Name: 쥐에서 동소 이식 간세포 암의 국소 치료에 대한 종양 살상 바이러스의 간동맥 관리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: 학습하세요 간동맥 투여를 통한 종양 살상 바이러스 국소 치료법으로 간세포 암(HCC)을 치료하는 방법을 쥐 모델에서 연구합니다. 이 기술은 고농도 바이러스를 다발성 병변에 전달하여 전통적 투여법의 한계를 극복합니다.

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이 작업은 독일 본에 소재한 독일 연구 재단의 SFB 824 하위 프로젝트 C6 및 C7(DFG Sonderforschungsbereich 824)의 지원을 받습니다.

주 : 다음 단계는 우리 기관의 지침과 바바리아, 독일의 지방 정부에 따라 수행되고있다. 지역 동물 관리 및 사용위원회에 의해 결정으로이 프로토콜을 재현하는 모든 시도는 동물의 인도적인 처리를위한 로컬 가이드 라인 준수에해야합니다. 예를 들어, 많은 기관은 멸균 장갑 설치류 수술 중 착용 할 것을 요구하고 있습니다. 또한, 바이러스와 작품은 개인과 환경 안전을위한주의하면서 현지 규정에 따라 수행해야합니다. 관리가 제대로 오염 된 폐기물 처분하고 (고온 가압 멸균 및 제조업체의 지침에 따라 적절한 항 바이러스 소독제로 청소하여, 예) 장비와 작업 공간을 청소주의해야한다. 시작 수술 전에 1. 준비 <ol><li> (고압 증기 멸균에 의해, 즉) 수술기구를 소독. </li><li> appropr에 바이러스를 희석사용되는 특정 바이러스의 독성 래트 균주의 민감성에 따라 달라질 늦었 농도. 주 : 수컷 버팔로 쥐 포성 구내염 바이러스를 사용하는 경우 예를 들어, 우리는 일반적으로 그 모델에서의 최대 허용 투여 량 인 1 ml의 부피에서 107 PFU를 주입. <ol><li> 1 ml를 주사기에 (무균 기술을 사용하여) 바이러스를 미리 기입하고, 주사기와 바늘에서 공기를 제거하기 위해주의하면서 30 G 바늘을 연결합니다. </li></ol></li><li> 필요한 모든 재료와 장비와 수술 공간을 준비하고 소독하는 에탄올로 영역을 스프레이. 거즈 면봉과 면봉 어플리케이터를 가습에 대한 멸균 생리 식염수 (0.9 % NaCl을)이있는 작은 용기를 입력합니다. </li></ol> 쥐 2. 준비 <ol><li> (로컬 동물 관리 및 사용위원회에 의해 지정된대로) 적절한 용량을 30 분에서 전에 수술 절차를 시작하기에, 진통제를 관리 할 수​​ 있습니다. 예를 들면,설피 린의 높은 용량 (100 ~ 200 ㎎ / ㎏)을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 흡입 (이소 플루 란) 또는 주사 (즉, 또한 MMF로 알려진 메데 토미의 혼합물 (0.15 ㎎ / ㎏), 미다 졸람 (2 ㎎ / ㎏)과 펜타닐 (0.005 ㎎ / ㎏)) 마취를 사용하여 쥐를 마취. 1-3%에 증발기를 통해 isolflurane 관리 정상 호흡 및 심박수를 유지하기 위해 필요한만큼 조정한다. <ol><li> 진행하기 전에, 쥐가 완전히 진정과 발 패드를 곤란하게하고 반응 관찰하여 통증을 느낄 수없는되어 있는지 확인합니다. </li><li> 마취 동안 건조를 방지하기 위해 동물의 눈 연고를 적용합니다. </li></ol></li><li> 단지 작은 동물 머리 깎기를 사용하여 성기 위 아래로 흉골에서 복부 영역을 면도. 