Name: 쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: 학습하세요 쥐 전립선 마이크로 해부 및 수술적 거세 방법으로 호르몬 조건이 전립선 암 발생에 미치는 영향을 연구하는 기법입니다. 개별 전립선 선엽 분석이 가능하여 재현성 있는 결과를 제공합니다.

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이 원고의 수치 중 일부는 넉넉한 바트 O. 윌리엄스의 실험실에 의해 제공되었다. 저자는 U54CA143803, CA163124, CA093900, 및 CA143055는 국립 암 연구소 (National Cancer Institute)에 의해 부여 지원됩니다.

이 프로토콜은 충족하고 존스 홉킨스 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회가 설정 한 가이드 라인을 따른다. 1. 마우스 전립선을 마이크로 - 해부 <ol><li> 이산화탄소 질식이나 기관 동물 관리 및 사용 지침서에 따라 다른 방법에 의해 승인 된 마우스를 안락사. </li><li> 네 발 각을 통해 핀을 넣어 해부 보드에 부정사 위치에 마우스를 고정. </li><li> 70 % 에탄올로 복부를 스프레이. </li><li> 집게와 하복부의 피부를 잡고, 피부의 실수로 모든 장기를 절단하지 않도록주의 음경의 개방, 약 1cm의 전방을 복막 가위를 사용합니다. </li><li> 복강을 노출, 하복부, 흉곽에 복부의 최대 양쪽에서 피부와 복막을 버려야. </li><li> 방광 및 비뇨 기관을 식별하고 부드럽게 옆으로 지방과 다른 기관을 이동하여 그들을 노출. </li><li> USING 포셉, 그립 요도 근처 기지에서 정관을하고, 그것을 멀리 눈물. </li><li> 반대 정관으로 반복합니다. </li><li> 동시에 방광과 복부 전립선 (방광의 기초 아래 약 1cm) 아래 요도를 통해 절단 가위를 사용하는 동안주의 깊게, 방광을 그립 집게를 사용하고 당기십시오. 주 : 방광이 인상되기 때문에, 전체 비뇨 기관 (함유 방광, 요도, 모든 전립선 돌출부 및 정낭의 단면)이 함께 제공된다. 약간의 저항이있을 수 있습니다. </li><li> 약 5-10 ml의 포스페이트 완충 식염수 (PBS)를 함유하는 60-100mm 페트리 접시에 비뇨 기관 (UGT)를 놓는다. </li><li> 해부 현미경 프로토콜의 나머지 부분을 수행한다. 이 미세 집게, 각 손에 하나를 사용하십시오. &quot;연필과 같은&quot;는 집게를 잡고 그들을 안정 할 수 있도록 벤치 위에 팔을 휴식. </li><li> 방광이라는 UGT 같은 위치를 미세 핀셋을 사용하여위에 요도 아래로 지적되고 정낭 방광의 양측에 위치된다. </li><li> 그립 하나 집게 조심스럽게와 요도는 전립선 조직을 멀리 찢어하지 않고 다른 집게와 멀리 지방을 빼냅니다. 참고 : 지방이 주변 조직에 &quot;반짝&quot;상대적으로 표시됩니다. </li><li> 지방이 제거되면, 전립선 개의 복부 로브 사이의 결합 조직을 찢고 구분 집게를 사용한다. </li><li> , 복부 로브 중 하나를 제거 팁 근처에 그립에 하나의 복부 로브를 하나 집게를 사용하여 그립에 다른 집게를 사용하려면이 가능한 요도에 가깝게 기지에서 로브. 여전히 로브의 기초를 파지하는 동안 그립에 다른 집게 요도를 사용합니다. 기업, 부드러운 움직임으로 떨어져 요도에서 로브를 당깁니다. 확실히 더 전립선 조직이 요도에 부착 남아합니다. 