Name: 암의 설립은 인간 기존의 골육종에서 세포 배양 줄기 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: 배우세요 인간 골육종에서 암 줄기세포를 분리하는 방법을. 구형집합체 형성 분석을 통해 CD44, CD105, Stro-1 표지자로 줄기세포 특성을 확인하고, 표적 항암 치료법 개발을 위한 연구에 활용하세요.

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이 연구는 ITT(Istituto Toscano Tumori) Grant Proposal 2010의 지원을 받았습니다.

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저자는 경쟁적인 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

암줄 기세포는 종양의 대부분이 특정 세포 부분 집합의 식별을 허용하는 여러 속성이 있습니다. 이러한 표현식, ATP 결합 카세트 다제 유출 수송차 28, 32, 33, 또는 ALDH 32 해독 효소의 발현의 상향 조절을위한의 과발현을위한 화학 요법 제를 세포 독성 취득 된 저항 이러한 특성에 기초 된 CSC를 분리 예컨대 CD133, CD44, CD34, CD90, 및 기타 30, 34, 35, 41, 여러 가지의 방법으로서, 특정 표면 마커의 42-44를 개발되었다. 이러한 기술 중 하나는 비 - 부착 조건 하에서 성장 된 CSC의 용량에 기초한 구 형성 분석이다. 구체를 형성하는 조직 줄기 세포 및 CSC 추가의 능력은 제 레이놀즈 등. (37)에 의해 신경줄 기세포의 식별에 관한 연구에서 설명 하였다. 그 후, 깁스 등. (38) 우리를이러한 연구 에디션은 골 육종에서, 특히, 고형 종양에서 암줄 기세포를 분리 시작합니다. 우리는 깁스 등의 알에 도시 된 구 형성 분석 방법을 사용 할 수 있습니다. 기존의 OS 생검에서 얻은 OSA 세포주에서 암줄 기세포를 분리하기로 결정했습니다. 우리는 원래의 방법이 분석의 결과를 개선하기위한 다른 암세포에 대한 재현성을 용이하게하도록 적응. 구 형성 검정의 설립을 참조하여, 우리는 40,000 세포를 도금하는 것은 / 웰의 분석의 시작 부분에서 분리 세포를 유지하는 것이 좋다 것을 확인 하였다. 이 트릭은 구 식민지가 세포 응집하지 않은 부착 조건에서 성장하고 구형 콜로니를 형성하는 하나의 CSC의 특정 독점 용량에서 발생 가능성을 방지하는 것이 매우 중요합니다. 이 기능은이 분석의 특히 중요한 포인트입니다. 또한 구 형성의 양호한 비율을 구하는 것을 증명원래의 방법에 기재된 바와 같이 매일 성장 인자의 분취 량을 매 3 일 아닌 새로 고침하기에 충분하다. 본 연구에서는, 우리는 또한 설립 광범위하게 비 접착 조건에서 배양 할 때 형성되는 구형 콜로니를 분리하기위한 좋은 방법을 설명했다. 이 웰을 손상시키지 않고 각각 형성 가능한 분야의 많은을 분리하려고하는 것이 매우 중요하기 때문에이 단계는이 분석에서 중요하다. 단지 구체 아니라 분석 기간 동안 현탁액에 남아 있었던 단일 세포를 분리하는 것이 중요하다. 이 중요한 점을 극복하기 위해, 우리는 위의 그림과 같이, CSC 격리를위한 좋은 결과를 준, 특정 분리 방법을 개발했습니다. 분명히이 형성하는 모든 분야가 복구 될 수없는 가능성이 있지만, 손실 비율이 매우 낮다. 실제로, 우리는 그들이 결정 (커질 후 구를 분리하여 40 ㎛의 기공 필터를 사용할 수있을에드 약 100-200 세포). 이 격리 영역 형성을 정지하지만, 단 전지의 메틸 잔기의 일부가 가장 작은 구체를 여과 할 수있다. 프로토콜에 기재 한 바와 같이 제거는 철저한 여과에 의해 수행된다. 또한, 가장 작은 구형 콜로니 그에 따른 손실이 40 ㎛의 메쉬를 통해 큰 구형 콜로니의 선택은 하나의 구형 콜로니를 형성 할 수있는 높은 용량과 더 stemness로 된 CSC를 선택할 수 있습니다. 이러한 모든 수정은 분석 향상과 이해 ​​구 형성 검정의 원래있어서 가장 중요한 단계를 재현 된 CSC 공부 연구자 있도록 하였다. 분리 암줄 기세포에 대한 시험 관내 방법에 관한 연구 중 본 연구에서 암줄 기세포를 분리이 적응 구 형성 분석은 좋은 방법이 될 수있는 방법을 보여 목표OSA 세포주. 일본어 방법 및 상세한 분리 기술에 대한 적응은 효능 향상을 설명했다. 단시간에, CSC 추가의 상당수가 얻어 질 수 있고 여러 가지 실험에 사용 하였다. 따라서, 급속 OS-CSC 추가 특징 이중 스템 형 표현형을 연구하기 위해, 특히, 줄기 등의 표현형을 확인하는 것이 가능하다. 따라서,이 수정 된 분석은 암줄 기세포를 분리 및 생물학 연구를위한 좋은 방법이 될 수 있습니다. 미래에,이 방법은 추가로 적응도 희귀 고형 종양의 생검에 의해 얻어지는 다른 유한 암 세포주에서 암줄 기세포를 분리하는데 사용될 수있다. 이러한 OS 희귀 고형 종양에서 CSC 추가 분리 가능성뿐만 아니라, 특정 암에 대한 연구의 개선을 허용하지만, 또한 분리를위한 더 좋은 방법을 개발하는 암의 다양한 유형의 연구 및 생물학의 앞으로의 연구를 확장 이 중요한 세포의 부분 집합. 따라서, 우리와 같은본 연구에서 수행 한, 아마에 대한 책임이 특정 세포의 부분 집합에 관한 매우 구체적인 항암 치료, 분자 표적을 발견하고 개발의 최종 목표로, CSC 생물학의 연구를 통해 CSC 분리의 방법을 개선하는 것이 중요하다 주 종양의 유지 재발의 개발 및 여러 기관에서 전이의 기원. CSC 생물학의 연구는 항암 치료 후 생존율이 매우 가난한 유지하는 등의 OS와 같은 암의 치료에 예리한 될 수 치료법을 찾는 것이 중요합니다.

