Name: Marginating-간 백혈구의 선택적 수확 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: 배우세요 쥐나 래트 간에서 강제 관류법으로 marginating-간 백혈구를 선택적으로 수확하는 방법을. 이 기술은 간 실질 세포 없이 간 혈관에서 백혈구만 순수하게 얻어 면역학 연구에 활용할 수 있습니다.

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저자와 이 작업은 NIH/NCI 보조금 # R01CA172138(SBE에)의 지원을 받았습니다.

윤리 정책 : 동물 과목을 포함하는 절차는 텔 아비브 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 1. 쥐 프로토콜 <ol><li> 준비 <ol><li> PBS 헤파린 (30 유닛 / ml) 용액을 준비 인산 1 ㎖ 당 방부제없는 헤파린 30 단위 첨가하여 실온 (RT)에서 사용되는 식염수 (PBS) 1X 버퍼 용액. 동물 당 35 ml의를 계산합니다. </li><li> 기포를 제거하는 연동 펌프 라인과 나비 바늘을 통해 헤파린 PBS를 통과한다. </li><li> (중력 (건조) 설정에 적어도 30 분 동안 121 ° C에서 오토 클레이브) 가위 2 쌍, 무딘 칼날 집게, 2 지혈제 및 치아 조직 포셉 - 수술 도구를 소독. </li></ol></li><li> MH-백혈구의 간 및 컬렉션의 관류 <ol><li> 8 %의 이소 플루 란의 과다 복용으로 동물을 안락사. 예방 조치로서, 이소 플루 란을 포함하는 50 ML 튜브를 배치그 흉강을 열 때까지 쥐의 머리 주위 -soaked 패드. </li><li> 호흡 중단시 즉시 간 및 심폐 복잡한을 노출 복막와 가슴 충치를 엽니 다. 이 과정을 통해 출혈하지 마십시오. <ol><li> 특히, 상부 가슴 캐비티 수준으로 그들을 통해 절단 리브를 향해 대각선 양쪽에 손상을 내장하지 않고 낮은 복부 정중선 점에서 절개, 진행을 시작합니다. </li></ol></li><li> 약 분 내 (~ 250 그램 동물에서 6 ml)에 가능한 한 많은 혈액을 수집 주사기로 우심실에서. </li><li> 관류의 수집을 가능하게하는, 마음에 가능한 한 가까운 지혈과 꼬리 대정맥을 클램프. </li><li> 포털 정맥을 노출, 실험자의 오른쪽에있는 동물 외부 장과 장소를 잡아 당깁니다. </li><li> 가능한 꼬리 같이 문맥으로 연동 펌프 (25)에 연결된 G IV 카테터, 삽입하지만 비장 정맥에 주동이. </li><li> 지혈에 꼬리 대정맥에 5 ML의 주사기에 연결된 25 G 나비 바늘을,,, 삽입합니다. </li><li> 약 3 ml / 분의 속도로 연동 펌프의 전원을 켜고 조심스럽게 주사기로 혈액으로 오염 관류의 첫 번째 ml의를 수집합니다. 관류 색이 교대로 (약 3 ~ 5 ㎖) 붉은 창백한 때까지 계속합니다. 간장의 색이 밝은 갈색으로 변화하고 있음을 알 수 있습니다. </li><li> 연동 펌프를 정지하지 않고, 20 ml의 수확 주사기와 5 ml의 수확 주사기 교체 관류 고속화 (최대 4 ml / 분)을 이용 간 관류 적어도 20ml를 수집. 연속적으로 포집 주사기 내로 관류 흐름을 모니터링하고, (대정맥 벽 붕괴 통해 바늘을 방해 할 수있는) 너무 강한 진공을 피한다. </li><li> 간장의 색이 밝은 갈색으로 변합니다 때 관류을 종료합니다. </li></ol></li><li> 백혈구 추출 <oL&gt; <li> 24 400 XG에서 10 분 동안 관류 액을 원심 분리기 기음. </li><li> 뜨는을 기음 </li><li> 10 분 동안 400 XG에 10 ml의 PBS, 원심 분리기를 추가하고 뜨는을 대기음. 