다음 실험 단계에 따라 적절한 매체에 로브를 놓습니다. <ol><li> 수정하고들 파라핀은-포함하려면충분한 조직 학적 분석을 위해, 10 % 중성 완충 포르말린 (NBF) 8의 로브를 배치합니다. </li><li> 냉동 보존를 들면, 10월 등의 매체를 동결하고 8 절편의 로브를 놓습니다. </li><li> 문화 단일 세포 분리를위한 차가운 PBS의 로브를 놓고 9 유동 세포 계측법. </li></ol></li><li> 다른 복부 로브와 단계를 반복 1.15. </li><li> 확인 정낭에 구멍 않도록주의하면서 조심스럽게 거리 정낭에서 로브를 당겨 집게를 사용하여, 전방 로브 중 하나를 제거하십시오. 로브는 정낭의 독립되면, 단계 1.15에서 복부 로브와 같은 방식으로 제거합니다. </li><li> 다른 전방 로브와 단계를 반복 1.17. </li><li> 지느러미 전립선이 표시되도록를 통해 나머지 비뇨 기관 플립. </li><li> 두 배면 측면 로브 또한 로브와 t 사이의 결합 조직 사이의 결합 조직을 찢어 집게를 사용하여 배면 측면 로브 중 하나를 제거하려면그는 정낭의 영역을 후부. 단계 1.15에서 복부 로브와 유사한 방식으로 로브를 제거합니다. </li><li> 다른 배면 측면 로브와 단계를 반복 1.20. </li></ol> 2. 수술 거세 참고 :이 생존 수술이기 때문에, 무균, 마취 및 통증 관리는이 프로토콜의 윤리적 및 성공적인 완료에 중요하다. 모든 기관 동물 관리 및 사용 지침을 따르십시오. 저체온증을 방지하기 위해 수술 중 이러한 재순환 물 블랭킷 같은 외부 열원을 사용한다. 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다. 수술에 사용하기 전에 모든 수술 도구를 압력솥. <ol><li> 깨끗한 무균 표면에 적절한 조치 (예를 들면 2 % 흡입 이소 플루 란)를 사용하여 마우스를 마취하고, m 위치부정사 위치에 여러개. 참고 예 케타민 마취 같은 대체 방법들이 또한 사용될 수 있고, 승인 동물 프로토콜에 따라. </li><li> 발가락을 곤란하게하여 마우스의 반사 신경을 확인합니다. 마우스가 반응하지 않는 경우, 다음 단계로 진행합니다. 이 반응 할 경우, 1-3 분 후에 다시 확인합니다. 전기 면도기로 수술 영역을 면도. </li><li> 무균 기관 수의 직원이나 IACUC에서 권장하는 70 % 에탄올 및 요오드 또는 절차의 교류 스크럽을 사용하여 마우스의 복부를 준비합니다. </li><li> 멸균 메스를 사용하여 음경에, 하복부의 중간 선에서 약 1.5 cm 전방을 피부를 통해 1 cm 수직 절개를합니다. </li><li> 주의 모든 장기를 절단하지, 복막을 통해 작은 절개 (&lt;1cm)을 확인합니다. </li><li> 멸균 집게 그립 복막의 절단 가장자리를 사용하여 아래 복강를 참조 할 수 있도록 조심스럽게 들어 올립니다. </li><li> 다른 멸균 집게를 사용하여, 일에 도달전자 방광에 측면 복강 그립 중 하나를 왼쪽 또는 오른쪽 고환 지방 패드. 고환뿐만 아니라 빠져 나올 때까지 복막과 피부의 구멍을 통해 지방 패드를 당깁니다. 이 단계에서 다른 조직이나 장기를 손상하지 않도록주의하십시오. </li><li> 소작 펜을 사용하여 고환을 잡고 지방 패드를 통해 절단. 소작 펜 주와 고환 동맥을 통해 천천히 잘라 : 고환 동맥이 너무 빨리 절단하는 경우가 너무 많은 출혈 일 수 있으며, 마우스를 안락사해야 할 수 있습니다. </li><li> 지방 패드와 동맥이 절단되면, 고환과 지방 패드를 제거합니다. </li><li> 를 반복하여 다른 정소와 2.6-2.9 단계를 반복합니다. 참고 : 고환의 제거를위한 다른 방법은 수술 가위로 용기를 절단 다음에 고환 동맥을 결찰하는 것입니다. </li><li> 복막은 흡수성 봉합사로 폐쇄 봉합. </li><li> 스테이플 피부는 수술 상처 클립을 마감했다. </li><li> 통증을 관리 할 수​​있는 진통제를 관리, 및 장소5 ~ 10 분 동안 따뜻한 케이지에 깨끗한 케이지에서 마우스. 통증이나 출혈의 흔적이 마우스를 모니터합니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

