Name: 마우스 귀와 꼬리 조직에서 생성 차 섬유 아세포 배양 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: 배우세요 마우스 귀와 꼬리 조직에서 1차 섬유아세포 배양을 수행하는 방법을. 실온에서 최대 10일 저장된 조직을 사용할 수 있어 세포생물학 연구에 활용됩니다.

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이 연구는 NRF 보조금 HUJ-CREATE - Cellular and Molecular Mechanisms of Inflammation의 지원을 받았습니다.

마우스는 euthanization까지 제도적 지침 (기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) 가이드 라인 싱가포르 국립 대학과 실험 동물 연구를위한 국가 자문위원회 (NACLAR) 지침)을 준수 무균 상태에서 보관 하였다. 1. 마우스 <ol><li> 해당 유전 적 배경 중 하나 마우스를 주문하십시오. 이 프로토콜은 하나의 C57BL / 6 마​​우스 유래의 조직에 기초한다. </li></ol> 완전 배지 2. 준비 <ol><li> 10 % 소 태아 혈청 (FCS), 50 μM 2- 머 캅토 에탄올, 100 μM 아스파라긴, 2 mM의 글루타민, 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신 용액 로즈웰 파크 메모리얼 연구소 (RPMI) 1640 배지에하기 성분을 첨가함으로써 완전 배지를 준비한다. </li></ol> 효소 솔루션 3. 준비 <ol><li> 15 ML 원뿔 바닥 튜브 콜라게나 D 솔루션을 준비합니다. <ol><li> 콜라게나 디 디의 10 mg의 무게4 용액에 ssolve 콜라게나 D 완전한 매체. </li></ol></li><li> 1.7 ml의 microcentrifuge 관에서 프로 나아 솔루션을 준비합니다. <ol><li> 프로 나제​​ 10 mg의 무게. </li><li> 1 M 트리스 완충액 (pH 8.0)의 5 μl를 추가합니다. 의 0.5 M EDTA (pH 8.0) 1 μl를 추가합니다. </li><li> 멸균 물 494 μL와 최고. </li><li> 30 분 동안 수욕에서 37 ℃에서 프로 나제​​ 용액을 부화. </li></ol></li></ol> 콜라게나 D-프로 나제​​ 믹스 (≤2 꼬리) 4. 준비 참고 : 무균 세포 배양 후드에서 다음 단계를 수행합니다. <ol><li> 콜라게나 D 솔루션의 4 ml의 프로 나제​​ 솔루션의 250 μl를 추가합니다. </li><li> 멸균 15ml의 원뿔형 바닥 튜브에 0.2 μm의 주사기 필터를 통해 콜라게나 D-프로 나제​​ 혼합물을 전달한다. </li></ol> 귀와 꼬리 조직에서 섬유 아세포의 5 추출 <ol><li> 해당 기관의 지침에 따라 쥐를 안락사.</li><li> 세포 배양 후드에서 멸균 수술기구 (가위와 집게를) 놓습니다. </li><li> 두 10cm 세포 배양 접시에 각각 10 ml의에게 완전한 매체를 추가합니다. </li><li> 귀 (~ 1cm 반경)와 가위와 마우스 (꼬리의 끝에서) 꼬리 5cm를 잘라 멸균 50 ML 원뿔 바닥 튜브에 40 ml의 70 % 에탄올에 5 분 동안 품어. </li><li> 5 분 동안 후드에서 개방 10cm 세포 배양 접시에 배치하여 공기 건조 귀와 꼬리. 일단 단계 5.3에 설명 된대로 전송 귀 두 개의 배양 접시에 꼬리 조각은 &quot;귀&quot;를 10 ml의에게 완전한 매체를 포함하는 &quot;꼬리&quot;를 표시, 건조. </li><li> 귀와 꼬리 사용하여 가위로 머리를 제거합니다. </li><li> 가위를 사용하여 크기가 3mm보다 작은 조각으로 귀와 꼬리를 잘라. </li><li> &quot;귀&quot;와 &quot;꼬리&quot;라고 표시된 1.8 ml의 cryotube 튜브로 절단 된 조직을 전송하고 유리 병에 1.8 ml의 마크에 도달하기 위해 볼륨에 대한 충분한 콜라게나 D-프로 나제​​ 솔루션을 추가 할 수 있습니다. </li><li> 