육종은 배아 중배엽 (1)에서 주로 발생하는 드문 악성 결합 조직 종양의 이종 그룹입니다. 다른 유형은 골 육종 및 연부 조직 육종을 포함한다. 뼈 육종은 비교적 드문 차 종양의 그룹, 골육종 (OS)를 포함한 여러 아형,로 구성되어 있습니다. OS, 뼈의 일반적인 기본 종양 중 하나는, 광범위한 임상 적, 조직 학적 및 분자 이질성 (2, 3)을 나타내는 중간 엽 악성 종양이다. 불행히도, OS 5, 어린이 및 청년 4에서 주로 발생하며 60 %를 차지 어린 시절 뼈 육종의 일반적인 조직 학적 아형은 6, 7. OS는 일반적으로 영향을 빠른 뼈의 성장을 특징으로 골격 영역 (예를 들면, 긴 뼈의 골 간단). 또한 수질 또는 중앙 OS라는 OS, 기존 OS의 조직 학적으로 서로 다른 아형 중 악성 종양의 높은 학년과 할당량 샤가80 % 8 재. 이 80 %는 60 % 종래 골아 OS 10 % chondroblastic OS, 및 10 % 섬유 아세포 OS 6, 8-10로 구성되어있다. 다른 OS 서브 타입은 역 형성, telangiectatic, 거대 세포가 풍부한 작은 세포 OS를 포함한다. 결합 수술 OS 관리 화학 요법의 진보에도 불구하고, 결과는 전이 11,12없이 환자 65-70%의 장기 생존율 불량 남아있다. 먼 재발 자주 전이로, 또는 덜 빈번 폐 전이 발생할 먼 뼈와 지방 재발 13. 전이는 종종 기존 치료에 저항. 이 저항은 10 년 무병 생존율 진단 14, 15, 전이성 질환을 가진 환자의 약 30 %가되는 이유이다. 정상 조직과 같이, 암 조직은 세포 유형의 이종의 집합으로 구성된다. 종양 내 세포 발달의 각 단계에 대응하는 것으로 보인다. 상관 없음 내ormal 조직 따라서 조직 항상성을위한 전구 세포 및 성숙한 세포를 제공 selfrenew 할 수있는 능력 세포의 서브 모집단을 상주. 마찬가지로, 암의 증식과 종양 전위 상이한 정도와 개발의 다른 단계에서 세포의 유사한 이종 집단으로 구성된다. 이러한 암 세포의 서브 세트는 암 줄기 세포 (CSC 추가)를, 종양 부피 (16)를 구성하는 다른 세포 계통을 따라서, 종양의 악성 가능성 selfrenew 및 유지 배타적 능력 세포 selfsustaining 생성 리저버를 구성 되나. 1990 년대에, 급성 골수성 백혈병에 대한 연구는 CSC의 소집단 (17), (18)의 존재에 대한 최초의 강력한 증거를 제공했다. 암줄 기세포는 이후함으로써 암 연구에서 가장 연구 주제 중 하나가되고, 고형 종양 (19)의 큰 숫자에서 고립되었다. 암줄 기세포는 실제로 정상 만드는 유전자의 돌연변이에 의해 정상 줄기 세포에서 발생할 수20-23 암 줄기 세포. 미세 환경과 여러 변형 돌연변이 및 상호 작용은 암줄 기세포를 예표 selfrenewal 용량과 불멸을 획득 ​​건강 전구 세포와 성숙 세포에 기여할 수있다. 이러한 변화에 대한 여러 가지 가설이있다. 건강 선조 건강한 성숙 세포 및 암세포 selfrenewal 관련 유전자 24-28을 활성화하여 줄기 같은 표현형을 획득하는 세포를 줄기 탈분화있다. 몇 가지 최근의 연구에도 불구하고, 암줄 기세포의 기원은 아직 발견해야합니다. 암줄 기세포의 특별한 특징은 능력이 다른 약물과 결합 된 수술과 화학 요법으로 구성 다중 치료 접근 방식을, 저항하는 것입니다. 최근의 연구는 암줄 기세포는 화학 요법 제를 세포 독성에 내성을 획득 할 수 있다는 것을 보여 주었다. 이 저항에 대한 가능한 설명은 ATP 바인딩 카세트 (ABC) 다중 약물 수송의 과발현을 포함한다 (즉,MDR1 및 BCRP1) 알데히드 데 하이드로게나 제 1 (ALDH1) 및 / 또는 세포주기 동력학 30-33 변화로서 항암제 대사 효소의 과발현. 지금까지 설명 된 모든 이러한 개념의 직접적인 결과는 CSC의 하위 집단이 완전히 제거 된 경우에만 단 한 번의 CSC가 살아 경우 국소 재발이나 원격 전이가 발생할 수 있습니다 동안 암 치료가 효과적 일 것입니다. 이 환자 나중에 재발 많은 치료 초기에 효과적인 것으로 보인다 이유에 대한 가능한 설명을 제공하지만, 때문에 인간의 육종 (34), 특히 OS (35), 또는 다른 뼈와 연부 조직 암에서의 암줄 기세포의 발견은 큰 임상 적 중요성을 가지고있다. 따라서, 기존의 OS에 대한 미래의 전투에 대한 희망이 하위의 분자 특성에 OS-암줄 기세포 감사에 관한 혁신적인 약물의 개발에 따라 새로운 특정 표적으로 한 치료를 찾을 수 있습니다인구와 CSC 생물학의 연구에. 1992 년 줄기 세포의 일부는 성숙한 포유 동물의 뇌에 존재 여부를 조사 하였다 레이놀즈와 동료, 줄기 형 셀 (36), (37)로 의심되는 세포를 분리하는 방법을 개발 하였다.이 방법의 특정 기능에 기초 비 접착 조건 하에서 성장 될 때이 세포 구형 콜로니를 형성한다. 비슷한 기술이 골 육종 (38)의 줄기와 같은 세포의 모집단을 연구하기 위해 2005 년에 깁스와 동료에 의해 사용되었다. 분리 종래 OS의 종류의 일차 세포 배양 물로부터 OS-CSC 추가 특성화하기 위해 OS 세포주에이 기술을 적용하기로 결정했다. 여기서는 종래의 OS의 생검 인간 유래의 유한 차 세포주로부터 OS-CSC 추가를 분리하는데 사용될 수있다 &quot;sarcosphere 분석&quot;이라 구 형성 분석이 적응 방법을 서술. 우리는 또한 모든 기술 유를 설명이 분석에 의해 단리 세포주의 줄기 등 CSC 표현형 확인 나오지 : 그리고 암줄 기세포의 마커 인 CD133 유전자의) 다 능성 배아 줄기 세포 (는 ESC를 특성화하는 유전자의 발현의 1) 평가하는 단계; 2) 집락 형성 단위 (CFU) 분석; 3) 적당한 분화 조건에서 조골 세포 및 지방 세포로 분화하도록 이들 세포의 기능 평가; 면역 형광 염색 및 유세포 분석에 의한 중간 엽 줄기 세포 표면 마커 (MSC들) (즉, CD44, CD105 및 STRO-1) ~ 4) 연구; 이들 세포의 활성 ALDH 5) 평가.

