Name: 방사성 표지 된 기판에서 이산화탄소 생산에서의 측정 노랑 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 1 s
Description: 학습하세요 방사성 표지 기판을 이용한 Drosophila melanogaster의 이산화탄소 생산 측정 방법을 통해 에너지 대사를 정량적으로 분석하는 기술입니다. 이 방법은 유전자 변이가 대사에 미치는 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 NIDDK (R21DK089391)의 유용한 조언과 자금 지원에 대해 Mingjian Lu 박사와 Morris Birnbaum 박사에게 감사드립니다.

방사성 표지 대사 기판을 포함하는 플라이 음식 1. 준비 <ol><li> 2 μCi를 방사성 표지 된 기질 (D- 글루코스 [6- (14) C] 글루코스, D- [1- (14) C] 또는 [1-14 C] -palmitic 산 40 - - 60 mCi의 / A 미세 원심 분리 관에서 혼합 한 15 μL FD &amp; C 청색 1 호 식품 염료 mmol) 및 H 2 O 25 ㎕의 총 부피를 같게한다. 주의 : 탄소 14 저에너지 베타 터이며 공기 짧은 범위를 가진다. 그러나 방사성 표지 분자 또는 실험자에 의해 우발적 인 섭취의 유출 방지하기 위해주의를 기울입니다. 식품 유리 병은 쉽게 뒤집어 비행; 방사성 표지는 액체 형태로 특히 때, 팁 것을 방지하는 용기를 수용해야합니다 (1.2 단계) 또는 응고 식품 (단계 1.4)에. 공급되는 또는 방사성 표지 CO 2의 소량을 내쉬고 시작합니다 방사성 표지 된 기판을 공급 한 파리. 이 파리는 흄 후드에 아크릴 상자에 보관하고, 작은 접시 KOH의 캘리포니아의해야n은 CO 2 스크러버로서 사용 상자에 설정 될 수있다. </li><li> 피펫 빈 플라이 식품 유리 병의 바닥에 방사성 표지 기판과 파란색 염료 믹스의 모든 (높이 : 9.4 cm, 폭 : 2.2 cm). </li><li> (- 음식 10 ㎖를 함유 한 유리 병에 대해 높은 전력 레벨에서 20 초 15) 식품 단지 액화 될 때까지 가열 표준 전자 레인지에서 음식 비행. </li><li> 푸른 색의 균일 성을 모니터링하는 것은 완전한 혼합을 보장하기 위해, 소용돌이 빠르게 방사성 표지 기판 / 파란색 염료 혼합 975 μl의 용융 음식을 추가합니다. </li><li> 30 분 - 음식이 식 20 실온에서 완전히 응고 할 수 있습니다. </li></ol> 성인 과일 파리 2. 먹이 방사성 표지 대사 기질 <ol><li> 성인 마취하는 압력 조절기와 CO 2 탱크 아크릴 기재에 융착 접속 다공성 폴리에틸렌으로 이루어진 CO 2 마취 장치를 이용 날아간다. / 분 5 L로 마취 장치에 CO 2 흐름. <ol><li> 전송 마취(- 바이알 당 30 파리 N = 15) d를 방사성 표지, 파란색으로 염색 한 음식을 포함하는 튜브 (으)로 운항하는 항공사. 캡 거품 마개 유리 병, 그리고 파리가 일어날 때까지 수평으로 휴식. 뚜껑이 아크릴 용기에 전송 튜브 (180cm X 180cm X 240cm 높이). </li></ol></li><li> 2에 대한 방사성 표지 음식에 파리를 전송하기 전에 24 시간 - - 단기 공급을 위해, 18 파리를 굶어. 3 시간 공급 단계 T 그는 기아 단계가 중요합니다 공급 파리 안정적으로 그들에게 제시 음식의 새로운 소스를 먹을 수 없기 때문에 . (5)의 과정을 통해 장기 급지 - 8 일 파리 고갈 될 필요는 없지만, 실험자는 파리에 수납 된 바이알에서 방사성 표지 된 식품의 수분 함량을 모니터하고 바이알에 물을 첨가하는 바늘과 주사기를 사용해야 건조 식품과 함께. </li><li> 전송 새로운 유리 병으로 그들을 &quot;도청&quot;로 레이블이 지정되지 않은 음식 (으)로 운항하는 항공사. (2)의 초기 추적 기간 - 4 시간은 파리가 자신의 손톱에서 방사성 표지 음식 입자를 청소 할 수 있으며 방사성 표지의 소화를 허용장내에 남아있는 에드 음식. 푸른 복부를 찾기 위해 파리의 육안 검사에 의해 장내를 통해 음식의 진행 상황을 모니터링합니다. </li><li> 그 후, 전송은 다른 음식 유형으로 운항하는 항공사 96 시간 유전 18 C 또는 30 ℃에서 - - 또는 주위 온도 (12 (12의 효과 측정을위한 표준 식품 1 % 한천에 24 시간 호흡에 금식 상태 대 공급) 조작 예를 들어, 온도에 민감한 GAL80 (GAL80 TS)를 사용하여). 주 :이 체이스 기간의 길이는 실험이 수행되면서 달라진다. 예를 들어, 30 ℃에서 96 시간 체이스 순서대로 GAL80 TS를 사용하여 실험에 필요할 수있다 완전히 GAL4 종속 유전자 발현을 활성화합니다. </li></ol> 이산화탄소 -collection 장치의 제조 3 <ol><li> 14 C-포도당 또는 14 C-팔 미트 산, 그쪽으로 표시 파리를 포함 구성 &quot;포드 비행&quot;하는 재료, 메쉬 캡 튜브를 조립t는 대기에 개방 유지됩니다. 25mm 길이, 둥근 바닥 튜브를 떠나, 12mm X 75mm 폴리 프로필렌 튜브의 상단에 50mm를 잘라. 130 μm의 나일론 메쉬의 35mm X 35mm 사각형을 준비합니다. 또한, 테이프 디스펜서에 투명 테이프를 구하십시오. </li><li> 이산화탄소 -collection 장치의 재료를 조립합니다. 각 포드 플라이를 들어, 20 ㎖ 유리 섬광 바이알, 오프 중심 구멍을 가진 고무 상부 스토퍼 잘 상부 스토퍼의 구멍을 통해 삽입되는 중심 학년 GF / B 유리 미세 섬유 필터 종이 (2.1 cm 직경 어셈블 원, 1 ㎛ 기공). GF / B 여과지 때문에 높은 습윤 강도 및 높은 로딩 용량이 사용된다. </li><li> 사용의 날에 5 % KOH의 신선한를 준비합니다. 단지 3.4 단계 전에 접어 아니라 그 고무 상부 스토퍼 구멍을 통해 나사 결합되는 중앙에 원형 GF / B 여과지를 놓고, 5 % KOH 100 ㎕로 포화. 그림 1을 참조하십시오. </li><li> 레이블이없는 미디어하는 인큐베이션 (들)에 따라nesthetize는 CO 2로 날아갑니다. 브러시는 나일론 메쉬로 차단 폴리 프로필렌 튜브, 모자로 날아와 튜브에 메쉬를 준수하는 투명 테이프를 사용합니다. 파리 깨어과 메쉬가 안전하게 튜브에 부착되기 전에 탈출 방지하기 위해 신속하게 작업 할 수 있습니다. 파리의 동일한 수는 특정 실험에 대한 각 플라이 포드에 사용되어야한다; 10 - 플라이 포드 당 20 파리는 섬광 계수 (아래 단계 4.1)에 의해 측정을 위해 충분한 방사성 표지-CO 2 생산하고 있습니다. </li><li> 20 ㎖의 유리 섬광 유리 병에 파리 포드를 전송합니다. 고무 상단 마개가 잘 KOH 포화 GF / B 여과지를 포함하는 센터를 들고 유리 병 캡. 유리 섬광 유리 병의 입술 위에 고무 상단 마개의 넓은 정상을 접습니다. 그림 1을 참조하십시오. </li><li> 세트 유리 뚜껑이, 아크릴 용기에 파리를 포함하는 유리 병, 시간 (2 ~ 12 시간이 잘 작동)의 다양한 기간 동안 품어. </li></ol> 결과 4. 분석 <ol><li> 에서4 ml의 신틸레이션 칵테일을 함유하는 6 ml의 플라스틱 섬광 바이알로 배양, 뚜껑을 벗기다 유리 바이알 및 전송 KOH 포화 GF / B 여과지의 끝. </li><li> 필요한 경우, 저장 기판의 후 결정을 위해 -80 ℃에서 드라이 아이스와 저장소의 비행 포드에서 파리를 동결. 이러한 샘플은 방사성하고 그에 따라 저장해야합니다. </li><li> / μCi를을 CPM을 결정하기 위해 0.5 μCi를 방사성 표지 기판 - 배경 역할을하지 않는 GF / B 형 종이 필터를 포함하는 하나 0.1을 포함하는 하나 2 등 : 추가 섬광 유리 병을 준비합니다. </li><li> 제조사의 프로토콜에 따라, 섬광 계수기를 사용하여 각 시료에 대한 CPM을 측정한다. </li><li> 시간당 비행 당 pmol의 14 CO 2 / CPM 및 pmol의 14 CO 2를 계산합니다. 각 샘플에 대한 CPM 값의 배경 CPM을 뺍니다. 깔끔한 방사성 표지 기판 데이터에서 배경 보정 CPM / 샘플의 μCi를 카운트 계산합니다. <ol><li> 사용제조자가 제공 한 특정 활성 및 방사성 표지 된 기질의 농도를 방사 (예를 들어, 50 μCi를 / μmol, 0.1 μCi를 μL / 각각)이 pmol의 / CPM을 계산하도록. pmol의 14 CO 2 / 샘플 14 CO 2 / 샘플 CPM에서 배경 보정 플라이 포드 데이터를 변환하기 위해이 요소를 사용합니다. 그리고 파리의 수와 비행 포드 시간의 숫자로 나눕니다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Wangler, M. F., Yamamoto, S., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruit+flies+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Fruit flies in biomedical research.</a> Genetics. 199 (3), 639-653 (2015).</li>
<li>Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+the+golden+bug%2C+emerges+as+a+tool+for+human+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Drosophila, the golden bug, emerges as a tool for human genetics.</a> Nat Rev Genet. 6 (1), 9-23 (2005).</li>
<li>Owusu-Ansah, E., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+metabolic+homeostasis+and+nutrient+sensing+in+Drosophila%3A+implications+for+aging+and+metabolic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Modeling metabolic homeostasis and nutrient sensing in Drosophila: implications for aging and metabolic diseases.</a> Dis Model Mech. 7 (3), 343-350 (2014).</li>
<li>Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+studying+metabolism+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for studying metabolism in Drosophila.</a> Methods. 68 (1), 105-115 (2014).</li>
<li>Deshpande, S. A., Carvalho, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+Drosophila+food+intake%3A+comparative+analysis+of+current+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying Drosophila food intake: comparative analysis of current methodology.</a> Nat methods. 11 (5), 535-540 (2014).</li>
