Name: Marginating - 폐 백혈구의 선택적 수확 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: 배우세요 폐 모세혈관 내피에 부착하는 marginating-pulmonary 백혈구를 쥐와 쥐에서 선택적으로 수확하는 방법을. 이 기술은 폐 면역학 및 질병 감수성 연구에 필수적인 특정 백혈구 집단을 정확하게 분리합니다.

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저자이 작품은 NIH / NCI 부여 # (SBE에) R01CA172138에 의해 지원되었다.

동물 주제와 관련된 절차 텔 아비브 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 1. 쥐 프로토콜 <ol><li> 준비 <ol><li> 2 나비 21 G 바늘을 정렬합니다. 선택적으로, 바늘의 날카로운 가장자리를 제출하여이 무딘 칼날 나비 21 G 바늘을 준비합니다. </li><li> 중력 (건조) 설정에 적어도 30 분 동안 121 ° C에서 오토 클레이브 멸균 가위 이쌍, 무딘 칼날 집게, 지혈, 치아 조직 겸자 : 수술 도구를 소독. </li><li> 인산염 완충 식염수 (1X PBS) 용액 1 ㎖ 당 30 단위의 헤파린을 첨가하여 PBS 헤파린 (30 유니트 / ㎖)을 준비한다. RT에서 사용합니다. 35 ml의 동물에 따라 필요한 최소한의 볼륨입니다. </li><li> 공기 방울을 방지하기 위해 연동 펌프 라인과 나비 바늘로 헤파린 PBS 스트림. </li></ol></li><li> MP-백​​혈구의 폐와 컬렉션의 관류 <ol><li> 8 %의 이소 플루 란의 과다 복용으로 동물을 안락사. 모니터링 호흡 정지에 의한 안락사를 확인합니다. </li><li> 호흡 중단시 즉시 멸균 가위와 치아 조직 집게를 사용하여 복강와 가슴 충치를 엽니 다. 칼 모양의 과정 복부까지 따라 중간 선 복부 절개를 수행합니다. </li><li> 내부 장기 또는 큰 혈관을 천공하지 않고, 조심스럽게 양쪽의 갈비뼈를 절단 집게를 사용하여 흉골을 들어 올립니다. 흉골에 지혈을 클램프 및 rostrally 심폐 복잡한을 노출 흉곽을 접습니다. </li><li> 심장의 우심실에 나비 바늘을 삽입하고 약 분 이내에 (~ 250g 동물 6 ml)에 주사기로 혈액의 최대 볼륨을 수집합니다. </li><li> 간 (토론 참조)의 후방 관류을 피하기 위해 지혈과 대정맥을 클램프. </li><li> (P)의 유출 관으로 혈액을 함유하는 주사기를 교체하는 동안 우심실 내의 버터 플​​라이 니들 홀드eristaltic 펌프. </li><li> 심실 중격의 침투를 방지 좌심실에 5 ml의 수확 주사기에 연결된 제 2 나비 바늘을 삽입합니다. </li><li> 약 5 ml / 분의 속도로 연동 펌프의 전원을 켜고 조심스럽게 주사기로 혈액으로 오염 관류의 첫 번째 밀리리터를 수집합니다. 관류 색상이 빨간색으로 옅은 어둠에서 꺼질 때까지 계속합니다. (혈액 오염 perfuste 폐기). </li><li> 연동 펌프의 중단없이 빠른 속도로 20 ml의 수확 주사기와 5 ml의 수확 주사기를 교체하고 관류의 더 높은 속도 (최대 7 ml / 분)를 사용하는 폐 관류 20 ㎖를 수집합니다. 진공 형성을 방지하면서 지속적으로 수집 주사기에 관류 흐름을 모니터링한다. </li><li> 연동 펌프의 흐름을 중단. </li></ol></li><li> 백혈구 추출 <ol><li> 400 × g에서 10 분간 원심 분리하여 관류 액. </li><li> 유체를 대기음. </li><li>10 분 동안 400 XG에 10 ml의 PBS 또는 매체, 원심 분리기를 추가하고 유체를 대기음. 