<table><tbody><tr><td>Ca2+ 및 Mg2+를 사용한 Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS)</td><td>LONZA</td><td>BE17-513F</td><td>_</td></tr><tr><td>Dulbecco의 인산염 완충 식염수&nbsp; Ca2+ 및 Mg2+ (DPBS)</td><td>LONZA</td><td>BE17-512F</td><td>_</td></tr><tr><td>Porcine Trypsin 1:250</td><td>BD Difco</td><td>215310</td><td>용매: 디펜스. 재고 농도 : 분말</td></tr><tr><td>에틸렌 디아민 테트라 아세트산 디 소듐 염 이수화물 (EDTA)</td> <td>시그마-알드리치</td><td>E4884</td><td>용매 : DPBS. 재고 농도 :</td></tr><tr><td>Clostridium histolyticum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0130</td>의 분말 콜라겐 분해 효소 <td>용매 : 완충 용액, pH 7.4. 재고 농도 : 분말</td></tr><tr><td>디메틸 설폭 사이드 (DMSO)</td> <td>BDH 화학 물질 -VWR</td><td>10323</td><td>_</td></tr> <tr><td>영양소 혼합물 F-12 햄</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>F6636</td><td>용매 : 초순수 dH2O. 재고 농도 : 분말</td></tr><tr><td>2- 포스 pho-L- 아스코르브 산 삼 나트륨 염</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>49752</td><td>용매 : DPBS. 재고 농도: 5 mg/mL</td></tr><tr><td>&beta;-글리세롤 포스페이트 디소듐 염 펜타하이드레이트</td><td>시그마-알드리치</td><td>50020</td><td>용매: DPBS. 재고 농도 : 1M</td></tr><tr><td>인슐린. 인간 재조합</td><td>시그마-알드리치</td><td>91077</td><td>용매: NaOH 0.1 M. 재고 농도: 10 mM</td></tr><tr><td>3-이소부틸-1-메틸크산틴</td><td>시그마-알드리치</td><td>I5879</td><td>용매: DMSO. 재고 농도 : 500 mM</td></tr><tr><td>Indomethacin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I7378</td><td>용매 : DMSO. 재고 농도 : 200 mM</td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td>용매 : DMSO. 재고 농도:&nbsp; 1 mM / 100 &micro;M. 생물학적 활성을 유지하기 위해 액체 질소에 보관하십시오</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7524</td><td>_</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum South America&nbsp;</td><td>EUROCLONE</td><td>ECS0180L</td><td>_</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(PEN-STREP) 10,000 U/mL</td><td>LONZA</td><td>DE17-602E</td><td>_</td></tr><tr><td>메틸셀룰로오스</td><td>시그마-알드리치</td><td>274429</td><td>용매: 초순수 dH2O. 재고 농도: 2%</td></tr><tr><td>Putresceine dihydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5780</td><td>용매: 초순수 dH2O. 재고 농도: 분말</td></tr><tr><td>아포-트랜스페린&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-1147</td><td>용제: DPBS. 재고 농도: 25mg/mL</td></tr><tr><td>인간 표피 성장 인자(EFGF)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E5036</td><td>용매: DPBS pH 7.4. 재고 농도 : 10 &micro; g/mL</td></tr><tr><td>섬유아세포 성장 인자-기본 인간</td><td>시그마-알드리치</td><td>F0291</td><td>용매: DPBS + 0.2% BSA. 재고 농도 : 25 &마이크로; g/mL</td></tr><tr><td>셀렌산</td><td>시그마-알드리치</td><td>211176</td><td>용매: DPBS. 재고 농도 : 30 mM</td></tr><tr><td>프로게스테론</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>P8783</td><td>용매 : ETOH. 재고 농도 : 10 mM</td></tr><tr><td>Toluidine Blue O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>198161 용매 : 초순수 dH2O. 재고 농도 : 파우더</td></tr><tr><td>오일 레드 O</td><td>ICN 생화학</td><td>155984</td><td>용매 : 2- 프로판올. 재고 농도 : 분말</td></tr><tr><td>Naphtol AS-MX 인산염 나트륨 염</td><td>시그마 - Aldrich</td><td>N5000</td><td>용매 : DMSO. 재고 농도 : 파우더</td></tr><tr><td>패스트 블루 BB 솔</td><td>트 시그마 - 알드리치</td><td>F3378</td><td>용매 : 트리스 HCL, pH 9.0. 재고 농도 : 파우더</td></tr><tr><td>패스트 레드 바이올렛 LB 솔</td><td>트 시그마 - 알드리치</td><td>F3381</td><td>용매 : 트리스 HCL, pH 9.1. 재고 농도 : 분말</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민, 분획 V (BSA)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>A-4503</td><td>용매 : DPBS. 재고 농도 : 2 %</td></tr> <tr><td>Alizarin Red S</td><td>ICN Biochemicals</td><td>100375</td><td>용매 : 초순수 dH2O. 재고 농도 : 분말</td></tr><tr><td>포름 알데히드 용액</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>533998</td><td>4 %</td></tr> <tr><td>Triton-100X</td><td>MERCK</td><td>11869</td><td>용매 : DPBS. 재고 집중도: 0.2%. 위험 - 화학 물질 후드 아래에서만 사용</td></tr><tr><td>Calcein</td><td>MERCK</td><td>2315</td><td>용제: DPBS . 재고 농도 : 200 & 마이크로; g/mL</td></tr><tr><td>2-프로판올</td><td>MERCK</td><td>109634</td><td>위험 - 화학 후드</td></tr><tr><td>Ab-CD105 아래에서만 사용하십시오. &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (마우스 단클론 [SN6]에서 CD105 (FITC)</td><td>Abcam</td><td>ab11415</td><td>액체. 응용 프로그램:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 유세포 분석 (Flow Cyt)</td></tr><tr><td>Ab-CD44&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (마우스 단클론&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; [F10-44-2]에서 CD44로(PE/Cy7&reg;) )</td><td>Abcam</td><td>ab46793</td><td>액체. 응용 프로그램:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 유세포 분석 (Flow Cyt)</td></tr><tr><td>Ab-CD45&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (마우스 단클론&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; [MEM-28]에서 CD45(PerCP))로&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab65952</td><td>액체. 응용 프로그램:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 유세포 분석 (Flow Cyt)</td></tr><tr><td>Ab-CD105&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (인간 CD105 정제 항체)&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>MHCD10500</td><td>용매: DPBS. 재고 농도 : 동결 건조. 