마우스 초음파 발성을 녹화 사회 커뮤니케이션을 평가하는

이 프로토콜의 전반적인 목표는 새끼 쥐 또는 성인의 초음파 발성을 기록하고 분석한 다음 mouseTube 데이터베이스에서 데이터를 공개적으로 사용할 수 있도록 하는 것입니다. 우리는 이전에 자폐증의 돌연변이를 확인했으니, 이제 이 유전자들의 역할을 이해하고자 합니다. 우리는 마우스 모델을 사용하고 있으며, 특히 마우스의 초음파 발성을 살펴보고 있습니다.

이 모델은 신경과학 분야의 핵심 질문을 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다. 예를 들어, 유전적 돌연변이가 자폐증과 같은 신경 정신병 장애에 대한 마우스 모델에서 사회적 의사 소통에 미치는 영향. 이 프로토콜의 주요 장점은 마우스 주소 지정 발성이 안정적으로 유도된다는 것입니다.

연구 비교 간의 개선을 위해 컨텍스트 정보의 표준화를 선호해야 합니다. 이 방법은 또한 mouseTube 데이터베이스를 사용하여 마우스 초음파 내 통신에 대한 지식을 향상시킵니다. 생쥐를 준비하고 갓 태어난 새끼를 얻은 후 새장을 설치하여 울음 소리를 녹음하십시오.

방음 상자 또는 스티로폼 상자를 사용하십시오. 먼저 온도계를 설정하여 내부 온도를 모니터링합니다. 다음으로, 상자 상단의 구멍을 통해 콘덴서 초음파 마이크를 내려 마이크의 멤브레인이 바닥에서 약 12-15cm 높이가되도

이제 마이크를 컴퓨터 사운드 카드에 연결합니다. 실험하지 않은 강아지를 녹음 상자 안의 깨끗한 플라스틱 강아지 홀더에 넣고 닫습니다. 피크 녹음 사운드가 사용 가능한 전체 amp왜곡 없이 위도

실험 중에는 이 설정을 변경하지 마세요. 이제 실험적 측정을 위해 강아지를 깨끗한 플라스틱 컵에 가능한 한 부드럽고 빠르게 넣으십시오. 그런 다음 강아지를 마이크 아래에 놓고 가능한 한 부드럽고 조용하게 상자를 닫습니다.

그런 다음 16비트, 300킬로헤르츠를 기록하여 고품질 데이터 세트를 만듭니다. 최대 5분 동안 녹음한 후 강아지를 제거합니다. 발 문신을 기록한 다음 디지털 온도계로 피부 온도를 측정하십시오.

이제 수성 잉크를 사용하여 강아지에게 작은 표시를 하고 둥지로 되돌려 놓습니다. 테스트 사이에 10% 에탄올을 사용하여 컵을 세척하고 완전히 말리십시오. 성인용 테스트 케이지의 경우 저강도 백색광으로 조명되는 방음 상자에 맞는 Plexiglas 케이지를 사용하십시오.

비눗물로 케이지를 청소하고 말리고 2cm의 새 침구로 채 웁니다. 케이지의 한쪽 모서리에 마이크를 고정하고 마이크의 각도를 조정하여 전체 케이지의 소리를 캡처합니다. 다음으로, 방음실 위에 비디오 카메라를 배치하여 마이크가 모서리를 가리지 않고 테스트 케이지의 표면을 볼 수 있도록 합니다.

실험하지 않은 동물 쌍을 사용하여 이전과 같이 녹음의 게인을 설정합니다. 실험을 위해 먼저 한 마리의 동물을 우리에 들여보내 거주자 역할을 채웁니다. 20분 동안 습관화하십시오.

이 시간 동안 기준선 기록이 이루어질 수 있습니다. 그런 다음 비디오 및 오디오 녹음을 시작하고 신인 역할을 채울 동성의 두 번째 동물을 소개합니다. 두 번째 터치가 케이지에 닿을 때 신호음을 트리거하여 녹음을 동기화합니다.

필요한 시간(예: 4분) 동안 동물의 상호 작용을 기록합니다. 이 검사를 준비하기 위해 검사 당일 이른 아침에 각 여성의 질 도말 검사를 받아 발정 주기의 상태를 확인합니다. 암컷의 꼬리를 잡고 케이지 그리드를 잡도록 합니다.

피펫을 사용하여 20 마이크로 리터의 PBS를 주입하고 회수하여 질을 여러 번 헹굽니다. PBS가 질 밖으로 흘러나올 때 주의하십시오. 약간 흐리면 충분한 세포가 있습니다.

점액이 생성되지 않도록 조심스럽게 수행하십시오. 슬라이드에 샘플을 펼칩니다. 한 번에 최대 4개까지 검사할 수 있습니다.

계속하기 전에 샘플을 건조시키십시오. 흄 후드 아래에서 PBS의 0.1 몰 May-Grunwald 용액의 수조에서 슬라이드를 3 분 동안 배양합니다. 그런 다음 슬라이드를 PBS 욕조로 1분 동안 옮깁니다.

