Name: Een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Leer een snelle en betrouwbare tracheale intubatiemethode bij muizen voor longonderzoek. Deze techniek minimaliseert weefselschade, vereist geen gespecialiseerde apparatuur en biedt korte hersteltijden voor efficiënt onderzoek naar longletsel en fibrogenese.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Brian Johnson van de histologie en Imaging Core aan de Universiteit van Washington voor hulp met de trichroomkleuring en analyse. Dit werk werd ondersteund door NIH subsidies HL098067 en HL089455.

De Institutional Animal Care en gebruik Commissies (IACUC) aan de Universiteit van Washington en Cedars-Sinai Medical Center hebben het dier werkzaamheden die nodig zijn voor deze studies goedgekeurd. 1. Voorbereiding <ol><li> Steriliseren zowel de stomp uiteinde pincet en de depressieve via autoclaaf. </li><li> Met behulp van een biologische veiligheid kabinet, bereiden een werkvoorraad van BLM in PBS van het gevriesdroogde poeder. Sonificeer de oplossing gedurende 10 minuten bij 35 Khz zelfs menging te verzekeren. Opmerking: Een totaal volume tussen 30 en 45 ul wordt aanbevolen pipetteren variatie op de lage kant en verstikking met grotere volumes voorkomen. </li><li> Bereid een schone werkruimte die ongeveer 1 m 2 onder de regeling zelf en aangewezen locaties voor kooien zowel voor als na de ingreep omvat. </li><li> Bevestig de basis van de procedure bord om de bank direct voor de onderzoeker door tot 2 of 3 stroken laboratorium tape over de basis en underlying bank. Zie figuur 1 voor nadere specificaties over het maken van een bord. </li><li> Bind een enkele lengte van formaat 4,0 hechtdraad tussen de twee positioneren schroeven van de procedure bord. </li><li> Genereer een geïmproviseerde spirometer door het verwijderen en gooi de plunjer drie 1 ml injectiespuiten en afzetten van 60 pl PBS in de bovenkant van elk vat een luchtdichte afdichting. Zet de naaf van de katheter losjes aan een van de spuiten en leg het aan de ene kant van het bord. </li><li> Aspireren 300 ul van lucht in een 1 ml spuit en leg het aan de ene kant van het bord. </li><li> Snij een extra stukje tape ongeveer 6 centimeter in lengte en opzij leggen. Deze wordt gebruikt om het dier te bevestigen aan de plaat in stap 2,4. </li><li> Opzetten van een isofluraan kamer. Bevestig O 2, isofluraan, en vacuüm op de juiste poorten op zowel de blootstelling kamer en de speling vacuüm. Als alternatief toedienen verdoving in een isofluraan-compatibele biologischeveiligheidskabinet. </li></ol> 2. intubatie <ol><li> Verdoven van de muis met isofluraan in de kamer tot het bewustzijn verliest en de ademhaling vertraagt ​​tot een passend tarief. Een typische risico omvat 4% isofluraan en 2% O 2 gedurende 3 tot 4 min, en het ideale uitkomst 2-2,5 min sedatie. Dit komt overeen met een ademhalingssnelheid van 1 adem elke 2 sec. </li><li> Tijdens het wachten op sedatie in te stellen, aspireren tussen 30 en 45 ul van BLM in een pipet en opzij leggen. </li><li> Als u klaar bent, op te schorten de verdoofde muis door de bovenste snijtanden van de draad aan de positionering schroeven van de procedure platform. Zorg ervoor dat dorsale gedeelte van het dier ligt vlak tegen het platform oppervlak. </li><li> Dat evenwel niet tot de ventilatie te beperken, plaats een stuk tape losjes over de lager (caudale) deel van de borstholte, net boven het middenrif. Plaatsing moet strak genoeg zijn om een ​​goede uitlijning te handhaven tijdens het procedure, maar niet zo strak dat het de ademhaling beperkt. </li><li> Schakel het belichtingstoestel tot tussen 80% en 100% intensiteit en richt de zwanenhals zodat deze 1-2 cm van het oppervlak van de huid, bij solar plexus. Controleer regelmatig het topje van de zwanenhals voor warmte te zorgen dat het niet de muis werkt verwonden. </li><li> Die achter het platform, gebruik maken van de steriele, stomp uiteinde een tang om de tong te vinden. Let daarbij goed op de onderste snijtanden, zacht grip te voorkomen en trek de tong uit de mondholte. </li><li> Met de resterende hand invoegen depressor en gebruiken om de tong plat tegen de bodem van de mondholte. Laat de tang, maar laat de depressor in de plaats voor de volgende twee stappen. </li><li> Waar zich het licht, zodat de trachea is zichtbaar door geleiden van de zwanenhals proximaal vanaf het niveau van de solar plexus tot de bovenkant van de hoofdstam bronchiën bereikt. Opmerking: In de luchtpijp kunnen gemakkelijk worden onderscheiden door de werking van de ademhaling, whilech zorgt ervoor dat het uitgezonden licht fluctueren in intensiteit. Wanneer correct gepositioneerd, wordt deze structuur waarneembaar in het axiale vlak als centraal pin licht met minimale omgevingslicht in de mondholte zelf. </li><li> Hoek de spuit, zodat het volgt de natuurlijke weg van de luchtpijp, en laat de 22-G catheter tip, met de bijgevoegde spuit met de druppel, recht in het lumen. De PBS bel zal beginnen te stijgen en dalen bij elke ademhaling na succesvolle plaatsing. Let op: Deze actie kan door een aantal seconden worden vertraagd als gevolg van de diepe sedatie. </li><li> Voer de katheter een extra 5 mm. Verwijder de tong depressieve. </li><li> Shift de spuit aan de andere hand, en het vastgrijpen van de hub, verwijder voorzichtig de spuit. </li><li> Storting tussen 30 en 45 ul van BLM in het midden van het inwendige van de katheternaaf, sluit de tweede spuit en afzien 300 ul van lucht in de naaf. </li><li> Vervang de tweedespuit met de eerste de luchtbel PBS dat. De bel zal blijven stijgen en dalen als de procedure succesvol is uitgevoerd. </li></ol> 3. Post-procedurele Care <ol><li> Verwijder de katheter en tape en plaats het dier in een droge warme plaats totdat hij terug bij bewustzijn - meestal binnen een paar minuten. </li></ol>