응용 프로그램: 면역형광 염색 (IF)</td></tr><tr><td>Ab-CD44&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (항-CD44 항체)&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>EPR1013Y(ab51037)</td><td>용제: DPBS. 재고 농도 : 동결 건조. 응용 프로그램: 면역형광 염색 (IF)</td></tr><tr><td>Ab-Stro-1&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (마우스 안티 STRO-1)&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>398401</td><td>용매: DPBS. 재고 농도 : 동결 건조. 응용 프로그램:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 유세포 분석(Flow Cyt)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 면역형광 염색(IF)</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (항토끼 IgG (Alexa Fluor 488 당나귀 항토끼 IgG (H+L))</td><td>Invitrogen</td><td>A-21206</td><td>용제: DPBS. 재고 농도 : 동결 건조. 응용 프로그램: 면역 형광 염색 (IF)</td></tr><tr><td>FITC 안티 마우스 IG (FITC-토끼 안티 마우스 IgG (H+L))</td><td>Invitrogen</td><td>61-6511</td><td>용매: DPBS. 재고 농도 : 동결 건조. 응용 프로그램:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 유세포 분석(Flow Cyt)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 면역형광 염색 (IF)</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 635 Phalloidin&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A34054</td><td>용제: DPBS. 재고 농도 : 동결 건조. 응용 프로그램: 면역 형광 염색 (IF)</td></tr> <tr><td>AutoMACS&trade; 실행 버퍼 MACS 분리 버퍼</td><td>Miltenyi</td><td>130,091,221</td><td>액체. 4 &deg에 저장; C</td></tr><tr><td>QIAzol&reg; 용해 시약</td><td>QIAGEN</td><td>79306</td><td>위험 - 화학 후드</td></tr><tr><td>QUANTITECT&reg 아래에서만 사용하십시오. &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 역전사 키트</td><td>QIAGEN</td><td>205314</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>엽록소</td><td>시그마-알드리치</td><td>C2432</td><td>액체. 위험 - 화학물질 후드 아래에서만 사용</td></tr><tr><td>층류 후드</td><td>GELAIRE</td><td>BSB6A</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>케미컬 후드</td><td>ARREDI TECNICI&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 빌라</td><td>모델lo&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 다이나믹A</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>EPPENDORF</td><td>5415R</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>레이저 스캐닝 컨포칼 현미경 LSM 5109 메타&nbsp;</td><td>자이스</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>iCycler PCR 열순환기&nbsp;</td><td>바이오라드</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>싸이플로우&reg; 「공간」NBSP;</td><td>(파르텍)</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>인버티드 마이크르포스코프 액시오버트 200M&nbsp;</td><td>자이스</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>냉동 용기 ,</td><td>Nalgene</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>오리지널 피펫-에이드</td><td>pbiBrand</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>마이크로피펫</td><td>EPPENDORF</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>유리 파스퇴르 피펫</td><td>SIGMA</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>VICTOR3&trade; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>퍼킨 엘머</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>원뿔형 튜브&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (15 및 50 mL)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>BD FALCON</td><td>352096 (15 mL용)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 352070 (50 mL용)</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>24-웰 클리어 플랫 바닥 TC-처리된 멀티웰-셀-배양 플레이트</td><td>BD 팔콘</td><td>353047</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>6-웰 클리어 플랫 바닥 초저 첨부 다중 웰 플레이트</td><td>CORNING</td><td>3471</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>혈청학적 피펫&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (5 및 10 mL)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>BD FALCON</td><td>357543 (5 mL용)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 357551 (10mL용)</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>주사기 (5mL)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>비|브라운</td><td>4617053V</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>페트리 접시 100X20 mm&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>BD 팔콘</td><td>353003</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>R&ouml; hren 튜브&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (3.5mL, 55x12mm, PS)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>사르스테트</td><td>55,484</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>페트리 접시 60X15 mm&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>BD 팔콘</td><td>353004</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>크라이오비얼 1.5 mL&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>NALGENE</td><td>5000-1020</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>세포 배양 플라스크 25 cm&sup2; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>BD 팔콘</td><td>353014</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>나일론 네트 필터, 친수성</td><td>MERCK</td><td>NY4104700</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>Swinnex 필터 홀더</td><td>MERCK</td><td>SX0002500</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>페리 핀셋&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>랜싯</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>덤스</td><td>_</td><td>_</td><td>_</td></tr></tbody></table>