학습 목표에 기초하여, 그대로 조제를 사용하여, 또는 추가적인 정제를 (예를 들면, 밀도 구배 분리)을 수행. <ol><li> 구체적으로, 층 50 CC 폴리 프로필렌 원심 분리 튜브에서 밀도 구배 분리 질량 4㎖를 통해 관류 액 4 mL로. 휴식을 끄고 30 분 동안 754 XG, 실온에서 튜브를 스핀. </li><li> 수동 피펫으로 밀도 구배 분리 - 상층 액 계면에서의 단핵 층을 구하는 PBS로 세척하고, 5 ML 튜브에 삽입합니다. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. 마우스 프로토콜 <ol><li> 준비 <ol><li> 인산 1 ㎖ 당 방부제없는 헤파린 30 단위 첨가하여 실온 (RT)에서 사용되는 헤파린 PBS (30 단위 / ml) 용액을 준비 식염수 (PBS) 1X solutio 완충엔. 동물 당 20 ㎖를 계산합니다. </li><li> 기포를 제거하는 연동 펌프 라인과 나비 바늘을 통해 헤파린 PBS를 통과한다. </li><li> (중력 (건조) 설정에 적어도 30 분 동안 121 ° C에서 오토 클레이브) 가위 2 쌍, 무딘 칼날 집게, 2 지혈제 및 치아 조직 포셉 - 수술 도구를 소독. </li></ol></li><li> MH-백혈구의 간 및 컬렉션의 관류 <ol><li> 8 %의 이소 플루 란의 과다 복용으로 동물을 안락사. 예방 조치로서, 그 흉강을 열 때까지 마우스의 머리 주위에 이소 플루 란 젖은 패드를 포함하는 15 ML 튜브를 놓습니다. </li><li> 침대에 마우스의 사지를 고정합니다. </li><li> 그대로 다이아 프램의 하부 측면을 유지, 간 및 호흡 중단시 즉시 심폐 복잡한을 노출 복막와 가슴 충치를 엽니 다 (A 배수 흉강 풀을 만들 수 있습니다). 이 과정을 통해 출혈하지 마십시오. <ol><li> 특히, 아래에 절개를 시작합니다가슴 위쪽 캐비티 수준으로 그들을 통해 절단 대각선으로 갈비뼈를 향해 양쪽에 복부 정중선 손상 내부 장기가없는 점, 진행,. </li></ol></li><li> 간문맥 노출되도록, 실험자의 오른쪽 바깥 동물 장내 장소를 철수. </li><li> 지라 정맥에 포털 정맥 주동이에 연동 펌프에 연결된 30g 바늘을 삽입합니다. </li><li> 흉강에서 관류의 배수 및 수집 할 수 있도록 다이어프램 위의 하대 정맥을 잘라. </li><li> 약 3 ml / 분의 속도로 연동 펌프의 전원을 켜고 조심스럽게 흉강 풀에서 혈액으로 오염 관류의 제 3 ㎖를 수집합니다. </li><li> 이 관류를 폐기하십시오. 필요한 경우 생리 식염수를 사용하여 다시 같은 세척을 반복 한 경우에만 다음 간 관류를 수집하기 시작합니다. </li><li> 다시 개시까지 ㎖ / 분 (4)의 속도로 관류 및 사용 흉강에서 관류 액 10 ㎖를 수집주사기에 연결된 나비입니다. </li><li> 간장의 색이 밝은 갈색으로 변합니다 때 관류을 종료합니다. </li></ol></li><li> 백혈구 추출 <ol><li> 원심 분리기 (400)의 X g에서 10 분 동안 관류. </li><li> 뜨는을 대기음. </li><li> 10 분 동안 400 XG에 10 ml의 PBS, 원심 분리기를 추가하고 학습 목표를 바탕으로 뜨는을 대기음, 그대로 준비를 사용하거나 추가 정제를 (예를 들어, 밀도 구배 분리)를 실시하고 있습니다. <ol><li> 구체적으로, 층 50 CC 폴리 프로필렌 원심 분리 튜브에서 밀도 구배 분리 질량 4㎖를 통해 관류마다 4 용액. 휴식을 끄고 30 분 동안 754 XG, 실온에서 튜브를 스핀. </li><li> 수동 피펫으로 밀도 구배 분리 - 상층 액 계면에서의 단핵 층을 구하는 PBS로 세척하고, 5 ML 튜브에 삽입합니다. </li></ol></li></ol></li></ol>