두 번이 단계를 반복합니다. PBS 또는 배지의 사용은 시료의 결과적인 사용에 의존한다. </li><li> 10 분 동안 400 XG에 20 ml의 PBS 또는 매체, 원심 분리기를 추가하고 유체를 대기음. </li><li> 시료 사용량 (FACS, PCR 등)에 기초하여, 원하는 농도로 세포를 재구성. </li></ol></li></ol> 2. 마우스 프로토콜 <ol><li> 준비 <ol><li> 2 나비 25 G 바늘을 정렬합니다. 선택적으로, 바늘의 날카로운 가장자리를 제출하여이 무딘 칼날 나비 25 G 바늘을 준비합니다. </li><li> 중력 (건조) 설정에 적어도 30 분 동안 121 ° C에서 오토 클레이브 멸균 가위 이쌍, 무딘 칼날 집게, 지혈, 치아 조직 겸자 : 수술 도구를 소독. </li><li> 1X PBS 용액 1 ㎖ 당 30 단위의 헤파린을 첨가하여 PBS 헤파린 (30 유니트 / ㎖)을 준비한다. RT에서 사용합니다. 25 ml의 동물에 따라 필요한 최소한의 볼륨입니다. </li><li> 헤어 구조 강화공기 방울을 방지하기 위해 연동 펌프 라인과 나비 바늘로 PBS 헤파린을하고있다. </li></ol></li><li> MP-백​​혈구의 폐와 컬렉션의 관류 <ol><li> 8 %의 이소 플루 란의 과다 복용으로 동물을 안락사. 모니터링 호흡 정지에 의한 안락사를 확인합니다. </li><li> 호흡 중단시 즉시 멸균 가위와 치아 조직 집게를 사용하여 복강와 가슴 충치를 엽니 다. 칼 모양의 과정 복부까지 따라 중간 선 복부 절개를 수행합니다. </li><li> 내부 장기 또는 큰 혈관을 천공하지 않고, 조심스럽게 양쪽의 갈비뼈를 절단 집게를 사용하여 흉골을 들어 올립니다. 흉골에 지혈을 클램프 및 rostrally 심폐 복잡한을 노출 흉곽을 접습니다. </li><li> 간 (토론 참조)의 후방 관류을 피하기 위해 지혈과 대정맥을 클램프. </li><li> 오른쪽 VEN으로 연동 펌프의 유출 관에 연결되는 버터 플​​라이 니들을 삽입마음의 tricle하고, 심장, 심실 중격의 avoidingpenetration의 좌심실에 2 ml의 수확 주사기에 연결된 제 2 나비 바늘. </li><li> 약 2 ml / 분의 속도로 펌프를 켜고 관류가 (혈액 오염 perfuste 폐기) 빨간색 옅은 어둠에서 꺼질 때까지 수확 주사기로 혈액 오염 관류의 첫 번째 밀리리터를 수집합니다. </li><li> 연동 펌프의 중단없이 빠른 속도로 10 ml의 수확 주사기 2 ml의 수확 주사기를 교체하고 관류의 더 높은 속도 (최대 4 ml / 분)를 사용하는 폐 관류 10 ㎖를 수집합니다. 진공 형성을 방지하면서 지속적으로 수집 주사기에 관류 흐름을 모니터링한다. </li><li> 연동 펌프의 흐름을 중단. </li></ol></li><li> 백혈구 추출 <ol><li> 400 × g에서 10 분간 원심 분리하여 관류 액. </li><li> 유체를 대기음. </li><li> 400에 10 ml의 PBS 또는 매체, 원심 분리기 추가10 분간 XG 및 유체를 흡인. 이 단계를 세 번 반복합니다. PBS 또는 배지의 사용은 시료의 결과적인 사용에 의존한다. </li><li> 10 분 동안 400 XG에 10 ml의 PBS 또는 매체, 원심 분리기를 추가하고 유체를 대기음. </li><li> 시료 사용량 (FACS, PCR 등)에 기초하여, 원하는 농도로 세포를 재구성. </li></ol></li></ol>

