Name: 화학 오염 물질의 신속 검출을위한 라만 분광 분석 향상된 필터 기반의 표면 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: 학습하세요 필터 기반 SERS 분석법으로 살충제 페밤과 항생제 암피실린 같은 화학 오염 물질을 신속하게 검출하는 방법을. 은 나노입자를 활용하여 민감도를 높이고 시료 준비 시간을 단축하는 이 기법은 환경 모니터링에 유용합니다.

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이 자료는 미네소타 대학의 국립 식품 보호 및 방어 센터(National Center for Food Protection and Defense)에서 수여하는 보조금을 통해 미국 국토안보부(U.S. Department of Homeland Security)의 보조금 번호 2010-ST-061-FD0001에서 지원하는 작업을 기반으로 합니다. 면책 조항: 이 문서에 포함된 견해와 결론은 작성자의 견해이며 미국 국토안보부 또는 미국 식량 보호 및 방위 센터의 명시적이든 묵시적이든 공식 정책을 반드시 나타내는 것으로 해석되어서는 안 됩니다.

1. 실버 나노 입자 합성 (15) <ol><li> 5 초 동안 100 ㎖의 초순수 (18.2 ΩU)와 소용돌이에 18 mg의 질산은을 녹인다. </li><li> 5 초 동안 1 ml의 물과 소용돌이에 27 mg의 구연산 나트륨 이수화 물을 녹인다. </li><li> 교반 막대를 함유하는 삼각 플라스크에 제조 된 질산은 용액을 모두 전송하고 자기 핫 플레이트 상 형틀을 넣어. ~ 350 ° C에서 700 rpm의 교반 속도로 격렬하게 교반하에 플라스크를 가열 (접시에 온도를 설정). </li><li> 끓는되면 바로 삼각 플라스크에 제조 된 구연산 나트륨 용액 모두를 추가하고, 용액의 Ag 된 NP의 형성을 나타내는 녹갈색을 변할 때까지 추가로 25 분 동안 비등 용액을 떠난다. </li><li> 핫 플레이트에서 플라스크를 제거하고 일정한 색상과 트란과 다른 자기 접시에 넣어 (가열하지 않음) 및 교반 O는 / N은 ​​실온에서 동일한 교반 속도에서 혼합물이 안정 상태에 도달 할 때까지sparency. 필요한 경우 제조 된 NP의 Ag의 흡광도를 결정하는 UV-힘 분광계를 사용한다. </li><li> 100ml의 초순수로 최종 혼합물을 희석. </li><li> 필요한 경우 제조사의 프로토콜에 따라의 Ag NP에의 크기를 측정하는 제타를 사용합니다. </li><li> 밀폐 용기에의 Ag 콜로이드를 전송하고, 알루미늄 호일로 광으로부터 보호한다. 필요한 경우 콜로이드 2 개월 동안 4-7 ℃에서 냉장고에 저장 될 수있다. </li></ol> SERS 액티브 필터 멤브레인 2. 제작 <ol><li> 50 mM의 NaCl 용액을 100 mL의 물에 2.92 g의 염화나트륨 (염화나트륨)을 녹인다. </li><li> 제조의 Ag NP에 1 ㎖에 5 mM의 NaCl 용액 1 ㎖를 첨가하고 20 rpm에서 10 분 동안 하향 경사 믹서 섞는다. 이 단계의 Ag 나노 클러스터로의 Ag NPS를 집계하는 것입니다. </li><li> 주사기에 부착 될 수있는 필터 홀더에 필터 막 (PVDF, 0.1㎛의 공극 크기)을 놓는다. 작은 기공 크기의 막 fo를이었다일치 신호의 Ag 나노 클러스터를 포착 및 생성에 큰 기공 크기 막 (즉, 0.22 μm의)보다 더 효과 싶게. </li><li> 로드 여과 주사기에 제조의 Ag 나노 클러스터 2 ㎖. 주사기 필터 홀더를 부착하여 수동 1 방울 / 초의 유속으로 막을 통과의 Ag 나노 클러스터의 전체 볼륨을 통과한다. 