피부를 부상없이 밀착 면도를 달성하기 위해주의하십시오. </li><li> 흡입 마취를 사용하여 적절한 크기의 코 콘에 주둥이를 배치하면, 앞장서고와 뒷다리에 테이프를 사용하여 수술 침대에 쥐를 수정합니다. 가열 패드를 배치래트 아래 체온을 유지한다. 방부제 페인트 알코올 린스 및 응용 하였다 외과 등급의 살균제를 사용하여 복부를 소독. </li></ol> 3. 개복술 <ol><li> 예 # 15로, 작은 만곡 메스를 사용하여, 직접 정중선을 따라 스킨 층의 작은 수직 절개를 만든다. xyphoid 과정까지 절개를 확장합니다. 다음 부드럽게 메스 절개를하기 Adson 집게 쌍으로 올려 근육층을 절개하고 수술 용 가위로 xyphoid 공정까지 절개를 연장한다. 복강의 장기를 천공하거나 xyphoid 프로세스 양쪽의 작은 혈관 손상되지 않도록주의한다. </li><li> 근육과 피부를 확산하고, 전체 복부를 노출 복부에 걸쳐 트랙터를 놓습니다. </li><li> 멸균 생리 식염수와 함께이 7.5 X 7.5 cm 2 거즈 면봉을 적셔 수술의 상단에 하나를 확산도 2a에 도시 된 바와 같이, 개방 및 하단에 하나. </li></ol> 간장 동맥 4. 분리 <ol><li> 부드럽게 복강 밖으로 장과 맹장을 들어 올려 하부 거즈 면봉에 배치, 멸균 생리 식염수에 적신이 젖은면 도포 면봉을 사용. 촉촉한 장기를 유지하고 길에서 그들을 유지하기 위에 거즈를 접으십시오. </li><li> 두 적신면 도포 면봉을 사용하여 부드럽게이 단계에서보기에 가장 지배적 인 로브 될 것입니다 왼쪽 측면 간 엽을 올립니다. 로브가 완전히 위쪽으로 이성을 상실하고 이전에 배치 거즈 면봉의 상단에 휴식을 할 수 있도록 로브의 밑면에있는 섬유 멤브레인을 통해 잘라 봄 가위의 작은 쌍을 사용하여 위쪽 로브 플립합니다. 제자리에 고정하기 위해 엽 위에 거즈 면봉을 접습니다. </li><li> 지금보기에서 가장 전엽 인 다음 로브 (전방 미상)를 계속합니다. 번째로해부 현미경 미세 겸자 E 보조제,이를 분리하고 자유롭게 위쪽으로 대칭되도록하기 위하여 로브를 둘러싼 박막을 해부. 왼쪽 측면 로브와 함께 거즈 면봉 아래 로브를 놓습니다. </li><li> 지금 볼 수 있습니다 후방 꼬리가 로브를 관찰합니다. 완전히 후방 꼬리가 로브를 해부 위쪽과 거즈 안에 함께 이전에 배치 간 로브와 그것을 뒤집어 단계를 반복 4.3. </li><li> 그냥 꼬리가 로브의 원래 위치 아래에, 지금 눈에 보이는 쉽고 강력한 맥동에 의해 인식 될 것입니다 일반적인 간동맥을 찾을 수 있습니다. 해부학 오른쪽에있는 동맥을 이어보기에서 십이지장과 적절한 간 동맥을 가리는 두꺼운 멤브레인 재료를 관찰합니다. 미세 집게를 사용하여이 물질을 들어 올려 조심스럽게이 지역에있는 작은 혈관을 피하기 위해주의하면서 그것을 찢어. 발생할 수있는 출혈을 멈추게하는면 도포 면봉을 사용합니다. <ol><li> ㄱ을 찾습니다멤브레인이 제대로 해부하면 해부 현미경의 도움을 명확히 볼 수 rterial 분기. </li></ol></li><li> 이 좋은, 무 외상성 집게를 사용하여 조심스럽게 일반적인 간 동맥, 위 십이지장 동맥, 그들은 주변의 막 (그림 2B)에서 해방되도록 적절한 간 동맥을 해부하다. </li></ol> 주입을위한 동맥 5. 준비 <ol><li> 십이지장 동맥 아래에 7-0 prolene의 봉합을 전달, 그냥 분기 (적절한 배치를위한 그림 1 참조) 이상, 선단에 영구적 인 끈을 묶어 마이크로 바늘 홀더를 사용합니다. 