Name: 절연, 특성화 및 잇몸 면역 세포 네트워크의 기능 시험 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: 배우세요 생쥐 잇몸 면역 세포를 분리하고 특성화하는 방법으로 구강 면역과 치주염의 면역 반응을 심층 분석하세요. 이 기술은 생존 가능한 세포를 확보하여 체외 기능 연구를 수행할 수 있게 합니다.

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저자는 NIDCR의 교내 프로그램(N.M.M)과 Wellcome Trust Stepping Stones Fellowship(097820/Z/11/B에서 J.E.K)과 Manchester Collaborative Centre for Inflammation Research 보조금(J.E.K)의 지원을 받았습니다. 저자는 원고를 비판적으로 검토한 Teresa Wild에게 감사를 표합니다.

이 프로토콜에 설명 된 모든 실험 절차는 필요한 가이드 라인을 따라 기관 동물 관리 및 사용위원회, NIDCR / NIH에 의해 승인되었다. 1. 사전에 준비 <ol><li> 전체 미디어 준비 : RPMI가 2 mM L- 글루타민, 100 단위 / mL 페니실린, 100 μg / mL 스트렙토 마이신 및 10 % FBS가 보충. </li><li> 7.5 μg의 DNase의 보충 RPMI 미디어의 50 ㎖ (신선한 확인 항상 얼음에 보관) : DNase의 미디어를 준비합니다. </li><li> DNase의 미디어 플러스 3.2 밀리그램 / 콜라게나 유형 IV ml의 5 ㎖ (신선한 확인 항상 얼음에 보관) : 콜라게나-DNase의 미디어를 준비합니다. </li><li> 사전 멋진 FACS 버퍼 : PBS에 희석 0.5 % FBS. </li><li> 4 ° C에서 미리 냉각 원심 분리기. </li><li> 37 ° C까지 따뜻한 진탕 배양기. </li></ol> 잇몸 블록 2. 절연, 해부 및 세포 분리 <ol><li> ARAC 지침에 따라, 적절한 챔버 내에 2 CO에 노출하여 마우스를 안락사. </li> &lt;리&gt;는 마음과 내부 장기를 노출 흉부와 복강을 엽니 다. 관류하기 위해, 하대 정맥의 절개를하고, 27 G 바늘 3 ML의 주사기를 사용하여 좌심실을 통해 PBS의 3 ㎖을 관류. </li><li> 이 위를 향 위장 패드에 몸과 마우스의 머리를 고정. </li><li> 기본 조직과 근육을 노출, 하악과 목 영역을 커버하는 피부를 분리, 가위로 목을 향해 입술의 각각의 접합면을 잘라. 하악을 밝히기 위해 아랫 입술을 해부하다. </li><li> 하부 앞니 사이 절단하는 하악골의 양측을 분리하고 구강에 액세스하는 각각의면을 ​​고정한다. </li><li> 시각화 멀리 비강에서 미각을 해부하다. </li><li> 10 블레이드를 사용하여 영역을 해부 및 치은 (그림 1) 주변과 상악과 하악 몰 영역을 포함한다. 수직 절개 단지 첫 번째 대구치 후방 세 번째 몰에 수평 절개시에 전방 확인잇몸의 경계 (조직 주변 치아의 화이트 칼라). </li><li> 5 ml의 콜라게나 / DNase의 (얼음 유지)와 50 ML 원뿔 튜브에 상악과 하악 블록을 배치합니다. </li><li> 1 시간 동안 37 ℃에서 진탕 배양기에서 배양 및 배양의 마지막 5 분 동안 0.5 M EDTA의 50 μl를 추가합니다. </li><li> 조직에 50 ㎖ 튜브에 차가운 DNase의 미디어의 5 ML을 추가하고 부드럽게 섞어 소용돌이 친다. </li><li> 페트리 접시에 조직의 4 블록을 전송하고 DNase의 미디어의 500 μL로 커버. 