<ol><li>Hyde, D. M., Hamid, Q., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy%2C+pathology%2C+and+physiology+of+the+tracheobronchial+tree%3A+emphasis+on+the+distal+airways%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anatomy, pathology, and physiology of the tracheobronchial tree: emphasis on the distal airways.</a> J Allergy Clin Immunol. 124, S72-S77 (2009).</li>
<li>Rosenthal, N., Brown, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+ascending%3A+perspectives+for+human-disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The mouse ascending: perspectives for human-disease models.</a> Nat Cell Biol. 9, 993-999 (2007).</li>
<li>Peters, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+as+a+model+for+human+biology%3A+a+resource+guide+for+complex+trait+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">The mouse as a model for human biology: a resource guide for complex trait analysis.</a> Nat Rev Genet. 8, 58-69 (2007).</li>
<li>Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+manipulated+mouse+models+of+lung+disease%3A+potential+and+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, 485-497 (2012).</li>
<li>Sharma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Clin+Evid%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome.</a> BMJ Clin Evid. 2010, (2010).</li>
<li>Saguil, A., Fargo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%3A+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome: diagnosis and management.</a> Am Fam Physician. 85, 352-358 (2012).</li>
<li>Wilson, M. S., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+fibrosis%3A+pathogenesis%2C+etiology+and+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary fibrosis: pathogenesis, etiology and regulation.</a> Mucosal Immunol. 2, 103-121 (2009).</li>
<li>Wuyts, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenesis+of+pulmonary+fibrosis%3A+a+moving+target%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">The pathogenesis of pulmonary fibrosis: a moving target.</a> Eur Respir J. 41, 1207-1218 (2013).</li>
<li>Mouratis, M. A., Aidinis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+pulmonary+fibrosis+with+bleomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pulm+Med%22%5BJournal%5D)">Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin.</a> Curr Opin Pulm Med. 17, 355-361 (2011).</li>
<li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bleomycin+animal+model%3A+a+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis?</a> Int J Biochem Cell Biol. 40, 362-382 (2008).</li>
<li>Myllärniemi, M., Kaarteenaho, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+treatment+of+idiopathic+pulmonary+fibrosis+-+preclinical+and+clinical+studies+of+pirfenidone%2C+nintedanib%2C+and+N-acetylcysteine%5BTitle%5D)+AND+%22European+Clinical+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Pharmacological treatment of idiopathic pulmonary fibrosis - preclinical and clinical studies of pirfenidone, nintedanib, and N-acetylcysteine.</a> European Clinical Respiratory Journal. 2, (2015).</li>
<li>Reinert, T., Baldotto, C. S. dR., Nunes, F. A. P., Scheliga, A. A. dS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bleomycin-Induced+Lung+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Bleomycin-Induced Lung Injury.</a> Journal of Cancer Research. 2013, 1-9 (2013).</li>
<li>Lakatos, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oropharyngeal+aspiration+of+a+silica+suspension+produces+a+superior+model+of+silicosis+in+the+mouse+when+compared+to+intratracheal+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Lung+Res%22%5BJournal%5D)">Oropharyngeal aspiration of a silica suspension produces a superior model of silicosis in the mouse when compared to intratracheal instillation.</a> Exp Lung Res. 32, 181-199 (2006).</li>
<li>Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+tracheal+instillation+of+solutes+into+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Osier, M., Oberdorster, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+inhalation+vs+intratracheal+instillation%3A+differences+in+particle+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Fundam+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Intratracheal inhalation vs intratracheal instillation: differences in particle effects.</a> Fundam Appl Toxicol. 40, 220-227 (1997).</li>
<li>Driscoll, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+instillation+as+an+exposure+technique+for+the+evaluation+of+respiratory+tract+toxicity%3A+Uses+and+Limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: Uses and Limitations.</a> Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).</li>
<li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol (1985). 106, 984-987 (1985).</li>
<li>Spoelstra, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+simple+method+for+endotracheal+intubation+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A novel and simple method for endotracheal intubation of mice.</a> Lab Anim. 41, 128-135 (2007).</li>
<li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> J Vis Exp. , e50601(2013).</li>
<li>Starcher, B., WIlliams, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+intratracheal+instillation+of+endotoxin+into+the+lungs+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A method for intratracheal instillation of endotoxin into the lungs of mice.</a> Lab Anim. 23, 234-240 (1989).</li>
<li>Daubeuf, F., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+bronchoalveolar+lavage+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Performing bronchoalveolar lavage in the mouse.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 2, 167-175 (2012).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+lung+fibrosis+requires+an+invasive+fibroblast+phenotype+regulated+by+hyaluronan+and+CD44%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Severe lung fibrosis requires an invasive fibroblast phenotype regulated by hyaluronan and CD44.</a> J Exp Med. 208, 1459-1471 (2011).</li>
<li>Grazioli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CYR61+%28CCN1%29+overexpression+induces+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">CYR61 (CCN1) overexpression induces lung injury in mice.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 308, L759-L765 (2015).</li>
<li>Redente, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor-alpha+accelerates+the+resolution+of+established+pulmonary+fibrosis+in+mice+by+targeting+profibrotic+lung+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor-alpha accelerates the resolution of established pulmonary fibrosis in mice by targeting profibrotic lung macrophages.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 50, 825-837 (2014).</li>
<li>Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intubation-mediated+intratracheal+%28IMIT%29+instillation%3A+a+noninvasive%2C+lung-specific+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system.</a> J Vis Exp. , e52261(2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In gevallen waarin aërosol onpraktisch vanwege beperkte reagens beschikbaarheid, veiligheid, kosten of directe toediening trachea is een superieure werkwijze voor het afgeven van exogene middelen in de longen 16 transtracheale instillatie is op grote schaal gebruikt om dit te bereiken.; Zoals bij alle chirurgische ingreep, maar houdt ook de kans op complicaties als gevolg van de procedure zelf, en niet noodzakelijkerwijze het middel dat wordt ingeprent. 13 Daarom is het steeds ge...