피쉐이커에 수평으로 cryotube 튜브를 레이스와 37 ℃에서 90 분 동안 200 rpm으로 샘플을 흔들. </li><li> 90 분 부화 후, 진탕 기에서 cryotube 튜브를 제거하고 후드에 튜브를 배치합니다. </li><li> 두 10cm 세포 배양 접시, 표시 &quot;귀&quot;와 &quot;꼬리&quot;각에 10 ml의에게 완전한 매체를 추가하고 각 접시에 70 μm의 셀 스트레이너를 넣어. </li><li> &gt; 5 분 10 ML의 주사기 플런저를 사용하여 조직을 분쇄 강제 단계 5.11에서 제조 된 따라 표시된 요리에 70 μm의 셀 스트레이너의 소화 귀와 꼬리 조직을 놓고. 셀 스트레이너에서 세포를 씻어 매체에 가끔 셀 스트레이너를 흔들어. </li><li> &quot;귀&quot;와 &quot;꼬리&quot;라는 레이블이 붙은 두 개의 15 ML 원뿔 바닥 튜브에 각각의 접시에서 세포 현탁액을 피펫. 추가로 10 ml의 완전한 매체와 요리와 스트레이너를 세척하고 해당 15 ML 원뿔 바닥 튜브에 매체를 추가 할 수 있습니다. </li><li> 세포를 스핀 다운~ 580 XG에 7 분 및 냉장 세포 원심 분리기를 사용하여 4 ° C의 서스펜션. </li><li> 상등액을 제거 15ml의 원뿔형 바닥 튜브에 세포 펠렛을 10 ㎖를 완전 배지를 추가하고 세포를 재현 탁. </li><li> 단계를 반복 5.14 및 5.15. </li></ol> 세포 혼합물 6. 배양 <ol><li> 상층 액을 제거합니다. 세포 펠렛은 그대로 남아 있는지 확인합니다. </li><li> 10ml에 세포 전체 매체를 다시 일시 중지하고 &quot;귀&quot;와 &quot;꼬리&quot;라는 레이블이 10cm 세포 배양 접시에 각각의 혼합물을 추가합니다. </li><li> 문화 : 10 μL 암포 테리 신 B 용액 (250 μg의 / ㎖ 원액)를 추가합니다. </li><li> 가습 5 % CO2 인큐베이터에서 37 ℃에서 세포를 배양한다. </li><li> 셋째 날, 10 ml의 신선한 완전한 파편 제거 암포 테리 신 B의 10 μl를 포함하는 매체 (그림 1, 2)와 매체를 교체합니다. </li></ol> 섬유 아세포의 7 하위 문화 <ol><li> 갔지N 문화는 약 70 % 컨 플루 (일 문화의 3 ~ 4) 매체를 제거하고 5 ml의 멸균 1X 인산 완충 식염수 (PBS)로 세포를 씻어 도달한다. </li><li> PBS를 제거하고 세포에 2 ㎖의 멸균 1X 트립신 EDTA 솔루션을 추가 할 수 있습니다. </li><li> 가습 5 % CO2 인큐베이터에서 37 ℃에서 5 분 동안 세포를 배양한다. </li><li> 5 분 후, 부드럽게 배양 접시를 누르고 세포에 6 ml의에게 완전한 매체를 추가합니다. </li><li> 15ml의 원뿔형 바닥 튜브에 세포 현탁액을 옮기고 냉장 세포 원심 분리기를 사용하여 450 ~ XG, 4 ° C에서 5 분 동안 튜브를 스핀. </li><li> 상층 액을 제거하고 부드럽게 5 ml의 완전 배지에서 세포 펠렛을 다시 일시 중지합니다. </li><li> 10cm 세포 배양 접시에 시드 2 × 105 세포 및 7.6 단계 7.1을 반복하기 전의 3-4일위한 가습 5 % CO2 인큐베이터에서 37 ℃에서 세포를 배양한다. </li></ol> 출하를위한 귀 8. 준비 참고 : T를 수행그는 무균 세포 배양 후드에서 다음 단계. <ol><li> 해당 기관의 지침에 따라 쥐를 안락사. </li><li> 세포 배양 후드로 멸균 가위와 집게를 놓습니다. </li><li> 50 ML 원뿔 바닥 튜브에 50 ㎖를 완전 배지를 추가합니다. </li><li> 가위와 마우스의 귀 (~ 1 센티미터 반경)를 잘라. </li><li> 사용 집게 (3 단계에서 제조 된) 50 ML 원뿔 바닥 튜브에 귀를 전송합니다. </li><li> 해당 상자에 실온에서 출하하기 전에 파라 필름으로 50 ML 원뿔 바닥 튜브를 밀봉합니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 재정적 이해 상충이 없음을 선언합니다.