끝 부분에 남아있는 봉합 재료의 약 2 인치를 허용하고도 2c에서와 같이 가르쳐 동맥을 당겨 바늘 홀더를 고정. </li><li> 일시적으로 혈액의 흐름 (그림 2C)를 차단하는 일반적인 간 동맥에 작은 클램프를 놓습니다. 참고 :이 꼬마 도깨비입니다바늘이 혈관으로부터 제거되면 ortant 다량 출혈을 방지한다. 또한, 동맥 혈류의 차단은 느린 바이러스 관리 및 더 나은 전달 효율성을 수 있습니다. <ol><li> 중요 혈액 흐름이 정지되는 시간 제한 신속하게 작업 - 공통 간동맥 클램핑 5 분 이내에 동맥 주입 이후 결찰을 수행한다. </li></ol></li><li> 가능하다면, 위 십이지장 동맥 날카로운 초점이 정확하게 30 G 바늘을 삽입하기에 충분히 큰 표시되도록, 해부 현미경의 배율을 높일 수 있습니다. 십이지장 동맥의 내강에 주입 주사기의 바늘을 놓고 플런저를 밀어 천천히. 참고 : 바늘의 적절한 배치는 적절한 간동맥을 통해 간으로 직접 흐르는 주입 된 용액에 발생합니다. <ol><li> 전달 효율을 최대화하는 것이 매우 천천히 주입을 수행한다. </li></ol></li> &lt;리&gt; 전체 주입량을 투여 한 후, 천천히 동맥 바늘 후퇴. 참고 : 주사 부위로부터 출혈이 없어야합니다. 출혈이 발생 않는 경우에는, 상기 클램프가 적절하게 배치되지 않고 신속하게 조정되어야 함을 나타낸다. </li></ol> 6. 결산 <ol><li> 십이지장 동맥 아래 두 번째 7-0 prolene의 봉합을 전달하고, 주사 부위 위에 제 2 영구 합자 넥타이. </li><li> 일반적인 간동맥에서 클램프를 제거합니다. 간으로 적절한 간 동맥을 통해 혈액의 흐름을 확인하는 복원되었습니다. <ol><li> 합자의 느슨한 끝을 잘라. </li></ol></li><li> 복강에 창자와 간을 반환하기 전에 더 출혈이 없음을 확인합니다. 부록은 원래의 방향으로 반환주의하십시오. </li><li> 곡선 바늘로 4-0 vicryl 봉합사 재료를 사용하여 별도의 레이어에서 근육과 피부를 봉합. 장소 continuou의 봉합은 약 1mm 떨어져 단단히 잡아 당깁니다. <ol><li> 봉합 단계에서, 진통제 등의 부 프레 노르 핀 등 (0.05 ㎎ / ㎏)을 관리 할 수​​ 있습니다. </li></ol></li><li> 마취에서 쥐를 제거합니다. 이소 플루 란이 사용 된 경우, 래트는 몇 분 안에 의식을 회복한다. MMF는 주사 마취로 사용 된 경우, 마취 효과를 반전되는, Atipamezole (0.75 ㎎ / ㎏), 플루 마제 닐 (0.2 ㎎ / ㎏) 및 날록손 (9.12 ㎎ / ㎏)의 피하 주사로 길항 과 동물이 20 분 안에 의식을 회복 할 수 있습니다. 초기 각성 단계에서 적외선 온난화 램프와 따뜻한 쥐를 유지합니다. <ol><li> 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. </li><li> 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다. </li></ol></li><li> 고통의 병적 징후가 수술 후 쥐를 모니터링하고 follow-진통제와 로컬 동물 관리 및 사용위원회가 필요. 예를 들면, 부 프레 노르 핀은 / 0.05 mg을 투여 12 시간마다 kg을 할 수있다. </li></ol>