Ondanks sommige anatomische en fysiologische verschillen, 1 muismodellen verder waardevol voor het modelleren van de menselijke biologie en pathogenese. 2 Vanuit husbandry oogpunt te zijn, muizen gemakkelijk te hanteren, een lage broedtijd, een versnelde levensduur en zijn relatief goedkoop naar huis. Met de ontwikkeling van verschillende genetische stammen en strategieën (bv., Conditioneel knock-outs, reporter muizen-lineage tracing benaderingen, enz.), Alsook de vele beschikbare reagentia (bijv., Antilichamen, recombinante eiwitten, remmers, etc.), zijn muizen een essentieel model gewerveld organisme menselijke homeostase en ziekteprocessen ontdekken geworden. 3 Muizen zijn bijzonder waardevol voor het bestuderen longaandoeningen, waaronder acute longbeschadiging (ALI) en pulmonale fibrose. 4 ALI bij mensen kan worden veroorzaakt door trauma, verwonding of sepsis en wordt gekenmerkt door epitheliale enendotheliale lek (bv., oedeem), ontsteking en ontluikende fibrose. Bij veel patiënten ALI ontwikkelt tot de ernstige vorm, acute respiratory distress syndrome (ARDS), wat vaak leidt tot fibrose en dood door respiratoir falen. 5,6 Longfibrose is een progressieve, fatale pathologie gekenmerkt door de overmatige depositie van extracellulaire matrix , met name type I collageen, wat leidt tot verminderde longfunctie. 7,8 Toediening van bleomycine (BLM) is de meest gebruikte en best gekarakteriseerde voorbeeld voor het induceren van ALI en fibrose bij proefdieren. 9 Hoewel BLM-geïnduceerde longfibrose bij knaagdieren doet herhalen niet volledig menselijke fibrotische fenotypes, 10 muizenstudies met dit model hebben geleid tot de ontdekking van vele belangrijke factoren beïnvloeden het ontstaan ​​en de progressie van ziekte. 11 Hoewel de exacte mechanisme (s) achter BLM geïnduceerde fibrogenese onbekend zijn, het initiëren van letselwordt gedacht dat het gevolg zijn van contact-afhankelijke DNA-breuken in de epitheelcellen die de geleidende luchtwegen en longblaasjes, en in het bijzonder type 1 pneumocyten. 12 De behoefte aan direct contact tussen BLM en de pulmonaire epitheel benadrukt het belang van een robuuste levering route en deze zorgen ook relevant voor een breed scala aan behandelingen gericht op het distale luchtwegen, waaronder recombinante proteïnen, antilichamen, siRNA, virussen, bacteriën, deeltjes, en meer. Orofaryngeale aspiratie (OPA) wordt algemeen gebruikt voor dit doel 13, maar een belangrijke tekortkoming van OPA is dat een gedeelte van het geleverde middel kan worden ingenomen in het maagdarmkanaal, hetgeen leidt tot onnauwkeurigheid in de toegediende dosering. Een andere veel gebruikte benadering is transtracheaal instillatie, die tracheostomie gaat onder zware verdoving de luchtpijp en instillatie van een middel bloot direct in de luchtwegen. 14 echter niet alleen kan een dergelijkeeen procedure ongewenst vanwege de invasiviteit, maar het is ook tijdrovend, vereist nogal wat training en veroorzaakt een sterke schade aan het ademhalingskanaal. 15,16 Verscheidene protocollen ontwikkeld die de directe toediening van agentia kan voordoen in de trachea zonder chirurgische ingreep, 16,17,18,19,20 maar deze werkwijzen omvatten verlengde herstelperiode door krachtige anesthetica, het gebruik van dure apparatuur (bijv., otoscope / laryngoscoop handel verkrijgbare procedure boards, fiber-optic draden, etc.), een overmaat van manipulatie in de mondholte en onzekerheid over de dosering. Dit document beschrijft een relatief eenvoudige methode van toediening via intubatie die het mogelijk maakt een onderzoeker snel, goedkoop en betrouwbaar inboezemen een reagens in de muizen long met een beperkt risico van de resterende schade aan de omliggende weefsels.