전립선 마이크로 해부 엽 특정 실험과 마우스 전립선 분석 (그림 1)을 허용한다. 유전자 조작 마우스 모델에서 표현형은 다른 사람에 보이지 않는 하나의 엽에서 볼 수있다. 또한, 조직 학적 분석을 위해,이 프로토콜은 순수한 전립선 조직의 최대 양 단면에 존재하는 다른 비뇨 기관 조직없이 절편 염색 될 수 있다는 것을 보장한다. 마지막으로, 단일 세포 실험이 프로토콜은 거의 순수한 전립선 세포의 격리를 허용한다. 상피 세포 농축 키트는 더 기질 세포에서 전립선 세포를 정화 할 수 있습니다. 마이크로 해부에 제한은 해부 현미경을 통해 보는 동안 미세 집게를 사용하는 데 필요한 해부 현미경의 사용, 학습 곡선을 포함한다. 대안 적으로, 전립선 조직은 미세 해부 불필요한 만드는 UGT의 일부로 조직학을 위해 절단 될 수있다. 그러나, 전체 UGT를 절편의 단점은 것입니다다른 조직은 깨끗하지 만드는 부분에 존재한다. 또한, 단일 전립선 세포 집단을 생성하기위한 상기 돌출부는 오염을 방지하기 위해 UGT로부...

전립선은 미국에서 남성 암의 가장 흔한 사이트입니다. 매년 전립선 암으로 진단됩니다 거의 220,000 남자, 약 27,000 남자는 질병 일에 굴복한다. 남성은 미국 1에서 전립선 암 진단 1 7 일생 위험이 있습니다. 양성 전립선 비대증 (BPH), 전립선의 연령과 관련된 비 암성 확대는 80 이상이 남성의 80 %에 영향을 미치는, 또한 광범위한 조건이다. 이와 같이, 전립선은 많은 연구의 초점이다. 마우스 모델은 3 전립선 질환을 연구하기 위해 널리 사용되어왔다. 전체 마우스 인간 전립선 선 (4)의 우수한 대표하지만, 유사성과 마우스 및 인간 전립선 해부학 생리학 (5) 사이의 차이가있다. 두 종에서 전립선은 요도를 둘러싸고, 방광의 기지에 위치해 있습니다. 인간의 전립선은 단일 보라입니다중앙, 전환, 주변 장치 및 전방 fibromuscular 기질 : 네 개의 구역으로 분할합니다. 전방, 복부 및 배면 측면 : 반대로 마우스 전립선 요도 주위의 상이한 위치에서 세 쌍의 돌출부로 구성된다. 세포 수준에서의 주된 차이점은 인체 내강의 셀 비율은 기저 세포가 1인지 : 1이지만 1 : 생쥐 6 4. 뮤린 기질은 인간에 대해 생쥐에서 다르다 - 근육 층 쥐 전립선 훨씬 얇다 동안 인간은, 더 광범위한 평활근있다. 마우스 전립선의 적절한 식별, 해부, 취급 마우스 전립선 연구에 필수적이다. 호르몬 대폭 인간 및 마우스 모두에서 전립선의 발달 및 항상성에 영향을 미친다. 에스트로겐 전립선 개발 7 역할을 보이는 반면, 전립선 암에서 가장 중요한 호르몬 테스토스테론이다. 테스토스테론은 선의 개발을 위해 필수적이다D 관리. 중 물리적 또는 화학적 거세에 따라, 약 90 성인 전립선 apoptose의 내강 세포의 %, 그리고 선이 줄어 듭니다. 테스토스테론은 거세 조건 하에서 개별적으로 재 도입되는 경우, 전립선 전체 용량 자체를 다시 생성 할 수있다. 테스토스테론은 남성 호르몬 결핍의 치료에 일반적으로 사용되는 치료 전략 이유 전립선 암을 유도하는 것으로 보인다. 그러나 많은 전립선 암은 안드로겐 박탈에 저항하게된다. 또한, 전립선 암의 안드로겐 결핍 치료 요법을받은 남성 거세 및 재생 조건이 사이클을 겪는다. 마우스에서 수술 거세는 남성 호르몬을 재 도입하여 전립선의 호르몬 재생과 함께 거세 저항성 전립선에 테스토스테론 순환의 효과를 연구 할 수있는 중요한 도구입니다. 이 글에서, 우리는 토론하고 locat입니다하기로 적절한 기술을 시연 할 예정이다전자 마이크로 해부 마우스 전립선뿐만 아니라 마우스를 외과 적 거세하기.