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<li>Sorski, L., Melamed, R., Lavon, H., Matzner, P., Rosenne, E., Ben-Eliyahu, S. PNIRS Annual Scientific meeting, Seattle, , (2015).</li>
</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

본 명세서 간 관류 방법은 선택적 수확 할 수 있으며 간 백혈구 marginating의 고유 인구 공부. 또한 피트 셀 3이라고 간 NK 세포, 간장 정현파에있는 독특한 NK 세포군을 구성한다. 그들은 쥐, 마우스 (17)과 인간 (18, 19)에서 발견된다. 절연 주변 NK 세포에 비해 피트 셀 작은 세포질 과립 (20)의 더 많은 수, 및 LFA-1 (12) 표면 항원의 이상 발현이 나타났다, YAC-1 및 CC531s 표적 세포 라인 (20)에 대하여 높은 세포 독성을 증명 . 또한, 절연 혈액 NK 세포와 달리 세포 덩이 NK 내성 P815 세포를 용균 할 수있다. 랫트와 유사 구덩이 세포, 인간 간 NK 세포는 NK 세포 18,19 순환 비교하여 NK-K562 민감한 표적 세포에 대해 높은 독성을 가지고, 강한 NK를 Lyse 표적 세포 18에 도시 하였다. Ov...

간 사인 곡선은 유기체에 중요한 다양한 면역 활동의 많은 백혈구 아형이 포함되어 있습니다. 예를 들어,도 덩이 세포로 알려진 간을 marginating (MH), 자연 살해 (NK) 세포, 특징 형태학 큰 과립 림프구 (LG 생명 과학)와 기능적으로 혈액 - 확립에 대하여 간 저항을 가능 자연 세포 독성 용량 백혈구뿐만 매개 종양 전이. 본 명세서에있어서의 목표는 중요한 독특한 세포 집단 (면역 함)을 연구하기 위해 MH 백혈구 선택적 수확을 가능하게하고, 이러한 특정 세포에 대한 각종 조작의 영향 (예 : 면역 활성)을 규명하는 것이다. 현상 원발 종양을 제거하는 면역 장애에도 불구하고, 암 환자 및 동물 모델에서의 증거는 면역계가 종양 세포, 미세 전이 및 throu 잔여 질병을 순환 제어 할 것을 지시GH 세포 매개 면역 (CMI). 그러나, 생체 내 기능과 인간에서 시험 관내 연구에서 가장자가 종양 세포는 순환 또는 비장 백혈구 1,2- 의한 세포 독성에 내성이 있음을 입증 동물, 이들 사이에 명백한 불일치가있다. 이러한 불일치는 별개 백혈구 모집단, 즉 marginating - 간 (정현파) 백혈구 활성화 NK 세포, 즉 세포 덩이 3들의 모집단의 생체 내 존재에 적어도 부분적으로 기인 할 수있다. 사실, 우리의 실험실에서 출판되지 않은 데이터는 F344 쥐에서 동계 종양 세포 순환 및 비장 백혈구에 내성이 발견되었다 (MADB106가), MH-NK 세포 (4)에 의해 용해 된 것으로 나타났다. 따라서, 순환 백혈구에 의심 &quot;NK 내성&quot;이다 종양 세포 MH-NK 세포에 의해 제어 될 수있다. 주목할만한, 마우스에서 MH-NK의 개선 활동은 면역 생체 내에서 다음 분명하다(폴리 I의 사용을 통해 예 : C 또는의 CpG-C) 자극 (5). 