<table><tbody><tr><td>Bleomycin For Injection, 30 units/vial</td><td>APP Pharmaceuticals, LLC</td><td>103720</td><td>Voor de beste resultaten, moet BLM worden gesuspendeerd in PBS, in aliquoten verdeeld en opgeslagen als eenmalig te gebruiken gelyofiliseerd aliquot</td></tr><tr><td>Blunt End Forceps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tongue Depressor (d.w.z. gebogen Valleylab Blade Electrode, 2,4")&nbsp;</td><td>Covidien</td><td>E1551G</td><td>Maak voor gebruik een 45-graads bocht op 1,5 cm&nbsp; van de bladpunt. Een geschikte depressor kan ook worden gemaakt van elk metalen implement met vergelijkbare afmetingen.&nbsp;</td></tr><tr><td>Exel Safelet Catheter 22G X 1"</td><td>Exel International</td><td>26746</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Slip-tip Wegwerp Tuberculinesering (200/sp, 1600/ca)</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>0.2 ml Pipettor en Filtertips</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fiber-Lite Illuminator. Model 181-1: Model 180 gekoppeld met standaard dubbele Gooseneck verlichter</td><td>Dolan Jenner Industries, Inc.</td><td>181-1</td><td>LED-verlichters met lager vermogen worden niet aanbevolen omdat ze de luchtpijp niet voldoende verlichten.</td></tr><tr><td>Intubatiebord</td><td></td><td></td><td>Zie Diagram 1.</td></tr><tr><td>Gekleurde labeltape: 0,5&nbsp;in. Breed</td><td>Fisherbrand</td><td>15-901-15A</td><td></td></tr><tr><td>Zuurstof&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat-gebufferde zoutoplossing, 1X</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td>Product moet steriel zijn</td></tr><tr><td>Niet-steriele zwarte zijde gebreide hechtdraad, 91,4 m, maat 4-0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>517698</td><td></td></tr><tr><td>Anesthesieapparaat Isofluraan voor op tafel</td><td>Highland Medical Equipment</td><td></td><td>http://www.highlandmedical.net/</td></tr><tr><td>Slide Top Inductiemuis Isofluraan Kamer</td><td>MIP / Anesthesia Technologies</td><td>AS-01-0530-SM</td><td></td></tr><tr><td>FORANE (isofluraan, USP) Vloeistof voor inhalatie 100 mL&nbsp;</td><td>Baxter</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;Nanozoomer Digitaal Pathologie systeem</td><td>Hamamatsu</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IgM ELISA Kwantificeringskit&nbsp;</td><td>Bethyl Laboratories</td><td>E90-101</td><td></td></tr></tbody></table>