막 트랩의 Ag 나노 클러스터는 SERS 활성 여과막을 형성한다. </li><li> 필터 홀더에 필터 멤브레인을 분리. 멤브레인에 손상이 없도록 핀셋을 사용하여 외부 테두리에 멤브레인을 들고 때 특별한주의가 필요합니다. 유리 슬라이드에 약 3 분 장소 막의 건조 공기. </li><li> SERS 기판의 라만 검출 <ol><li> 5 mW의, 10X 현미경 대물 렌즈로 설정 (2)의 1 초간 노출 수 노출 시간의 레이저 출력과 파장 780 nm 레이저 라만 악기를 설정한다. 소프트웨어의 목적은 너무 따라 설정되어 있는지 확인합니다. &lt;/ 리&gt; <li> 라만 장비의 플랫폼 상 위에 막으로 유리 슬라이드에 놓고 막 표면에 초점 현미경을 사용한다. </li><li> 무작위로 막 표면에서 8-10 지점을 선택하고 기기는 순서대로 자동으로 수집합니다. 분석을위한 제조업체의 소프트웨어에서 열기 스펙트럼 데이터. </li></ol></li></ol> SERS 액티브 필터 시스템 3. 응용 화학 오염 물질을 감지하는 <ol><li> 10 PPB의 ferbam 솔루션을 준비합니다. 주의 : Ferbam 매우 휘발성이다. 주의 사항 (마스크와 고글) 고체 무게 사용합니다. <ol><li> 2 mg을 ferbam 분말을 달아 원액 (100 PPM)를 만들기 위해 20 ㎖ 50 % 아세토 니트릴 (10 ㎖의 아세토 니트릴과 물 10 ㎖)에 용해. 30 초 동안 플라스크를 소용돌이. </li><li> 시험관에 100 ppm의 ferbam 용액 1 ㎖를 취하여 10 ppm의 용액을 만들기 위해 9 ml의 50 % 아세토 니트릴을 추가한다. 5 초간 튜브를 소용돌이. </li><li> 1 mL를 취하여10 ppm의 시험 관내 용액을 9 ml의 50 % 아세토 니트릴을 추가 1 ppm의 용액을 제조한다. 5 초간 튜브를 소용돌이. </li><li> 시험관에 1 ppm의 용액 1 ㎖를 취하여 100 ppb의 용액을 만들기 위해 9 ml의 50 % 아세토 니트릴을 추가한다. 5 초간 튜브를 소용돌이. </li><li> 시험관에 100 ppb의 용액 1 ㎖를 취하여 10 ppb의 용액을 만들기 위해 9 ml의 50 % 아세토 니트릴을 추가한다. 5 초간 튜브를 소용돌이. </li></ol></li><li> 1 ppm의 암피실린 솔루션을 준비합니다. <ol><li> 10 mg을 암피실린 분말을 달아 100 ppm의 암피실린 용액을 100 ml의 물에 용해. 30 초 동안 플라스크를 소용돌이. </li><li> 시험관에 100 ppm의 용액 1 ㎖를 취하여 10 ppm의 암피실린 용액을 만들기 위해 9 ml의 물을 첨가 하였다. 5 초간 튜브를 소용돌이. </li><li> 시험관에 10 ppm의 용액 1 ㎖를 취하여 1 ppm의 암피실린 용액을 만들기 위해 9 ml의 물을 첨가 하였다. 5 초간 튜브를 소용돌이. </li></ol></li><li> 이 위를 향하도록 NP 코팅면, 필터 홀더에 다시 필터 멤브레인을 넣습니다. &lt;/ 리&gt; <li> 로드 5 새로운 주사기로 하나의 샘플 ml의 다음 내부의 Ag 코팅 멤브레인 필터 홀더에 부착합니다. </li><li> 수동 1 방울 / 초의 유속으로 막을 통해 시료의 전체 볼륨을 통과한다. 대상 분자 여과막 코팅 NP에 흡착하고 농축 될 수있다. </li><li> 약 3 분 동안 필터 홀더, 건조 공기의 필터 멤브레인을 분리하여 단계 2.6에 기재된 방법과 동일한 방법을 사용하여 라만 장비를 사용하여 신호를 측정한다. </li><li> 2.6 단계를 반복 2.2 다른 AG-코팅 막을 제조하고, 다른 시료의 검출을위한 단계 3.3에서 수행합니다. </li></ol>

