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DOI: 10.3791/53608-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol outlines a high-throughput cryo-electron tomography method for determining high-resolution in situ structures of molecular machines. It streamlines data processing, minimizes bottlenecks, and reduces resource downtime, enabling researchers to concentrate on significant biological inquiries.
우리는 분자 기계 구조의 동일계에서 높은 해상도를 결정하기 위해 높은 처리량 극저온 전자 단층을 활용하는 방법에 대한 프로토콜을 제시한다. 프로토콜은 일반적인 병목 현상을 회피, 대용량의 데이터가 처리 될 수있게하고, 사용자가 중요한 생물학적 질문에 집중할 수 있도록 자원 중단 시간을 감소시킨다.
이 절차의 전반적인 목표는 사용자가 초저온 전자 단층 촬영의 고처리량 수집 및 처리 파이프라인을 구축할 수 있도록 돕는 것입니다. 이 방법은 차세대 검출기로 수집된 데이터를 어떻게 처리하고 자동화된 틸트 시리즈 수집 소프트웨어로 생성된 엄청난 양의 데이터를 어떻게 처리합니까? 이 기술의 주요 장점은 사용자가 자동화된 틸트 시리즈 처리를 위한 효율적인 파이프라인을 찾기 위해 통합된 방식으로 여러 소프트웨어 패키지를 구성할 수 있어 단층 촬영 분석에 더 많은 시간을 할애할 수 있다는 것입니다.
일반적으로 Cryo-ET를 처음 접하는 개인은 전자 현미경에서 생성된 방대한 데이터를 처리하기 위해 많은 지루한 단계가 필요하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 이 개발에 대한 아이디어는 5년 전 한 가지 박테리아를 3D로 재구성하기 위해 수백 단계를 수동으로 거쳐야 했을 때 처음 떠올랐습니다. 사전에 Shigella flexneri minicells 준비에 대한 텍스트 프로토콜을 참조하십시오.
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