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</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

본 명세서에있어서, 상기 선택적 수확을 가능 MP-백혈구 고유 인구 공부. 순환 또는 비장 백혈구에 비해 MP 인구 백혈구 개체군의 고유 조성물 높은 활성 수준, 다양한 사이토 카인의 높은 릴리스 및 프로와 항 염증성 사이토 카인 2,3- 높은 mRNA 수준을 특징으로한다. 구체적으로, 우리는 MP-NK 세포는 다양한 표적 세포에 대해 3,4- 순환 NK 세포보다 더 독성이 있고, 인터페론 γ 높은 수준의 발현을 보여 주었다. 전반적으로, 우리의 결과는 MP-NK 백혈구는 혈액을 매개로 전이 및 폐 전이를 조절하는데 더 큰 생물학적 중요성을 의미 할 수있다, 따라서 NK 세포를 순환하고,보다 더 큰 세포 독성을 가지고하는 것이 좋습니다. 따라서, 비장 또는 순환 백혈구가 골드 표준 또는 면역 상태를 반영하기위한 기본 인구, 인간 연구로 간주해서는 안 그 닷컴monly는 조심스럽게 해석되어야 백혈구 순환에 전적으로 의존하고 있습니다. 각종 질병 특이 폐 준다 더욱이, 면역력이 기관 내 연구...

폐의 모세 혈관 (즉, marginating - 폐 (MP) 백혈구) (1) 다른 면역 구획 (예를 들어, 순환, 비장, 골수)에서 백혈구에 비해 뚜렷한 백혈구의 구성과 독특한 활성을 나타내는 것으로 나타났다 2-에 부착 백혈구 4. 예를 들어, 순환 및 비장 NK 세포뿐만 아니라, 분화 된 전령 RNA (mRNA의) 레벨 및 프로와 항 염증성 사이토 카인의 분비 증가에 비해 다양한 종양 세포에 대하여 MP-백혈구 전시보다 천연 킬러 (NK) 세포 독성. MP-백​​혈구 순환 백혈구 (50 % 대에 각각 30 %)에 비해 본래 / 적응 면역의 높은 비율을 가지고있는 세포의 조성물은 순환하는 백혈구와 구별된다. 여기에 제시된 방법의 목적은, MP-백혈구의 선택적 수확을 가능하게이 중요하고 독특한 면역 구획 (세포 인구)을 연구하기 위해, 그리고 eluc하는 것입니다이러한 특정 세포에 대한 각종 조작 (예를 들면, 면역 활성)의 효과를 IDATE. 이 독특한 인구의 의미를 이해하기 위해서는, 면역 시스템 세포 매개 면역 (CMI)의 생체 내 기능을 통해 종양 세포, 미세 전이 및 잔여 질병을 순환 제어 할 수 있다는 것이 중요하다. 이 능력은 원발 종양을 제어하는 면역계의 선행 장애에도 불구하고 명확하며, 암 환자 및 동물 모델에서 생체 내 5 충분한 증거에 의해 지원된다. 중요한 것은, 이러한 연구 결과는 6,7가 (세포 독성 분석에 의해 측정) 종종 시험 관내 대부분의자가 종양 세포는 인간과 동물에서 혈액 샘플에서 백혈구를 순환시켜 세포 독성에 내성이보고 생체 연구와 일치한다. 이 차이는 같은 상술과 같은 별개의 백혈구 인구의 생체 내 존재에 기인 할 수있다상술 한 MP 백혈구 인구 및 활성화 NK 세포 (3) 구체적으로는 모집단. 실제로, 순환 및 비장 백혈구에 강한 것으로 밝혀졌다 동계 종양 세포 (MADB106)은, MP-NK 세포 -3,8- 의해 용해되는 것으로 도시 하였다. 따라서 fischer344 (F344) 쥐의 폐에 전이 의심 &#39;NK 내성&#39;MADB106 세포 아니라 순환 또는 일반적 접근 용이성을 부여 다룬다 비장 NK 세포에서 MP-NK 세포에 의해 제어된다. 정제 및 활성 MP-백혈구는 폐 조직의 분쇄 또는 생물학적 분해 (9)를 기반으로 폐에서 백혈구의 표준 수확 방법을 통해 액세스 할 수 없습니다. 우리의 접근 방식은 조직 처리 방법에 비해 두 가지 이점이있다. 먼저, 관류 방법은 선택적으로 다른 폐 실질 간질 세포에서 유래 한 기관지 폐포 비교 예에서 그들을 분리 MP-백혈구 수확tments. 둘째, 더 관류 기술은 분쇄 및 생물학적 처리와 달리 무결성 및 MP-백혈구의 생리적 환경을 유지하는 것은 손상 세포는 그들의 형태를 변경하고, 제조 및 면역 활성을 조절 특히 NK을 억제하는 다양한 인자의 방출을 유도하는 것으로 접근 세포 독성 10. 폐 암 전이 및 각종 감염성 질환의 주요 표적 장기입니다. 모든 순환 악성 세포와 감염된 세포는 변형 및 모세 혈관 내피 세포 및 주민 백혈구와 상호 작용하는 데 필요한 폐 모세 혈관을 통해 전달합니다. 이러한 조건 하에서, 세포의 순환을 용이하게 상주 MP-백혈구 타겟팅 할 수있다. 그것은 따라서이 면역 구획 활성화 백혈구을 가지고 생물학적으로 유리한 것, 그리고 서로 다른 생물학적 실험, 임상 설정에서이 독특한 MP-인구를 연구하는 것이 중요하다. 그 한건데주의하는 가치가있다다양한 생물학적 반응 - 수정하여 stemic 면역 활성화 (예를 들어, polyinosinic-polycytidylic 산 (폴리는 I : C) 또는 유형-C의 CpG 올리고 데 옥시 뉴클레오티드 (의 CpG-C ODN)를), 순환 백혈구 3보다 MP-백혈구 더 활성화하는 것으로 나타났다 8,11.

