예는 폐 전이 및 그들의 미세 환경의 라이브 영상을 생체 내

우리는 쥐에 형광 기자를 활용, 폐 전이에서 종양 세포 기질 상호 작용의 생체 라이브 영상에 대한 비교적 간단한 방법을 설명합니다. 스피닝 디스크 공 촛점 현미경을 사용하여,이 기술은 최소 4 시간 동안 생균의 시각화를 가능하게하고 다른 염증성 폐 상태를 학습하도록 구성 될 수있다.

이 절차의 전반적인 목표는 폐 전이 내에서 동적 종양 세포 기질 상호 작용을 시각화하는 것입니다. 이 방법은 전이가 어떻게 설정되는지, 그리고 미시 환경 내의 어떤 세포 유형이 이 과정에 관여하는지와 같은 암 전이 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술이 제공하는 주요 이점은 최소 4시간 동안 살아있는 세포를 시각화할 수 있는 체외 폐 이미징을 위한 빠르고 쉬운 방법이라는 것입니다. 이 기술은 폐 전이 치료를 위한 다양한 표적 치료제의 작용 기전에 대한 이해를 증진시켰을 수 있습니다. 폐 절편 영상으로 전이를 검사하고 이 절차의 결과로 광범위한 세포 사멸로 어려움을 겪고 있을 때 이 방법에 대한 아이디어가 처음 떠올랐습니다. 생체 외 라이브 이미징을 위해 폐를 준비하려면 먼저 담금질 조각으로 덮인 폴리스티렌 폼 뚜껑에 마우스를 고정시키고 70% 에탄올로 동물을 살균합니다. 다음으로, 수술용 가위를 사용하여 피부를 가로 상복부 절개한 다음 복막을 통해 유사한 절개를 합니다. 그런 다음 해부판을 수직 위치로 옮기고 하행 대동맥을 절단하여 혈액이 흉강이 아닌 복부로 고이도록 합니다. 다이어프램의 작은 구멍을 잘라 진공을 해제합니다. 그런 다음 흉곽을 따라 잘라 횡격막을 절제하고 폐를 시각화합니다. 수술용 가위를 사용하여 갈비뼈 위의 기관까지 피부를 자르고 갈비뼈는 그대로 둡니다. 그런 다음 흉곽에서 피부를 분리하고 주변 결합 조직을 제거하여 기관을 노출시키되 기관 자체가 손상되지 않도록 주의합니다. 기관을 완전히 절단하지 않고 가능한 한 후두에 가까운 연골 고리와 평행하게 노출된 기관에서 직경 약 1mm의 작은 구멍을 잘라냅니다. 그런 다음 반력 없이 20게이지 바늘을 4-5mm 간격으로 기관에 부드럽게 삽입합니다. 바늘 끝은 기관을 통해 볼 수 있어야 합니다. 주사기에 섭씨 37도 2%의 낮은 용융 온도 아가로스 400마이크로리터를 채운 다음 집게로 바늘을 고정합니다. 해부 보드를 수직으로 유지하면서 바늘을 통해 따뜻한 아가로스의 전체 양을 폐에 천천히 주입합니다. 폐가 팽창하면 바늘을 기관 내부에 유지한 상태에서 주사기를 분리하고 폐에 섭씨 20도의 PBS 약 50ml를 부어 아가로스를 굳히는 데 도움을 줍니다. 아가로스가 응고되면 바늘을 제거하고 집게를 사용하여 기관을 닫아 응고되지 않은 아가로스의 누출을 방지합니다. 이제 흉골 절개술로 가슴을 더 열고 집게로 기관을 잡습니다. 그런 다음 수술용 가위를 사용하여 기관을 완전히 자릅니다. 폐를 제거하려면 기관을 부드럽게 위로 당기고 결합 조직과 식도를 잘라낸 다음 폐를 흉강에서 완전히 빼냅니다. 조직을 섭씨 37도 RPMI 1640에 담그어 과도한 혈액을 씻어냅니다. 가위와 집게를 사용하여 엽을 자릅니다.