여기에서 우리는 귀를 쥐의 꼬리에서 차 섬유 아세포 문화를 확립하기, 간단한 저렴하고 빠른 실험 절차를 제공합니다. 추출은 조직 3 일 후 격리 내에 부착하고 신속하게 분할하는 섬유 아 세포에서 발생한다. 일차 전지의 중요한 한계는 노화, 영구 성장 정지 15이다. 섬유 아세포는 노화되기 전에 프로토콜을 사용하여, 섬유 아세포 배양 크기 (2-3 배 증가) 및 확장 오류 증가, 세포의 평탄화에 의해 지시, 5 ~ 6 회 계대 될 수있다. 섬유 아 세포의 분리를 수행 할 때주의가 섬유 아세포의 낮은 복구가 발생합니다 불충분 절단 또는 소화로, 조직의 중단시 지불해야합니다. 이 섬유 아세포의 수를 증가 귀와 꼬리 섬유 아세포를 풀 수있다. 복막과 동일한 방식으로 처리 된 폐 조직을 포함하여 추가의 조직 (T)을 향상시키기 위하여 적당히 첨가 할 수있다섬유 아세포의 그는 수. 파편은 섬유 아 세포 추출 다음 문화에 존재하지만, 그것은 섬유 아세포는 세포 배양 접...