een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Ondanks enkele anatomische en fysiologische verschillen, blijven muismodellen een essentieel hulpmiddel voor het bestuderen van longziekten bij mensen. Bleomycinetoxiciteit is een veelgebruikt model om zowel acute longschade als fibrose te bestuderen, en er zijn meerdere methoden ontwikkeld voor het toedienen van bleomycine (en andere toxische stoffen) in de longen. Veel van deze benaderingen, zoals transtracheale instillatie, hebben echter inherente nadelen, waaronder de noodzaak van sterke anesthetica en overlevingschirurgie. Dit artikel rapporteert een snelle, reproduceerbare methode van intratracheale intubatie die milde inhalatieanesthesie, visualisatie van de luchtpijp en het gebruik van een surrogaat spirometers om de blootstelling te bevestigen omvat. Als bewijs van concept werden 8-12 weken oude C57BL/6 muizen ofwel 2,0 U/kg bleomycine of een gelijkwaardig volume PBS toegediend, en zowel schade als fibrotische eindpunten werden na de blootstelling gemeten. Deze procedure stelt onderzoekers in staat om een groot aantal muizen in een relatief korte periode te behandelen met weinig kosten en minimale zorg na de procedure.

Geïntubeerd muizen werden dagelijks gecontroleerd op gewichtsverlies en nood, en offerde 4, 10 of 17 dagen later via intraperitoneale injectie van 2,5% 2,2,2 tribroomethanol. Bronchoalveolaire lavage (BAL) werd in drie wasbeurten PBS verzameld zoals elders beschreven 21 , en de rechter long werd gefixeerd in 10% formaline, ingebed in paraffine, en gekleurd met Masson&#39;s Trichrome door de Universiteit van Washington histologie en Imaging Core 22....