메스 블레이드를 사용하여 치은과 치간 영역으로 블레이드를 가리키는 조직의 각 블록에서 잇몸을 제거합니다. </li><li> 셀 스트레이너 (70 ㎛의 크기)를 통해 새로운 50 ㎖ 튜브, 페트리 접시뿐만 아니라 해부시 사용 이전 DNase의 매체에서 조직 및 미디어 전송. DNase의 미디어 (3-5 ml)에 사용 된 악기와 필터의 모든 씻으시오. </li><li> 멸균 3 ML의 주사기의 플런저를 사용하여, 스트레이너에 조직을 매쉬차가운 DNase의 미디어 (30-35 ml)로 필터링. </li><li> 차가운 DNase의 미디어와 셀 스트레이너를 씻으십시오. </li><li> 4 ° C에서 원심 분리기, 6 분 동안 314 XG. </li><li> 상층 액을 버리고, 전체 미디어의 1 ㎖에 다시 일시 중지합니다. </li><li> 세포 카운트를 자동 세포 계수기를 사용하여 (예상 사용량은&gt; 80 %의 생존 6 10 1.2 × 5-10 × 8 세포 사이의 범위한다). </li></ol> 잇몸 세포의 3 자극 및 FACS 염색 <ol><li> Brefeldin A의 1 μL / ㎖의 존재하에 PMA (50 NG / ml) 및 이오 노마 이신 (2.5 μg의 / mL)로 단일 세포 현탁액을 자극 </li><li> 37 ° C에서 3.5 시간, 5 % CO 2 품어. </li><li> 스핀 다운, 4 ° C에서 PBS와 원심 분리기로 씻어; 6 분 동안 314 XG. </li><li> 제조업체의 지침에 따라 생존의 얼룩을 사용하여 세포를 얼룩. </li><li> 세포 마커 (CD45, TCRγδ, TCRβ, CD4, CD8, TCRγδ 또는 개미에 대한 얼룩제조업체의 지침에 따라 선택의 ibodies). </li><li> 4 ° C, 5 분 동안 314 XG에 차가운 FACS 버퍼와 원심 분리기와 세포를 씻으십시오. </li><li> 조심스럽게 세포 펠렛을 방해하는 소용돌이. </li><li> 실온에서 20 분 동안 2 % 파라 포름 알데히드로 세포를 고정한다. </li><li> 4 ° C, 세포 내 사이토 카인 5 분, 얼룩을위한 314 XG에 차가운 FACS 버퍼, 원심 분리기와 세포를 씻으십시오. <ol><li> 4 ° C, 5 분 동안 314 XG에 FACS 버퍼와 원심 분리기에 희석 차가운 0.5 % 사포닌의 솔루션을 FACS 튜브를 입력합니다. </li><li> FACS 튜브에 0.5 % 사포닌 용액 300 μl를 추가, 4 ° C에서 어둠 속에서 15 분 동안 배양 한 후 4 ° C, 5 분 동안 314 XG에 원심 분리기. </li><li> 제조업체의 지침에 따라 세포 내 마커 (IL-17A와 IFNγ 또는 선택의 사이토 카인)에 대한 세포를 얼룩. 5 분, 4 ° C에서 314 XG 0.5 % 사포닌 용액과 원심 분리기와 세포를 씻으십시오. </li><li> FACS 다시 세척버퍼 4 ° C, 5 분 동안 314 XG에 원심 분리기. </li><li> FACS 완충액 300 μL에 세포를 다시 일시. </li></ol></li><li> 유동 세포 계수기에 대한 결과를 분석합니다. </li></ol> 4. 유동 세포 계측법 분석 <ol><li> 세포를 시각화하는 파편을 제외 앞으로 (FSC)와 사이드 분산 (SCC) 및 게이트에서 분석한다. </li><li> 높이 (FSC-H) 매개 변수 대 앞으로 분산 형 지역 (FSC-A) 단일 셀을 선택합니다. </li><li> 추가 분석 (도 2A 및 2C)에 대한 조혈 마커 CD45 +의 라이브 (생존 염색법으로 표시됨) 및 양성 게이트 셀. </li><li> 도 2 및도 3에 도시 된 바와 같이 특정 마커의 분석을 계속한다. </li></ol>

<ol><li>Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+The+Normal+Bacterial+Flora+Of+The+Oral+Cavity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Defining The Normal Bacterial Flora Of The Oral Cavity.</a> J Clin Microbiol. 43, 5721-5732 (2005).</li>
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</ol>

