May 7th, 2016
아가미 갈퀴, 인두 이빨, 분지 뼈를 포함한 분지 골격은 대부분의 물고기에서 식품 가공의 주요 부위 역할을 합니다. 여기에서는 이 내부 골격을 3척추 스틱백으로 해부하고 평평하게 장착하는 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 방법은 다른 다양한 어종에도 적용할 수 있습니다.
이 절차의 전반적인 목표는 Stickleback Branchial Skeleton을 해부하고 평평하게 장착하는 것입니다. 이 방법은 발달, 유전학 및 진화 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 동물이 새로운 환경에 어떻게 적응하는지, 발달 과정에서 성체 형태의 다양성이 어떻게 발생하는지 등입니다.
이 기술의 가장 큰 장점은 가지 골격을 해부하고 평평하게 장착함으로써 전체 마운트에서 연구할 수 없는 다양한 영양 특성을 시각화할 수 있다는 것입니다. 준비 과정에서 세 개의 척추 스틱백의 관련 머리 골격 형태를 검토하십시오. 물고기를 해부할 준비를 한 후, 먼저 날카로운 5번 집게를 눈 옆쪽에 45도 각도로 삽입하여 눈을 덮고 있는 막에 구멍을 뚫습니다.
그런 다음 요구르트 용기의 뚜껑처럼 눈막을 벗겨냅니다. 그런 다음 열린 집게를 눈 뒤에 삽입하고 시신경을 잡고 눈을 제거합니다. 눈에 구멍을 뚫지 않도록 주의하거나 멜라닌이 누출되지 않도록 주의하십시오.
눈을 반대쪽에 두도록 이 과정을 반복합니다. 그런 다음 작은 가위의 날을 수술 플랩의 뒤쪽 아래에 놓고 수술 위쪽의 등쪽 연조직을 눈구멍 쪽으로 자릅니다. 다음으로 안와에서 등쪽에 있는 전두골을 자릅니다.
그런 다음 안와 중앙 주위의 정중선 파라스페노이드 뼈를 자릅니다. 반대쪽에서 오페라 컷을 반복합니다. 다음 단계에서는 골반 척추를 핸들로 사용할 수 있습니다.
몸에서 직접 부드럽게 당겨 접을 수 있습니다. 이제 수술 아래에 집게를 삽입하고 몸에서 얼굴을 천천히 떼어냅니다. 이 과정에서 아직 붙어 있는 연조직을 잘라냅니다.
아가미 갈퀴 주변을 조심하고 방해하지 않도록 주의하십시오. 안면 골격을 제거할 때 퍼콜과 함께 첫 번째 각분지 뼈를 실수로 잡기 쉽습니다. 앞으로 껍질을 벗길 때 그들의 퍼콜 아래를 살펴보고 여분의 것이 없는지 확인하십시오.
이제 겸자로 정중선 기저부의 양쪽에서 각룡을 분리하는 동시에 전방 두개골 안면 골격을 벗겨내고 제거합니다. 반대쪽에서도 반복합니다. 전방 두개골 안면 골격은 턱 전체, 설골 전체, 밑에 있는 등쪽 및 내골 요소, 두개골의 앞쪽 부분을 포함합니다.
다음으로, 닫힌 겸자를 장 튜브 바로 아래에 삽입하고 앞으로 드래그합니다. 이 과정에서 분지 골격에 붙어있는 나머지 근육과 인대를 떼어냅니다. 그런 다음 닫힌 겸자의 끝을 사용하여 배쪽 분지 골격을 복부 뇌 케이스에 연결하는 근육을 긁어냅니다.
후방에서 전방의 움직임으로 긁습니다. 스틱백의 반대쪽에서 근육 제거 과정을 반복합니다. 다음으로, 장관의 바닥을 잡고 앞쪽으로 당겨 가지 골격을 제거합니다.
다섯 번째 ceratobranchial의 뒤쪽에 있는 수직 절단을 사용하여 장관을 분리합니다. 흔한 실수는 장관을 너무 앞쪽에 잡아 복부 전두관을 훨씬 뒤로 떠나는 것입니다. 흉강 뒤쪽 깊숙이 잡으면 나중에 언제든지 여분의 장 튜브를 제거할 수 있습니다.
분지 골격의 등쪽에 있는 뇌낭에서 남아 있는 뼈 조각을 제거한 후. 가지 바구니에 가위를 삽입하고 등쪽 치아 플레이트의 양측 세트 사이에 등쪽 절단을 만듭니다. 등쪽 치아 플레이트가 손상되지 않도록 이 절단을 중앙에 유지하십시오.