<table><tbody><tr><td>수술 도구</td><td>Roboz</td><td>다양한</td><td></td></tr><tr><td>포름알데히드</td><td>시그마</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT 매체</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>드라이 아이스에 넣어 얼려야 하며, -80°C에서 보관해야 합니다; C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>온라인 공급업체에서도 구매</td></tr> 가능 <tr><td>Cautery Pen</td><td>Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>Silk 봉합</td>사 <td>AD Surgical</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Wound</td><td>Clips Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

마우스 모델은 전립선암과 다른 질병을 연구하는 데 광범위하게 사용됩니다. 쥐는 전립선을 연구할 수 있는 훌륭한 모델이며 인간의 전립선 발달 및 질병 발견을 위한 대리물로 사용되어 왔습니다. 전립선 미세박리를 통해 다른 조직의 오염이 없는 상태에서 엽 특이적 전립선 해부학, 조직학 및 세포 특성을 일관되게 연구할 수 있습니다. 테스토스테론은 전립선 발달과 질병에 영향을 미칩니다. 안드로겐 박탈 요법은 전립선암 환자를 위한 일반적인 치료법이지만 많은 전립선 종양은 거세 저항성이 있습니다. 마우스 모델의 외과적 거세는 거세 저항성 및 전립선에 대한 호르몬 생물학의 다른 측면에 대한 연구를 가능하게 합니다. 이 절차는 테스토스테론 재도입 또는 전립선의 호르몬 재생과 결합할 수 있으며, 이는 전립선의 줄기 세포 계통을 연구하는 강력한 방법입니다. 전립선 미세 박리와 외과적 거세는 전립선 발달 및 질병에 대한 강력하고 일관된 연구를 위한 수많은 기회를 열어줍니다. 이 원고는 실험실 쥐의 전립선 미세 박리 및 외과적 거세에 대한 프로토콜을 설명합니다.

여섯 전립선 로브는 전립선의 미세 절개를 통해 마우스 (그림 1)에서 제거되었습니다. 전체 비뇨 기관 (UGT)은 모든 전립선 로브 방광, 정낭, 요도 (도 1a)로 구성된다. 정관 요도에 부착하지만, 전립선 미세 해부 불필요하며, 따라서 요도 (도 1b 내지도 1c)를 절단하여 UGT의 제거 전에 분리 될 수있다. 비뇨 생식 기관이 함께 남아 한 번 복부 (그림 1D)에서 제거됩니다. 이 시점에서, 전립선은 UGT 로브 (도 1E)에 접근하기 위해 제거 될 필요가 지방 조직에 덮여 유지. 여섯 개의 돌출부 (복부, 전방 및 배면 측면 쌍) 방광 기지 요도 주변을 알 수있다. 순수 전립선 조직이어서 (도 1F) 상기 프로토콜 다음 제거 될 수있다. 이 로브 할 수있다추가 분석을 위해 적절한...