차 세포는 시험관 조건에서 조직 배양 생활에서 파생됩니다. 그것은 일반적으로 일차 전지가 더 밀접하게 생리 학적 상태와 그들이 불멸 또는 종양 세포 라인 1보다 시작된 조직의 유전 적 배경을 닮은 것으로 가정한다. 그 때문에, 일차 세포는 생물학적 질문 2,3-을 연구하는데 유용한 모델을 나타낸다. 그러나 무한정 성장 설립 세포 라인과는 달리, 일차 전지는 결국 문화의 노화를 받아야 자주 다시 설정해야합니다. 일반적으로 사용되는 세포는 일차 섬유 아세포, 상피 세포, 내피 세포, T 세포, B 세포, 골수 유래 대 식세포 (BMDM) 골수 유래의 수상 세포 (BMDC)를 포함한다. 섬유 아세포는 종종 일차 세포 배양 모델로서 이용된다. 그들은 다른 일차 전지를 통해 주요 장점을 제공합니다. 세포 배양은 쉽게 쉽게 유지, 설립 및 더의 purifica을 필요로하지 않습니다문화 이전에 세포의 기. 그들은 빠른 초기 확산 및 전문 매체 또는 정품 인증 프로토콜에 대한 요구 사항이 있습니다. 섬유 아세포를 효율적으로 생물학적, 화학적, 물리적 프로토콜을 사용하여 형질 4,5- 수있다. 세포 배양을 확립하기 전에 실온에서 최대 10 일 동안 귀를 저장하는 가능성이있다. 섬유 아세포 문화는 세포질 프로세스의 시각화에 도움과 유도 만능 줄기 (IPS) 세포를 6으로 재 프로그래밍에 적합하다. 섬유 아세포는 콜라겐 단백질과 세포 외 기질 (7)을 분비 결합 조직의 중요한 세포이다. 그들은 여러 조직 8 구조적 틀을 제공하고 상처 치유 및 조직 수선에 9,10- 필수적인 역할을한다. 여기, 우리는 섬유 아세포 귀에서 문화와 마우스 (11)의 꼬리를 확립하기 간단하고 빠른 (&lt;4 시간) 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 최소한의 마우스가 필요합니다경험 (12,13 다른 프로토콜과 대조적으로) 조직을 수확하는 최대 10 일 동안 실온에서 저장 매체에 귀에서 배양을 확립하는데 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>RPMI-1640</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01</td><td></td></tr><tr><td>태아 송아지 혈청</td><td>HyClone</td><td>SV30160.03</td><td></td></tr><tr><td>2-메르캅토에탄올</td><td>시그마-알드리치</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>아스파라긴</td><td>시그마-알드리치</td><td>A4159</td><td></td></tr><tr><td>글루타민</td><td>시그마-알드리치</td><td>G8540</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>하이클론</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Merck Millipore</td><td>107017</td><td>Absolute for analysis</td></tr><tr><td>Collagenase D</td><td>Roche Diagnostics</td><td>11088866001</td><td>From Clostridium histolyticum, 동결건조, 비멸균</td></tr><tr><td>Pronase 프로테아제</td><td>Merck Millipore</td><td>53702</td><td>Streptomyces griseus에서&nbsp; </td></tr><tr><td>Tris 완충액(pH 8)</td><td>1st BASE</td><td>1415</td><td>초순수 등급</td></tr><tr><td>0.5M EDTA(pH 8)</td><td>1st BASE</td><td>BUF-1053</td><td>생명공학 등급</td></tr><tr><td>10X 인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>1st BASE</td><td>BUF-2040-10X4L</td><td>초순수</td></tr><tr><td>등급 Trypsin-EDTA 용액 10X</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>59418C-100ML</td><td>0.5% 트립신, 0.2% EDTA, 페놀 레드 없이 SER-TAIN 공정에 의해 조사된 트립신 감마, 식염수</td></tr><tr><td>암포테리신 B</td><td>시그마-알드리치</td><td>A2492-20ml</td><td>250 &mu; g / ml를 탈 이온수, 멸균 여과</td></tr><tr><td>가위</td><td>Aesculap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>Aesculap</td><td>AE-BD312R</td><td></td></tr><tr><td>0.2 &mu; M 주사기 필터</td><td>Sartorius Stedim</td><td>16534</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; M 세포 여과기</td><td>SPL</td><td>93070</td><td></td></tr><tr><td>주사기 플런저</td><td>Terumo</td><td>SS+10L</td><td></td></tr><tr><td>극저온 튜브</td><td>NUNC</td><td>368362</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>10 cm 세포 배양 접시</td><td>Greiner</td><td>664160</td><td>세포 배양 처리 접시&nbsp;</td></tr><tr><td>15 ml 원뿔형 바닥 튜브</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>50 ml 원뿔형 바닥 튜브</td><td>Greiner</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>수조</td><td>GFL</td><td>1002</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>배양 쉐이커</td><td>Sartorius Stedim</td><td></td><td>Certomat-BS1</td></tr><tr><td>Zeiss Axiovert 25 광학 현미경</td><td>Carl Zeiss AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 귀와 꼬리 조직에서 생성 차 섬유 아세포 배양

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

차 세포는 조직에서 직접 파생 된 설립 세포주에 비해 생체 내에서 세포의 생리 학적 상태를보다 잘 나타내는 것으로 생각된다. 그러나, 일차 세포 배양 물은 일반적으로 제한된 수명을 가지며 빈번하게 재 확립 될 필요가있다. 섬유 아세포는 일차 전지의 쉽게 접근 할 수있는 소스입니다. 여기, 우리가 귀 마우스의 꼬리에서 차 섬유 아세포 문화를 확립하기 간단하고 빠른 실험 절차에 대해 설명합니다. 프로토콜은 최대 10 일 동안 실온에서 저장 귀에서 일차 섬유 아세포 배양을 확립하는데 사용될 수있다. 프로토콜에 따라 신중하게되면 오염은 일부 경우에 장시간 저장된 비 멸균 조직의 사용에도 불구하고 발생하기 어렵다. 섬유 아세포 문화에 빠르​​게 증식과 복제 성 노화가 진행되기 전에 상당한 숫자로 확장 할 수 있습니다.