암의 설립은 인간 기존의 골육종에서 세포 배양 줄기

Establishment of Cancer Stem Cell Cultures from Human Conventional Osteosarcoma

골육종 (OS)에 대한 치료에 현재 향상 암 환자의 생명을 연장했지만 전이가 발생했을 때, 5 년 생존율은 여전히 ​​좋지. 암 줄기 세포 (CSC) 이론은 종양을 유지하고 약제 요법에 저항 할 수있는 능력을 포함한 줄기 같은 특성을 갖는 종양 내 종양 세포의 서브 세트가 있음을 보유하고있다. 따라서, OS의 생물학 및 병인에 대한 이해는 특정 서브 세트를 박멸 및 환자군 질병률 및 사망률을 감소시키는 치료 표적의 개발을 진행시키기 위해 필요하다. , 암줄 기세포를 분리 암줄 기세포의 세포 배양을 수립, 그들의 생물학을 공부하는 것은 OS 생물학 및 병인에 대한 우리의 이해를 향상시키는 중요한 단계입니다. OS의 생검에서 인간 유래 된 CSC-OS의 설립 nonadhere 하에서 3 차원 줄기 세포 배양 물을 만들 수있는 능력을 포함하여, 여러 가지 방법을 사용 가능하게 된NT 조건. 이러한 조건에서, CSC 추가 딸 줄기 세포에 의해 형성된 콜로니 구형 플로팅을 만들 수있다; 이 식민지는 &quot;세포 분야&quot;라고되어있다. 여기서는 OS 생검에서 얻어진 종래의 OS의 일차 세포 배양 물로부터 CSC 배양을 설정하는 방법을 설명한다. 우리는 명확하게 암줄 기세포를 분리하고 특성화하는 데 필요한 여러 구절을 설명합니다.

뼈 육종 암 줄기 세포의 존재 (CSC 추가)는 최근에 발병에 연결되어있다. 이 글에서, 우리는 비 접착 조건에서 성장하는 암줄 기세포의 능력을 사용하여 기존의 골육종 (OS)의 인간 생체 검사에서 얻은 기본 세포 배양에서 암줄 기세포의 분리를 제시한다.

The current improvements in therapy against osteosarcoma (OS) have prolonged the lives of cancer patients, but the survival rate of five years remains ...

