안압 상승을 통해 망막 허혈 - 재관류 손상의 마우스 모델

이 기술의 전반적인 목표는 망막 허혈-재관류 손상의 실험적 모델을 제공하는 것이며, 이는 병리학적 결과입니다. 이 방법은 일반적으로 망막 허혈-재관류의 기저에 있는 메커니즘을 조사하고 관련 병리를 치료하기 위한 잠재적인 치료 방법을 평가하는 데 사용됩니다. 이 기술의 주요 장점은 주변 조직에 대한 손상을 최소화하면서 안구 구조를 고도로 표적으로 하는 부상을 생성한다는 것입니다.

이 기술의 유용성은 망막 허혈-재관류 손상의 여러 징후에 대한 이해와 3개월로 확장됩니다.: 망막 신경혈관 단위의 염증, 산화 스트레스 및 응시 기능 장애. 캐뉼라 배치를 위한 수술 기술은 시각적 가이드 없이는 재현하기 어려울 수 있으므로 이 방법의 비디오 시연이 중요합니다. 절차를 시작하기 전에 테이블 위의 빈 케이지를 따뜻하게 하십시오.

그런 다음 기본 세트 사전 피어싱된 Y-site 튜브의 날카로운 끝을 0.1% 헤파린 나트륨 병에 삽입하고 IV 극 확장에서 헤파린 나트륨 바닥을 걸어둡니다. 튜브의 공기 필터 캡을 찰칵 열었습니다. 그런 다음 헤파린 나트륨 병을 테이블 위에서 헤파린 나트륨 드립의 최고점까지 163cm로 올려 120 밀리리터의 수은의 헤파린 나트륨 흐름 압력을 생성합니다.

헤파린 나트륨이 튜브를 채울 수 있도록 기본 세트 사전 피어싱된 Y-site 튜브를 열고 기본 세트 사전 피어싱된 Y-site 튜브를 5개의 밸브 매니폴드에 연결합니다. 그런 다음 Luer male to Luer male 튜브 피팅을 사용하여 30 게이지 1/2 인치 바늘을 5 포트 매니 폴드에 연결합니다. 각 바늘을 30 게이지 튜브의 자체 10 인치 세그먼트에 삽입합니다.

그런 다음 지혈기를 사용하여 새로운 30 게이지 반 인치 바늘 끝을 부러 뜨리고 뭉툭한 끝을 30 게이지 튜브의 열린 끝에 삽입합니다. 다음으로, 테이프를 사용하여 바늘 튜브를 배열하여 내부 포트에 연결된 튜브가 외부 포트에 연결된 튜브 위에 위치하도록 하여 전방 챔버 캐뉼레이션 중에 튜브가 엉키지 않도록 합니다. 이제 5 개의 밸브 매니 폴드와 각 개별 포트로 향하는 0.1 % 헤파린 나트륨 흐름을 2-3 분 동안 켜서 기포를 제거하십시오.

그런 다음 5개의 밸브 매니폴드에 있는 모든 포트를 끕니다. 캐뉼레이션을 수행하기 위해 마취제를 투여한 후 모든 마우스를 수술대 위의 따뜻한 케이지에 넣고 5-10분 후에 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족으로 깊은 마취가 이루어졌는지 확인합니다. 그런 다음 동공 확장을 위해 트로피카미드 한 방울을 투여하고 국소 마취를 위해 프로파라카인 한 방울을 각 동물의 눈에 투여하고 마취 순서대로 마우스를 배열하여 마취된 첫 번째 마우스가 캐뉼레이션된 첫 번째 마우스가

점안액이 효과를 발휘할 때까지 기다리는 동안 4인치 직선 테이프 조각을 준비하고, 테이프가 찢어지기 전에 단단히 잡아당기고, 동물 한 마리당 한 조각의 테이프를 따로 보관합니다. 테이프를 단단히 당기지 않으면 테이프가 말리게 됩니다. 첫 번째 마우스가 준비되면 동물을 외과용 현미경 아래에 놓습니다.

