(A)의 유지 보수 노랑 초파리 인구 케이지
March 15th, 2016
이 원고는 파리 개체군 케이지를 사용하여 정기적으로 Drosophila melanogaster 개체군을 배양하기 위한 자세한 프로토콜을 보고합니다.
이 백서에서는 파리 개체군 케이지의 유지 관리를 위한 상세하고 유연한 프로토콜에 대해 설명합니다. 정기적으로 밀리그램에서 수십 그램의 배아, 유충, 치골 및 성충 파리를 생산하는 효율적인 방법입니다. 생화학 및 분자 생물학 실험에 필요한 많은 양의 DNA, RNA, 단백질 및 기타 유사한 구성 요소를 얻기 위해 공정에 들어온 파리를 수집했습니다.
인구 케이지는 설정하는 데 시간이 많이 걸릴 수 있습니다. 그러나 케이지를 몇 달에 걸쳐 유지 관리하면 시간을 절약하고 단기간에 생물학적 물질을 신속하게 수집할 수 있습니다. 시작하려면 플라스틱 용기 뚜껑에서 2x2cm 정사각형 3개를 잘라 플라스틱 용기를 설정합니다.
폼 플러그가 꼭 맞도록 각 구멍의 네 모서리에 3/4인치 라벨 테이프를 추가합니다. 그런 다음 각 구멍에 하나의 폼 플러그를 끼웁니다. 용기 내부를 플라스틱 랩으로 덮습니다.
이 필름 위에 플라스틱 용기의 바닥을 덮을 면 층을 추가하고 여분의 면을 찢어냅니다. 다음으로, 333ml 비커에 500ml의 탈이온수를 추가하여 플라이 음식 준비를 진행합니다. 화학 물질 후드에서 마그네틱 바로 용액을 저어주고 원액에서 167마이크로리터의 프로피온산과 1.08밀리리터의 인산을 추가합니다.
활성 건조 효모 77.5g을 천천히 첨가하여 큰 덩어리를 피하십시오. 건조 효모를 녹인 후 마지막으로 자당 38.8g을 넣으십시오. 자당을 녹인 직후, 신선한 음식을 솜 위에 붓는다.
탈출한 파리가 음식을 오염시키는 것을 방지하기 위해 뚜껑이 있는 플라스틱 용기를 닫기 전에 솜을 고르게 덮으십시오. 이전 주기에서 가장 단단한 id nondi coronated 배아 1.5g을 현탁시킵니다. 두 개의 여과지를 반으로 자르고 주걱을 사용하여 네 조각에 생물학적 혼합물을 고르게 분배합니다.
불린 면 위에 여과지를 놓고 뚜껑을 닫습니다. 마지막으로 동공 단계까지 플라스틱 용기를 배양합니다. 배아가 첫 번째 instar 유충이 될 때 모니터링합니다.
생성된 유충은 효모 혼합물을 먹고 두 번째 및 세 번째 instar 유충으로 성장하고 두 번 탈피합니다. 성장 기간 동안 함께 제공되는 텍스트 프로토콜에 자세히 설명된 대로 파리 개체군 케이지를 청소합니다. 초기 설정 후 4일 후에 유충 번데기를 관찰합니다.
유충은 4일 동안 이 단계에 더 머무를 것입니다. 첫 번째 파리가 나오기 전에 플라스틱 용기를 열고 깨끗한 개체군 케이지 안의 실험실 담금지 위에 모든 강아지와 함께 면이 들어있는 플라스틱 필름을 놓습니다. 미리 준비된 당밀 혼합물을 교반 막대로 30분 동안 자동 재생합니다.
혼합물을 식히고 당밀 혼합물에 Tegosept 용액을 첨가하십시오. 다음으로 혼합물을 21x14.5cm 고기 트레이에 붓습니다. 볼륨이 16개의 트레이를 덮을 수 있을 만큼 충분한지 확인하십시오.