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현재의 기술이 성공적으로 적합한 (단일 마우스)에서 면역 세포의 수가 산출뿐만 아니라 표현형 특성화뿐만 아니라 기능적 연구 생체. 다른 그룹은 이전에 분리하여 치은 뮤린 면역 세포를 특성화하는 프로토콜 번역 및 동물 모델 9 치주염의 연구에서 유세포 빛깔의 사용 가치를 도입했다. 상당한 문제 해결이 프로토콜의 주요 수정을 따르면 치은 칼라 영역과 치간 치은 (그림 1)를 모두 포함하기 위해 조직의 전체 블록의 해부를 포함했다. 단독으로 치은 박리 종종 전체 두께 플랩이 달성되지 않고, 치은의 일부 특히 치간 영역에서 누락된다. 이 방법을 사용하여 수확 된 면역 세포의 수는 크게 증가한다. 이 기술은 또한 치은 조직 상악의에서 모두 최적의 분리를 허용D 하악. 이 프로토콜의 중요한 단계는 치은 지역의 보수적 해부 및 해부을 효율적으로 속도를 포함한다. 특히, 조직의 블록 치아 (잇몸)의 주위에 최소한의 조직이 아...

치은 조직은 인간 및 뮤린 치열을 둘러싸고 끊임없이 티스 (1)의 복잡한 생물막에 노출된다. 치은 배리어 치안 면역 세포 망은 병원성이 챌린지에 대한 효과적인 면역성을 제공하는 동시에, 조직의 무결성을 유지하는 로컬 공생 미생물과 항상성을 보장하고 필수적이다. 항상성을 달성하기 위해, 면역 시스템은 신중 아직 작은 디테일이 치은 면역 세포군 및 조직 내성 (2)를 유지하는 역할로 알려진 고도로 전문화 면역 세포 망을 생성 치은 환경에 맞게 조정된다. 면역 항상성이 치은에 중단되면, 어느 증가 호스트 감수성 및 / 또는 dysbiotic 미생물 지역 사회, 염증 상태의 존재를 통해, 치주염 3 (4)를 발생한다. 치주염은 치아의 손실로 이어지는 일반적인 염증성 질환입니다upporting 구조. 그것의 심한 형태는 일반 인구 (5)의 약 10 %에서 볼 수있다. 치주염 감수성과 진행에 관여하는 중요한 요소를 해부하는 것은 6 어려운 입증했다. 그러나, 동물 모델은 치주염 개시 및 진행 (7)의 메커니즘을 이해하는데 매우 유용 하였다. 모델 면역 항상성 및 치주염의 구동 발전을 유지하는데 필수적인 주요 세포 집단과 분자 매개체를 정의하는데 이용 될 수있다. 이러한 통찰력은 면역 항상성의 치은 특정 제어에 대한 우리의 이해를 변환 및 질환 발병의 우리의 현재 이해를 촉진 할 것이다.

<table><tbody><tr><td>세밀한 가위</td><td>세밀 과학 도구</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>메스 핸들 #3</td><td>세밀 과학 도구</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>메스 블레이드 #10</td><td>세밀 과학 도구</td><td>10010-00</td><td>멸균</td></tr><tr><td>스플린터 펜치</td><td>인테그라 밀텍스</td><td>6-304</td><td></td></tr><tr><td>바늘과 정규 베벨&nbsp;</td><td>BD Medical</td><td>305109</td><td>27 G, 12.7 mm 길이</td></tr><tr><td>Monoject 주사기</td><td>Covidien</td><td>8881513934</td><td>Luer-lock 팁, 3 ml</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Life Technologies</td><td>10010-049</td><td>칼슘 및 마그네슘</td></tr><tr><td>없음 RPMI 1640</td><td>Lonza</td><td>12-167F</td> 소 췌장에서 <td>L-글루타민</td></tr><tr><td>DNase I</td> 제외 <td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-1G</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 IV형</td><td>Gibco (by Life technologies)</td><td>17104-019</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gemini Bio-products</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin 50 mg/ml</td><td>Quality biological</td><td>120-098-661EA</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Gibco (by Life technologies)</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Gibco (by Life technologies)</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>0.5 M EDTA pH 8.0</td><td>품질 생물학</td><td>351-027-721EA</td><td></td></tr><tr><td>50 ml 튜브</td><td>Corning</td><td>352070</td><td>폴리프로필렌, 멸균</td></tr><tr><td>70 &mu; M 세포 여과기</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>Corning</td><td>351029</td><td>멸균</td></tr><tr><td>5ml FACS 튜브</td><td>Corning</td><td>352052</td><td>멸균</td></tr><tr><td>BD GolgiPlug</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>brefeldin A 용액</td></tr><tr><td>Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>Ionomycin 칼슘 염</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>13909</td><td></td></tr><tr><td>퀼라야 껍질의 사포닌</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4521</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD 수정 가능한 아쿠아 데드 셀 스테인 키트</td><td>Life Technologies</td><td>L34957</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD45 Alexa Fluor 700</td><td>eBioscience</td><td>56-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD4 eFluor 450</td><td>eBioscience</td><td>48-0042-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 TCR 베타 APC eFluor 780</td><td>eBioscience</td><td>47-5961-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 감마 델타 TCR FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5711-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 IL-17A APC</td><td>eBioscience</td><td>12-7311-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 IFN-&감마; PE</td><td>eBioscience</td><td>11-5931-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 NK1.1 PE-Cy7</td><td>eBioscience</td><td>25-5941-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD90.2 APC eFluor 780</td><td>eBioscience</td><td>47-0902-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD3e FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0031-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD19 FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0193-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD11b FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD11c FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0114-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 TCR 베타 FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5961-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 Ly-6G FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5931-82</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 Ly-6C FITC</td><td>BD Pharmingen</td><td>553104</td><td></td></tr></tbody></table>