<table><tbody><tr><td>Autoclud 연동 펌프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>, 버터플라이 바늘,</td><td>OMG</td><td></td><td>, 26G</td></tr><tr><td>, 버터플라이 바늘,</td><td>OMG</td><td></td><td>, 21G*3/4"</td></tr><tr><td>, 주사기</td><td>Pic 용액</td><td></td>, <td>1ml</td></tr><tr><td>주사기</td>, <td>Pic 용액</td><td></td>, <td>2.5ml</td></tr><tr><td>주사기</td>, <td>Pic 용액</td><td></td>, <td>5ml</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Pic 용액</td><td></td><td>10ml</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Pic 용액</td><td></td><td>25ml</td></tr><tr><td>뭉툭한 모서리 집게</td><td></td><td></td><td></td></tr> 가<tr><td>위</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>지혈</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>조직 집게 헤</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>파린 나트륨 돼지 점막(무방부제)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

marginating - 폐 백혈구의 선택적 수확

Selective Harvesting of Marginating-pulmonary Leukocytes

Marginating-pulmonary (MP) 백혈구는 폐 모세혈관의 내부 내피에 부착하는 백혈구입니다. MP-백혈구는 다른 면역 구획의 백혈구와 비교하여 독특한 구성과 특성을 나타내는 것으로 나타났습니다. 증거는 자연 살해 세포의 세포 독성이 더 높고, 순환 또는 비장 면역 세포와 비교하여 MP-백혈구 집단의 뚜렷한 전염증 및 항염증 프로파일을 시사합니다. 본원에 제시된 방법은 마우스 또는 랫드에서 폐의 강제 관류에 의한 MP-백혈구의 선택적 수확을 가능하게 합니다. 조직 분쇄 및 생물학적 분해와 같이 폐-백혈구를 추출하는 데 사용되는 다른 방법과 달리, 이 방법은 실질, 간질성 및 기관지-폐포 세포로 오염되지 않은 폐 모세혈관에서 독점적으로 백혈구를 생성합니다. 또한 관류 기술은 조직 처리로 인한 생리적 반응을 유발하지 않고 MP-백혈구의 무결성과 생리학적 환경을 더 잘 보존합니다. 이 독특한 MP 백혈구 집단은 모든 순환 악성 세포와 감염된 세포가 폐 모세혈관을 통과하는 동안 억류되어 내피 세포 및 상주 백혈구와 물리적으로 상호 작용하기 때문에 비정상적인 순환 세포를 식별하고 반응하기 위해 전략적으로 배치됩니다. 따라서 MP-백혈구의 선택적 채취와 다양한 조건에서의 연구는 특히 순환 비정상 세포 및 폐 관련 질병 제어와 관련하여 생물학적 및 임상적 중요성에 대한 이해를 높일 수 있습니다.

MP-구획 전시 다른 백혈구 하위 집합 조성물은 백혈구 순환 비교. 유세포 분석을 이용하여, 백혈구 개체군 식별 모두 순환 및 MP 백혈구의 조성물의 특징을 정량화 하였다. 과립구와 림프구는 전방 및 측면 산란을 기반으로 확인되었다. 림프구 내 NKRP-1 세포는 밝은 NK 세포, 단핵구와 같은 T 세포로서 CD3 +, RM1 + 및 CD4 + / CD8 + / CD25로 확인 하였다 + T 세포 개체군의 식별을 위해 사용되었다. 과립구, 단핵구 및 NK 세포를 포함하여 면역 세포가 선천적으로, 순환 (p &lt;0.05), 27.9 % (± 0.66 %)에 비해, MP-백혈구 인구의 52 % (± 1.52 %)를 구성. 반대로, CD4 +, CD4 + CD8 + T 세포 및 규정 (CD4 <s...