당밀이 굳을 때까지 최대 20분 동안 기다렸다가 건조를 방지하기 위해 각 트레이를 플라스틱 필름으로 덮습니다. 그런 다음 트레이를 사용할 때까지 섭씨 4도에서 보관하십시오. 비이커에 탈이온수 200ml를 넣고 숟가락으로 저어가면서 건조 효살을 천천히 붓습니다.
혼합물이 땅콩 버터의 농도에 도달하면 건조 효모 추가를 중단하여 파리가 음식에 달라붙는 것을 방지하십시오. 당밀 트레이 하나에서 플라스틱 필름을 제거하고 숟가락이나 주걱을 사용하여 새로 준비한 습식 이스트로 덮습니다. 전체 표면이 덮여 있는지 확인하십시오.
파리가 비행을 멈췄는지 확인하기 위해 최대 30분 동안 섭씨 4도의 콜드럼에 케이지를 놓습니다. 케이지가 콜럼에 있는 동안 그물을 열고 젖은 이스트가 든 당밀 트레이를 케이지에 조심스럽게 추가합니다. 그물을 닫고 케이지를 실온에 놓습니다.
eclosion 2일 후, 신선한 습식 사료가 담긴 새 당밀 트레이를 케이지에 넣습니다. 난자 침전의 수율을 높이려면 젖은 효모의 표면을 가능한 한 불규칙하게 만드십시오. 케이지를 실온에서 유지하십시오.
배아를 작은 흰색 점으로 시각화할 수 있으면 배아를 채취할 준비가 된 것입니다. 배아를 채취하려면 최대 30분 동안 케이지를 차가운 방에 두어 파리를 진정시킵니다. 다음 주기를 위해 플라스틱 용기와 파리 사료를 준비합니다.
다음으로, 8 리터 오토 클레이브 트레이에서 총 용량의 1/4에 물을 추가하고 10 % Triton X-100 1 밀리리터를 추가합니다. 케이지가 콜럼에 있는 동안 당밀 플레이트를 조심스럽게 제거하고 생물학적 위험 백에 넣습니다. 백에서 트레이를 제거하고 오토클레이브 트레이의 세제 용액에 빠르게 담근 다음 생물학적 위험 백을 닫고 백을 생물학적 위험 용기에 넣습니다.
증류수 총을 사용하여 당밀에서 배아와 효모를 씻어냅니다. 플레이트와 당밀은 생물학적 위험 상자에 버리십시오. 3 개의 체 세트를 통해 용액을 조심스럽게 붓습니다.
덩어리가 남지 않을 때까지 증류수 건으로 맨 위에 있는 덩어리를 씻습니다. 오토클레이브 트레이를 증류수로 헹구고 체를 통해 헹굼 물을 붓습니다. 상단 체를 제거합니다.
첫 번째 유충의 대부분과 두 번째 instar 유충의 대부분은 체 40에 남아 있습니다. 두 번째 체를 제거합니다. 세 번째 체의 노란색 물질은 배아와 작은 첫 번째 instar 유충의 혼합물입니다.
증류수 총을 사용하여 모든 계란을 체의 한쪽으로 옮깁니다. 그런 다음 주걱으로 모아 무게를 잰다. 1.5g을 사용하여 새로운 주기를 시작하십시오.
나머지 배아는 추가 처리를 위해 사용하거나 폐기하십시오. 1.5g의 출발 물질로부터 6개의 연속 사이클을 수집했습니다. 그리고 주기당 평균 10g의 배아와 유충을 산출했습니다.
새로운 음식을 추가한 후 1시간 후에 5회 연속 회수한 결과와 새 당밀 플레이트를 놓은 후 3시간 후에 3회 연속 회수한 결과물을 보여줍니다. 이 비디오를 시청한 후에는 파리 개체군 케이지를 사용하여 초파리 멜라노가스터(drosophila melanogaster)의 개체군인 문화를 조절하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
개요
이 원고는 파리 개체군 케이지를 사용하여 유충(Drosophila melanogaster) 개체군을 유지하기 위한 상세한 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 다양한 실험에 필요한 생물학적 물질을 효율적으로 생산할 수 있습니다.