Dit artikel presenteert een snelle en eenvoudige methode voor het toedienen van bleomycine rechtstreeks in de muis luchtpijp via intubatie. Belangrijkste voordelen van deze werkwijze zijn dat het zeer reproduceerbaar, gemakkelijk onder de knie, en vereist geen gespecialiseerde apparatuur of lange hersteltijden.

Een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Het algemene doel van deze procedure is het bieden van een snelle, eenvoudige en betrouwbare toediening van reagentia in de longen van muizen via intubatie. De methode beperkt daarnaast het risico op restschade aan het omliggende weefsel en is goedkoop. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen de fundamentele longbiologie en de mechanismen van ziekten.Zoals acute longschade en fibrogenese. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat deze zeer reproduceerbaar is, gemakkelijk te beheersen is en geen gespecialiseerde apparatuur of langdurige hersteltijden vereist. De procedure moet worden uitgevoerd met gesteriliseerde instrumenten.Autoclaveer zowel de stompe pincet als de tongdepressor. Bereid in een steriele laminaire flowkast een werkvoorraad van het reagens voor om via de intubatie toe te dienen. Een bolusvolume tussen 30 en 45 µL wordt aanbevolen.Sonicate de oplossing gedurende 10 minuten bij 35 kilohertz om een gelijkmatige menging te garanderen. Bereid nu de werkruimte voor. Reserveer minimaal één vierkante meter ruimte voor de werkplek zelf.Samen met aparte locaties voor de dieren zowel vóór als na de procedure. Bereid nu een procedurebord voor. Dit aangepaste model is uitgesneden uit een aluminiumplaat en versterkt met een T-beugel.Vergelijkbare commerciële platen zijn ook verkrijgbaar. Bevestig de basis van de procedureplaat met een paar stroken plakband aan de bank, zodat deze zich direct voor de experimentator bevindt. Bind vervolgens een stuk 4.0 hechtdraad tussen de twee positioneringsschroeven van de procedureplaat.Bouw vervolgens een spirometer. Verwijder de zuigers uit drie spuiten van 1 ml. Vul vervolgens de bovenkant van elke spuitcilinder met maximaal 60 µL PBS.Bevestig een van deze drie spuiten losjes aan de aansluiting van een katheter. Tijdens het gebruik zal lucht uit de trachea ervoor zorgen dat de PBS in de cilinder stijgt en daalt. Plaats dit naast het procedurebord.Plaats de andere twee extra spuiten binnen handbereik om als reserve te dienen. Aspireer vervolgens 300 microliters lucht in een vierde spuit en leg deze aan één zijde van het bord. Bereid daarnaast enkele stukken plakband van zes inch voor om het dier aan het bord te bevestigen.Stel vervolgens, indien nodig, een isofluraankamer in. Sluit de zuurstof-, isofluraan- en vacuümlijnen aan op de juiste poorten van de kamer en het afzuigsysteem. Begin met het anesthetiseren van de muis.Het is belangrijk dat elk laboratorium de blootstelling aan isofluraan optimaliseert om aan de eigen behoeften te voldoen, aangezien factoren zoals de leeftijd, het gewicht en de gezondheid van het dier de reactie op de anesthetica kunnen beïnvloeden. Laad tijdens het wachten de bolus van het reagens in een pipetpunt en zet deze apart. Wanneer de muis gesedateerd is, wordt deze bij de bovenste snijtanden aan de draad op het procedureplatform opgehangen, waarbij de rug van het dier plat tegen het platformoppervlak rust.Plak nu het onderste gedeelte van de borstholte, net boven het diafragma, losjes op het platform, waarbij u er zorg voor draagt de ventilatie niet te belemmeren, om het dier tijdens de procedure in positie te houden. Stel vervolgens de flexibele