조직 파편의 상당한 양의 조직 결과에서 섬유 아세포의 추출 (도 1). 조직 파편과는 대조적으로, 섬유 아세포는 1 일, 문화의 3 사이의 조직 배양 플라스틱 표면에 부착. 섬유 아세포 배양 매체는 안전하게 크게 문화 (그림 2)에서 파편 현재의 수준을 감소해야 문화의 3 일에 변경 될 수 있습니다. 섬유 아세포는 가늘고 긴 형태와 명확하게 볼 세포질 (그림 1과 2)를 표시합니다. 유사 분열 세포는 이후 문화의 3 일에서 존재해야하고 세포 배양 3 ~ 4 일 이내에 세포 자랄 때 70 ~ 80 %에 도달해야한다. 10cm 배양 접시에 귀와 꼬리 조직에서 수율은 4 5 10 × 5 (귀), 문화의 3 일에서 5 5 10 × 6 전지 (꼬리) 범위. 섬유 아세포의 분리에 이어 세 번째 날, 세포를 계대 배양 할 수 있고, 10cm 배양 접시 당 2 × 105 세포로 시딩. ...

우리는 귀 및 쥐의 꼬리에서 일차 섬유 아세포를 생성하기위한 간단하고 신속한 실험 절차를 설명한다. 절차는 특별한 동물 훈련을 필요로하지 않고, 최대 10 일 동안 실온에서 저장 귀에서 배양 섬유 아세포의 생성을 위해 사용될 수있다.