이 에세이의 전반적인 목표는 인간 골육종에서 유래한 한정 세포주로부터 암 줄기세포를 분리하는 것입니다. 이 연구의 주요 장점은 종양학 분야의 다른 연구자들에게 체외(in vitro)에서 암 줄기세포를 분리하는 방법을 명확하게 제시한다는 점입니다. 이렇게 분리된 세포는 골육종 및 기타 고형암에 대한 치료법 연구에 활용될 수 있습니다.일반적으로 이 실험에 익숙하지 않은 연구자들은 육종 콜로니를 분리하는 방법을 모를 경우 어려움을 겪을 수 있습니다. 분리 단계는 실제로 수행하고 이해하기 어렵기 때문에 이에 대한 시각적 시연이 매우 중요합니다. 우리는 구체 형성 분석(sphere formation assay)에 관한 문헌을 읽었을 때 처음으로 이 기술에 대한 아이디어를 얻었습니다.Gypsum 및 공동 연구자들에 의해 기술되었습니다. 절차 시연은 박사 과정 학생인 Dr. Gaia Palmini와 본 실험실의 기술자인 Dr. Roberto Zonefrati가 진행하겠습니다. 먼저, 필요한 모든 배양액을 준비하십시오.소화 완충액 및 실험 과정에 필요한 기타 용액들을 준비합니다. 다음으로, 확진된 세침 흡인 또는 수술적 생검 조직에서 골육종을 분리하여 골육종 유한 세포주를 구축합니다. 그리고 동반된 텍스트 논문에 기술된 대로 얻어진 세포를 계대 배양합니다.골육종 세포 배양이 확립되고 플레이트의 세포 밀도가 포화 상태에 가까워지면, 흡입법으로 배지를 제거하고 세포를 플레이트에서 분리하기 위해 트립신 처리합니다. 세포를 새 튜브로 옮긴 후, 세포 덩어리를 분산시키기 위해 세포 현탁액을 파이펫으로 부드럽게 위아래로 섞어줍니다.다음으로, 세포 현탁액 10 µL를 채취하여 헤모사이토미터(hemocytometer) 챔버로 옮깁니다. 헤모사이토미터 챔버를 위상차 현미경 아래에 두고 현탁액 내의 세포 농도를 계산합니다. 그런 다음, 메토셀룰로오스(methocellulose)가 함유된 sarcosphere 성장 배지 35 mL에 세포 280,000개를 첨가하고, 파이펫을 사용하여 용액을 부드럽게 혼합하여 세포 덩어리를 분산시킵니다.세포 혼합물 5 mL를 초저부착(ultra low attachment) 6-웰 플레이트의 각 웰에 옮깁니다. 플레이팅 후, 도립현미경을 사용하여 세포의 형태와 개별적으로 잘 분리되었는지 확인합니다. 세포를 37 °C, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양합니다.성장 인자의 농도를 유지하기 위해 3일마다 각 웰에 beta FGF와 EGF의 신선한 알코올 추출물을 추가합니다. 7, 14, 20, 21, 28일에 현미경으로 세포를 관찰하여 sarcosphere 분석의 진행 상황을 확인합니다. 웰 중앙에 거대한 검은색 sarcosphere들이 모여 있는 것이 관찰되면 배양을 중단하고 분리 과정을 시작하십시오.사코스피어(sarcosphere)를 분리할 때가 되면, 멸균된 1,000 µL 피펫을 사용하여 사코스피어가 포함된 배지를 멸균 멤브레인 필터 홀더가 장착된 주사기로 옮깁니다. 사코스피어가 포함된 배지를 완전히 제거한 후, 웰에 5 mL의 성장 배지를 첨가하고 헹구어 줍니다. 그리고 남아 있는 모든 스피어를 수집합니다.그 다음, 현미경을 사용하여 모든 sarcosphere가 회수되었는지 확인하십시오. 회수가 완료되지 않았다면, 구체 수집이 완료될 때까지 웰을 다시 세척하십시오. 이어서, 구체에 손상을 주지 않도록 서스펜션을 막 필터 홀더를 통해 중력 여과하고, sarcosphere가 필터를 통과하지 않도록 확인하십시오.이 과정 동안, 멸균된 유리 파스퇴르 피펫을 조심스럽게 사용하여 기포를 제거하십시오. 