<li>Bland, M. L., Lee, R. J., Magallanes, J. M., Foskett, J. K., Birnbaum, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPK+supports+growth+in+Drosophila+by+regulating+muscle+activity+and+nutrient+uptake+in+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+biol%22%5BJournal%5D)">AMPK supports growth in Drosophila by regulating muscle activity and nutrient uptake in the gut.</a> Dev biol. 344 (1), 293-303 (2010).</li>
<li>Hulbert, A. J., Clancy, D. J., Mair, W., Braeckman, B. P., Gems, D., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+rate+is+not+reduced+by+dietary-restriction+or+by+lowered+insulin%2FIGF-1+signalling+and+is+not+correlated+with+individual+lifespan+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Geront%22%5BJournal%5D)">Metabolic rate is not reduced by dietary-restriction or by lowered insulin/IGF-1 signalling and is not correlated with individual lifespan in Drosophila melanogaster.</a> Exp Geront. 39 (8), 1137-1143 (2004).</li>
<li>Van Voorhies, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+function+in+Drosophila+melanogaster+in+response+to+hypoxia+and+pure+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Metabolic function in Drosophila melanogaster in response to hypoxia and pure oxygen.</a> J. Exp. Biol. 212 (19), 3132-3141 (2009).</li>
<li>Montooth, K. L., Marden, J. H., Clark, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+determinants+of+variation+in+energy+metabolism%2C+respiration+and+flight+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Mapping determinants of variation in energy metabolism, respiration and flight in Drosophila.</a> Genetics. 165 (2), 623-635 (2003).</li>
<li>Yatsenko, A. S., Marrone, A. K., Kucherenko, M. M., Shcherbata, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+metabolic+rate+in+Drosophila+using+respirometry%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Measurement of metabolic rate in Drosophila using respirometry.</a> JoVE. (88), e51681(2014).</li>
<li>Icreverzi, A., de la Cruz, A. F., Van Voorhies, W. A., Edgar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+cyclin+D%2FCdk4+regulates+mitochondrial+biogenesis+and+aging+and+sensitizes+animals+to+hypoxic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+cycle%22%5BJournal%5D)">Drosophila cyclin D/Cdk4 regulates mitochondrial biogenesis and aging and sensitizes animals to hypoxic stress.</a> Cell cycle. 11 (3), 554-568 (2012).</li>
<li>Tuttle, S., Muschel, R., Bernhard, E., McKenna, W. G., Biaglow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+ability+of+cells+overexpressing+MYC+proteins+to+reduce+peroxide+and+hydroperoxides%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Decreased ability of cells overexpressing MYC proteins to reduce peroxide and hydroperoxides.</a> Br J Cancer. 27, 140-144 (1996).</li>
<li>Ontko, J. A., Jackson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+rate+of+oxidation+of+fatty+acids+in+animal+tissues.+Effect+of+substrate+concentration%2C+pH%2C+and+coenzyme+a+in+rat+liver+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the rate of oxidation of fatty acids in animal tissues. Effect of substrate concentration, pH, and coenzyme a in rat liver preparations.</a> J Biol Chem. 239, 3674-3682 (1964).</li>
<li>Vincent, A., Briggs, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((parkin-induced+defects+in+neurophysiology+and+locomotion+are+generated+by+metabolic+dysfunction+and+not+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Gen%22%5BJournal%5D)">parkin-induced defects in neurophysiology and locomotion are generated by metabolic dysfunction and not oxidative stress.</a> Hum Mol Gen. 21 (8), 1760-1769 (2012).</li>
<li>Katz, J., Abraham, S., Hill, R., Chaikoff, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+occurrence+and+mechanism+of+the+hexose+monophosphate+shunt+in+rat+liver+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The occurrence and mechanism of the hexose monophosphate shunt in rat liver slices.</a> J Biol Chem. 214 (2), 853-868 (1955).</li>
<li>Katz, J., Wood, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+glucose-C14+for+the+evaluation+of+the+pathways+of+glucose+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The use of glucose-C14 for the evaluation of the pathways of glucose metabolism.</a> J Biol Chem. 235 (8), 2165-2177 (1960).</li>
<li>Piper, M. D. W., Blanc, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+holidic+medium+for+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+methods%22%5BJournal%5D)">A holidic medium for Drosophila melanogaster.</a> Nat methods. 11 (1), 100-105 (2014).</li>
<li>Sang, J. H., King, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+Requirements+of+Axenically+Cultured+Drosophila+Melanogaster+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Nutritional Requirements of Axenically Cultured Drosophila Melanogaster Adults.</a> J Exp Biol. , (1961).</li>
<li>Chernick, S. S., Chaikoff, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+and+hepatic+utilization+of+glucose+for+lipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Insulin and hepatic utilization of glucose for lipogenesis.</a> J Biol Chem. 186 (2), 535-542 (1950).</li>
<li>Van Voorhies, W. A., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+the+%22rate+of+living%22+model%3A+further+evidence+that+longevity+and+metabolic+rate+are+not+inversely+correlated+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Phys%22%5BJournal%5D)">Testing the "rate of living" model: further evidence that longevity and metabolic rate are not inversely correlated in Drosophila melanogaster.</a> J Appl Phys. 97 (5), 1915-1922 (2004).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계를 선언하지 않습니다.