간 특정 NK 세포 (NK-MH)은 내피 세포 및 쿠퍼 세포 부착, 정현파 루멘 내부에 위치하고있다. MH-NK 세포는 단독으로 생리 활성 물질로서 7,8- 리소좀 효소 및 퍼포 granzymes와 같은 산성 포스파타제를 포함하는 조밀 한 구형 입자 및 막대 코어 드 소체 (6)을 특징으로한다. NK 세포를 순환과 비교하여, MH-NK 세포 과립 및 소포 9-11 높은 수 및 크기를 나타낸다. NK 세포 순환에 비해 염증 조건 MH-NK 세포, LFA-1 (12)의 더 높은 발현을 나타내는 것으로 나타났다. 이러한 향상된 발현 MH-NK 세포는 NK 세포 13,14 순환 비해 특정 종양 세포에 대해 세포 독성 더있는 메커니즘을 구성 할 수도있다. nterestingly, 인터루킨 (IL) -2와 시험 관내 인큐베이션에 따라, MH-NK 세포가 확대되고,자신의 번호와 과립의 크기는 프로 Fi를 제작 림 포카 인 활성화 킬러의 (LAK) 세포 (15)와 일치 모두 증가. 액티브 MH 백혈구 독점적 그라인딩과 조직의 생물학적 분해에 기초하는 표준 간 백혈구 수확하는 방법을 통해 얻어 질 수 없다. 본원에 기술 된 우리 관류 방법은 표준 방법에 비해 두 가지 장점을 갖는다. 우선, 관류 방법은 선택적으로 다른 간 구획에서 다른 백혈구에 의한 오염을 방지 MH 백혈구를 수확. 조직 처리 손상 세포 것을 접근하거나 형태를 변경하고, 조직 손상으로 인해 현저 면역 조절 다양한 인자의 방출을 유도 달리 둘째, 더 관류 기술, 무결성, 활동, 및 MH 백혈구의 생리적 환경 보존 활동. 간은 암전 A에 대한 중요한 타겟 기관이다차 다양한 감염 16. MH 전지 고유 특성을 나타내는 바와 같이 이들 병변에 대해 다양한 조건에서이 특정 인구를 연구하는 것이 중요하다. 예를 들어, 다양한하는 BRM에 의한 전신 면역 활성화를주의하는 가치가있다 (예를 들면 폴리 I : C 또는의 CpG-C)가 백혈구 5 순환보다 MH-백혈구 더 활성화하는 것으로 나타났다.

<table><tbody><tr><td>Autoclud 연동 펌프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>, 버터플라이 바늘,</td><td>OMG</td><td></td><td>26G</td></tr><tr><td>, 버터플라이 바늘</td>, <td>OMG</td><td></td><td>21G*3/4"</td></tr><tr><td>, 주사기</td><td>Pic 용액</td><td></td>, <td>1ml</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Pic 용액</td><td></td>, <td>2.5ml</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Pic 용액</td><td></td>, <td>5ml</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Pic 용액</td><td></td><td>10ml</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Pic 용액</td><td></td><td>25ml</td></tr><tr><td>무뚝뚝한 모서리 집게</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>지혈</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>조직 집게</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>22W 형광 일광 돋보기 램프</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

