타액 기능 저하의 쥐 모델에서 Retroductal 턱밑 글 랜드 점적 및 현지화 된 분획 조사

두경부 방사선 요법의 주요 부작용인 타액선 기능 저하로 환자의 삶의 질을 떨어뜨립니다. 동물 모델에서 새로운 치료법의 효능을 입증하는 것은 임상 전환 전에 전제 조건입니다. 이 프로토콜은 쥐의 턱밑샘에 대한 후향 투여 및 국소 방사선 조사에 대해 설명합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 턱밑샘에 치료제를 후향적으로 투여하여 타액 기능 장애를 퇴치하는 효능을 평가하는 것입니다. 이 방법은 방사선으로부터 타액선 기능을 보호하거나 회복할 수 있는 치료법과 같은 타액선 질환 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 타액선을 국소적으로 치료할 수 있어 비표적 조직 부작용의 위험을 줄일 수 있다는 것입니다.

일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 사람들은 덕트 개구부가 보이지 않고 캐뉼라를 덕트 안으로 맹목적으로 조작해야 하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 절차를 시작하기 전에 10cm 길이의 PE 10 폴리에틸렌 튜브를 두스칼로 자른 다음 집게 손가락과 양손의 엄지 손가락 사이에 튜브의 양쪽 끝을 잡고 튜브의 중간 부분을 부드러운 불꽃 위로 가열하고 조심스럽게 양쪽을 당겨 부드러운 튜브를 두 배로 늘립니다. 다음으로, 두스칼을 사용하여 중간에 있는 튜브를 45도 각도로 절단하여 각각 끝이 가늘어지는 두 개의 캐뉼리를 얻습니다.

캐뉼리 중 하나의 테이퍼되지 않은 끝을 0.5cc 인슐린 주사기의 29게이지 바늘 위로 늘립니다. 그런 다음 캐뉼라를 제거하고 220마이크로리터의 식염수를 주사기에 넣습니다. 주사기 샤프트를 두드려 기포를 제거하고 바늘 위에 캐뉼라를 다시 부착합니다.

플런저를 눌러 캐뉼라에서 공기를 배출하고 튜브를 통한 용액의 자유로운 흐름을 보장하고 주사기의 식염수 부피를 200마이크로리터로 조정합니다. 이제 발가락 꼬집기와 만질 수 있는 반사로 쥐의 적절한 진정 수준을 확인하고 노출된 각막에 눈 윤활제를 바르십시오. 특별히 설계된 구속 플랫폼에 아미말을 놓고 윗니를 가로 막대에 맞물립니다.

아래 앞니에 고무 밴드를 감아 턱을 아래로 당깁니다. 플랫폼에 고정합니다. 그런 다음 멸균 봉합사를 혀에 통과시키고 들어 올려 입 바닥을 들어 올립니다.

그런 다음 지혈제를 사용하여 봉합사를 고정하고 지혈을 가로 막대 위로 통과시킵니다. 다음으로, 맞춤형 뺨 스프레더를 사용하여 뺨을 확장하고 해부 현미경을 사용하여 입 바닥에서 설하 유두를 찾습니다. 섬세한 집게를 사용하여 미리 형성된 PE 10 튜브의 테이퍼된 끝을 잡고 캐뉼라 끝을 설하 유두의 관 구멍으로 부드럽게 조작합니다.

그런 다음 캐뉼라를 덕트에 3-5mm 끼우고 캐뉼라가 막힘 없이 덕트를 통과하도록 합니다. 식염수를 주입하기 전에 아트로핀을 동물의 목 목덜미에 피하로 주사합니다. 주입 후 10분 후에 시아노아크릴레이트 한 방울로 캐뉼라를 덕트 구멍에 고정합니다.

접착제가 건조된 후 200마이크로리터의 식염수가 분비샘에 주입될 때까지 주사기 플런저를 분당 50마이크로리터로 천천히 누릅니다. 주입 중 뒤쪽 presure가 발생하면 튜브를 중단하고 빼낸 다음 새 캐뉼러로 다시 캐뉼러를 삽입하십시오. 그런 다음 지혈제로 튜브를 고정하고 주사기를 조심스럽게 제거합니다.

동물이 의식을 회복할 때까지 30-60분 동안 튜브를 덕트에 그대로 두십시오. 그런 다음 혀를 잡고 있는 봉합사를 제거하고 동물이 완전히 회복될 때까지 열 램프 아래의 별도의 우리로 동물을 옮깁니다. 턱밑샘에 분획된 방사선 조사를 국소적으로 적용하기 위해.

누운 자세에서 마취된 쥐의 흉골 위쪽까지의 영역을 포함하는 3cm의 방사선 필드를 기둥으로 만듭니다. 해당 부위에 1cm 크기의 조직 등가 덩어리를 놓은 후. 선형 가속기에서 6메가볼트 광자 빔을 사용하여 방사선 소스와 볼러스 상단 사이의 거리를 100cm로 조정합니다.

적절한 노출 시간을 위해 동물에게 2.5개의 회색을 조사합니다. 방사선 노출 기간이 끝나면 방금 말한 것처럼 동물이 회복하는 동안 동물을 따뜻하게 합니다. 초기 실험 중에 분비샘에 hematoxylin 또는 tryplan blue 용액을 주입하고 안락사된 동물의 분비선 염색을 평가하여 캐뉼라의 적절한 배치를 확인했습니다.

턱밑샘은 목에 기둥형 방사선을 선택적으로 조사할 수 있어 동물의 건강과 실험 결과에 영향을 미칠 수 있는 심각한 구강 표적 이탈 효과를 피할 수 있기 때문에 연구되었습니다. 방사선 치료 후 8주가 지난 시점에 이 분획 방사선 체계가 타액 흐름에 미치는 영향을 분석한 결과, 매일 2.5 그레이 단위로 노출되면 타액 흐름이 급격히 감소한다는 사실이 밝혀졌습니다. 방사선 조사를 받지 않은 동물에 비해 방사선 조사를 받은 동물의 타액 배출량이 10배 감소했습니다.

이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 몇 분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 캐뉼라가 타액선의 배설관으로 제한 없이 통과하도록 하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 개발 후 이 기술은 타액선 질환 분야의 연구자들이 방사선 및 자가면역 타액선 질환에 대한 치료법을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 쥐의 턱밑샘에 후방삽입을 수행하는 방법과 방사선 독성 개선의 치료 효능을 평가하기 위해 분비샘을 국소적으로 조사하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 유전자 및 단백질 치료제를 사용하는 것은 매우 위험할 수 있으며, 이 절차를 수행하는 동안 바늘로 찌르는 것을 피하고 생물학적 제제에 대한 피부 노출을 최소화하는 등의 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.