이 프로토콜은 성인 초파리 특정 방사성 표지 된 기질의 산화를 측정하는 방법을 설명한다. 이 방법은 간단 정량적 재현성 성이며,이 ATP 생산에 산화 영양소 (들)를 식별 할 수 있기 때문에 전체 CO 2 생산 O이 소비를 측정하는 기존의 방법을 보완한다. 여기에 설명 된 방법을 사용하여 특정 방사성 표지 된 기질의 산화로부터 유리 CO 2의 측정은 전체 CO 2 생산을 측정하는 기술을 보완한다. 총 CO 2 제품 (V의 CO2가) 및 총 O 2 소모량 (V O2)가 공지되면, 대사 속도를 산출 할 수 있고, 산화 반응을위한 연료 소스 호흡 교환 비율에 기초하여 추정 될 수있다 (V를 대사량의 평가를 허용 CO2 / V의 O2 = RER). 언제탄수화물 배타적 기판 RER = 1이지만, 지방산은 단독 소스 RER = 0.7, 포도당, 지질의 산화 반응의 화학량 론에 의해이 때. 초파리 (14)의 산소 소비를 측정하는 장치의 부재에있어서, 상기 산화성 연료 소스를 식별 할 수 없다. 라벨이 추적 한 방사성 기판 또는 다른 양 및 방사성 표지 CO 2 생산의 측정 속도로 운항하는 항공사에 의해 그러나, 하나는 자극 동안이나 효과에 대해 서로 다른 시간 지점에서 주어진 기판을 산화하는 파리의 능력에 대한 결론을 도출 할 수 있습니다 연료의 산화에 돌연변이를 부여. 이 프로토콜에서 중요한 단계가 있습니다. 유출 및 연구 분야의 오염을 방지하기 위해, 방사성 물질을 사용할 때는 먼저주의를 기울여야한다. 단계 2.1 및 3.4 중 파리 마취 둘째, 실험자 장시간 CO (2)의 효과를 피하기 위하여 신속하게 작동해야신진 대사와 행동에 노출. 20 파리의 그룹 마취 새로운 바이알에 20 초 이하에서 비행 포드로 전송할 수 있습니다. 식품 유리 병에 마취 장치에서 전송하면, 유리 병은 음식 표면에 갇히지에서 마취 파리를 방지하기 위해 옆에 휴식해야한다. 파리 단계 2.2에서와 같이 여러 날에 걸쳐 공급 방사성 표지 음식 경우, 실험자는 파리 탈수에 민감로 음식이 건조하지 않도록 보장해야한다. 연방 또는 금식 상태 사전 라벨링 라벨의 선택, 표시 시간의 길이, 플라이 포드 기간, 마취의 방법은이 방법을 사용할 때, 문제 및 변형을 실시 할 수있는 파라미터이다. (- 3 시간 2) 사전에 금식 기간을 실시하지 않는 방사성 표지 음식의 상당량을 소비 할 가능성이 첫째, 짧은 라벨링 기간을 실시 날아갑니다. 라벨 C 둘째, 검색한 대사 표현형에 대한 이끌어 낼 수있는 결론에 영향을 미칩니다. 예를 들어, D-에서 방사성 표지 CO 2 생산 [1- (14) C] 글루코스는 시트르산 사이클 또는 펜 토스 포스페이트 션트 통해 산화를 반영 할 수는 D-에서 방사성 CO 2 생산 반면 [6- (14) C] 글루코스 산화 반영 시트르산 회로 통해서만 12,15,16. 필수 아미노산 (17, 18)에 대한 방사성 트레이서 파리 먹이는 것은 단백질 유래의 아미노산의 산화를 평가하는 좋은 전략이 될 것이다. 마지막으로, 방사성 표지 포도당과 긴 표시 기간은 또한 중성 지방 (19)와 같은 쉽게 피루브산과 interconverts 알라닌 등의 아미노산과 같은 분자의 다른 클래스에이 전구 물질의 혼입의 가능성을 올립니다. 이것은 분자 (6)의 서로 다른 클래스에 혼입 된 방사능을 측정함으로써 평가 될 수있다. 사실, 파리의 별도의 동료가 공급 될 수 방사선동일한 방식으로 기판 iolabeled하고, 예를 들면 조건 (6)에 저장된 공급 글리코겐 및 트리글리세리드 유지 금식된다 플라이 포드 실험 또는 방사능 표지의 측정에 사용된다. 또 다른 전략은 방사성 표지식이 영양소 자체 산화 이들 영양소 저장되지 형태 공개 가능성 단락 표시 기간을 사용하는 것이다. 셋째, 파리의 두 그룹이 처음 주어진 시간에 걸쳐 14 CO 2 생산의 동일 등급하지만, 매우 상이한 레이트를 가질 수 있다는 것도 가능하다. 따라서, 플라이 창에 지출 파리 시간의 양을 변화하면 표현형의 변화를 평가할 때 변경하는 중요한 매개 변수 일 수있다. 마지막으로,이 프로토콜은 CO 2 마취 플라이 포드 장치에 파리를 넣어 짧은 기간의 사용을 요구한다. CO 2 마취 플라이 포드 실험의 과정을 통해 대사 기능에 영향을 미칠 수있다. 또 다른 a를pproach은 신진 대사 속도 (20)에 영향을주지 않습니다 질소 마취를 사용하는 것입니다. 연료의 산화 및 신진 대사 속도와 같은 복잡한 시스템을 측정하는 기술과 마찬가지로, 여기에 설명 된 방법은 한계가있다. 첫째, 기판의 다른 시작 양 분석의 CO 2 컬렉션 위상을 입력 따라서 방사성 음식의 다른 양을 소비 할 수있는 다른 그룹에 날아 것이 가능하다. 이것은 큰 샘플 크기의 실험을 수행함으로써 한꺼번에 파리를 공급함으로써 어느 정도에 대해 제어 될 수있다. 비슷한 푸른 색 용기는 방사성 표지를 소비 한 것이며 실험의 추적 부분에 이월 할 수와 짧은 라벨 기간 동안, 파리. 파리의 그룹에 남아있는 방사성 표지의 양을 또한 실험의 끝에서 상기 공급 및 초기 추적 기간 종료 후 파리 별도 코호트를 측정 할 수있다. 사이 둘째, 활동 수준파리 포드에서 파리의 그룹이 다를 수 있습니다. 이는 실험적으로 결정된 데이터를 해석 할 때 고려되어야 할 것이다. 셋째로,이 기술은 전체 CO 2 생산 특정한식이 영양제 또는 영양소의 저장 형태 (들) 만 생산을 측정하지 않는다. 이 프로토콜은 대체하지 않습니다하지만 다른 및 추가 정보를 제공하기 때문에 대신 VCO (2)의 측정을 보완. 여기에 기재된 방법은 특정 대사 기질 미량의 산화 반응의 산물이며, 방사성 CO 2 호기 측정한다. 포도당 지방산 또는 아미노산 - - 사용 된 상표를 변화시킴으로써 하나는 기아 같은 다른 유전 적 배경에 다른 생리 학적 조건하에 대사 상이한 기판들의 기여를 평가하기 위해 더욱 정교한 실험을 설계 할 수있다. 이 기술의 미래 응용 프로그램은 metabolis의 측정을 포함개발의 애벌레와 번데기 단계, 각각 영양소 저장 및 고장의 극단을 특징으로 초파리의 수명주기의 두 단계에서 m.