모든 sarcosphere가 여과되면, 단일 세포를 확실히 제거하기 위해 성장 배지 10 mL를 시린지에 직접 넣고 압력을 가하지 않은 상태로 여과하여 여과 장치를 세척하십시오. sarcosphere 현탁액의 여과가 완료되면, 액체 필터를 폐기하고 망 필터에 엉켜 있는 sarcosphere를 회수하는 데 세심한 주의를 기울여야 합니다.이제 필터 유닛을 분리하여 시린지에서 제거하십시오. 그리고 이를 100 mm 페트리 접시에 넣습니다. 멸균된 정밀 핀셋을 사용하여 멤브레인 필터 홀더에서 네트 필터를 제거하십시오.그리고 필터를 새로운 60 millimeter 페트리 접시에 옮깁니다. 그다음, 5 milliliters의 성장 배지를 추가하면서 넷 필터를 부드럽게 흔들어 세척하여, 막의 엉킴으로부터 sarcosphere를 분리시킵니다.다음으로, 멤브레인을 웰에 넣고 현미경 관찰을 통해 멤브레인에 엉켜 있는 구체(sphere)가 더 이상 없는지 확인합니다. 멤브레인을 다시 세척한 후, 여전히 엉켜 있는 구체가 있다면 현미경으로 멤브레인을 다시 확인합니다. 멤브레인에 더 이상 구체가 남아 있지 않으면, 사코스피어(sarcosphere)를 단층으로 성장시키기 위해 성장 배지에서 배양합니다.사코스피어(sarcosphere)로부터 얻은 골육종 암줄기세포의 성장을 관찰합니다. 60 mm 페트리 접시에서 세포가 약 90% 합류도(confluence)에 도달할 때까지 배양합니다. 본 기사에 수록된 다수의 표준 프로토콜 외에도, 분화 능력 평가, ALDH 활성 측정, 유세포 분석, 면역형광 염색 및 RT-PCR 분석 방법이 함께 제공되는 텍스트 프로토콜에 상세히 포함되어 있습니다.골육종 샘플은 세침 흡인 또는 외과적 절제를 통해 얻습니다. 적절하게 처리할 경우, 100 millimeter 페트리 접시에서 일차 배양이 합류(confluence) 상태에 도달하는 데 약 한 달이 소요됩니다. 세포 증식 후, 사코스피어(sarcosphere) 분석을 시작하기 위해 세포를 6-well 초저부착 플레이트에 분주합니다.이 플레이트는 세포를 부유 상태로 유지하며, 기질 부착을 방지합니다. 7일 후, 단일 세포들로 둘러싸인 여러 개의 작은 구형 콜로니가 관찰됩니다. 그리고 28일 후에는 여러 개의 커다란 sarcosphere가 관찰됩니다.구형 콜로니가 분리되면, 단일 근육구(sarcospheres)를 일반 부착 플레이트에 배양하여 줄기세포 유사 암세포를 증식시킬 수 있습니다. 면역형광 염색 결과, 증식된 세포들이 CD44와 CD105에 대해 양성을 보였고 Stro-1에 대해 중등도 양성을 보여 중간엽 줄기세포 유사 표현형을 나타냈습니다. RT-PCR 또한 세 가지 배아 줄기세포 표지 유전자의 발현을 통해 배아 줄기세포 표현형을 양성으로 나타냈습니다.Nanog, Oct 3/4, 그리고 Sox2입니다. 그리고 골육종 암 줄기세포의 마커인 CD133 유전자입니다. 본 영상에서 보여드린 상세한 분리 기술은 구체(sphere) 형성 분석의 가장 중요한 단계들을 이해하고 재현하는 방법을 제시함으로써, 다른 연구자들이 암 줄기세포를 연구할 수 있는 길을 열어줄 것입니다.이 수정된 분석법은 암 줄기세포를 분리하고 그 생물학적 특성을 연구하는 데 유용한 기술입니다. 이 방법은 추가적인 조정을 통해 고형 종양 생검으로 얻은 다른 한정된 암 세포주에서 암 줄기세포를 분리하는 데에도 활용될 수 있습니다.결론적으로, 여러 유형의 종양에서 암 줄기세포를 분리함으로써 그 생물학적 특성을 연구할 수 있을 것입니다. 이는 궁극적으로 분자 표적을 찾아내고 특정 세포 하위 집단을 대상으로 하는 매우 특이적인 항암 치료법을 개발하는 것을 목표로 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 문서는 기본 셀 문화, 및 종양 세포에서 적혈구와 섬유 아세포의 contaminations를 제거하는 방법에 신선한 얻은 흑색 증 조직의 준비에 대해 설명합니다. 마지막으로, 우리는 어떻게 묘사...