이 원고는 실험실 쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세에 대한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 또한이 프로토콜에 의해 생성 된 대표적인 결과를 도시한다. 마지막으로, 우리는 장점과 이러한 프로토콜의 사용에 대해 설명합니다.

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

이 절차들의 전반적인 목표는 생쥐 내의 다양한 호르몬 상태뿐만 아니라 전립선을 연구할 수 있도록 하는 것입니다. 이 방법은 호르몬 결핍이 전립선 발암 과정에 미치는 영향과 같은 전립선암 분야의 핵심 질문에 대한 답을 찾는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 개별 전립선 샘에서 다양한 병리적 과정과 호르몬 변화의 영향을 연구할 수 있다는 점입니다.먼저 각 발의 발바닥 부분을 통해 마우스를 해부판에 배와위(supine position)로 고정하고, 복부를 70% ethanol로 분무합니다. 그다음, 포셉으로 하복부 피부를 잡고 가위를 사용하여 음경 개구부에서 전방으로 약 1cm 떨어진 지점의 피부와 복막을 절개합니다. 하복부부터 복부 양측을 따라 흉곽까지 피부와 복막을 계속 절개하여 복강을 노출시킵니다.방광과 비뇨생식관(UGT)의 위치를 확인한 후, 지방과 다른 장기들을 조심스럽게 옆으로 밀어 비뇨 조직을 노출시킵니다. 그런 다음, 포셉을 사용하여 요도 근처의 정관 기저부를 잡고 혈관을 떼어냅니다. 반대쪽 관을 제거한 후, 포셉으로 방광을 조심스럽게 잡고 들어 올리면서, 동시에 가위로 복측 전립선 아래 및 방광 기저부에서 약 1cm 아래의 요도를 절단합니다.수확한 UGT를 약 5~10 mL의 PBS가 담긴 60~100 mm 페트리 접시에 옮기고, 접시를 해부 현미경 아래에 놓습니다. 다음으로, 양손에 미세 핀셋을 하나씩 잡고 연필처럼 쥔 뒤, 팔뚝을 현미경 양옆의 실험대 위에 올려 고정합니다. 핀셋을 사용하여 방광이 위를 향하고 요도가 아래를 향하며, 정낭이 방광 양옆에 위치하도록 UGT의 위치를 잡습니다.한쪽 포셉으로 요도를 잡고, 다른 포셉을 사용하여 전립선 조직을 제거하지 않도록 주의하며 지방을 조심스럽게 떼어냅니다. 모든 지방이 제거되면, 전립선의 두 복측엽 사이의 결합 조직을 찢어 분리합니다. 그런 다음, 한쪽 포셉으로 복측엽 중 하나의 끝부분을 잡고, 다른 포셉으로 요도에 최대한 가깝게 엽의 기저부를 잡습니다.이제, 다른 쪽 포셉으로 요도를 고정하는 동시에 엽을 혈관으로부터 단단하고 매끄러운 동작으로 당겨 분리합니다. 요도에 전립선 조직이 남아 있지 않은지 확인하십시오. 그 후, 다음 실험 단계에 따라 엽을 적절한 배지에 넣습니다.동일한 방식으로 다른 복측 엽을 분리한 후, 핀셋을 사용하여 정낭을 찌르지 않도록 주의하면서 전측 엽 중 하나를 정낭에서 조심스럽게 당겨 떼어냅니다. 그 후,

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연구

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Medicine

의학

이 비디오에서는 남성 마우스 모델에서 비뇨 생식기 시스템 또는 UGS를 해부하는 절차를 설명합니다. 이 UGS는 전립선을 분리하고 전립선암 발병에서 전립선의 역할을 연구하기 위해 체외에서 추가로 절개됩니다.

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이 비디오에서는 전립선암 세포를 마우스 모델에 전립선 내 주사를 투여하는 절차를 보여줍니다. 정소성 쥐 모델은 비침습적이고 임상적으로 관련된 환경에서 질병의 기원과 치료 요법에 대한 반응을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

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이 비디오는 아데노바이러스 기반 전달 시스템을 사용하여 전립선 세포의 특정 유전자를 편집하는 방법을 설명합니다. 이 접근법은 CRISPR 기술을 활용하여 유전자 발현의 정소성 및 국소적 변경을 가능하게 하여 전립선암에 대한 새로운 마우스 모델을 개발할 수 있습니다.