모델 생물 초파리 melanogaster의에서 작업 유전 원리, 발달 과정, 성장, 노화, 행동, 내성과 인간의 질병 1,2의 이해에 크게 기여하고있다. 초파리의 유전 및 세포 생물학적 접근 방법의 무수한은이 분야에서 발전을 주도하고있다. 그러나, 초파리의 신진 대사의 연구는 더 느리게 개발 등 작은 동물의 신진 대사 매개 변수를 측정의 어려움에 상당 부분 기인하고있다. 당뇨병과 같은 인간의 질병을 연구하는 모델로 초파리를 이용하여과 성장과 다양한 병리에 신진 대사의 기여를 이해에 대한 관심은 개발이 생물 3,4를위한 대사 기술을 적용 할 필드를 밀었다. 신뢰할 수있는 방법은 이제 초파리 대사 매개 변수의 수의 측정에 사용할 수 있습니다. 예를 들면, 식품 섭취를 평가 간단 <s&gt; 5까지 저장 트리글리세리드 글리코겐뿐만 아니라 혈당 수준 체액 순환 글루코스 4 개의 분자로 구성된 이당류 플라이, 트레할로스, 주요 순환 당 수준. 대사 추적자의 사용은 저장 형태의 글리코겐과 중성 지방 6 포도당으로식이 요법과 흡수 된 영양소의 전환에서 영양소 흡수에 대한 연구를 활성화하고있다. 대사율 열매 산소 소비 7,8 이산화탄소 측정 날아 (CO 2) 생산에 평가 될 수있다. 시트르산 회로식이 저장 탄수화물과 지방산의 대사로부터 유도되는 아세틸 코엔자임 A (COA)로서주기를 입력 할 수있는 두 개의 탄소 단위를 산화시킨다. 싸이클마다 한 차례 GTP (또는 ATP)의 각 분자 및 전자 공여체 FADH 2 NADH 세 분자 및 폐 제품이 CO 2 분자를 생성한다. CO 2 생산 수기초 대사 속도를 추정하는데 이용 될 수있다. 총 CO 2 생산은 시판 또는 제 respirometers 9-10,11의 사용을 통해 초파리에서 정량화 할 수있다. 특히 O이 소비의 측정과 결합 된 총 CO 2 생산의 측정은, 전신 에너지 대사에 대한 통찰력을 제공한다. 그러나, 영양을 식별하지 않는이 법안은 아데노신 삼인산 (ATP) 생산을 위해 산화된다. 탄수화물, 지방산, 단백질 : 영양소의 세 가지 주요 클래스는 CoA를 아세틸하는 TCA 회로 다음 변환을 입력 할 수 있습니다. 글루코오스 -6- 포스페이트, 글루코오스 또는식이 저장된 글리코겐으로부터 유도는 아세틸 CoA를 형성하는 피루 베이트 탈수소 효소에 의해 피루브산 탈 카복실되고 변환 될 수있다. 다음 시트르산 회로 입사 아세틸 -CoA ß 산화 수율로식이로부터 또는 저장 트리글리세리드로부터 유도 된 지방산의 고장. 최종적으로아미노산의 대부분은 알파 - 케 토글 루타 레이트 등의 아실 CoA 또는 시트르산 사이클의 중간체 인 아세틸 피루브산으로 변환 후 시트르산 회로를 입력 할 수있다. 기저 및 자극 조건에서 에너지 대사 영양 관련 기여 방사성 트레이서를 사용하여 모니터링 할 수있다. 여기에 제시된 프로토콜 12,13 배양에서 배양 세포에서 산화를 평가하기 위해 사용되는 프로토콜로부터 초파리에서 사용하기 위해 적합하다. 이 방법에서, 초파리는 공급 (14) C-방사성 표지 대사 기판 (탄수화물, 지방산, 또는 아미노산) 짧은 (시간)의 규정 또는 긴 (일) 펄스, 레이블이없는 음식 추격 한 다음에 노출됩니다 챔버 중탄산 호기 CO 2 포집 수산화 칼륨 (KOH) 포화 된 여과지를 포함. 방사성 표지는 중탄산 섬광 계수에 의해 정량화 될 수있다. 실험 사이의 방사성 표지-CO 2 생산의 차이파리 알 기는 예 유전자형 간의 연료 대사 연장 빠르거나 본질적인 차이에 걸쳐 ATP 생산을위한 다른 연료의 사용을 반영 할 수있다.