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</ol>

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이 프로토콜의 중요한 단계 중 하나는 유니폼의 Ag NPS에서 일관된 결과의 핵심의 Ag NP에 합성이다. 가열 시간 및 전구체의 농도를 정밀하게 제어되어야한다. 이 AGNPS 제제의 평균 크기를 측정 하였다 제타는 80nm이다 (데이터는 보이지 않음). 다른 중요한 단계는 염 농도 응집 시간을 정확하게 제어해야 염 집합이다. 작은 기공 크기를 갖는 멤브레인 트랩의 Ag 나노 클러스터로 더 효과적 발견되었을뿐만 아니라, 막의 선택 또한 중요하다. 이 연구에서 사용되는 특정 막의 전면 측 주사기를 연결 홀더에 배치해야 앞면과 뒷면이있다. 이 아래에 배치 된 경우, 코팅은 훨씬 덜 효과​​적이었다. 막을 통과 할 때 거품을 방지하는 것은 성공적인 코팅 또 다른 열쇠이다. 이 분석의 문제를 들어, 다음과 같이추천합니다. 없거나 거의 신호가 검출되지 않으면, 다음의 원인을 확인한다. 주요 원인의 Ag NPS에서 여과막의 세공에 포집 될 정도로 응집하지 수 있었다. 염 농도 및 / 또...

표면 강화 라만 분광 (SERS)는 나노 기술에 라만 분광법을 조합 한 기술이다. 노블 금속 나노 표면에서의 분석 물질의 라만 산란 강도는 크게 국부 표면 플라스 몬 공명에 의해 강화된다. 한 나노 입자은 (Ag NPS에서) 지금까지 의해 가장 널리 사용되는 SERS 높아 확장 능력 기판. 최대 2 아르 ),은 (Ag NP는 다양한 합성 방법이 개발되었다. 3-6의 Ag NPS는 감도 및 / 또는 기능을 향상시키는 것이 효과적 SERS 기판으로 단독으로 사용하거나 다른 재료 및 구조와 결합 할 수있다. 7-11 SERS 기술은 식품 및 환경 시료에 다양한 미량 오염 물질의 검출을위한 훌륭한 능력을 증명하고있다 (12) 전통적으로, SERS 샘플 준비하기위한 일반적인 두 가지 방법이 있습니다 :.. 솔루션 기반 및 기판 기반의 방법 (13)을 솔루션 기반의 운전 방식d를 샘플로 혼합 NP 콜로이드를 사용합니다. 이어서 NP-분석 착체 원심 분리하여 수집하고, 건조 후의 라만 측정 용 고체 지지체 상에 증착된다. 기판 기반 방법은 일반적으로 예비 제작 된 고체 기판 상에 액체 시료 몇 ㎕를 증착에 의해 도포된다. (14) 그러나, 이들 두 가지 방법 중 어느 쪽의 샘플 볼륨 다량 효과적이고 적용 가능하다. SERS 분석의 여러 변형은 필터 시스템 15-21 통합 또는 미세 유동 장치의 혼입 부피 제한을 극복. 21-24 변성 SERS 분석법은 화학 오염 물질을 모니터링하기위한 감도 및 타당성에 큰 개선을 보여 주었다 큰 물 샘플에서. 여기서 우리는 농약 ferbam 항생제 암피실린 미량 검출하도록 제조 및 주사기 필터 SERS 기반 방법의 적용에 대한 상세한 프로토콜을 보여준다.