유전자 조작 마우스 모델의 전립선암 모델링: 마우스 전방 전립선 엽 세포에서 CRISPR/Cas9 매개 국소 유전자 편집 기술

인간의 전립선 암이 동 소성 모델에 폐 종양 세포와 구별 전이의 형성을 순환, 종양 크기의 정량을 허용한다. 세포가 일차 장기 탈출해야 같이, 혈류를 입력하고, 보조 사이트에 이식,이 모델은 인간에서 효과적으로 시나리오 되풀이되었습니다.

인간의 전립선 암 전이의 동소 쥐과 모델

전립선암은 미국에서 암 관련 사망의 두 번째로 흔한 원인입니다. 정소성 암 모델은 전립선암의 생물학을 이해하고 치료 요법의 효능을 평가하는 데 유용한 접근 방식을 제공합니다. 이 프로토콜은 정형소 전립선암 마우스 모델을 확립하는 데 필요한 자세한 단계를 설명합니다.

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이 프로토콜의 목표 후속 거세와 전립선 암 세포의 내부 전립선 주사를 설명 하는 것입니다. 안 드로 겐 의존 및 거세 저항 전립선 암의 Orthotopic 전 임상 모델은 임상 관련 종양 microenvironment 및 immunocompetent 호스트의 컨텍스트에서 질병 연구에 중요 한.

발광 및 형광 Orthotopic Syngeneic Murine 모델 Androgen 종속 및 거세 내성 전립선 암

신장 구조 조직 설계 기관 부족 및 투 석의 해로운 효과 위한 솔루션을 제공합니다. 여기, 우리는 마이크로 프로토콜 설명 cortico 골 수 세그먼트의 격리 murine 신장 해 부. 이 세그먼트는 신장 organoids를 형성 세포 비 계 없는 구문으로 이식.

서 주 신장 조직 세그먼트와 소설 비 계 없는 건설 기술 관

이 프로토콜 murine 전립선에 바이러스 배달 하는 새로 설립된 방법을 설명합니다. CRISPR/Cas9 기술, 유전자 overexpression 또는 Cre recombinase 배달 사용 하 여, 기술 유전자 발현의 orthotopic 변경 허용 하 고 전립선 암에 대 한 새로운 마우스 모델을 구현.

CRISPR의 바이러스 배달 Murine 전립선 유전자 변경에 대 한 가이드

유전자 조작된 생쥐 전립선 암 메커니즘을 조사를 위해 유용한 모델이 있습니다. 여기를 식별 하 고 마우스 비뇨 생식 기 시스템에서 전립선 엽 해 부, 조직학에 따라 구분 하 고 분리 다운스트림 분석에 대 한 spheroids로 기본 전립선 세포에는 생체 외에서 문화 프로토콜 선물이.

식별, 조직학 특성화 및 체 외 3D 회전 타원 체 문화 모델에 대 한 마우스 전립선 돌출부의 해 부

우리는 전립선 종양 해부에 초점을 맞춘 마우스 전립선 암 모델의 부검 및 해부를위한 방법을 보여줍니다. 마우스 전립선 종양 오르가노이드의 생성을 위한 단계별 프로토콜도 제시된다.

전립선암의 유전자 조작 마우스 모델에서 종양 오르가노이드의 생성

이 원고는 생존 설치류 고환 절제술과 난소 절제술을 신속하게 수행하는 일관된 방법을 설명합니다.

성호르몬 생성을 줄이기 위한 쥐 고환 절제술 및 난소 절제술

학습하세요 쥐 전립선 마이크로 해부 및 수술적 거세 방법으로 호르몬 조건이 전립선 암 발생에 미치는 영향을 연구하는 기법입니다. 개별 전립선 선엽 분석이 가능하여 재현성 있는 결과를 제공합니다.

쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세

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