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직접 종양내 주사는 의심할 여지 없이 단일 종양 결절의 효율적인 종양 형질도입을 초래하는 가장 간단한 방법이지만, 간동맥 주입은 다초점, 동소 간세포암종을 표적으로 삼는 이상적인 투여 경로를 나타냅니다. 이 방법은 종양 용해성 바이러스가 있는 면역 능력 쥐의 간세포암종을 치료하는 데 안전하고 효과적인 것으로 입증되었습니다. 또한, HCC 환자는 화학색전술의 경동맥 적용으로 일상적으로 치료되기 때문에 여기에 설명된 방법은 임상 환경으로 쉽게 번역할 수 있습니다.
전임상 설치류 모델에서 종양 요법의 간동맥 전달의 명백한 단점은 절차의 침습성과 쥐의 외과적 개입과 수술 후 관리 모두에 필요한 시간입니다. 이 기술을 확립하고자 하는 연구자는 재현 가능한 결과와 높은 생존율을 얻기 위해 절차에 능숙해지기 위해 상당한 시간을 투자해야 합니다. 또한, 간동맥의 직경이 극히 작기 때문에 현재까지 생쥐의 간동맥 주입에 대한 보고는 없습니다. 간세포암종의 유전적 모델은 주로 생쥐에서 생성...