<table><tbody><tr><td>팔미트산, [1-14C]-, 50 &마이크로; Ci</td><td>PerkinElmer</td><td>NEC075H050UC</td><td></td></tr><tr><td>GLUCOSE, D-[6-14C]-, 50 &마이크로; Ci</td><td>PerkinElmer</td><td>NEC045X050UC</td><td></td></tr><tr><td>포도당, D-[1-14C]-, 50&micro; Ci</td><td>PerkinElmer</td><td>NEC043X050UC</td><td></td></tr><tr><td>초파리 바이알, 좁은, 폴리스티렌</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-116</td><td></td></tr><tr><td>둥근 바닥 폴리프로필렌 튜브, 12 x 75 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959AA</td><td></td></tr><tr><td>메쉬, nitex 나일론, 120 &micro; m</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102</td><td></td></tr><tr><td>20ml 붕규산 유리 섬광 바이알</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-15</td><td></td></tr><tr><td>오프 센터 홀이 있는 플라스크 상단 스토퍼</td><td>Fisher Scientific</td><td>K882310-0000</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 센터 웰</td><td>Fisher Scientific</td><td>K882320-0000</td><td></td></tr><tr><td>Whatman GF/B 유리 극세사 여과지, 원형, 직경</td> <td>2.1cmFisher Scientific</td><td>09-874-20</td><td></td></tr><tr><td>Ecoscint A</td><td>National Diagnostics</td><td>LS-273</td><td></td></tr><tr><td>6 ml 섬광 바이알, 푸시-온/트위스트-오프 캡</td><td>포함 National Diagnostics</td><td>SVC-06</td><td></td></tr></tbody></table>

방사성 표지 된 기판에서 이산화탄소 생산에서의 측정<em&gt; 노랑 초파리</em

Measurement of Carbon Dioxide Production from Radiolabeled Substrates in Drosophila melanogaster

초파리 유전학의 힘은 점점 호르몬 신호 전달과 신진 대사의 질문에이 유기체 인간 질병 모델의 개발에 적용되고있다. 이러한 신진 대사 속도와 같은 매개 변수 측정을위한 민감한 방법 등의 과일 파리 같은 작은 동물의 생리 및 질병의 이해를 구동하기 위해 필요하다. 여기에 설명 된 방법은 포도당이나 지방산 등의 14 C 표지 기판 미량 함유 식품을 공급 성인 초파리 소수 연료의 산화를 평가한다. 공급 기간과 추가 실험 조작 후에, 파리, 방사성 CO 2 중탄산 칼륨과 같은 방사성 표지 된 기질의 산화 반응에서 생성 된 후 트랩 호기 KOH 포화 된 여과지를 함유하는 유리 병에 위치 메쉬 캡핑 짧은 튜브로 전송 KHCO 3. 이것은 방사성 중탄산은 섬광 계수에 의해 측정된다. 이 수성이다연료 산화의 연구, uan​​titative 재현하고 간단한 방법. 방사성 표지 된 글루코스, 지방산, 또는 아미노산의 사용은 공급 금식 같은 다른 유전 적 배경을 다른 조건으로 에너지 대사에 서로 다른 연료 원의 기여의 결정을 허용한다. 이것은 생체 에너지 대사에서 측정하는 데 다른 방법을 보완 및 대사 조절의 이해를 촉진한다.