zwanenhalslamp in op 80 tot 100%. Positioneer het licht op één tot twee centimeter van het huidoppervlak nabij de plexus solaris en controleer regelmatig of de huid niet oververhit raakt. Lokaliseer vanuit de achterzijde van het platform de tong met behulp van de stompe pincet.Houd er vervolgens rekening mee dat u de onderste snijtanden vermijdt, pak de tong voorzichtig vast en trek deze uit de mondholte. Terwijl u de tong fixeert, vlakt u deze af met de tongspatel in de niet-dominante hand, waarbij u de forceps laat loslaten. Leid nu de zwanenhals van ongeveer de plexus solaris naar de hoofdbronchiën om de trachea te verlichten.De trachea kan ook gemakkelijk worden onderscheiden door de ademhalingsbeweging, waardoor de intensiteit van het licht dat de trachea verlaat zal fluctueren. Wanneer deze correct gepositioneerd is, is de trachea zichtbaar als een centraal lichtpunt, met minimale omgevingsverlichting in de mondholte zelf. De katheter mag de mondholte pas binnengaan zodra het zicht op de trachea optimaal is.De trachea kan niet in beeld worden gebracht door manipulatie van de lichtbron of de depressor. Onderzoekers dienen de tong los te laten en de procedure opnieuw te proberen. Hoek daarna de spuit zo dat deze het natuurlijke verloop van de trachea volgt.Breng vervolgens de punt van de 22 gauge katheter, met de bevestigde spuit met PBS, rechtstreeks in het lumen. Schuif de katheter nu nog vijf millimeter verder naar binnen en verwijder de tongspatel. Bij een correcte plaatsing zal de PBS-bel in de cilinder beginnen te stijgen en te dalen bij elke ademhaling.Houd bij het zoeken naar deze indicator geduld, aangezien zowel zware als lichte sedatie de ademhalingsfrequentie kunnen beïnvloeden. Verplaats vervolgens de spuit naar de niet-dominante hand. Terwijl u de houder vasthoudt, verwijdert u voorzichtig de spuit en laat u de katheter op zijn plaats.Breng met de dominante hand de voorbereide bolus reagens direct aan in het midden van de catheternaaf. Bevestig vervolgens de tweede spuit met 300 µL lucht en spuit de lucht in de naaf. Dit helpt om een goede distributie van de bolus in de longen te waarborgen.Verwijder nu de spuit en vervang deze door een spuit die de PBS-bel bevat. De bel zal blijven stijgen en dalen als de procedure succesvol is uitgevoerd. Verwijder nu de katheter en de tape.Plaats het dier vervolgens op een droge, warme plek totdat het weer bij bewustzijn is. Dit gebeurt doorgaans binnen enkele minuten. Geintubeerde muizen werden dagelijks gecontroleerd op gewichtsverlies.Muizen werden verzameld op vier, 10 en 17 dagen na intratracheale intubatie met bleomycine. Bronchoalveolaire lavage werd verzameld uit deze longen en geanalyseerd. Verhoogde spiegels van IgM toonden een significante tijdsafhankelijke toename van de longpermeabiliteit aan, wat duidt op dysfunctie van de epitheliale en/of endotheliale barrière.De rechterlongen werden gefixeerd en gekleurd met Masson's trichroom. De fibrogene respons, een goed gevestigde marker voor het totale collageengehalte, werd gekwantificeerd. De histologische coupes toonden een behandelingsafhankelijke verdikking van het pulmonale interstitium en een toename van fibrotische laesies.Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in minder dan een minuut worden uitgevoerd mits correct uitgevoerd. Tijdens deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat manipulatie van de zachte weefsels rondom de trachea niet nodig of aanbevolen is. Dit kan zowel de gezondheid van het dier als de integriteit van het experiment in gevaar brengen.