환자 유래 세포 배양 및 CD133의 절연<sup&gt; +</sup흑종에서&gt; Putative 암 줄기 세포

직접 인체 조직에서 암 줄기 세포 (암줄 기세포)의 분리는 생물학적 특성 분석을위한 필수입니다. 또한 어려운 단계를 문제 해결에 대한 팁을 제공하면서이 원고는, 인간의 조직에서 전립선 암줄 기세포의 분리를위한 방법을 설명합니다.

인간의 전립선 암 샘플에서 암 줄기 세포의 분리

암 줄기 세포 (암줄 기세포는) 때문에 chemoresistance에 종양 재발에 관여하고 있습니다. 우리는 선택 및 난소 암 세포주에서의 확장 된 CSC 프로토콜을 최적화했다. 화학 요법 시스플라틴 세포를 치료하고 우리는 비 부착 CSC 문화에 대한 풍부 미디어를 홍보 줄기 세포에서 배양.

인간 세포주에서 Chemoresistant 난소 암 줄기 세포에 대한 심화 학습

시험관 분야 분석법은 암 줄기세포를 식별하는 데 일반적으로 사용됩니다. 여기에서는 단일 분석과 다중 세포 기반 구체 분석을 비교합니다. 더 힘든 단일 세포 기반 분석 또는 메틸셀룰로오스 보충제는 더 정확한 결과를 제공하는 반면, 액체 배지에서 수행되는 다중 세포 기반 분석은 세포 밀도의 영향을 크게 받을 수 있습니다.

다중 및 단일 세포 기반 분야 분석 실험을 사용하여 인간의 난소 암 세포의 줄기 세포 특성의 평가

다음 프로토콜 환자 파생 된 연 조직 육 종 (STS)의 주 문화는의 설립에 집중 한다. 이 모델 분자 배경 및 약리 프로필 이러한 드문 악성 종양의 더 나은 이해를 우리를 도울 수 및 STS 관리를 개선 하기 위한 추가 연구에 대 한 출발점을 대표할 수 있었다.

환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립

우리는 형광 활성화 세포 선별에 의한 인간 육종 환자 유래 이종이식에서 종양 을 자극하는 세포의 분리를 위한 상세한 프로토콜을 설명하고, 인간 백혈구 항원-1(HLA-1)을 음성 마커로 사용하고, 추가검증및 이러한 HLA-1 음성 종양 을 자극 하는 세포의 특성.

육종 환자 유래 이종이식에서 종양 을 발하는 세포의 격리 및 특성화

휴면 및 활성 암 세포 고기 양적 위상 이미징 사용 하 여 특징 이었다. 셀 확산, 마이그레이션, 및 형태 분석 통합 되었고 한 간단한 방법을 분석.

시간 레이블, 양적 위상 이미징 휴면 하 고 적극적인 인간 암 세포의 연구

여기, 우리 제시 프로토콜 유도 만능 줄기 세포 (Ipsc)의 세대에 대 한 Li Fraumeni 증후군 (LFS) 환자 파생된 섬유 아 세포, 중간 엽 줄기 세포 (MSCs)를 통해 Ipsc의 차별화에서에서 osteoblasts, 및 모델링 비보 tumorigenesis LFS 환자 파생 osteoblasts를 사용 하 여입니다.

Li Fraumeni 증후군 환자에서 파생 된 유도 만능 줄기 세포를 사용 하 여 다리를 모델링

이 방법론의 목적은 유세포분석및 서양세포분석과 서양계의 기능성 분석및 현상형 특성화를 사용하여, 구형 프로토콜을 사용하여 암 세포주 및 원발성 인간 종양 샘플에서 암 줄기세포(CSC)를 식별하는 것입니다. 얼룩.

부인과 및 유방암 종양에서 암 줄기 세포 구체 획득

본 프로토콜은 인간 골육종 조직을 이용하여 환자 유래 이종이식(PDX) 마우스 모델을 확립하는 방법을 설명한다.

인간 골육종 조직을 이용한 환자 유래 이종이식 마우스 모델 구축

배우세요 인간 골육종에서 암 줄기세포를 분리하는 방법을. 구형집합체 형성 분석을 통해 CD44, CD105, Stro-1 표지자로 줄기세포 특성을 확인하고, 표적 항암 치료법 개발을 위한 연구에 활용하세요.

암의 설립은 인간 기존의 골육종에서 세포 배양 줄기

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