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효소 다이제스트 및 그라데이션 분리를 사용하여 마우스 피부에서 침투 백혈구의 분리
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JoVE Journal Immunology and Infection
Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

효소 다이제스트 및 그라데이션 분리를 사용하여 마우스 피부에서 침투 백혈구의 분리

Full Text
22,322 Views
07:11 min
January 25, 2016

DOI: 10.3791/53638-v

Charles J. Benck1, Tijana Martinov2, Brian T. Fife2, Devavani Chatterjea1

1Department of Biology,Macalester College, 2Department of Medicine, Division of Rheumatic and Autoimmune Diseases, Center for Immunology,University of Minnesota

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes the isolation of skin-infiltrating leukocytes using enzymatic digestion and density gradient separation. This method is effective for studying cellular and molecular mechanisms in mouse models of skin pathologies, such as atopic dermatitis.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Immunology

Background

  • Skin-infiltrating leukocytes play a crucial role in skin pathologies.
  • Traditional methods for tissue dissociation can be harsh and less effective.
  • Enzymatic digestion offers a more economical alternative.
  • Precision is required in skin harvesting and gradient handling.

Purpose of Study

  • To isolate leukocytes from mouse skin for further analysis.
  • To provide insights into skin-infiltrating leukocyte biology.
  • To facilitate the study of other resident cell populations.

Methods Used

  • Enzymatic digestion of mouse skin in nutrient-rich medium.
  • Gradient separation to isolate leukocytes.
  • Careful excision of skin using surgical scissors.
  • Visual demonstration to aid in learning the technique.

Main Results

  • Successful isolation of leukocytes from mouse skin.
  • Improved understanding of skin-infiltrating leukocyte biology.
  • Potential applications in studying various skin pathologies.
  • Demonstrated effectiveness of the method compared to traditional techniques.

Conclusions

  • The enzymatic digestion and gradient separation method is effective and economical.
  • This protocol can enhance research on skin-related diseases.
  • Visual aids are essential for mastering the technique.

Frequently Asked Questions

What is the main goal of this protocol?
The main goal is to isolate skin-infiltrating leukocytes for further study.
Why is visual demonstration important?
Visual demonstration helps new users learn the precise techniques required for skin harvesting and gradient separation.
What are the advantages of this method?
This method is effective, economical, and provides an improved alternative to harsher tissue dissociation techniques.
Can this method be applied to other cell populations?
Yes, it can also be used to investigate other resident cell populations in the skin.
What type of mouse is used in this protocol?
The protocol uses adult eight to twelve-week-old female ND4 Swiss-Webster mice.
What tools are necessary for the procedure?
10 centimeter surgical scissors are required for excising the skin sample.

이 프로토콜은 영양이 풍부한 배지에서 마우스 피부의 효소 분해 후 백혈구를 분리하기 위한 구배 분리를 설명합니다. 이렇게 파생된 세포는 다양한 다운스트림 응용 분야에 사용할 수 있습니다. 이것은 조직 해리 기계와 더 가혹한 트립신 및 디스파제 기반 조직 소화 프로토콜에 대한 효과적이고 경제적이며 개선된 대안입니다.

이 절차의 전반적인 목표는 효소 분해 및 밀도 구배 분리를 사용하여 피부 침윤 백혈구를 분리하는 것입니다. 이 방법은 아토피 피부염을 포함한 피부 병리학의 많은 마우스 모델에서 세포 및 분자 메커니즘을 조사하는 데 적용할 수 있습니다. 이 방법은 피부 침투 백혈구 생물학에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 다른 상주 세포 집단의 조사에도 적용할 수 있습니다.

일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 과도한 지방 및 결합 조직을 완전히 제거하는 것을 포함하는 피부 채취에 어려움을 겪을 것입니다. 이 방법의 시각적 시연은 피부 수확 및 밀도 구배 처리는 배우기 어렵고 정밀도와 연습이 필요하기 때문에 매우 중요합니다. 치료 후 적절한 시점에 10cm 수술용 가위를 사용하여 8주에서 12주 된 암컷 ND4 Swiss-Webster 마우스의 25 x 25mm 면도한 옆구리 피부를 조심스럽게 절제합니다.

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