<table><tbody><tr><td>Ampicillin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1760-5</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Ferbam</td><td>Chem Service</td><td>N-11970-250MG</td><td>98+</td></tr><tr><td>%질산은</td><td>Sigma Aldrich</td><td>209139</td><td>99.0+%</td></tr><tr><td>구연산나트륨 탈수</td><td>Sigma Aldrich</td><td>W302600</td><td>99+%</td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td>99.5+%</td></tr><tr><td>EMD Millipore Durapore PVDF 멤브레인 필터</td><td>Fisher Scientific</td><td>VVLP01300</td><td>0.10 &마이크로; m 기공 크기, 친수성</td></tr><tr><td>폴리카보네이트 필터 홀더</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-29550-40</td><td>13mm 직경</td></tr><tr><td>아날로그 와류 믹서</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-215-365</td><td>N/A</td></tr><tr><td>너트 믹서</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-450-213</td><td>N/A</td></tr><tr><td>DXR 라만 분광기</td><td>Thermo Scientific</td><td>IQLAADGABFFAHCMAPB</td><td>레이저 출력: 1mW 노출 시간: 5초</td></tr></tbody></table>

화학 오염 물질의 신속 검출을위한 라만 분광 분석 향상된 필터 기반의 표면

A Filter-based Surface Enhanced Raman Spectroscopic Assay for Rapid Detection of Chemical Contaminants

다양한 화학 오염 물질 검출에 적용할 수 있는 필터 주사기 시스템을 사용하여 고감도 표면 강화 라만 분광법(SERS) 기판을 제작하는 방법을 시연합니다. 은 나노 입자 (Ag NP)는 시트르산 나트륨에 의한 질산은의 환원을 통해 합성됩니다. 그런 다음 NP는 염화나트륨에 의해 응집되어 필터 멤브레인의 기공에 갇힐 수 있는 나노 클러스터를 형성합니다. 주사기는 내부에 필터 멤브레인이 있는 필터 홀더에 연결됩니다. 나노클러스터를 주사기에 적재하고 멤브레인을 통과하면 액체는 멤브레인을 통과하지만 나노클러스터는 통과하지 않아 SERS 활성 멤브레인을 형성합니다. 분석물을 테스트할 때 액체 샘플은 주사기에 로드되고 Ag NPs 코팅된 멤브레인을 통해 흐릅니다. 분석물은 Ag NPs 코팅된 멤브레인에 결합하고 농축됩니다. 그런 다음 멤브레인을 필터 홀더에서 분리하고 공기 건조시킨 다음 라만 기기로 측정합니다. 여기에서는 개발된 분석을 사용하여 10ppb ferbam 및 1ppm ampicillin의 검출뿐만 아니라 검출 감도에 대한 Ag NP 및 샘플의 부피 효과에 대한 연구를 제시합니다.

이 실험의 주요 단계는 개략도 (도 1)에 도시 하였다.도 2는 최대 감도를 달성하기 위해, 막 코팅 AGNPS의 최적 체적을 사용하는 중요성을 보여주고있다. ferbam을 사용하는 경우 0.5 ㎖ (불충분 한 코팅) 2 ㎖ (너무 코팅)에 비해의 Ag NP에 1 ㎖, 가장 강한 신호를 제공한다. 우리가 개발 한 필터 SERS 기반 분석으로 큰 신호 강도 1 PPM (도 1)에서 10 ppb의 수준에 ferbam 암피실린을 검출 할 수 있었다. ferbam의 SERS 스펙트럼은 10 ppb의에 고유 한 특성 피크를 나타낸다. 1,386cm에서의 피크는 -1 혼합 스트레칭 CN 및 C = (S)의 진동 및 대칭 CH <su...

제조 및 화학적 오염 물질 (예를 들어, 농약 ferbam 항생제 암피실린)의 검출을 위해 라만 분광 (SERS) 분석 향상된 필터 기반의 표면을 행하는 방법이 제시된다.

We demonstrate a method to fabricate highly sensitive surface-enhanced Raman spectroscopic (SERS) substrates using a filter syringe system that can be ...