간세포 암 (HCC)은 전 세계적으로 다섯 번째 가장 일반적인 암, 그리고 중요한 건강 문제 1,2하고 암 관련 사망의 세 번째 주요 원인이다. 색전술 (TAE) 또는 화학 색전술 (TACE)을 포함하는 종양 절제술, 또는 그 기다리고 간 이식, 국소 치료를받을 수없는 환자의 표준 완화 의료 3,4으로 적용됩니다. 주변 간 간문맥 5,6-로부터 혈액 공급의 대부분을 수신하면서 이들 치료법은 종양 간 동맥 혈류가 거의 독점적으로 공급되고, 이에 의해 간에서 이중 혈액 공급의 고유 기능을 이용한다. HCC에 대한 설립 치료의 매우 제한된 효능으로 인해 종양 살상 바이러스는 유망한 대체 치료제로 등장했다. JX-594는 최근 Pexa-VEC 이름을 변경하는 티미 딘 키나제 삭제 된 우두 벡터, 과립구-m로 무장이다HCC 7의 II 상 임상 시험이 완료된 acrophage 콜로니 자극 인자 (GM-CSF). 최근 인간 인터페론 - 베타를 발현하는 재조합 수 포성 구내염 바이러스 벡터 (VSV)는 sorafenib-내화 HCC (NCT01628640)에 대한 상 임상 시험을 체결했다. 종양 살상 바이러스가 가까운 환자에서 간세포 암종에 대한 임상 응용 프로그램에 대한 승인을 얻기로 이동함에 따라, 효과적인 투여 경로에 대한 필요성은 다 초점 질병이 분명하다 목표로한다. 전신적 전달로 인해 비효율적 종양 전달에 크게 효과가 있지만, 애플리케이션은 종양 질환 진행에 민감 uninjectable 미세한 병변을 떠나는 주입 종양 치료의 효능을 제한 할 수있다. 우리는 소성을 HCC를 대상으로하는 국소 방식으로 콜리 틱 바이러스 치료를 관리하는 쥐의 간 동맥을 분리하는 방법을 설립했다. 우리는 증명이 안전하고 효과적인 광고에서이 투여 경로 결과면역 능력이 쥐 8-10에서 중요한 생존 연장의 결과로, 다 초점 HCC 결절의 전달을했습니다. 여기서는, 액세스 해부 및 쥐의 간동맥에 주입하는 방법을 설명한다. 절차의 방식은도 1에 도시된다 (이전 9 공개)