방사성 기질의 대사로부터 생성되는 호기 및 포획 방사성 CO 2의 양 플라이 포드 파리의 수뿐만 아니라 동물의 CO 2 회수 장치에 소요되는 시간과 상관한다. 이를 테스트하기 위해 18 시간 동안 금식 한 파리 2 시간 동안 방사성 표지 팔 미트 산 (0.02 μCi를 / μL 음식)를 공급 한 후 3 ~ 6 시간의 배양을위한 12 또는 25 동물의 그룹에서 방사성 표지 CO 2 생산을위한 시험 하였다. 25 파리 제조 CO 2의 양은 12 파리 제조 거의 두 배였으며, 각 그룹의 양이 항온 처리 시간은 6 시간 (도 2a)을 3 시간으로 증가 될 때 두배. pmol의 14 CO 2 / 파리 / 시간은 각 그룹에서 거의 동등했다. 금식 ß 오하여 지방산 류의 분해를 촉진xidation; 따라서 지방산 산화에서 CO 2 생산 먹인 동물에 비해 절식 동물에서 증가한다. 이 경우인지 확인하려면 18 시간이 파리 2 시간 동안 방사성 팔 미트 산을 공급 하였다 금식. 짧은 펄스 공급 후, 파리의 두 그룹으로 분할하고, 3 시간 동안 비 표지 즉석 식품을 1 % 아가로 전송 한 다음 2 시간 동안 포드 비행 옮겼다. 두 개의 별도의 실험에서, ß 산화가 금식 동물 증가되었음을 나타내는 식품 (그림 2B)에 쫓아 파리와 비교 한천 생산 훨씬 더 많은 방사성 표지 CO 2에 쫓아 날아갑니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/54045/54045fig1.jpg" /> 도 1 호기 수집 장치 방사성 표지 CO 2. 방사성 표지 대사 기판을 소비 한 파리는는 &quot;비행 포드&quot;(FP), 메시 (M)로 출장 컷오프 원심 분리기 튜브에 배치했다. 플라이 포드 100 μL 포화 GF / B 여과지를 포함하는 중앙 웰 (CW)를 배치되는 오프 - 센터 홀을 포함하는 고무 상부 스토퍼 (S)와 20 ㎖ 유리 섬광 바이알에 넣고, 캡핑 5 % KOH. 호기 CO 2는 KOH와 반응 중탄산 여과지에 포집된다. 갇혀, 방사성 표지 CO 2가 포화 여과지의 섬광 계수에 의해 정량화 할 수있다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54045/54045fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/54045/54045fig2.jpg" /> 그림 2 시간 14 CO 2 생산의 상관 관계와 파리에서의 수연준 금식 조건에 비행 포드와 응답합니다. (A) 방사성 표지 팔미 테이트 공급 파리에서 생산 된 14 CO 2의 양 (N = 12 (오픈 바) 또는 25 (폐쇄 바)) 파리 포드에서 소비와 시간 (3 또는 6 시간 시험 파리의 수와 상관 관계 ). 당 비행을 바탕으로, 파리는 0.99, 1.13, 1.10 및 1.01 pmol의 14 CO 2 / 시간 (그래프 데이터로 올바른 순서로 같은 왼쪽에 나열된 데이터)를 생산했다. (B) 음식을 추격했다 파리보다 팔미 테이트 더 많은 방사성 표지 산화 한천에 추격했다 파리. 데이터는 두 실험이며 표준 편차 수단으로보고되는 N = 16-17 파리 / 그룹 (실험 1); N = 10 파리 / 그룹 (실험 2). * P = 0.017, 학생의 t-test를. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54045/54045fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

이 논문은 미량의 특정 방사성 표지 대사 기질을 파리에게 공급하는 Drosophila melanogaster의 연료 산화 측정 방법을 설명합니다. 연료 산화로 인해 생성된 호기된 방사성 표지된 CO2 가 수집되고 측정됩니다.