이 필터 기반 표면 증강 라만 분광법(Surface Enhanced Raman Spectroscopy) 방법의 전반적인 목표는 액체 시료 내의 다양한 표적 분자를 미량 수준에서 검출하는 것입니다. 이 기술의 두 가지 장점은 시료 준비 시간 및 비용이 절감된다는 점과, 더 중요한 점으로 더 많은 양의 시료를 사용하여 감도를 높임으로써 검출 한계를 낮출 수 있다는 점입니다. 일반적으로 이 방법이 처음인 연구자는 적절한 응집 단계가 없으면 나노 입자가 막의 기공에 포집되지 않거나 막 위에 균일하게 분포되지 않아 어려움을 겪을 수 있습니다. 우선, 신선한 질산은 용액 100 milliliters를 준비하고, 700 RPM으로 마그네틱 교반을 하며 350 °C 핫플레이트에서 끓는점까지 가열하십시오.용액이 끓기 시작하면 즉시 갓 제조한 sodium citrate 용액 1 mL를 첨가하고 25분 동안 끓입니다. 은 나노입자가 형성됨에 따라 용액은 녹갈색으로 변합니다. 25분 후, 플라스크를 가열하지 않은 교반기에 올리고 700 RPM으로 밤새 교반합니다.아침이 되면 혼합물은 일정한 색상과 투명도를 유지하며 안정된 상태여야 합니다. 필요한 경우, 나노입자의 흡광도를 측정하십시오. 이어서 혼합물을 초순수로 희석하여 100 milliliters로 맞춥니다.그다음, zetasizer를 사용하여 은 나노 입자의 크기를 측정하십시오. 보관을 위해 은 나노 입자를 밀폐 용기에 옮깁니다. 알루미늄 호일로 감싸 빛으로부터 차단하십시오.콜로이드는 4°C에서 최대 2개월 동안 안정적으로 유지됩니다. SERS 활성 필터 막을 제작하려면, 먼저 준비된 콜로이드 1 mL에 5 mM 염화나트륨 1 mL를 첨가하십시오. 그 후 뉴테이터(nutator)를 사용하여 20 RPM으로 10분간 혼합합니다.은 나노클러스터가 형성되는 동안, 0.1 µm 공극의 PVDF 멤브레인을 준비하십시오. 필터 홀더가 완전히 건조되어 있어야 하며 필터가 올바른 방향으로 장착되었는지 확인하는 것이 매우 중요합니다. 10분간 혼합한 후, 2 mL의 나노클러스터를 초당 약 한 방울의 속도로 멤브레인에 통과시켜 여과하십시오.끊김 없이 용액을 계속해서 밀어 넣습니다. 그 결과로 SERS 활성 필터 막이 생성됩니다. 핀셋을 사용하여 활성 필터 막을 조심스럽게 떼어냅니다. 그런 다음, 3분 동안 공기 중에서 건조시킵니다.건조되면 SERS 활성 막을 유리 슬라이드로 옮깁니다. 이제 SER

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Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

자기 변조 biosensing 시스템은 빠르게, sensitively 단순히 같은 DNA 분자와 단백질과 같은 생물 학적 assays를 감지하는 활용됩니다.

자기 변조 Biosensing 시스템을 사용하여 생물 학적 Assays의 급속한 동차 검색

출처: Zhang, M. 외, 단일 박테리아 내 중수소 통합 자극 라만 산란 영상을 통한 신속 항균 감수성 검사. J. Vis. Exp. (2022)이 영상은 자극 라만 산란 현미경을 활용해 중수소 표지된 대사 활동을 추적하여 항생제에 대한 감수성을 평가하는 방법을 시연합니다. 탄소-중수소 신호를 모니터링함으로써 내성 및 감수성 박테리아 집단을 신속히 검출할 수 있게 합니다.

자극 라만 산란 현미경을 이용한 박테리아 항생제 감수성 검출

우리는 나노 구조 기질과 고정화된 단백질 및 압타머와 인터페이스하는 나노 생물학적 시스템의 제조 및 특성화를 설명합니다. 나노 구조 기판의 리소그래피 제작, 생체 기능화 및 표면 강화 라만 분광법(SERS) 특성화와 관련된 관련 실험 단계가 보고됩니다. 표면 고정 단백질의 SERS 검출 및 단백질-리간드 및 압타머-리간드 결합의 프로빙이 입증되었습니다.