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

본 프로토콜의 전체적인 목적은 생쥐의 귀와 꼬리로부터 일차 섬유아세포 배양을 확립하는 것입니다. 이 방법은 건강한 세포와 암세포의 차이와 같은 세포 생물학 분야의 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 본 연구의 주요 장점은 세포를 분리하기 전, 실온의 배지에서 최대 10일 동안 보관된 귀로부터 섬유아세포를 생성할 수 있다는 점입니다.이 방법은 마우스 생물학에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 랫드 및 토끼와 같은 다른 포유류 동물 유기체에도 적용 가능합니다. 조직을 수집하기 전, 10 centimeter 배양 접시에 10 milliliters의 완전 배지를 채웁니다. 그 후, 마우스를 안락사시킨 다음 멸균된 도구를 사용하여 조직 샘플을 수집합니다.반지름 약 1cm 크기의 귀 조직과 약 5cm 길이의 꼬리 조직을 채취합니다. 채취한 조직을 70% ethanol 40mL가 담긴 원추형 튜브로 옮깁니다. 5분 동안 담가둔 후, 배양 후드 내의 10cm 오픈 배양 접시에서 5분간 공기 건조시킵니다.조직이 마르면 배지가 충전된 플레이트로 옮깁니다. 이제 가위로 모든 조직의 털을 잘라내고, 조직을 3 mm보다 작은 조각으로 자릅니다. 잘게 자른 조직을 크라이오튜브(cryotube) 바이알로 옮긴 후, 바이알의 1.8 mL 표시선까지 collagenase D pronase 용액을 채웁니다.이제 조직을 37 °C에서 200 rpm으로 흔들어주며 90분 동안 배양합니다. 후드 내에서 배양 접시에 완전 배지 10 mL를 채웁니다. 접시 위에 70 µm 세포 스트레이너를 놓고, 배양이 끝나면 조직 소화물을 스트레이너에 넣습니다.이제 플런저를 사용하여 스트레이너 내의 조직을 갈아줍니다. 이 과정을 최소 5분 동안 수행하십시오. 가끔 스트레이너를 배지에 흔들어 분리된 세포가 씻겨 나오게 합니다.충분한 수의 세포를 얻기 위해서는 소화된 귀 및 꼬리 조직을 잘 갈아주는 것이 중요합니다. 또한 조직을 갈아낸 후에는 세포 스트레이너(cell strainer)를 반드시 흔들어 주십시오. 이렇게 하면 스트레이너에 남아 있는 추가 세포들을 씻어낼 수 있습니다.다음으로, 15 milliliter 원추형 튜브에 세포 현탁액을 수집합니다. 그런 다음, 스트레이너를 10 milliliters의 배지로 헹구고, 헹굼액을 수집액에 추가합니다. 이제 세포를 세척합니다.먼저, 냉장 원심분리기를 사용하여 세포를 침전시킵니다. 둘째로, 상층액을 제거합니다. 셋째로, 10 milliliters의 완전 배지에 세포를 현탁합니다.세척 과정을 한 번 더 반복한 후, 배양이 가능하도록 세포를 완전 배지에 넣어 절차를 마무리합니다. 세포를 배양하려면, 먼저 세포 현탁액을 10 milliliter 배양 접시로 옮깁니다. 그런 다음, 각 배양액에 10 microliters의 amphotericin B 용액을 첨가합니다.이제 세포를 3일 동안 배양합니다. 3일째 되는 날, 배지를 amphrotericin B가 포함된 신선한 완전 배지로 교체합니다. 곧 배양 세포가 70% 밀도(confluency)에 도달하게 됩니다. 이때 배지를 제거하고 5 mL의 1X PBS로 배양물을 헹굽니다.그런 다음, PBS를 2 mL의 1X trypsin EDTA 용액으로 교체하고 세포를 5분 동안 배양합니다. 짧은 배양 후, 디쉬를 가볍게 두드리고 각 디쉬에 6 mL의 신선한 완전 배지를 첨가합니다. 이제 디쉬에서 떨어진 세포를 피펫으로 분주하여 두 개의 15 mL 원추형 튜브에 옮깁니다.그다음, 냉장 원심분리기를 사용하여 450 Gs에서 5분 동안 튜브를 원심분리합니다. 펠렛을 5 mL의 완전 배지에 다시 현탁하고 현탁액의 세포 밀도를 측정합니다. 이제 10 cm 디쉬당 200,000개의 세포가 되도록 분주합니다.이 세포들을 70% 합류도(confluency)에 도달할 때까지 3~4일 동안 배양한 다음, 세포를 수집하고 특정 밀도로 다시 분주하는 과정을 반복합니다. 이러한 방식으로 최대 25일까지 배양할 수 있습니다. 세포 추출 3일 후, 배지를 교체하기 전 배양액 내에 상당한 양의 잔해물이 관찰되었습니다.세포 잔해를 흰색 화살표로 표시하였습니다. 스케일 바는 100 microns를 나타냅니다. 새로운 배지를 사용함으로써 세포 잔해가 유의하게 감소하였습니다.상온에서 10일 동안 보관된 조직으로 배양한 지 3일 된 배양물은 섬유아세포가 상당히 강인하다는 것을 보여주었습니다. 이러한 조직으로부터 5~6일 후 70~80%의 섬유아세포 합생도(confluency)를 달성했습니다. 세포는 섬유아세포 마커인 vimentin으로 라벨링되었으며, 이는 빨간색으로 나타납니다.핵을 표지하기 위해 DAPI를 사용하였으며, 이는 파란색으로 나타납니다. 스케일 바는 10 microns입니다. 균일한 염색 결과는 섬유아세포 배양이 순수함을 시사합니다.설명된 프로토콜을 통해 통상적으로 이러한 결과를 얻었습니다. 이 영상을 시청하신 후, 여러분은 일차 섬유아세포 배양을 빠르고 신뢰성 있게 구축하는 최종 단계에 도달했을 것입니다. 이 절차를 수행하는 동안 조직에서 섬유아세포를 추출할 때 각별한 주의를 기울여야 하며, 조직을 충분히 분쇄하지 않으면 세포 수가 감소하는 결과가 나타날 수 있습니다.

generating-primary-fibroblast-cultures-from-mouse-ear-and-tail-tissues

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

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설치류에서 기본 성인 Fibroblast 문화를 구축

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그들은 pluripotency에 대한 표준 테스트를 통과 때도 생성 유도 만능 줄기 세포 (iPSC) 라인이 발달 가능성을 서로 다른 행을 생산하고 있습니다. 여기 가진 전체 pluripotency로 iPSC 라인을 정의 iPSCs에서 완전히 파생 쥐를 생산하기 위해 프로토콜을...