marginating-간 백혈구의 선택적 수확

Selective Harvesting of Marginating-hepatic Leukocytes

Marginating-hepatic (MH) 백혈구(간의 정현파에 부착된 백혈구)는 다른 면역 구획의 백혈구에 비해 독특한 구성과 특성을 나타내는 것으로 나타났습니다. 특히, 증거는 MH-백혈구 집단의 뚜렷한 전염증 및 항염증 프로필과 생쥐와 쥐 모두에서 순환 또는 비장 면역 세포에 비해 간 특이적 NK 세포(즉, 구덩이 세포)의 세포 독성이 더 높다는 것을 시사합니다. 본원에 제시된 방법은 마우스 및 랫트에서 간의 강제 관류에 의한 MH 백혈구의 선택적 수확을 가능하게 한다. 조직 분쇄 및 생물학적 분해를 포함하여 간 백혈구를 추출하는 데 사용되는 다른 방법과 달리, 이 방법은 다른 간 구획의 세포에 의해 오염되지 않은 간 정현파에서 독점적으로 백혈구를 생성합니다. 또한 관류 기술은 MH 백혈구의 무결성과 생리학적 환경을 더 잘 보존하여 조직 처리에 대한 알려진 생리학적 반응을 보존합니다. 많은 순환 악성 세포와 감염된 세포가 간 정현파를 통과하는 동안 억류되어 내피 세포 및 상주 백혈구와 물리적으로 상호 작용하기 때문에 고유한 MH 백혈구 집단은 비정상적인 순환 세포와 상호 작용, 식별 및 반응하기 위해 전략적으로 배치됩니다. 따라서 MH-백혈구의 선택적 채취 및 다양한 조건에서의 연구는 특히 순환 비정상 세포 및 간 관련 질환 및 암 전이와 관련하여 MH 백혈구의 생물학적, 임상적 중요성에 대한 이해를 증진시킬 수 있습니다.

F344 래트에서 우리는 간 조직의 기계적 분쇄 다음, 전체 간 세포 집단의 세포 독성 (강제 간 관류 간 정현파 수집) MH-NK 세포의 세포 독성을 비교 및​​ 순환 백혈구의 세포 독성에 관한 것이다. 전체 세포 제제는 면역 분석법의 루틴으로 적어도 3 회 세척하고, 목표 세포주로서, 우리는 동종 YAC-1 또는 동계 MADB106 표적 세포주를 사용 하였다. 도 1에 나타낸 바와 같이 4 -, MH-NK 세포는 전체 간세포 집단 (도 1) 모두를 MADB106 및 YAC-1을 표적 세포주 대 (~ 80 % 각각 100 %까지) 심각한 독성을 나타내 반면 순환 백혈구 (도 2 및 3)의 깊이보다 낮은 세포 독성 수준과 동계 MADB106 목표 세포주에 대해 거의 사멸을 표시. 같은 relati기계적으로 처리 간은 또...

Marginating-hepatic leukocytes는 다른 백혈구 집단에 비해 독특한 특성과 뚜렷한 면역 기능을 나타냅니다. 여기에서 우리는 쥐 또는 생쥐의 간을 강제 관류하여 이 특정 간 세포 집단을 선택적으로 수확하는 방법을 설명합니다. 변두리-간 백혈구는 간 관련 질환 및 전이에 대한 감수성을 결정하는 데 중요한 것으로 보입니다.

Marginating-간 백혈구의 선택적 수확

Marginating-hepatic (MH) leukocytes (leukocytes adhering to the sinusoids of the liver), were shown to exhibit unique composition and characteristics ...