절연, 특성화 및 잇몸 면역 세포 네트워크의 기능 시험

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

조직 내 면역 세포 네트워크는 국소 면역을 매개하고 조직의 항상성을 유지하는 데 중요한 역할을 하지만, 구강 점막과 치은에 상주하는 면역 세포 집단에 대해서는 알려진 바가 거의 없습니다. 우리는 미생물에 지속적으로 노출되는 지역이자 일반적인 염증성 질환인 치주염에 취약한 부위인 쥐의 잇몸 조직에서 면역 세포를 분리하고 연구하기 위한 기술을 확립했습니다. 우리의 프로토콜은 안정 상태에서도 치은에 상주하는 면역 세포 집단의 상세한 표현형 특성을 허용합니다. 또한 당사의 절차는 생체 외 사이토카인 분비 평가와 같은 기능 연구에 사용할 수 있는 높은 생존력을 가진 충분한 세포를 산출합니다.치은 면역 세포 네트워크의 이러한 표현형 및 기능적 특성화의 조합은 구강 면역 및 치주 항상성과 관련된 메커니즘을 조사하는 데 도움이 될 뿐만 아니라 국소 면역 병리학에 관련된 메커니즘에 대한 이해를 증진시킬 것입니다.

(- / -, 그림 2A - C LFA 대 WT) 프로토콜의 응용 프로그램을 설명하기 위해, 우리는 면역 세포와 치주염이없는 마우스의 치은의 네트워크를 검사 대표적인 결과를 보여줍니다. 대표 FACS 플롯은 치은 (그림 2A, 2C)에 살고 CD45 + 조혈 세포를 표시합니다. 이 프로토콜로 면역 세포의 분리 처리가 생체 자극 사이토 카인 분비 패턴의 특성을 수행 할 수있는 세포를 산출한다. 여기에서 우리는 정상 상태 (WT) 총 CD45 + 세포에서 IL-17 및 IFN-γ 염색을 표시하고 마우스에서 (그림 2B - D) (인해 LFA 결핍) 치주염을 나타내는. 이러한 데이터는 조직 정상 상태 (WT) 동안 로컬 ...

우리는 분리, 표현형 특성화 및 쥐의 잇몸에서 면역 세포의 기능 분석을위한 기술을 설립했다.