<table><tbody><tr><td>수의학 클리퍼</td><td>Aesculap</td><td>GT415</td><td>수술 부위의 털을 제거하는 데 이상적인 작고 무선 트리머</td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>Zeiss</td><td>Stemi SV6</td><td></td></tr><tr><td>30 G Needles</td><td>Braun</td><td>4656300</td><td>30 G x &frac12; "</td></tr><tr><td>1 ml 주사기</td><td>Braun</td><td>9161406V</td><td>투베르큘린 주사기</td></tr><tr><td>일회용 메스</td><td>깃털</td><td>2975#15</td><td>#15 블레이드&nbsp;</td></tr><tr><td>표준 수술용 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-13&nbsp;</td><td>날카롭고 뭉툭하여 피부와 근육을 개방합니다</td></tr>.<tr><td>Adson 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>1101-12</td><td>치아 포함, 피부와 근육 파악용</td></tr><tr><td>Alm 견인</td>기 <td>Fine Science Tools</td><td>17008-07</td><td>뭉툭한 치아, 수술 중 복강 개방</td></tr><tr><td>거즈 면봉</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>18504</td><td>7.5 cm x 7.5 cm, 사용 전에 고압멸</td></tr>균해야 합니다.<tr><td></td><td> Rauscher</td><td>11970</td><td>멸균</td></tr><tr><td>미세 팁 foreceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td>0.4mm, 각진 팁, 간 동맥 해부용</td></tr><tr><td>Vannas 스프링 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-09</td><td>섬세한 절단용</td></tr><tr><td>마이크로 니들 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>12076-12</td><td>위십이지장 동맥 결찰용</td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>12005-15</td><td>텅스텐 카바이드 턱</td></tr><tr><td>7-0 프롤렌 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>8648H</td><td>구부러진 바늘이 있는 폴리프로필렌 봉합사, 위십이지장 동맥 결찰용</td></tr><tr><td>4-0 Vicryl 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>V3040H</td><td>곡선 바늘이 부착된</td></tr><tr><td>적외선 온난화 램프</td><td>Beurer</td><td>IL11</td><td>수술 후 체온 유지용</td></tr></tbody></table>

쥐에서 동소 이식 간세포 암의 국소 치료에 대한 종양 살상 바이러스의 간동맥 관리

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

간세포암종(HCC)은 치료 옵션이 제한적이고 예후가 좋지 않은 질환입니다. 최근 몇 년 동안 종양 용해성 바이러스 요법은 악성 종양과 싸울 수 있는 잠재적으로 강력한 도구임이 입증되었습니다. 간에는 독특한 이중 혈액 공급이 있기 때문에 주로 동맥 혈류에 의해 공급되는 정소성 간 종양에 국소적으로 치료법을 적용할 수 있습니다. 우리는 이전에 종양 용해성 바이러스의 간 동맥 전달이 다초점 HCC 병변의 안전하고 효율적인 전달 효율을 초래하여 면역 능력이 있는 쥐의 생존을 크게 연장한다는 것을 입증했습니다. 이 절차는 많은 간세포암 환자에게 제공되는 표준 완화 치료인 환자에 대한 경동맥 색전술의 적용을 밀접하게 모방합니다. 쥐의 간 동맥을 통해 종양 치료를 투여할 수 있는 능력은 개발 중인 새로운 바이러스 벡터를 평가하기 위한 매우 정교한 전임상 모델을 가능하게 합니다. 여기에서는 정소성 간암을 치료하기 위한 종양 용해성 바이러스 벡터의 주입을 위한 간동맥 현미해부에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

경험 (동맥 성공적 해부 주입 한 동물이 수술을 살아되었음을 의미 함)이 거의 100 % 성공률을 달성 할 수있다. 그러나, (기타 종양 부담 정도 기본적인 간 기능) 수술 전에 래트의 상태 분명 수술 개입의 결과에 중요한 역할을한다. 수술 후, 래트를 단독 버퍼해도 바이러스없이 주입하고, 일시적인 체중 감량과 간 효소의 약간의 일시적인 상승이 발생할 것으로 예상 될 수있다. 우리는 이전에 보여준 그 콜리 틱 수 포성 구내염 바이러스 (VSV) 또는 동 소성, 다 초점 HCC 모델 8,9 효율적인 종양 전달과 종양 특이 바이러스 복제, 뉴캐슬 질병 바이러스 (NDV) 결과의 트랜스 간 동맥 관리. 두 바이러스는 종양 동역학 다르지만주변 간 바이러스의 증거는 없었다 동안 바이러스 복제의 LacZ를 리포터 유전자 양성 효소 염색...