이 절차의 전반적인 목표는 마우스 또는 래트의 간에서 강제 관류를 통해 간의 동양혈관에 부착되는 면역 세포인 변연 간 백혈구를 선택적으로 수집하는 것입니다. 이 방법은 다른 백혈구 집단과 비교하여 독특한 특성과 뚜렷한 면역 기능을 나타내는 간 백혈구를 연구할 수 있게 합니다. 이 기술의 주요 장점은 간 실질과 같은 다른 간 구획의 세포에 의해 오염되지 않고 간 동양혈관으로부터만 백혈구를 얻을 수 있다는 점입니다.시연은 제 실험실의 우수한 대학원생인 Liat Sorski와 Lee Shaashua가 진행하겠습니다. 간 관류 절차를 시작하기 전에, 연동 펌프 라인과 버터플라이 바늘에 헤파린 처리된 PBS를 흘려보내 기포를 모두 제거하십시오. 그 후, 호흡이 정지되는 즉시 멸균 가위와 치과용 조직 포셉을 사용하여 안락사시킨 쥐의 하복부부터 검상돌기까지 정중선 복부 절개를 실시하되, 내부 장기가 손상되지 않도록 주의하십시오.다음으로, 포셉을 사용하여 흉골을 들어 올리고 양측의 횡격막과 흉곽을 조심스럽게 절개합니다. 지혈집게(hemostat)로 흉골을 고정한 후, 흉곽을 머리 쪽(rostrally)으로 접어 심폐 복합체를 노출시킵니다. 그런 다음, 10 milliliter 주사기에 연결된 21 gauge 버터플라이 바늘을 준비하여 심장의 우심실에 삽입합니다.다음으로, 10 milliliter 주사기를 사용하여 가능한 한 많은 양의 혈액을 채취하십시오. 혈액 채취가 완료되면, 지혈鉗(hemostat)를 사용하여 후대정맥을 심장에 최대한 가깝게 집어 고정합니다. 그런 다음, 문맥을 노출시키기 위해 장을 복강 밖으로 밀어 동물의 왼쪽으로 옮깁니다.다음으로, 연동 펌프의 유출 파이프에 연결된 25 gauge IV 카테터를 준비하여, 비정맥(splenic vein)보다 앞쪽에 위치하면서 가능한 한 꼬리 쪽으로 간문맥(portal vein)에 삽입합니다. 그런 다음, 5 mL 주사기에 연결된 21 gauge 나비바늘을 준비하여 지혈집게(hemostat)의 꼬리 쪽 하대정맥(inferior vena cava)에 삽입합니다. 연동 펌프를 약 3 mL/min의 속도로 가동하고, 혈액으로 오염된 초기 몇 mL의 관류액을 주사기에 수집합니다.관류액이 연한 빨간색이 되면 펌프를 멈추지 말고 5mL 수집용 주사기를 20mL 수집용 주사기로 교체하십시오. 그런 다음, 분당 7mL의 속도로 간 관류액을 최소 20mL 수집하십시오. 간 전체가 연한

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

쥐의 간 세포의 주요 문화 macrophages를 얻을 소설 방법을 설명합니다. 이 방법은 플라스틱 요리 선택적 첨부하여 문화 flasks 및 정화의 흔들림 다음 문화 macrophages의 확산을 활용합니다. 이 기술은 효율적으로 복잡한 장비와 기술없이 간 macrophages을 제공합니다.

성인 간세포의 혼합 차 문화에서 Macrophages을 분리하는 간단하고 효율적인 방법

이 비디오는 3개의 백혈병 세포 하위 집단, 즉 배지에서 자유롭게 떠다니는 부유 백혈병 세포, 중간엽 기질 세포 단층의 표면에 부착된 위상 밝은 백혈병 세포, 2D 공동 배양에서 중간엽 기질 세포 단층 아래로 이동한 위상 희미한 백혈병 세포의 공간 분리 방법을 설명합니다.

Leukemic Subpopulation Harvest: 2D 공동 배양에서 백혈병 세포 하위 집단의 공간적 분리 방법

이 비디오에서는 강제 관류에 의해 쥐의 간에서 변두리 간 백혈구를 분리하는 방법을 보여줍니다.

Isolation of Marginating Hepatic Leukocytes from a Mouse Liver(마우스 간에서 간 백혈구 가장자리 분리)

이 비디오는 자연 살해 세포 또는 NK 세포를 포함한 림프구를 선택적 증식을 위해 인간의 간 조직에서 분리하는 방법을 보여줍니다. 효소 및 기계적 분해 후 밀도 구배 분리는 NK 세포를 포함한 림프구 분리를 촉진합니다. 수집된 림프구는 NK 세포의 선택적 증식에 추가로 사용될 수 있습니다.