an-improved-method-for-rapid-intubation-of-the-trachea-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Herhaalde metingen van knaagdieren respiratoire fysiologie en bemonstering van de luchtwegen ontstekingscellen wenselijk zijn, maar over het algemeen niet haalbaar. Hier beschrijven we een herhaalbare methode voor het mondeling intuberen muizen dat herhaalde metingen van de luchtwegen hyperreactiviteit en de bemonstering van de luchtwegen ontstekingscellen vergunningen.

Een reversibele, niet-invasieve methode voor Airway Resistance Metingen en bronchoalveolaire lavage Fluid Sampling in Muizen

Een muismodel voor de ventilator geïnduceerde longschade is een belangrijk instrument om een ​​acute longbeschadiging...

Druk gecontroleerde ventilatie te Acute Lung Injury in Muizen Braken

We hebben een eenvoudige, betrouwbare en relatief goedkope methode voor endotracheale intubatie bij muizen via directe laryngoscopie behulp van een otoscoop met een 2,0 mm speculum ontwikkeld. Deze techniek is atraumatische en kan worden gebruikt voor herhaalde metingen in chronische experimenten. We vinden het superieur aan tracheostomie of eerder gerapporteerde niet-chirurgische technieken.

Luchtpijpintubatie in Muizen<em&gt; Via</em&gt; Directe laryngoscopie behulp van een otoscoop

Dit artikel beschrijft een striaghforward en efficiënte methode van intubatie muizen voor longfunctie metingen of pulmonale instillatie, die het mogelijk maakt de muizen om te herstellen en studeerde worden op latere tijdstippen. Deze procedure houdt een goedkope optische vezel lichtbron die direct verlicht de luchtpijp.

Een eenvoudige methode van de Muis van Lung intubatie

Het gebruik van een model dat de toestand van longziekten bij mensen nabootst is kritiek voor het bestuderen van de pathofysiologie en / of etiologie van een bepaalde ziekte en ontwikkelen van therapeutische interventie. Hier een niet-invasieve intratracheaal intubatie methode die direct exogene materialen kunnen leveren aan muizenlongen wordt gepresenteerd.

Niet-invasieve Intratracheaal intubatie om te studeren de Pathologie en Fysiologie van Mouse Lung

Hier presenteren we een protocol van Transverse aorta vernauwing (TAC) via een laterale Thoracotomie. Deze techniek is een minimaal invasieve, gesloten borst chirurgische ingreep gericht om overbelasting van de druk en hartfalen in muizen met behulp van TAC laboratorium standaardinstellingen te simuleren.

Een gesloten-borst-Model voor het opwekken van transversale aorta vernauwing in muizen

Het doel van dit artikel is het beschrijven van een verfijnde methode van intubatie van de laboratoriummuis. De methode is niet-invasief en daarom ideaal voor studies die seriële controle van de ademhalingsfunctie en/of instillatie van behandelingen in de long vereisen.

Herhaalde Orotracheale intubatie bij muizen

Hier stellen we een protocol voor intratracheale lipopolysaccharide (LPS) levering via niet-invasieve orofaryngeale endotracheale intubatie. Deze methode minimaliseert het trauma van de chirurgische procedure voor het dier en levert LPS nauwkeurig af aan de luchtpijp en vervolgens aan de longen.

Niet-invasieve intratracheale lipopolysaccharide-instillatie bij muizen

Hier introduceren we een gestandaardiseerde procedure voor endotracheale intubatie via tracheotomie gevolgd door thoracotomie bij ratten, gericht op het verbeteren van de precisie en reproduceerbaarheid van niet-overlevingstoepassingen die invasieve ventilatie en blootstelling van thoracale organen vereisen in in vivo rattenmodellen.

Endotracheale intubatie via tracheotomie en daaropvolgende thoracotomie bij ratten voor niet-overlevingstoepassingen

We beschrijven een muizenmodel van overbelasting van de rechterventrikeldruk geïnduceerd door pulmonale rompbanden. Gedetailleerde protocollen voor intubatie, chirurgie en fenotypering door middel van echocardiografie zijn opgenomen in de paper. Op maat gemaakte instrumenten worden gebruikt voor intubatie en chirurgie, waardoor het model snel en goedkoop kan worden gereproduceerd.

Een muizenmodel van door drukoverbelasting geïnduceerde rechterventrikelhypertrofie en falen door pulmonale rompbanden

Dit protocol laat zien hoe het optimaal positioneren van een muis en het transoraal inbrengen van een op camera's gebaseerde otoscoop visualisatie van de glottis, snelle intubatie met minimaal weefseltrauma en consistente vloeistofafgifte aan de longen mogelijk maakt.

Verbeterde methodologie voor vloeistofafgifte aan de muizenlong: intubatie met behulp van een consumentenotoscoop

Leer een snelle en betrouwbare tracheale intubatiemethode bij muizen voor longonderzoek. Deze techniek minimaliseert weefselschade, vereist geen gespecialiseerde apparatuur en biedt korte hersteltijden voor efficiënt onderzoek naar longletsel en fibrogenese.

Een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen

Meer video's verkennen