Zebrafish의 행동 증후군에 대한 대담, 침략, 그리고이 얕아 분석

이 프로토콜의 전반적인 목표는 제브라피시의 대담함, 공격성, 얕은 행동 증후군을 관찰, 분석 및 해석하는 데 사용되는 방법론을 표준화하는 것입니다. 직접적으로, 이 방법은 진화 이론, 개체군 구조 및 개체군 역학의 질문에 답할 수 있습니다. 학제 간 기술과 결합하면 약리학, 독성학, 행동 유전학 및 내분비학과 같은 분야에 적용 할 수 있습니다.

이 기술의 주요 장점은 대담함, 공격성, 얕은 조합이 제브라피시에서 잘 연구되고 쉽게 정량화할 수 있는 많은 행동을 포함한다는 것입니다. 또한 각 분석을 수정하여 대체 실험 질문에 답할 수 있습니다. 제브라피시를 초점 물고기와 자극 물고기의 적절한 비율로 무작위로 분리하는 것으로 시작합니다.

모든 물고기를 제브라피시 하우징 랙에 12-12시간의 엄격한 라이트/다크 주기로 보관하십시오. 모든 초점 및 자극 물고기에게 매일 플레이크 음식을 공급하십시오. 그리고 연구에 참여하지 않는 날에만 일주일에 한 번만 소금물 새우를 먹이십시오.

다음으로, 실험실에 3개의 분석 탱크를 설치합니다. 하나는 공격성, 대담함, 그리고 불리한 외부 자극의 가능성을 최소화하는 위치에서의 얕아짐에 대한 것이다. 그리고 비디오 카메라가 탱크 전체를 캡처할 수 있는 충분한 공간을 확보하십시오.

비디오 카메라를 설정하여 탱크 라벨을 볼 수 있을 만큼 충분히 선명하고 초점 물고기의 미묘한 행동을 구별할 수 있도록 합니다. 차등 기록으로 인한 행동 점수의 의도하지 않은 차이를 최소화하기 위해 모든 행동 분석 기록 중에 탱크를 완전히 볼 수 있도록 카메라를 동일한 위치로 유지하십시오. 다음으로, 모든 행동 분석에 대한 날짜, 물고기 번호 및 분석 번호를 추적하기 위한 라벨링 체계를 정의합니다.

탱크 외부에 테이프로 라벨을 붙입니다. 빠른 참조와 향후 품질 관리를 위해 이 정보를 실험실 노트북에 기록하십시오. 마지막으로, 모든 분석 사이에, 그리고 개체가 하우징 랙에서 꺼낸 직후에 사용될 적응 탱크를 설정합니다.

30 x 15 x 10cm 크기의 19리터 직사각형 탱크를 얻는 것으로 시작하십시오. 공격 탱크의 세 면을 둘러싸는 외부의 불투명한 칸막이를 탱크에 장착하고, 바람직하지 않은 외부 자극을 줄이기 위해 앞면을 볼 수 있도록 노출시킵니다. 외부 표시가 있는 탱크를 4개의 동일한 직사각형 사분면으로 나눕니다.

실리콘 코크를 사용하여 22.5도 기울어진 왼쪽 하단 사분면 내에 거울을 고정하여 탱크의 맨 왼쪽에 대해 직각 삼각형을 형성합니다. 섭씨 27.5도에서 28.5도로 예열된 신선하고 숙성된 물을 준비하고, 적응 탱크와 공격 탱크의 물 온도가 하우징 랙에서 섭씨 2도 이내가 되도록 공격성 탱크에 추가할 준비를 합니다. 하우징 랙에서 초점 물고기를 컵에 담아 별도의 적응 탱크로 옮겨 10분 동안 적응합니다.

비디오 카메라가 공격성 분석 탱크에 초점이 맞춰져 있는지 확인하고 기록을 누릅니다. 그런 다음 즉시 부항을 통해 초점 물고기를 순응 탱크에서 공격성 탱크로 옮깁니다. 10분 30초 동안 공격 탱크를 기록합니다.