종양 용해성 바이러스 요법은 간세포 암종(HCC) 치료를 위한 새로운 치료법으로 개발 중입니다. 여기에서는 종양 용해성 바이러스의 간 동맥 투여를 통한 간세포암의 국소 치료 방법을 설명합니다.

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

이 외과적 개입의 전반적인 목표는 간동맥 투여를 통해 정위성 간세포암 또는 HCC 병변에 국소 지역 용해성 바이러스 치료제를 전달하는 것입니다. 이 방법은 국소 지역에 적용된 치료법이 정위성 HCC를 치료하는 데 얼마나 효과적인가와 같이 용해성 바이러스 분야의 핵심 질문들에 대한 답을 찾는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다수의 HCC 병변에 고농도의 용해성 바이러스를 전달할 수 있다는 점입니다.종양 내 또는 전신 투여의 한계점입니다. 이 기술은 경동맥 화학색전술의 적용을 모방합니다. 이는 많은 HCC 환자들에게 표준 치료법으로 사용되므로 전임상 데이터의 우수한 전이 가능성을 제공합니다.수술을 시작하기 전, 적절한 개인 보호 장구를 착용하고 수술 부위와 장비를 70% ethanol로 소독하십시오. 바이러스의 독성과 사용되는 쥐 계통의 감수성에 따라 바이러스를 적절한 농도로 희석하십시오. 그런 다음, 희석된 바이러스를 1mL 주사기에 미리 채우고 30 Gauge 바늘을 장착하되, 기포가 생기지 않도록 주의하십시오.발바닥 꼬집기에 반응이 없는 것을 확인하여 쥐가 완전히 진정되었는지 확인합니다. 작고 굽은 메스를 사용하여 정중선을 따라 피부에 작은 수직 절개를 가하고, 절개 부위를 검상돌기까지 확장합니다. 다음으로 같은 방식으로 근육층을 절개하되, 복강 내 장기를 찌르지 않도록 주의합니다.근육과 피부를 벌려 복부 전체 영역이 노출되도록 복부에 리트랙터를 배치합니다. 그다음 7.5 by 7.5 centimeter 크기의 거즈 솜 두 개를 생리식염수로 적신 후, 거즈 하나는 수술 절개창의 상단에, 다른 하나는 하단에 펼쳐 놓습니다. 간동맥을 분리하기 위해, 먼저 적신 면봉 두 개를 사용하여 장과 맹장을 복강 밖의 아래쪽 거즈 솜 위로 조심스럽게 옮기고, 거즈를 장기 위로 덮어 습도를 유지합니다.다음으로, 간의 왼쪽 외측엽을 조심스럽게 들어 올려 위쪽 거즈 위로 뒤집고, 작은 스프링 가위로 엽의 아래쪽에 있는 섬유성 막을 절개합니다. 거즈를 엽 위로 접어 고정합니다. 그런 다음 해부 현미경과 미세 핀셋을 사용하여 내측 미상엽을 둘러싸고 있는 얇은 막을 박리하고, 해당 엽을 위쪽 거즈 위로 뒤집습니다.내측 꼬리엽을 좌측 외측엽과 함께 거즈 접힘 아래에 배치하고, 동일한 방식으로 후측 꼬리엽을 박리합니다. 후측 꼬리엽을 거즈 아래에 배치한 후, 강한 박동을 통해 총간동맥의 위치를 확인합니다. 동맥을 따라 해부학적 우측으로 이동하여, 미세 핀셋을 사용하여 위십이지장동맥과 고유간동맥을 가리고 있는 두꺼운 막성 조직을 제거합니다.면봉을 사용하여 모든 출혈을 지혈합니다. 그런 다음 두 개의 미세 무외상 포셉(atraumatic forceps)을 사용하여 주변 막으로부터 총간동맥, 위십이지장동맥 및 고유간동맥을 조심스럽게 박리합니다. 간동맥에 주입하기 위해, 먼저 7-0 prolene 봉합사를 위십이지장동맥 아래로 통과시킨 후, 미세 바늘 홀더를 사용하여 분지점 바로 위의 동맥 원위단에 영구 결찰사를 묶고 각 끝단에 약 2인치의 봉합사 길이를 남겨둡니다.다음으로, 혈류를 일시적으로 차단하기 위해 총간동맥에 소형 클램프를 장착합니다. 클램프 장착 후 5분 이내에 위십이지장동맥이 뚜렷하게 보이고 바늘을 정확하게 삽입할 수 있을 만큼 충분히 크게 보일 때까지 배율을 높입니다. 그런 다음 주입용 시린지 바늘을 위십이지장동맥의 내강에 배치하고, 형질전환 효율을 최대화하기 위해 플런저를 천천히 누릅니다.전체 주입량을 모두 투여한 후, 동맥에서 바늘을 천천히 제거하고 두 번째 7-0 prolene 봉합사를 위십이지장동맥 아래로 통과시킵니다. 주입 부위 위쪽에 두 번째 영구 결찰사를 묶고 총간동맥에서 클램프를 제거합니다. 고유간동맥을 통해 간으로 향하는 혈류가 회복되었는지 확인한 후, 결찰사의 느슨한 끝부분을 절단합니다.내부 출혈이 없는지 확인합니다. 그 후 외부로 노출된 조직들을 복강 내로 다시 넣습니다. 4-0 vicryl과 곡선 바늘을 사용하여, 근육과 피부를 각각 별도의 층으로 나누어 약 1mm 간격의 연속 봉합사로 봉합합니다.그 다음 동물이 완전히 회복될 때까지 관찰합니다. 종양 내 바이러스 복제 역학은 바이러스 종류에 따라 다릅니다. 예를 들어, 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus)의 복제는 주입 후 1일 이내에 정점에 도달합니다.주입된 동물의 간세포암 결절 내에서만 수많은 바이러스 포커스가 관찰되었습니다. 이와 대조적으로, 뉴캐슬병 바이러스는 주입 후 5일에 바이러스 역가가 정점에 도달하며 연장된 바이러스 복제 역학을 나타냅니다. 바이러스의 고유한 종양 특이성으로 인해, 병원체는 주변의 정상 간 조직에서 빠르게 제거됩니다.또한, 무작위로 선택된 vesicular stomatitis virus 벡터 처리 종양 결절의 형태측정학적 분석 결과, 종양 형질도입 효율은 종양 크기와 상관관계가 없는 것으로 나타났습니다. 가용성 전분 미세구를 바이러스 용액과 동시에 경간동맥으로 투여하면 정상 간 조직의 혈류에는 최소한의 영향만 주면서 종양 결절의 거의 완전한 색전술을 유도합니다. 이는 가돌리늄 조영제를 사용한 동적 대비 증강 자기공명영상(dynamic contrast-enhanced magnetic resonance images)을 통해 추가적으로 입증되었습니다.이 기술에 숙달되면, 적절하게 수행했을 때 20분 이내에 완료할 수 있습니다. 처치에 소요되는 시간을 최소화하기 위해, 마취제를 투여하기 전 모든 준비물을 갖추는 것이 중요합니다. 이 영상을 시청한 후에는 간동맥을 박리하고 HCC의 국소 지역 치료를 위해 온콜리틱 바이러스 용액을 주입할 수 있도록 준비하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.바이러스 취급은 매우 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 개인 보호복 착용 및 작업 구역과 기구의 적절한 소독과 같은 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

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