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

이 방법의 전반적인 목표는 구강 면역 및 치주염과 관련된 면역 반응을 심층적으로 분석하기 위해 잇몸 면역 세포를 분리하는 것입니다. 이 방법은 치주염의 병인에 어떤 세포 인자들이 관여하는지와 같은 구강 면역 분야의 핵심 질문에 대한 답을 찾는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 구강 면역 세포 네트워크를 평가할 수 있으며, 후속 인비트로(in-vitro) 연구에 충분한 양의 생존 세포를 분리할 수 있다는 점입니다.본 프로토콜의 첫 번째 단계로, 마우스의 몸통을 고정하기 위해 핀을 꽂고 흉강과 복강을 열어 심장과 내부 장기를 노출시킵니다. 다음으로, 대정맥에 절개창을 내고 27-gauge 바늘이 장착된 3-milliliter 주사기를 사용하여 좌심실을 통해 3 milliliters의 PBS를 관류합니다. 모든 혈액이 씻겨 나가면, 마우스의 배 부분이 위를 향하도록 하여 해부 패드 위에 머리를 핀으로 고정합니다.그 후 가위를 사용하여 입술의 각 구각에서 목 방향으로 절개하여, 하악 및 목 부위를 덮고 있는 피부를 분리하고 하부 조직과 근육을 노출시킵니다. 하악의 양측을 분리하기 위해 하악 절치 사이를 절개합니다. 구강 내에 접근할 수 있도록 분리된 하악의 각 측면을 25-gauge 바늘로 고정합니다.구개부를 확인한 후, 10번 수술용 메스를 사용하여 첫 번째 어금니 바로 앞쪽과 세 번째 어금니 뒤쪽으로 수직 절개를 가합니다. 그런 다음 조직을 비강으로부터 분리하고, 하악골에서 블록을 분리합니다. 이후 잇몸 경계의 과잉 조직을 제거하고, 상악 및 하악 블록을 얼음 위에 보관된 5 mL의 collagenase 및 DNase가 들어 있는 50 mL 원심분리관(conical tube)으로 옮깁니다.진탕 인큐베이터에서 37 °C로 1시간 동안 조직을 소화시키며, 마지막 5분 동안 0.5 M EDTA 50 µL를 첨가합니다. 그런 다음 조직에 냉각된 DNase 배지 5 mL를 넣고 튜브 내용물을 부드럽게 회전시켜 섞습니다. 이어서 4개의 조직 블록을 페트리 접시에 옮깁니다.그 후 500 µL의 신선한 DNase 배지로 덮어줍니다. 메스를 사용하여 각 조직 블록에서 잇몸을 제거합니다. 그리고 배양 접시의 모든 내용물을 50 mL 튜브 위에 놓인 70 µm 셀 스트레이너로 옮깁니다.페트리 접시와 체를 3~5 mL의 신선한 DNase 배지로 세척합니다. 그런 다음 멸균된 3 mL 주사기의 플런저를 사용하여 잇몸 조직을 체의 메시에 대고 으깹니다. 체를 30~35 mL의 차가운 DNase 배지로 헹구고, 여과액을 원심 분리합니다.그 다음, 펠렛을 1 milliliter의 완전 배지에 재현탁하고 생존 세포 수를 측정합니다. 방금 시연한 면역 세포의 분리 및 처리 과정은 야생형 및 치주염 감수성 동물 모두에서 치은 세포의 사이토카인 분비 패턴에 대한 ex-vivo 자극 및 특성 분석을 수행하기에 충분한 수의 세포를 얻을 수 있게 합니다. 실제로, 치주염 감수성 LFA 녹아웃 마우스의 T 세포 및 자연 살해 세포 구획을 평가하는 이 밀도 도표에서 보여주는 것처럼 마우스 치은 면역 세포 조성을 분석할 수 있습니다.적절한 게이팅 전략을 사용하여 TCR beta CD4 양성, TCR beta CD8 양성, TCR gamma delta 양성 T 세포뿐만 아니라 NK 세포 및 선천성 림프구 세포의 세포 내 사이토카인 생성 또한 측정할 수 있습니다. 기술을 충분히 숙달하고 적절하게 수행한다면, 면역 염색을 위해 3시간 이내에 세포를 분리할 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때는 모든 단계를 효율적이고 빠르게 완료하는 것이 중요하며, 세포를 조작하지 않는 모든 시간에는 항상 얼음 위에 보관해야 함을 기억하십시오.이 절차를 마친 후, 특정 세포 하위 집단의 기능과 관련된 추가적인 질문에 답하기 위해 세포 분류(cell sorting)와 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

마음에서 기능적 면역 세포를 분리를위한이 방법은 이러한 세포의 감소 반응의 결과로, 원치 않는 면역 세포 활성화의 원인이 collagenase의 소화의 종래의 방법에 대한 대안을 제공합니다. 격리 우리의 방법은 효소 소화와 관련된 문제를 피함으로써 기능 심장병 면역 세포를 산출.

심장 기능 면역 세포의 분리

이 비디오는 마우스 모델에서 치은 면역 세포 네트워크의 분리 절차를 보여줍니다. 효소 소화는 부착된 치아와 뼈에서 잇몸 조직을 방출하고, 이는 더 기계적으로 소화되어 치은에서 면역 세포를 방출합니다. 분리된 세포는 면역학 실험을 할 준비가 되었습니다.