The power of Drosophila genetics is increasingly being applied to questions of hormone signaling and metabolism and to the development of models of human ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 palmitic acid 또는 glucose와 같이 방사성 동위원소로 표지된 기질을 설정하여, 살아있는 초파리가 생성하는 이산화탄소를 측정하는 것입니다. 이 방법은 특정 돌연변이가 에너지 대사에 영향을 미치는지 여부와 같이 Drosophila 연구자들이 가진 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 적은 수의 초파리를 대상으로 연료 산화에 대한 정량적이고 민감하며 재현 가능한 측정이 가능하다는 점입니다.초파리가 마취에서 깨어나기 전에 실험 장치를 올바르게 구축하려면 작은 부품들을 빠르게 조작하여 플라이 포드(fly pod)를 조립해야 하므로, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. Carbon-14는 저에너지 베타 방출체이며 공기 중 도달 거리가 짧지만, 방사성 표지 분물이 유출되거나 실험자가 실수로 섭취하지 않도록 여전히 주의를 기울여야 합니다. 1~2 $\mu\text{Ci}$의 방사성 표지 기질을 15 $\mu\text{L}$의 FD&C Number One 청색 식용 색소 및 물과 혼합하여 총 부피 25 $\mu\text{L}$가 되도록 준비하십시오.방사성 표지된 기질과 청색 염료 혼합물 전체를 빈 초파리 배지 바이알 바닥에 피펫으로 옮깁니다. 초파리 배지 바이알은 쉽게 쓰러지므로, 쓰러지지 않도록 고정할 수 있는 용기에 보관하십시오. 표준 초파리 배지를 전자레인지에서 배지가 막 액화될 때까지 가열합니다.10 mL의 식품이 들어 있는 바이알 하나당 일반적으로 고출력 단계에서 15~20초간 가열하는 것으로 충분합니다. 녹은 식품 975 µL를 방사성 표지 기질 및 청색 염료 혼합물에 추가하고, 청색의 균일성을 확인하며 빠르게 소용돌이치듯 섞어 완전히 혼합되도록 합니다. 점성이 있는 녹은 식품을 정확하게 파이펫팅하기 위해 가위로 파이펫 팁의 끝부분을 잘라 입구를 넓혀야 할 수도 있습니다.음식을 실온에서 20~30분 동안 완전히 식혀 굳힙니다. 아크릴 베이스에 다공성 폴리에틸렌을 융합하고 압력 조절기가 달린 이산화탄소 탱크에 연결한 이산화탄소 마취 장치를 사용하여 성체 파리를 마취합니다. 이산화탄소를 마취 장치로 분당 5L의 속도로 흘려보냅니다.마취된 초파리를 방사성 표지된 청색 염료 먹이가 들어 있는 바이알로 옮깁니다. 각 바이알을 폼 마개로 막고 초파리가 깰 때까지 수평으로 눕혀 둡니다. 그 후 바이알들을 뚜껑이 있는 아크릴 용기로 옮깁니다.단기 급여의 경우, 2~3시간의 급여 단계 동안 파리가 확실히 섭식하도록 방사성 표지 식품으로 옮기기 전 18~24시간 동안 굶깁니다. 5~7일에 걸친 장기 급여의 경우, 파리를 굶길 필요는 없으나 실험자는 바이알 내 방사성 표지 식품의 수분 함량을 모니터링해야 하며, 식품이 마른 바이알에는 바늘과 주사기를 사용하여 물을 추가해야 합니다. 방사성 표지 기질 급여 기간이 끝나면, 파리를 가볍게 두드려 새 바이알로 옮김으로써 비표지 식품으로 교체합니다.2~4시간의 초기 추적 기간(chase period)을 통해 초파리가 큐티클에서 방사성 표지된 먹이 입자를 제거하고, 장 내에 남아 있는 방사성 표지된 먹이의 소화를 유도합니다. 초파리를 육안으로 관찰하여 복부가 푸른색으로 변하는지 확인함으로써 장을 통한 먹이의 이동 진행 상황을 모니터링하십시오. 그 후, 초파리를 다른 종류의 먹이나 다른 주변 온도로 옮깁니다.이 추적 기간의 길이는 수행하는 실험에 따라 달라집니다. 이산화탄소 수집 장치를 만들기 전에, C-14 포도당 또는 C-14 팔미트산으로 표지된 초파리를 넣고 대기에 개방해 둘 메쉬 캡 튜브인 초파리 포드(fly pod)를 제작하기 위한 재료를 준비하십시오. 지혈 겸자로 면도날을 고정한 다음, 분젠 버너의 불꽃으로 면도날이 빨갛게 달아오를 때까지 가열하고, 가열된 날을 사용하여 12 mm x 75 mm 폴리프로필렌 튜브의 상단 50 mm를 잘라내어 25 mm 길이의 라운드 바텀 튜브를 만듭니다.130 micron 나일론 메시를 35 millimeter × 35 millimeter 크기의 정사각형으로 준비합니다. 투명 테이프를 1.5~2인치 길이로 여러 조각 자릅니다. 다음으로, 이산화탄소 수집 장치에 필요한 재료들을 준비합니다.각 플라이 포드(fly pod)에 대해 20 milliliter 유리 신틸레이션 바이알, 중심에서 벗어난 구멍이 있는 고무 마개, 센터 웰, 그리고 GFB 등급 유리 마이크로파이버 필터 페이퍼를 준비합니다. 센터 웰을 상단 마개의 구멍을 통해 삽입합니다. 5% 수산화칼륨은 사용 당일에 새로 조제합니다.초파리를 플라이 팟(fly pod)으로 옮기기 위해 마취시키기 직전에, 원형 GFB 필터 페이퍼를 접어 고무 상단 마개 구멍에 끼워진 중앙 웰에 넣고 100 µL의 5% 수산화칼륨으로 적십니다. 마취된 초파리를 플라이 팟으로 옮기는 과정은 이 프로토콜에서 가장 어려운 단계입니다. 성공적인 수행을 위해 필요한 모든 재료를 가까이 두고, 초파리가 이산화탄소에 노출되는 시간을 최소화하며, 메쉬가 튜브에 단단히 고정되기 전에 초파리가 깨어나 탈출하는 것을 방지하기 위해 신속하게 작업하십시오.표시되지 않은 배지에서 배양한 후, 이산화탄소로 초파리를 마취시킵니다. 마취된 초파리를 절단된 폴리프로필렌 튜브 속으로 쓸어 넣고, 나일론 메쉬로 뚜껑을 덮은 뒤 투명 테이프를 사용하여 메쉬를 튜브에 고정합니다. 특정 실험의 각 초파리 포드에는 동일한 수의 초파리를 사용해야 합니다.플라이 팟당 10~20마리의 파리는 신틸레이션 계수를 통해 측정하기에 충분한 방사성 표지 이산화탄소를 생성합니다. 플라이 팟을 20 milliliter 유리 신틸레이션 바이알로 옮깁니다. 수산화칼륨으로 포화된 GFB 필터 페이퍼가 들어 있는 중앙 웰이 달린 고무 마개로 유리 바이알을 닫습니다.고무 마개 윗부분의 넓은 면을 유리 신틸레이션 바이알의 입구 가장자리 위로 접어 덮습니다. 파리가 들어 있는 유리 바이알을 뚜껑이 있는 아크릴 용기에 넣고 다양한 시간 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 유리 바이알의 뚜껑을 열고, 수산화칼륨으로 포화시킨 GFB 여과지를 4 mL의 신틸레이션 칵테일이 들어 있는 6 mL 플라스틱 신틸레이션 바이알로 옮깁니다.추가적인 신틸레이션 바이알을 준비합니다. 하나는 배경값(background)으로 사용할 미사용 GFB 여과지를 넣고, 다른 한두 개의 바이알에는 분당 횟수당 마이크로큐리(counts per minute per microcurie)를 결정하기 위해 0.1에서 0.5 microcurie의 방사성 표지 기질을 넣습니다. 신틸레이션 카운터를 사용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 각 샘플의 분당 횟수를 측정합니다. 이후, 프로토콜 본문에 설명된 대로 총 이산화탄소 생성량을 계산합니다.파리를 18시간 동안 단식시킨 후, 방사성 표지된 palmitic acid를 2시간 동안 공급하였으며, 이후 12마리 또는 25마리의 동물 그룹으로 나누어 3시간 또는 6시간 동안 배양하며 방사성 표지된 이산화 탄소 생성을 측정하였습니다. 이 그래프에서 알 수 있듯이, 25마리의 파리가 생성한 이산화 탄소의 양은 12마리가 생성한 양의 거의 두 배였으며, 배양 시간이 3시간에서 6시간으로 증가함에 따라 각 그룹의 생성량이 두 배로 증가하였습니다. 파리 한 마리당 시간당 생성된 picomolar 단위의 방사성 표지 이산화 탄소 양은 각 그룹에서 거의 동일하였습니다.단식이 베타 산화를 통한 지방산 분해를 촉진하므로, 단식한 동물은 급여된 동물에 비해 지방산 산화로 인한 이산화탄소 생성이 증가해야 합니다. 이를 테스트하기 위해, 18시간 동안 단식시킨 초파리에게 방사성 표지된 palmitic acid를 2시간 동안 급여한 후 두 그룹으로 나누어, 표지되지 않은 초파리 먹이 또는 1% agar로 옮겼습니다. 두 차례의 별도 실험 결과, agar에서 체이스(chase) 과정을 거친 초파리가 먹이에서 체이스한 초파리보다 방사성 표지된 이산화탄소를 유의하게 더 많이 생성하였으며, 이는 단식한 동물에서 베타 산화가 증가했음을 나타냅니다.이 절차에 이어, 선호하는 연료원이 무엇인지와 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 총 이산화탄소 생성량 및 총 산소 소비량 측정, 호흡 교환비 계산과 같은 보완적인 방법들을 수행할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후, 여러분은 특정 돌연변이나 실험적 조작이 특정 연료를 에너지원으로 사용하는 능력에 미치는 영향을 결정하기 위해 이 프로토콜을 사용하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 방사성 물질을 다루는 것은 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 장갑, 실험복, 보호 안경을 착용하고 적절한 차폐 장치를 사용하는 등의 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