표면 EBL 날조 된 나노 구조 기판을 사용하여 생체 분자의 라만 분광학 감지 강화

이 원고는 무지개 송어 아가미 상피 세포를 사용하여 현장 휴대용 전기 전지 기판 임피던스 센서에 사용하기 위해 유체 바이오칩을 준비하는 방법을 설명합니다.  센서를 사용하여 신속한 음용수 독성 테스트를 실행하기 위한 프로토콜도 설명합니다.

준비 및 시험 독성에 대한 신속한 평가 음주의 물 샘플에 대한 RTgill-W1 세포와 유체 바이오칩을 임피던스 기반

시아노균 꽃과 관련 시아노톡신의 조기 발견을 위한 빠른 종합 전략은 여기에서 기술된다. 그것은 24 시간에서 물 샘플 및 바이밸브 샘플과 같은 유기 매트릭스에서 시아노박테리아 및 관련 시아노톡신의 검출을 허용합니다.

빠른 검출 전략을 사용하여 시아노균 꽃과 관련 된 Cyanotoxins의 조기 발견

이 프로토콜은D2O대사의 단일 세포 자극 라만 산란 이미징에 의해 2.5시간 이내에 신속한 항균 감수성 테스트(AST) 분석을 제공합니다. 이 방법은 소변 또는 전혈 환경의 박테리아에 적용되며, 이는 클리닉에서 신속한 단일 세포 표현형 AST를 변형시킵니다.

단일 박테리아에 혼입된 중수소의 자극된 라만 산란 이미징에 의한 신속한 항균 감수성 테스트

이 논문은 동일한 현미경 플랫폼에 통합 된 자극 된 라만 산란 (SRS)과 일관된 스토크스 라만 산란 (CARS)의 해상도, 감도 및 이미징 대비를 직접 비교합니다. 결과는 CARS가 더 나은 공간 분해능을 가지며, SRS는 더 나은 콘트라스트와 스펙트럼 분해능을 제공하며, 두 방법 모두 비슷한 감도를 가지고 있음을 보여줍니다.

화학 이미징을 위한 하이퍼스펙트럼 자극 라만 산란 및 일관된 안티스토크스 라만 산란 현미경의 직접 비교

우리는 광대역 자극 라만 산란 (SRS) 현미경으로 화학 이미지를 획득하기위한 프로토콜을 제시합니다. 차등 다중 채널 잠금 검출로 작동하는 SRS 현미경을 기반으로 하는 프로토콜은 시료 준비, SRS 장치의 조정 및 화학적으로 이질적인 샘플의 서로 다른 구성 요소를 분리하기 위한 화학측정법을 설명합니다.

광대역 자극 라만 산란 현미경을 기반으로 한 멀티플렉스 화학 이미징

본 연구에서는 생체적합성이 우수한 저비용 표면 강화 라만 산란(SERS) 기반 지문 나노프로브를 개발하여 비파괴 방법으로 살아있는 세포의 SERS 스펙트럼을 얻는 방법을 자세히 보여주기 위해 라벨이 없는 생세포 바이오이미징을 보여주고 두 가지 박테리아 균주를 검출했습니다.

Au@Carbon 도트 나노프로브를 기반으로 하는 Label-Free Surface-Enhanced Raman Scattering Bioanalysis

이 프로토콜은 표면 강화 라만 산란을 위한 유연한 기판의 제조 방법을 설명합니다. 이 방법은 낮은 농도의 R6G 및 Thiram을 성공적으로 검출하는 데 사용되었습니다.

초고감도 검출을 위한 폴리디메틸실록산(PDMS) 기반 SERS(Flexible Surface-Enhanced Raman Scattering) 기판 제작

학습하세요 필터 기반 SERS 분석법으로 살충제 페밤과 항생제 암피실린 같은 화학 오염 물질을 신속하게 검출하는 방법을. 은 나노입자를 활용하여 민감도를 높이고 시료 준비 시간을 단축하는 이 기법은 환경 모니터링에 유용합니다.

화학 오염 물질의 신속 검출을위한 라만 분광 분석 향상된 필터 기반의 표면

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