Marginating-pulmonary leukocytes는 다른 백혈구 집단에 비해 독특한 특성과 뚜렷한 면역 기능을 나타냅니다. 여기서 우리는 쥐와 생쥐에서 폐의 강제 관류에 의한 폐 백혈구의 이러한 하위 집단의 선택적 수확에 대해 설명합니다. 변두리폐 백혈구는 혈액 매개 및 폐 관련 질환에 대한 감수성을 결정하는 데 중요한 것으로 보입니다.

Marginating - 폐 백혈구의 선택적 수확

Marginating-pulmonary (MP) leukocytes are leukocytes that adhere to the inner endothelium of the lung capillaries. MP-leukocytes were shown to exhibit ...

이 실험 절차의 전반적인 목적은 강제 관류를 통해 마우스 또는 래트의 폐를 세척하여 폐 모세혈관의 내피세포 안쪽 벽에 부착되는 가장자리성 폐 백혈구(marginating-pulmonary leukocytes)를 선택적으로 수집하는 것입니다. 이 방법을 통해 독특한 특성과 구별되는 혈액학적 기능을 나타내는 특정 백혈구 집단을 연구할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 실질, 간질 및 기관지 폐포 구획의 세포를 제외하고 오직 폐 모세혈관에서만 백혈구를 얻을 수 있다는 점입니다.이 절차는 제 연구실의 두 대학원생인 Liat Sorski와 Lee Shaashua가 시연할 것입니다. 절차를 시작하기 전, 연동 펌프 라인과 버터플라이 바늘을 통해 헤파린 처리된 PBS를 흘려보내 기포를 모두 제거하십시오. 그 후, 호흡이 중단되는 즉시 멸균 가위와 치과용 조직 포셉을 사용하여 검상돌기까지 복부 중앙 절개를 시행함으로써 안락사시킨 쥐의 복강과 흉강을 개방하십시오.다음으로, 포셉을 사용하여 흉골을 들어 올리고 양쪽 흉곽을 조심스럽게 절개합니다. 지혈鉗(hemostat)으로 흉골을 고정한 뒤 흉곽을 머리 쪽(rostrally)으로 젖혀 심폐 복합체를 노출시킵니다. 그런 다음 나비바늘을 심장의 우심실에 삽입하여 가능한 최대량의 혈액을 채취합니다.혈액 수집이 모두 완료되면, 간으로의 역관류를 방지하기 위해 지혈鉗(hemostat)로 대정맥을 집어 고정합니다. 그런 다음, 우심실 내에 나비바늘을 유지한 상태에서 혈액이 담긴 주사기를 연동 펌프의 유출 파이프로 교체하고, 5 mL 수집 주사기가 연결된 두 번째 나비바늘을 좌심실에 삽입합니다. 이제 연동 펌프를 분당 약 5 mL의 속도로 작동시키고, 관류액이 진한 빨간색에서 옅은 빨간색으로 변할 때까지 관류액으로 오염된 초기 혈액 수 mL를 수집 주사기로 부드럽게 수집합니다.그 후, 펌프를 멈추지 않은 상태에서 5 mL 수집용 주사기를 20 mL 수집용 주사기로 빠르게 교체하고, 분당 7 mL의 속도로 폐 관류액 20 mL를 수집하여 쥐의 변연성 폐백혈구를 회수합니다. 폐의 색상이 연한 붉은색에서 투명한 흰색으로 점차 변하는 것을 확인하며, 이는 관류가 성공적으로 이루어졌음을 나타냅니다. 관류액의 전체 부피가 모두 수집되면 연동 펌프의 흐름을 중단하고 수집된 관류액을 튜브로 옮깁니다.그 다음 관류액을 원심 분리하고 상층액을 흡인합니다. 연동 펌프 라인과 버터플라이 바늘에 헤파린 처리된 PBS를 흘려보내 기포를 제거합니다. 마우스의 변연성 폐 백혈구를 수집하려면, 호흡이 멈추는 즉시 멸균 가위와 치과용 조직 핀셋을 사용하여 검상돌기까지 복부 정중선 절개를 실시함으로써 복강과 흉강을 엽니다.다음으로, 포셉을 사용하여 흉골을 들어 올리고 양쪽 늑골을 절단합니다. 