measurement-carbon-dioxide-production-from-radiolabeled-substrates

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오에서는 Drosophila melanogaster의 흉부에 E. coli를 주입한 후 E. coli 박테리아 부하를 측정하는 기술을 보여줍니다.

Measuring E. coli Bacterial Load in Drosophila melanogaster following E. coli Infection(대장균 감염 후 Drosophila melanogaster의 대장균 박테리아 부하)

대사 질환은 인간에서 가장 흔한 질병 중 하나들이다. 유 전적으로 다루기 쉬운 모델 생물 D. melanogaster의 대사를 조절하는 신규 한 유전자를 확인하는데 사용될 수있다. 이 논문은 자신의 CO 2 생산을 측정하여 파리의 신진 대사 속도를 연구 할 수있는 비교적 간단한 방법을 설명합니다.

대사율의 측정에<em&gt; 초파리</em&gt; Respirometry를 사용하여

이 논문에서 초파리의 permeabilized 직업적인의 고해상도 respirometry를 사용 하 여 산소 소비량을 측정 하는 방법을 설명 합니다. 이 기술은 조직의 고전적인 미토 콘 드 리아 격리 기술에 비해 최소한의 금액을 요구 하 고 얻은 결과 더 순수 관련.

조직의 최소 금액을 사용 하 여 초파리의 Permeabilized 섬유에 미토 콘 드리 아 산소 소비량의 측정

선물이 산소 소비와 초파리 melanogaster 애벌레와 성인 두뇌에 있는 세포 외 산성화를 측정 하기 위한 프로토콜. 신진 대사 분석기는 적응 하 고 최적화 된 프로토콜 활용 됩니다. 마이크로 조직 억제는이 프로토콜의 중요 한 구성 요소 설계 하 고이 분석에 그들의 사용을 위해 특히 창조 되었다.

초파리 melanogaster Larval 및 성인 두뇌의 변화 분석

전기량 호흡 측정법은 작은 유기체의 신진대사율을 측정하는 데 이상적입니다. 본 연구에서 Drosophila melanogaster에 대해 적응시켰을 때, 측정된O2 소비량은 이전 연구에서 야생형 D. melanogaster에 대해 보고된 범위 내에 있었습니다. 더 작고 덜 활동적인 CASK 돌연변이의 플라이당 O2 소비량은 야생형보다 현저히 낮았습니다.

전기량 미세호흡계를 사용한 초파리 멜라노가스터의O2 소비량 측정

이 문서에서 우리는 세번째 instar Drosophila의 유충에서 중추 신경계를 해부하다하는 방법을 보여줍니다.

Drosophila Melanogaster에서 애벌레 CNS의 해부

에서 복잡한 운전하는 동작의...

성인 Drosophila Melanogaster의 로코의 고해상도 비디오 추적

Drosophila의 hemocytes은 개발 배아의 전체를 통해 분산. 이 프로토콜은 찬란 표시된 hemocytes와 배아를 사용하여 이러한 마이 그 레이션을 마운트 및 이미지하는 방법을 보여줍니다.

라이브 영상 Drosophila melanogaster 배아 Hemocyte 마이 그 레이션

곤충에서 oenocytes는 cuticular 탄화 수소 화합물을 생산합니다. 이러한 화합물은 건조로부터 보호하고 화학 커뮤니케이 션을 촉진한다. 여기 우리는 성인에서 oenocytes을 분리하는 데 사용되는 절개 기법을...

성인에서 Oenocytes의 해부 Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster의 testes 신속하게하고 효율적으로 해부 바늘을 사용하여 성인 남성에서 격리 수 있습니다. 연습, 하나는 쉽게 하나 또는 두 일 이내에 항체 또는 효소 기반 assays 높은 처리량 시퀀싱 이상의 전통적인 분자 생물학의 방법으로 DNA 또는 RNA의 분석 또는 단백질의 충분한 testes의 양을 분리 수 있습니다.

의 분리 Drosophila melanogaster Testes

학습하세요 방사성 표지 기판을 이용한 Drosophila melanogaster의 이산화탄소 생산 측정 방법을 통해 에너지 대사를 정량적으로 분석하는 기술입니다. 이 방법은 유전자 변이가 대사에 미치는 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

방사성 표지 된 기판에서 이산화탄소 생산에서의 측정

더 많은 동영상 탐색