식 거부 반응의 재현성 역학 (그림 3)을 강조받은 동물에서 얻은 조직의 H &amp; E 조직학. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53483/53483fig1.jpg" /> 완전 H2-일치하지 않는 마우스 스트레인 조합 그림 1. 동종 이식 생존 [C57BL...

슈퍼 미세 혈관 문합을위한 비 봉합 커프 기술을 적용 마우스에서 소성을 뒷다리 이식이 새로운 모델은, 혈관 복합 동종 이식 (VCA)에 관한 생체 역학적 면역 학적 연구를위한 강력한 도구를 제공합니다.

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

본 교육 영상의 전반적인 목표는 초미세혈관 문합을 위한 비봉합 커프 기술을 이용한 정위 후지 이식 마우스 모델을 소개하는 것입니다. 동물 모델은 인간 질병의 이해와 치료에 있어 매우 중요하며, 지난 20년 동안 재건 이식이 임상적 현실이 될 수 있도록 길을 열어주었습니다. 특히 이 모델은 혈관화 복합 동종이식편에 특이적인 동종면역 반응의 생리적 경로와 관련된 핵심 질문들에 대한 답을 찾는 데 도움을 줄 수 있습니다.이 기술의 주요 장점은 비봉합 커프 기술이 이 초미세혈관 수술의 복잡성을 크게 줄이고 성공률을 높인다는 점입니다. 발가락 꼬집기로 적절한 진정 수준을 확인한 후, 공여 동물의 뒷다리와 서혜부를 제모합니다. 다음으로 10% povidone iodine로 피부를 소독하고 마우스를 해부 현미경 아래에 배치합니다.가위를 사용하여 허벅지 중간 부위 근위측의 서혜부 피부를 절개하여 공여자 사지 채취를 시작합니다. 절개 부위를 원형으로 연결하여 뒷다리를 신체의 나머지 부분과 분리합니다. 대퇴 동맥, 정맥 및 신경을 확인하고 박리합니다.그다음 핀셋과 미세 가위를 사용하여 세 구조물을 분리합니다. 혈관벽의 미세 외상을 방지하기 위해 노 터치(no touch) 기법을 사용하는 것이 시술의 성공을 보장하는 데 필수적입니다. 혈관경 분리가 완료되면 미세 가위를 사용하여 서혜인대 부위에서 혈관을 절단합니다.개별 복측 및 배측 근육 그룹의 분리를 허벅지 중간 지점까지 계속하여 공여 동물로부터 이식편을 분리합니다. 그 다음, 대퇴골 간의 중간 부분을 절단하여 대퇴골을 횡단시킵니다. 33 gauge 바늘이 장착된 주사기를 사용하여, 채취한 사지를 2 ml의 heparinized 4 °C 식염수로 세척합니다.그 다음, 개별 폴리이미드 커프를 대퇴정맥과 대퇴동맥에 배치합니다. 그리고 이식편을 삽입 전까지 4 °C의 페트리 접시 내 젖은 면 거즈에 보관하십시오. 페시스를 폴리이미드 커프에 장착하는 과정이 이 절차에서 가장 결정적인 단계입니다.잘못된 결찰은 혈류를 손상시킬 수 있으며, 부적절한 조직 압박은 일부 항생 조직을 노출시켜 혈전 형성 가능성을 높일 수 있습니다. 수혜측 뒷다리를 제거하기 위해 0.3 mL의 따뜻한 식염수를 복강 내로 주입합니다. 뒷다리 주변을 원형으로 절개하고, 방금 시연한 것과 같이 대퇴 동맥, 정맥 및 신경을 확인하여 박리합니다.혈관 경(vascular pedicle)의 박리가 완료되면 서혜인대 부위에서 대

orthotopic-hind-limb-transplantation-in-the-mouse

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

여기서 우리는 금 본위 것으로 보인다 orthotopic 쥐 뒷다리 - 사지 이식 절차를...

쥐에서 Orthotopic 힌드 - 림브 이식

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합하기 위해 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 설명합니다.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

이 프로토콜은 면역학 및 기능 적 회복의 동시 연구를 향해 기어드 혈관 복합 동종 이식 (VCA)의 견고하고 재현 가능한 모델을 제시한다. 손 바느질 혈관 아나토모와 신경 응착오른쪽 중간 허벅지 뒷다리 직교 이식에 세심한 기술에 투자 된 시간은 기능적 회복을 연구 할 수있는 능력을 산출한다.

다음 단계: 쥐의 기능적 회복을 극대화하기 위한 신경 응복 성 직교 힌지 이식 모델

이 논문은 쥐에 있는 부분이성 골균 플랩 이식 프로토콜 및 중간 후속에 있는 그것의 잠재적인 결과를 제시합니다.

쥐의 부분 이종화 힌드래그 이식 모델

이 원고의 목적은 마우스에서 이종 후두 이식을 수행하는 데 필요한 미세 수술 단계를 설명하는 것입니다. 후두 이식의 다른 동물 모델과 비교하여이 마우스 모델의 장점은 비용 효율성과 면역 학적 분석 및 데이터의 가용성입니다.

후두 이식 연구를 위한 이종 마우스 모델

이 프로토콜에서는 마우스에서 성공적인 orthotopic 간 이식(OLT) 모델의 구현에 대해 논의합니다. 또한 마우스에서 성공적인 OLT 후 동종이식 개통을 추가로 분석하기 위한 보조제, 특히 microcomputationd tomography(microCT) 스캔을 활용하는 보조제에 대해서도 논의합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

배우세요 마우스 후지 이식 모델을 이용한 혈관화 복합 동종이식 연구 방법을. 비봉합 커프 기법으로 초미세혈관 문합을 수행하여 면역 반응을 분석하고 이식 수술 성공률을 높이는 데 활용할 수 있습니다.

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

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