흉골에 지혈鉗(hemostat)를 고정하고 늑골을 머리 쪽(rostrally)으로 접어 심폐 복합체를 노출시킵니다. 간으로의 역류 관류를 방지하기 위해 대정맥을 지혈鉗로 집고, 심장의 우심실에 버터플라이 바늘을 삽입합니다.그런 다음, 나비 바늘을 우심실에 유지한 상태에서 나비 바늘을 연동 펌프의 유출 파이프에 연결하고, 2 mL 수집용 주사기가 연결된 두 번째 나비 바늘을 좌심실에 삽입합니다. 펌프를 약 2 mL/min의 속도로 작동시킵니다. 관류액의 색이 진한 빨간색에서 연한 빨간색으로 변할 때까지, 관류액으로 오염된 첫 1 mL의 혈액을 수집용 주사기에 조심스럽게 수집합니다.그 후, 연동 펌프를 중단하지 않은 상태에서 2 mL 수집용 주사기를 10 mL 수집용 주사기로 빠르게 교체하고, 분당 4 mL의 관류 속도로 폐 관류액 10 mL를 수집합니다. 폐의 색상이 옅은 붉은색에서 투명한 흰색으로 점진적으로 변하는 것을 통해 관류가 성공적으로 이루어졌음을 확인합니다. 모든 폐 관류액을 수집하면 연동 펌프의 흐름을 중단하고 수집된 관류액을 튜브로 옮깁니다.그런 다음 관류액을 원심 분리하고 상층액을 흡입하여 제거합니다. 변연화 폐 구획은 순환 백혈구에서 관찰되는 것과는 다른 백혈구 하위 집단 조성을 나타냅니다. 실제로 과립구, 단핵구, 자연 살해 세포를 포함한 선천성 면역세포가 변연화 폐 백혈구 집단의 50% 이상을 차지합니다.순환 세포 구획의 30% 미만과 비교됩니다. 반면, T 세포와 수지상 세포 집단은 순환 세포에 비해 주변부 폐 구획에서 더 낮은 비율로 발견됩니다. 전체적인 자연 살해 세포의 총수는 비슷하지만, 대형 자연 살해 세포는 순환 세포 구획보다 주변부 폐 구획에서 3배 더 높은 비율로 존재합니다.또한, 적어도 두 가지의 서로 다른 종양 세포주를 대상으로 한 표준 크로뮴 방출 분석법(chromium release assay)으로 측정한 결과, 주변부 폐 구획(marginating-pulmonary compartment) 유래 자연살해세포의 종양 세포 용해 능력이 순환 자연살해세포의 능력보다 더 큰 것으로 나타났습니다. 아울러, MADB106 표적을 사용했을 때 in vivo Poly I:C 투여를 통한 면역 자극은 순환 자연살해세포보다 주변부 폐 자연살해세포의 세포독성에 더 깊은 영향을 미칩니다. 이 기술을 완전히 익히고 적절하게 수행한다면, 몇 분 내에 완료할 수 있습니다.이러한 기술을 통해 MP 백혈구를 선택적으로 수집할 수 있습니다. 이들 백혈구에 대한 연구는 특히 순환하는 비정상 세포 및 폐 관련 질환의 제어와 관련하여 생물학적 및 임상적 중요성에 대한 우리의 이해를 증진시킬 것입니다. 이 절차 이후, 수집된 세포는 유세포 분석, PCR 또는 기타 관심 있는 분석법을 통해 특성을 분석하고 평가할 수 있습니다.이 영상을 시청한 후에는 변연화 폐 백혈구(marginating-pulmonary leukocytes)를 수집하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

selective-harvesting-of-marginating-pulmonary-leukocytes

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

마우스 폐 돌기 세포의 고도 정화 준비가 설명되어 있습니다. 구체적인 중점이 종래의 돌기 세포 집합의 고립에 제공됩니다.

마우스 폐에 돌기 세포의 분리

여기, 우리는 폐에 타고난 면역 세포를 거주하고 polyanhydride의 nanoparticles와 공동으로 문화에 대한 응답으로 자신의 활성화를 검토하고 있습니다 murine 폐포 macrophages를 수확을위한 프로토콜을 설명합니다.

