Optical Control of a Neuronal Protein Using a Genetically Encoded Unnatural Amino Acid in Neurons

Ji-Yong Kang; Daichi Kawaguchi; Lei Wang

doi:10.3791/53818

뉴런의 유전자 인코딩 된 부 자연스러운 아미노산을 사용하여 신경 세포 단백질의 광 제어

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Neuroscience

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Optical Control of a Neuronal Protein Using a Genetically Encoded Unnatural Amino Acid in Neurons

뉴런의 유전자 인코딩 된 부 자연스러운 아미노산을 사용하여 신경 세포 단백질의 광 제어

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08:20 min

March 28, 2016

DOI: 10.3791/53818-v

Ji-Yong Kang¹, Daichi Kawaguchi², Lei Wang³

¹Department of Neuroscience, School of Medicine,Tufts University, ²Molecular Neurobiology Laboratory,The Salk Institute for Biological Studies, ³Department of Pharmaceutical Chemistry and the Cardiovascular Research Institute,University of California, San Francisco

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기에서는 배양 또는 생체 내에서 뉴런에서 발현되는 표적 뉴런 단백질에 광반응성 비천연 아미노산을 유전적으로 암호화하여 짧은 광 펄스로 뉴런 단백질을 선택적으로 활성화하는 절차를 제시합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 뉴런에서 유전적으로 암호화된 비천연 아미노산을 사용하여 뉴런 단백질의 기능을 광학적으로 제어하는 것입니다. 이 방법은 공간적 시간 해상도를 가진 뇌 기능의 신경 신호 전달에 대한 특정 신경 단백질의 기여에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다양한 신경 단백질에 적용하여 다양한 신경 과정의 광학 조절을 달성할 수 있는 잠재력이 있다는 것입니다.

40마이크로미터 나일론 메쉬를 통해 여과한 후 500마이크로리터의 성장 배지가 있는 24웰 플레이트의 커버 슬립에 해마 뉴런을 도금하여 이 절차를 시작합니다. 그 후, 섭씨 35도의 이산화탄소 5%, 공기 가습 95%의 인큐베이터에서 2-3주 동안 뉴런 배양을 배양합니다. transfection 당일, 이중 증류수에 신선한 2.5몰 염화칼슘 용액을 만들고 0.22마이크로미터 필터로 멸균 여과합니다.

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