유도 만능의 줄기 세포에서 파생 마우스의 생성

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여기, 우리는 두 번 시드를 부분적으로 유도 만능 줄기 세포로 쥐에 이식을위한 기능적인 조직 설계 혈관 이식을 생성하는 프로토콜을 제시 (PiPSC은) - 탈세 포화 선박 발판 생물 반응기에서 유래 내피 세포 - 평활근 세포 및 PiPSC 산출했다.

마우스 모델에서 조직 공학 혈관의 생성 및 손톱 확장

여기에서는 폴리시스트로닉 구조에서 Gata4, Tbx5 및 Mef2c의 레트로바이러스 매개 전달을 사용하여 iCM을 생성하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 효율성과 품질이 향상된 비교적 균질한 재프로그래밍된 세포 집단을 생성하며 향후 iCM 재프로그래밍에 대한 연구에 유용합니다.

Gata4, Mef2c 및 Tbx5의 최적 비율을 표현하는 폴리 시스 트론 구조를 사용하여 유도 된 심근의 향상 발전

섬유아세포 행동은 다양한 임상 개체의 기초가 되지만, 주로 내재된 이질성으로 인해 특성화가 제대로 이루어지지 않은 상태로 남아 있습니다. 전통적인 섬유아세포 연구는 체외 조작, 생체 내 섬유아세포 거동 마스킹에 의존합니다. 세포 배양이 필요하지 않은 마우스 피부 섬유아세포의 분리를 위한 FACS 기반 프로토콜에 대해 설명합니다.

FACS에 의해 쥐 피부 섬유 아세포 격리

생산 유발에 대 한 우리의 프로토콜 여기 제시 erythroid 창시자 (Iep) 성인 섬유 아 세포 전사 인자 제어를 사용 하 여 마우스에서에서 직접 혈통 프로그래밍 (DLR).

리니지 Reprogramming 성인 마우스 구와 Erythroid 창시자에의 직접

이 프로토콜은 0-4일 된 마우스의 피부로부터 멜라닌세포 및 섬유아세포 배양을 동시에 생성하는 신속한 방법을 간략하게 설명한다. 이러한 1차 배양은 피부 세포 생물학, 색소 침착, 상처 치유 및 흑색종을 포함한 다양한 생리학적 관련 과정을 연구하기 위해 시험관 내에서 유지 및 조작될 수 있다.

1 차적인 뮤린 멜라닌세포 및 섬유아세포 배양물의 급속한 생성

우리는 초보자 (예를 들어, 학생)에 의해 수행 할 수있는 쉽고 빠르고 신뢰할 수있는 방법으로 기본 성인 섬유 아아세포를 분리하는 프로토콜을 제시한다. 이 절차는 효소 조직 소화와 기계적 동요를 초음파와 결합하여 1 차 섬유 아아아를 얻습니다. 프로토콜은 특정 실험 요구 사항(예를 들어, 인간 조직)에 쉽게 적응될 수 있다.

초음파 증강 원발성 섬유아세포 분리

여기에 제시된 프로토콜은 기계학 연구, 질병 모델링 및 스크리닝 애플리케이션에 적합한 이중 극이 있는 다중 우물 판에서 48개의 조직의 병렬 배양에 대한 엔지니어링 된 결합 조직을 생성하는 프로토콜입니다. 프로토콜은 다른 장기와 종에서 섬유 아세포와 호환되며 인간의 기본 심장 섬유 아세포와 함께 여기에 예시됩니다.

섬유아세포, 선별 애플리케이션을 위한 인간 공학형 결합 조직

배우세요 마우스 귀와 꼬리 조직에서 1차 섬유아세포 배양을 수행하는 방법을. 실온에서 최대 10일 저장된 조직을 사용할 수 있어 세포생물학 연구에 활용됩니다.

마우스 귀와 꼬리 조직에서 생성 차 섬유 아세포 배양

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