Polyanhydride의 Nanoparticles에 의해 유도된 Murine Macrophages 폐포 수확 및 평가 세포 활성화

이 비디오에서는 강제 관류에 의해 쥐의 간에서 변두리 간 백혈구를 분리하는 방법을 보여줍니다.

Isolation of Marginating Hepatic Leukocytes from a Mouse Liver(마우스 간에서 간 백혈구 가장자리 분리)

이 프로토콜은 소화 효소, 밀도 구배 분리, 수지 밀착성 및 CD146 + 자성 비드의 선택을 이용하여, 래트에서 일차 폐 상주 간엽 기질 세포를 얻기위한 분리 기술을 설명한다.

CD146의 분리<sup&gt; +</sup쥐 폐에서&gt; 주민 폐 중간 엽 기질 세포

Marginating-hepatic leukocytes는 다른 백혈구 집단에 비해 독특한 특성과 뚜렷한 면역 기능을 나타냅니다. 여기에서 우리는 쥐 또는 생쥐의 간을 강제 관류하여 이 특정 간 세포 집단을 선택적으로 수확하는 방법을 설명합니다. 변두리-간 백혈구는 간 관련 질환 및 전이에 대한 감수성을 결정하는 데 중요한 것으로 보입니다.

Marginating-간 백혈구의 선택적 수확

이 프로토콜에 설명 합니다 제거 하 고 그들은 바로 심장 도관 법 동안에 폐 동맥 쐐기는 하는 동안 남아 백조 Ganz 카 테 터의 풍선 도움말에는 폐 동맥 내 피 세포 (PAECs)의 정화 부착 하는 deflated 풍선 환자의 몸에서 제거 다음.

오른쪽 심장 도관 법 후 백조 Ganz 카 테 터의 풍선 팁에서 내 피 세포의 수확

우리는 폐 HIV 저수지를 평가하기 위하여 항레트로바이러스 치료에 만성 HIV 에 감염된 개별에게서 기관지 정맥 세척 액 및 일치한 말초 혈액을 처리하는 방법을 기술합니다. 이러한 방법은 초과민성 중합효소 연쇄 반응에 의한 면역phenotyping 및 HIV DNA/RNA 정량화에 사용될 수 있는 고순도 CD4 T 세포 및 폐포 대식세포의 획득을 초래한다.

기관지 충혈 유체 및 폐포 대식세포 및 CD4+ T 세포 면역체노티핑 및 HIV 저수지 평가를 위한 일치하는 혈액 처리

최근에 확인된 두개내 세포 유형인 연수막 림프 내피 세포(LEC)는 기능이 잘 이해되지 않습니다. 이 연구는 마우스에서 LLEC를 수확하고 시험관 내 1차 배양을 확립하기 위한 재현 가능한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 연구자들이 LLEC의 세포 기능과 잠재적인 임상적 영향을 탐구할 수 있도록 설계되었습니다.

연수막 림프 내피 세포의 수확 및 1차 배양

이 프로토콜은 인플루엔자 감염 후 안정적인 상태에서 마우스 폐에서 살아있는 면역 및 비면역 집단을 격리하는 방법을 자세히 설명합니다. 또한 상피 및 골수성 세포 부분 집합을 식별하기 위한 게이팅 전략을 제공합니다.

Isolation of Live Myeloid and Epithelial Cell Populations from the Mouse Lung(쥐 폐에서 살아있는 골수성 및 상피 세포 집단의 분리)

murine 두뇌에서 침투 leukocytes을 얻는 빠른 방법을 설명합니다. 이 방법은 연속 Percoll 기울기와 백혈구 - 농축 레이어를 선택하고 정화 불연속 Ficoll 기울기를 사용합니다. 절연 leukocytes 그때 흐름 cytometric 측정에 의해 특징 수 있습니다.

브레인 - 침투 Leukocytes의 분리

배우세요 폐 모세혈관 내피에 부착하는 marginating-pulmonary 백혈구를 쥐와 쥐에서 선택적으로 수확하는 방법을. 이 기술은 폐 면역학 및 질병 감수성 연구에 필수적인 특정 백혈구 집단을 정확하게 분리합니다.

Marginating - 폐 백혈구의 선택적 수확

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