그런 다음 슬라이드를 PBS의 5% 중량 Giemsa R 수조로 옮깁니다. 10분 후 새 PBS로 슬라이드를 1분 더 헹굽니다. 그런 다음 얼룩진 슬라이드를 검사합니다.

샘플에서 핵이 없는 크고 각질화된 상피 세포만 보이고 파란색으로 염색되면 암컷은 완전히 발정된 것입니다. 그러한 암컷만 테스트에 사용할 수 있습니다. 이제 남성을 거주자로 하여 테스트 케이지를 설정합니다.

10분 동안 습관을 들이고 필요한 경우 기본 오디오 녹음을 할 수 있도록 합니다. 그런 다음 비디오 및 오디오 녹음을 시작하고 완전히 발정한 여성을 소개합니다. 경고음을 사용하기 전과 같이 레코드를 동기화합니다.

그런 다음 4분과 같이 필요한 만큼 동물들이 상호 작용하도록 합니다. 기록이 완료되면 마우스를 각각의 우리로 되돌립니다. 파스퇴르 연구소의 mouseTube 웹사이트에 데이터를 업로드하려면 먼저 로그인하십시오.

Strains 버튼을 클릭하여 기록된 마우스 변형률이 mouseTube 데이터베이스에 존재하는지 확인합니다. 그렇지 않은 경우 관리자에게 생성하도록 요청하십시오. 다음으로, 동물 피사체를 만듭니다.

기록된 동물의 식별 코드를 입력합니다. 나중에 데이터를 쉽게 검색할 수 있도록 그룹으로 수집합니다. 그런 다음 사용된 프로토콜에 대한 설명을 제공합니다.

이제 각 녹음 세션에 대한 실험을 만듭니다. 프로토콜, 기록된 개인 그룹, 사용된 하드웨어 및 소프트웨어, 세부 사항을 지정합니다. 이 실험은 발성 파일에 해당하는 모든 메타 데이터를 수집합니다.

다음으로, 발성 파일에 대한 링크를 만듭니다. 먼저 목록에서 실험을 선택합니다. 그런 다음 발성 파일의 URL을 복사하여 Files to Link 열의 해당 필드에 붙여넣습니다.

이 데이터베이스에 넣는 링크가 실제로 좋지 않을 수 있습니다. 발성 파일을 호스팅하는 서버가 커뮤니티 구성원을 위해 기관 외부에서 액세스할 수 있는지 확인합니다. 세부 정보(Details)의 메모(Notes) 섹션에서 필요에 따라 제공합니다.

예를 들어, 오디오 파일과 함께 제공되는 비디오 파일에 대한 링크를 입력하도록 지정합니다. 마지막으로, 항목을 만든 후 유효성을 검사합니다. 각 파일에 대해 각 상자를 채울 필요는 없습니다.

필요에 따라 입력한 링크를 수정합니다. 자폐 스펙트럼 장애와 관련된 유전자인 Shank2의 발현이 부족한 마우스를 특성화했습니다. 이 쥐는 비정형적인 음성 의사소통을 보였는데, 처음에는 암컷과의 상호작용에서 통화율 감소로 관찰되었습니다.

다음으로, 강아지에서 성견으로 바뀌는 5개의 울음소리의 표준 레퍼토리를 평가했습니다. 측정은 먼저 P2 강아지로 이루어졌습니다. 보컬 레퍼토리는 P6 새끼에서 변경되지 않았습니다.

P10에서도 보컬 레퍼토리는 여전히 동일했다. 이 시점까지, Shank2 null 마우스에 의해 나타난 결핍은 그리 크지 않았다. 그러나 성인이 되면서 유전자형과 관련된 차이가 분명해졌습니다.

수컷이 발정기에 암컷과 상호 작용할 때, 돌연변이 수컷이 하는 짧고 구조화되지 않은 울음소리의 비율이 눈에 띄게 증가했다. 암컷 사이에서 들리는 호출 패턴에서 Shank2 null 암컷은 일반 암컷과 짝을 이룰 때 더 짧고 구조화되지 않은 호출을 더 많이 방출했을 뿐만 아니라 덜 복잡한 호출과 빈도 점프 호출을 더 적게 방출했습니다. 수컷 또는 암컷의 한 쌍의 Shank2 null 마우스는 야생형 새끼 짝 쌍에 비해 더 낮은 피크 주파수로 발성했습니다.

행동 사건과 발성 방출에 대한 분석을 동기화함으로써 돌연변이 마우스의 초음파 발성 방출의 맥락에서 장애를 식별할 수 있었습니다. Shank2 null 마우스는 새로 온 쥐와 신체적 접촉을 할 때 덜 자주 소리를 냈고, 특히 항문 생식기 부위를 킁킁거릴 때 더 자주 소리를 냈습니다. 새로 온 사람들이 Shank2 null 마우스의 시야에 있을 때 더 많은 발성이 들렸습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 마우스 초음파 발성을 녹음하고 mouseTube 데이터베이스에 데이터를 업로드하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 절차를 시도하는 동안 마우스 성대 장벽의 높이와 내부 생존 능력을 고려하여 충분한 개별 사전 조건을 기록하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.