다음으로, 분지 골격의 뒤쪽 끝에 있는 고무 같은 장 내강에 두 개의 얕은 측면 절단을 만듭니다. 장관의 반대쪽 끝에. 분기 골격을 여는 데 도움이 됩니다.
이제 골격을 50% 글리세롤, 영점 2개, 5% 수산화칼륨이 장전된 마이크로 센트리퓨지 튜브로 옮겨 부드럽게 세척합니다. 또는 대신 추가 세척이 필요하지 않은 경우 순수한 글리세롤로 옮기십시오. 재염색이 필요한 경우 자세한 내용은 텍스트 프로토콜에 나와 있습니다.
장착을 준비하려면 용액을 순수 글리세롤로 변경하고 튜브를 최소 5분 동안 흔듭니다. 그런 다음 가지 골격을 제거하고 등쪽이 위로 향하게 하여 22 x 60mm 유리 커버 슬립의 바닥 근처에 놓습니다. 이제 글리세롤 몇 방울을 골격에 옮깁니다.
다음으로, 모델링 점토로 된 두 개의 작은 공을 굴리고 커버 슬립의 양쪽 끝에 하나를 놓고 스페이서 역할을 합니다. 그런 다음 앞쪽 가지 골격을 평평하게 할 수 있을 만큼 충분한 압력으로 제제 위에 두 번째 커버 슬립을 느슨하게 놓습니다. 이제 등치아판을 포함한 왼쪽 등쪽 덮개를 벗겨내고 덮개 슬립 사이에 덮개를 밀어 넣습니다.
그런 다음 오른쪽 등쪽 덮개에 대해서도 동일한 작업을 수행합니다. 그리고 커버 슬립의 가장자리에서 전체 분기 골격을 밀어냅니다. 절차를 완료하려면 상단 커버 슬립을 가볍게 눌러 점토 공을 평평하게 만듭니다.
가지가 있는 골격을 평평하게 장착할 수 있을 정도로. 그러나 부서질 정도는 아닙니다. 이 과정에서 한 줄의 갈퀴가 가려지면 커버 슬립 사이에 집게를 밀어 넣고 각막 분지 또는 전체 준비의 방향을 바꾸십시오.
순수 글리세롤에 평평하게 장착하면 제제를 실온에서 최소 10년 동안 평평하게 보관할 수 있습니다. 이 프로토콜은 절개되고 평평하게 장착된 분기 골격을 생성합니다. 다양한 중요한 영양 형질을 연대기화할 수 있는 곳입니다.
등쪽에서 볼 때, 아가미 갈퀴의 모든 줄, 모든 인두 이빨 판, 그리고 거의 모든 분지 뼈를 쉽게 시각화하고 연대순으로 나타낼 수 있습니다. Alizarin red S는 또한 로다민 또는 유사한 적색 필터에 floureses를 맺어 다른 마커 및 시각화를 위한 대체 방법과 함께 이중 라벨링을 할 수 있습니다. 이 이미지에서 아가미 레이크는 캐럿으로 표시되어 있습니다.
이빨은 화살촉으로 표시되고 뼈는 별표로 표시됩니다. 일단 숙달되면 몇 분 안에 해부를 완료할 수 있으며 비교적 빠르게 수백 마리의 동물을 대상으로 수행할 수 있습니다. 그리고 우리는 stickleback 가지 골격 해부를 시연했지만 이 절차가 다양한 물고기 종에 대한 지침으로 사용될 수 있기를 바랍니다.
가지 골격을 해부함으로써 우리는 전체 산에서 볼 수 없는 다양한 중요한 영양 특성을 빠르고 쉽게 시각화할 수 있습니다. 두개골 안면 골격의 발달과 진화에 대한 더 나은 이해를 제공합니다.
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이 기사는 삼척새우 가시의 아가미 골격을 해부하고 평탄화하는 프로토콜을 제시합니다. 이는 물고기의 먹이 처리에 중요한 측면입니다. 이 방법은 다양한 종류의 물고기에 적용 가능하며 발달 및 진화 생물학을 이해하는 데 도움이 됩니다.
This protocol enables precise morphological analysis of the branchial skeleton, a key determinant of feeding efficiency and dietary adaptation in fish. By allowing quantification of trophic traits such as gill raker number and pharyngeal tooth density, it supports target validation in studies of evolutionary developmental biology. The method provides a scalable, reproducible system for linking genotype to phenotype in vertebrate craniofacial patterning.
The method fits within early discovery workflows where phenotypic screening of genetic mutants or natural variants requires detailed anatomical readouts.