선택적 확장을 위한 간 조직에서의 자연 살해 세포 분리

동일한 공여자로부터 인간 간세포와 비실질 간 세포를 분리하는 기술에 대해 설명합니다. 다양한 간 세포 유형은 기능적 간 모델 및 조직 공학의 기초를 구축합니다. 이 새로운 방법은 높은 수율과 생존력으로 간 세포를 분리하는 것을 목표로 합니다.

차 인간 간세포의 분리 및 비 실질 간 세포의 주요 집단 대응을위한 프로토콜

Marginating-pulmonary leukocytes는 다른 백혈구 집단에 비해 독특한 특성과 뚜렷한 면역 기능을 나타냅니다. 여기서 우리는 쥐와 생쥐에서 폐의 강제 관류에 의한 폐 백혈구의 이러한 하위 집단의 선택적 수확에 대해 설명합니다. 변두리폐 백혈구는 혈액 매개 및 폐 관련 질환에 대한 감수성을 결정하는 데 중요한 것으로 보입니다.

Marginating - 폐 백혈구의 선택적 수확

간 손상은 이종 세포 인구를 나타내는 전구 세포의 확장을 동반한다. 이 세포 구획의 소설 분류는 여러 부분 집합의 구별이 가능합니다. 여기에 설명 된 방법은 추가 분석 및 분석에 사용될 수있는 다양한 서브 세트의 고순도 분리 계측법 흐름을 도시한다.

분리 및 소설 표면 마커 조합에 의해 확인 된 간 전구 부분 집합의 농축

이 프로토콜의 목표 설명된 마커를 사용 하 여 간 내 림프 내 피 세포 인구를 식별 하는 것입니다. 우리는 콜라 IV 및 DNase 및 조직, 림프 내 피 세포의 명료한 인구를 식별 하기 위해 cytometry와 결합의 부드러운 닦지를 이용 한다.

림프 내 피 세포의 흐름 Cytometric 분석 Murine 간 소화

여기서 우리는 원발성 마우스 간 정현파 내피 세포 (LSEC) 분리를위한 프로토콜을 개략적으로 설명하고 시연합니다. 이 프로토콜은 간 콜라게나제 관류, 저속 원심분리에 의한 비실질 세포 정제 및 CD146 마그네틱 비드 선택을 기반으로 합니다. 우리는 또한 표현형과 유세포 분석기 및 주사 전자 현미경을 사용하여 이러한 분리 된 LSEC를 특성화합니다.

마우스 일차 간 정현파 내피 세포의 분리 및 특성화

지질이 함유된 간세포는 간 재생에 내재되어 있지만 일반적으로 밀도 구배 원심분리 시 손실됩니다. 여기에서 우리는 지방성 간세포를 유지하는 최적화된 세포 분리 프로토콜을 제시하여 마우스에서 부분 간 절제술 후 재생 간세포의 대표적인 집단을 생성합니다.

생쥐의 부분 간 절제술 후 재생 간세포의 분리

최근에 확인된 두개내 세포 유형인 연수막 림프 내피 세포(LEC)는 기능이 잘 이해되지 않습니다. 이 연구는 마우스에서 LLEC를 수확하고 시험관 내 1차 배양을 확립하기 위한 재현 가능한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 연구자들이 LLEC의 세포 기능과 잠재적인 임상적 영향을 탐구할 수 있도록 설계되었습니다.

연수막 림프 내피 세포의 수확 및 1차 배양

배우세요 쥐나 래트 간에서 강제 관류법으로 marginating-간 백혈구를 선택적으로 수확하는 방법을. 이 기술은 간 실질 세포 없이 간 혈관에서 백혈구만 순수하게 얻어 면역학 연구에 활용할 수 있습니다.

Marginating-간 백혈구의 선택적 수확

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