쥐 치아 블록에서 치은 면역 세포 네트워크 분리

이 연구는 단일 셀 문화를 생산하기 위해 마우스 구강의 잇몸 조직을 분리하고 처리 할 수​​있는 효율적인 방법을 설명합니다. 그 결과 세포는 더욱 유동 세포 계측법 분석 및 분자 연구에 사용할 수 있습니다.

쥐과 잇몸 세포의 분리, 처리 및 분석

이 기사에서는 두 가지 프로토콜을 제시합니다: 하나는 숙주 내에서 성공적으로 침입하여 생존할 수 있는 혐기성 박테리아를 측정하기 위한 것이고, 다른 하나는 숙주 세포와 상호 작용하는 혐기성 박테리아를 시각화하기 위한 것입니다. 이 연구는 모든 배양 가능한 혐기성 및 모든 진핵 세포 유형에 적용할 수 있습니다.

숙주 세포와 혐기성 세균의 상호 작용을 평가하기위한 모델 생물로 포피 진지 발리

노출 된 정상적인 안구 표면은 각막과 결막으로 이루어져 있습니다. 상피 세포, 배 세포 및 면역 세포가 결막에 존재한다. 여기, 노출 세포학의 비 침습적 기술은 인상 세포학 장치 및 결막의 면역 세포를 분석하는 유동 세포 계측법을 사용하여 설명합니다.

결막에서 세포를 분리하고 표현하기위한 비 침습적 방법

프로토콜의 목적은 염증 인간의 gingiva 모델 시험관을 구축 하는 것입니다. 이 조직 모델 공동 세 가지 유형의 인간 세포, HaCaT keratinocytes, gingival fibroblasts 및 THP 1 대 식 세포, 3 차원 조건 하에서 양성. 치은 염 및 치 주 염 등 치 주 질환을 조사 하는 것이 모델을 적용할 수 있습니다.

3 차원 선 동적인 인간 조직 Gingiva 등가물

본 의정서에서는, 점막 조직에 있는 바이러스성 감염을 모방하고 활성화시 선천적인 면역 반응을 공부하기 위하여 부분적인 외과 편도선 절제술을 겪고 있는 건강한 인간에게서 편도선 단핵 세포를 쉽게 처리하고 배양하는 방법을 설명합니다.

편도선 단핵 세포의 격리는 인간 점막 림프구 조직에서 Ex Vivo 타고난 면역 반응을 연구합니다

여기서 우리는 전통적인 방법에 록 억제제 Y-27632를 추가하여 인간 칭기발 상피 세포의 격리 및 배양에 대한 변형된 방법을 제시한다. 이 방법은 더 쉽고 시간이 많이 걸리며 줄기 세포 특성을 향상시키며 실험실과 임상 응용 분야에서 더 많은 수의 고잠재 상피 세포를 생성합니다.

Y-27632를 사용하여 1차 인간 칭기발 상피 세포의 격리 및 배양

현재 프로토콜은 지속적으로 성장하는 마우스 절개, 마우스 어금니 및 인간 치아로부터 단세포 RNA-seq 분석에 적합한 단일 세포를 격리하는 빠르고 효율적이며 부드러운 방법을 제시합니다.

마우스와 인간의 치아에서 단일 세포의 신속한 격리

제2형 염증과 관련된 그룹 2 선천성 림프 세포(ILC2s)는 주로 기생충 감염, 알레르기 질환, 대사 항상성 및 조직 복구에 대한 반응에 참여합니다. 이 연구에서는 쥐의 코 점막에서 ILC2를 분리하고 CD226의 발현을 감지하는 절차를 입증합니다.

CD226의 발현을 검출하기 위해 마우스 비강 점막에서 그룹 2 선천성 림프 세포 분리

이 프로토콜의 목표는 다양한 분자 크기의 형광 표지된 덱스트스트란을 생 체 내 치은염 표면에 국소적으로 도포한 후, 단일 광자 현미경 시스템을 이용한 체외 영상을 통해 쥐 치은상피 장벽의 무결성을 정량적으로 평가하는 표준화된 접근법을 제공하는 것입니다.

형광 추적체를 이용한 마우스 치은성 상피 장벽의 기능 평가

배우세요 생쥐 잇몸 면역 세포를 분리하고 특성화하는 방법으로 구강 면역과 치주염의 면역 반응을 심층 분석하세요. 이 기술은 생존 가능한 세포를 확보하여 체외 기능 연구를 수행할 수 있게 합니다.

절연, 특성화 및 잇몸 면역 세포 네트워크의 기능 시험

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