그런 다음 공격성 탱크에서 초점 물고기를 순응 탱크로 다시 컵에 넣습니다. 분석이 완료된 후 녹음을 시청할 때는 물고기가 수조에 도입된 후 추가 적응 기간으로 30초 동안 기다렸다가 행동을 채점합니다. 마지막으로, 반복 간에 높은 일치도로 점수가 매겨질 때까지 단일 공격성 분석에 대해 최소 두 번 점수를 매깁니다.

대담성 분석을 설정하려면 먼저 높이 15cm, 상단 26.5cm, 하단 22.5cm, 너비 6cm의 작은 1.5리터 사다리꼴 탱크를 구합니다. 탱크의 세 면을 불투명 종이로 감싸고 앞면을 볼 수 있도록 노출시킵니다. 탱크 외부에 얇은 테이프 한 조각을 놓아 탱크의 상단 부분과 하단 부분을 구분합니다.

다음으로, 볼드니스 탱크의 물 온도가 하우징 랙에서 섭씨 2도 이내인지 확인합니다. 초점 물고기를 하우징 랙에서 적응 탱크로 옮기고 10분 동안 적응시키십시오. 비디오 카메라가 굵기 분석에 초점을 맞추고 있는지 확인하고 장치에서 RECORD를 누릅니다.

즉시 적응 탱크에서 대담 탱크로 초점 물고기를 옮기고 8분 30초 동안 기록합니다. 분석이 완료된 후 녹음을 시청할 때 점수를 매기기 전에 물고기를 수조에 도입한 후 추가로 30초의 적응 기간을 허용합니다. 마지막으로, 반복 간에 높은 일치도로 점수가 매겨질 때까지 단일 boldness assay를 최소 두 번 스코어

숄링 분석을 설정하려면 실리콘 코크로 밀봉된 두 개의 유리 칸막이로 나뉜 세 개의 구획이 있는 76리터 탱크를 구하십시오. 외부적으로는 테이프를 사용하여 각 자극 영역을 지정하는 각 유리 칸막이에서 6점 35센티미터 떨어진 두 개의 선호 영역을 표시합니다. 숄링 탱크의 3면 주위에 외부 불투명 칸막이를 적용하고 전면을 볼 수 있도록 노출된 상태로 둡니다.

다음으로, 테스트 전에 최소 12시간 동안 적응할 자극 암초를 선택하고 실험이 진행되는 동안 여울 탱크에 남아 있도록 합니다. 하우징 랙에서 초점 물고기를 부항을 통해 별도의 적응 탱크로 옮기고 10분 동안 적응합니다. 그런 다음 부항을 통해 순응 탱크에서 얕은 탱크의 중앙 구획으로 초점 물고기를 옮깁니다.

10분의 실시간 채점 관찰 기간 전에 10분의 적응 기간을 허용하며, 이 기간 동안 떼를 지어 잡는 물고기는 대상 모래톱이 있는 챔버의 선호 구역 내에 있는 것으로 정의됩니다. 다음으로, 각 선호 영역에서 보낸 시간과 중앙 볼륨에서 보낸 시간을 정량화합니다. 마지막으로, 분석이 완료된 후, 사용된 모든 초점 개체의 최종 목적지 탱크 역할을 할 별도의 터미널 탱크로 물고기를 옮깁니다.

이 프로토콜은 행동 증후군이 존재하는지 확인하기 위해 제브라피시의 공격성, 대담성 및 떼를 지어 다니는 행동의 일관된 연관성을 조사했습니다. 여기서 구성 요소 1은 공격적 행동을 나타내고 구성 요소 2는 대담성 행동과 관련이 있습니다. 공격성과 대담성 행동은 동일한 구성 요소로 표현되지 않기 때문에 제브라피시에는 대담성 공격성 행동 증후군이 없다고 결론지을 수 있습니다.

일단 마스터하면 한 초점 물고기의 전체 프로토콜을 70분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 관찰자 편향을 최소화하기 위해 자신과 팀이 각 대상 행동을 숙지해야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 동일한 비디오 녹화에 여러 번 점수를 매기면 결과에 대한 신뢰도도 높아집니다.

이 절차에 따라 약리학적, 유전적 또는 생리학적 분야의 다른 방법을 수행하여 행동 증후군에 영향을 미치는 내부 및 외부 요인에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 제브라피시의 대담함, 공격성, 얕은 행동 증후군을 관찰, 분석 및 해석하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 시청해 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다!