그런 다음 5개의 밸브 매니폴드에서 첫 번째 0.1% 헤파린 나트륨 포트를 켜고 한 쌍의 집게를 사용하여 한쪽 눈을 부드럽게 받칩니다. 다음으로, 30 게이지 캐뉼라 바늘을 구역 섬유와 각막 정점 사이의 대략 중간 지점에 삽입하십시오. 콘레아를 두 번 관통하지 않도록 주의하십시오.

캐뉼라를 전방(anterior chamber)에 깊숙이 삽입하기 위해 부드럽게 비틀는 동작이 사용됩니다. 이제 테이프 조각에 손을 뻗는 동안 삽입된 캐뉼라의 움직임을 최소화하기 위해 30 게이지 튜브를 테이블 상판에 대고 누르고 테이프를 사용하여 튜브를 테이블에 고정합니다. 튜브가 고정되면 수술 시작 시간을 기록합니다.

현미경을 사용하여 누출이 없는지, 허혈-재관류 눈이 반대쪽 눈보다 큰지 확인하여 안구 팽창의 존재 여부를 확인합니다. 실험이 끝날 때까지 30분마다 Hypromellose를 양쪽 눈에 바르면 각막에 윤활유를 바르고 미세 누출을 막습니다. 시술 중 동물이 휘젓는 경우 꼬리를 들어 올리고 복강내 케타민 부스터를 투여합니다.

첫 번째 동물을 캐뉼러를 투여한 후 90분이 지나면 전방에서 캐뉼라를 부드럽게 당겨 윤활 젤리로 양쪽 눈을 윤활합니다. 후속 캐뉼라가 제거되면 동물이 완전히 회복될 때까지 각 마우스를 수술 테이블의 케이지에 다시 놓습니다. 캐뉼라를 모두 제거한 후에는 알코올 물티슈로 소독하십시오.

그런 다음 공기로 채워진 60ml 주사기를 사용하여 5개의 밸브 매니폴드, 30게이지 바늘, 30게이지 튜브 및 캐뉼러에서 헤파린 나트륨을 배출합니다. 다음으로, 증류수를 채운 60ml 주사기로 모든 기구를 헹굽니다. 마지막으로 60ml의 공기로 모든 재료에서 증류수를 배출하고 나중에 사용할 수 있도록 소독 및 헹굼 장비를 보관하십시오.

뉴런 핵에 대한 NeuN 면역 표지는 허혈-재관류 손상 후 7일 후에 컨포칼 현미경 이미징에 의해 허혈-재관류 모욕 후 상당한 둔세포 손실을 나타냅니다. 실제로, 대조군의 NeuN 양성 세포와 허혈-재관류된 눈의 수동 정량화는 손상 후 갠지이온 세포층 뉴런 수의 감소를 보여주며, 이는 허혈-재관류로 인한 세포 사멸의 존재를 나타냅니다. 전기망막조영술에 의해 기록된 낮은 a-파 및 b-파 진폭은 또한 부상을 입지 않은 대조군의 눈과 비교하여 망막 신경 기능에서 허혈-재관류로 인한 손상의 발생을 의미합니다.

이 기술을 숙달하면 약 5시간 내에 10마리의 동물에게 수행할 수 있으며, 이 중 마지막 2시간은 쥐가 마취에서 회복될 때까지 기다립니다. 이 절차를 시도하는 동안 깊은 마취를 유지하는 것이 중요합니다. 효과적인 진정제로서 동물의 움직임에 의한 캐뉼라의 이동을 방지할 수 있습니다.

이 절차에 따라 망막 기능에 대한 추가 질문에 답하기 위해 망막 검사와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 이 기술을 통해 안과학, 신경과학 및 혈관 생물학 분야의 연구자들은 설치류에 대한 망막 신경혈관 발병 기전 및 치료 개입을 탐구할 수 있었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 안구 전방의 캐뉼레이션을 통해 표적 망막 손상을 만드는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

수술 기구를 사용하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 효과적인 날카로운 물건 폐기 사용과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.