주요 연구 구성 요소
과학 분야
- 신경과학
- 생물학
- 유전학
배경
- Drosophila melanogaster는 유전 및 생물학 연구에 널리 사용됩니다.
- 파리 개체군 케이지를 유지하는 것은 시간이 많이 걸리지만 상당한 이점을 제공합니다.
- 각종 실험을 위해 배아와 유충을 정기적으로 수집하는 것이 필수적입니다.
- 이 프로토콜은 파리 배양에 대한 체계적인 접근 방식을 제공합니다.
사용된 방법
- 폼 플러그와 면으로 플라스틱 용기를 설치합니다.
- 탈이온수, 프로피온산, 인산, 효모를 사용하여 파리 사료를 준비합니다.
- 배아를 배양하고 유충 발달을 모니터링합니다.
- 후속 주기를 위해 배아와 유충을 수집 및 처리합니다.
주요 결과
- 여러 주기에 걸쳐 파리 개체군을 성공적으로 유지합니다.
- 주기당 약 10그램의 배아 및 유충을 생산합니다.
- 실험을 위한 생물학적 물질을 효율적으로 수집합니다.
- 연구를 위한 파리 개체군 케이지 사용의 타당성을 입증합니다.
결론
- 이 프로토콜은 Drosophila 배양에 대한 구조화된 접근 방식을 제공합니다.
- 파리 개체군 케이지를 유지하는 것은 대규모 생물학적 물질 수집에 유익합니다.
- 이 방법은 유전 및 생화학 연구의 효율성을 향상시킬 수 있습니다.
자주 묻는 질문
Executive Industry Relevance
Reliable access to large, developmentally synchronized populations of Drosophila melanogaster is critical for high-throughput molecular and biochemical workflows in early discovery. Population cage maintenance enables scalable, reproducible collection of embryos and larvae, supporting robust target validation and assay development. This capability underpins portfolio-wide efficiency by ensuring consistent biological input for downstream R&D pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables bulk collection of embryos and larvae for molecular analyses and pathway interrogation.
- Supports functional target validation by providing uniform developmental material.
- Facilitates biological de-risking through reproducible sample generation.
- Improves predictive confidence in early-stage experimental outputs.
Screening & Assay Development
- Provides standardized biological material for assay calibration and validation.
- Ensures reproducibility and scalability in screening workflows.
- Enables preparation of synchronized samples for quantitative readouts.
- Supports reliable compound evaluation by minimizing biological variability.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant model system requirements for translational studies when Drosophila is used as a genetic model.
- Maintains continuity from discovery through preclinical validation by supplying consistent material.
- Reduces risk in advancing candidates by supporting robust mechanistic studies.
Pipeline & Workflow Integration
The population cage method anchors the supply of biological material from early discovery through assay development and preclinical research, ensuring workflow continuity and standardization.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway analysis by enabling synchronized sample collection.
- Screening: Delivers reproducible, quantitative biological inputs for assay readiness.
- Analytics: Facilitates accurate measurement and comparison of experimental conditions through uniform sample preparation.
- Translational Research: Provides material for disease-relevant studies when Drosophila models are leveraged.
- Enterprise Reuse: Establishes a scalable, reusable platform for ongoing R&D needs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in early-stage research.
- Operational Value: Standardizes and streamlines biological material production for high-throughput workflows.
- Strategic Value: Enables better go/no-go decisions and capital efficiency by ensuring reliable experimental inputs.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement across multiple programs.
Implementation Considerations
- Requires technical expertise in Drosophila handling and population cage setup.
- Needs dedicated space and environmental controls for cage maintenance.
- Demands cross-team standardization for consistent sample quality.
- Adaptation to other model systems may require protocol modification.
- Initial setup is time-intensive, but ongoing maintenance is efficient and scalable.
