Name: 에 내장 혈관 신생에 의하여 조직 공학 생체 조직 공학 상공 회의소 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: 배우세요 생체 내 혈관화 조직 공학 기법으로 동맥정맥 루프를 이용하여 쥐에서 삼차원 혈관화 조직을 생성하는 방법. 이 기술은 장기 재생 및 조직 수복 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 NHMRC와 스탠 폭스 의료 재단 보조금에 의해 지원되었다. 저자는 고소 맥케이, 릴리 아나 페페, 안나 Deftereos 및 실험 의학의 아만다 Rixon 외과 단위, 성 빈센트 병원, 멜버른의 수술 지원을 인정합니다. 지원은 혁신, 산업의 빅​​토리아 주 정부의 부서 및 지역 개발의 운영 인프라 지원 프로그램에 의해 제공됩니다.

여기에 설명 된 프로토콜은 세인트 빈센트 병원 멜버른, 호주의 동물 윤리위원회에 의해 승인되었으며, 호주 국립 보건 의료 연구위원회 가이드 라인을 엄격하게 준수에 따라 실시 하였다. 참고 : 두 개의 챔버 프로토콜이 아래에 설명되어 있습니다. 두 가지 모델과 특정 실 디자인은도 1에 도시된다. 챔버 (1) (래트 동정맥 루프 챔버 모델) 폴리 카보네이트로 제조된다. 그것은 내부 직경 13mm, 높이 4mm 원통형이다. 벽에 한 지점에서의 창은 척추 경에 대한 방해받지 않고 액세스 할 수 있습니다. (쥐 관류 척추 경 챔버 모델) 제 모델에서, 챔버는 폴리 이루어지고, (10 × 8 × 4mm 3 내부 치수) 사각형이다. 그들이 챔버 범으로 대퇴 동맥 및 정맥을 수용하기 위해 양측에 두 개의 1.5 mm의 개구부를 갖는다. 1. 쥐 동정맥 루프 회의소 모델 (한 참BER 당 동물) 참고 : 수술을 시작하기 전에, 모든 악기가 제대로 살균되어 있는지 확인합니다. 마찬가지로, 멸균 수건 악기 받침대를 확인하고 절차를 수행하는 동안 오염을 방지하기 위해 수술 분야에서 적당한 거리에있다. <ol><li> 수술에 대한 동물의 준비 <ol><li> 동정맥 루프의 창조를위한 선박의 그들의 큰 크기에 최소 250g의 무게 쥐를 사용합니다. </li><li> 4 % 이소 플루 란 흡입과 동물을 마취. 발가락 핀치에 응답하지 않는 문제를 평가하여 마취의 적절한 깊이를 확증. 마취 후, 충분히 2 % 이소 플루 란과 절차 전반에 걸쳐 마취 동물을 유지합니다. </li><li> 온난화 패드에 부정사 위치에 동물을 배치하고 수술 중 탈수를 방지하기 위해 눈에 멸균 윤활제를 적용합니다. </li><li> 전기 면도기를 사용하여, 두 사타구니 면도 촉촉한 거즈 조각으로 머리를 제거합니다. </li><li> 클로르헥시딘과 수술 사이트를 준비/ 70 % 에탄올 용액 및 멸균 수건 동물 드레이프. 진통제로 카프로 펜의 단일 용량 (5 ㎎ / ㎏, 피하)를 관리 할 수​​ 있습니다. </li></ol></li><li> 대퇴 정맥 이식의 수확 <ol><li> A # (15) 블레이드를 사용하여, 사타구니 인대에 왼쪽 사타구니 평행에 4cm 길이의 피부 절개를합니다. 이 사타구니 지방 패드를 노출합니다. </li><li> 가위는 상복부의 선박에 따라 혈관 척추 경에 부착 떠나와 원주 지방 패드를 통해 절단. </li><li> 마이크로 가위를 사용하여 복벽 및 하부 대퇴 혈관의 필름 상 결합 조직 유착 해방. </li><li> 복부 벽에 트랙터를 놓고 내측 당깁니다. 이 사타구니 인대와 대퇴 혈관의 전체 길이를 노출합니다. </li><li> 마이크로 집게를 사용하여 곡선 가위 부드럽게 당겨 및 절단하여 상복부 정맥을 해부와 그 주변 지방에서 격리. 루프를 구성 할 때이 정맥은 밧줄 역할을합니다. </li><li> 날기g 마이크로 집게 곡선 마이크로 가위는 대퇴 혈관과 신경 상복부 분기에 그 분기의 말단에 사타구니 인대에서 모든 방법을 포함하는 혈관 주위 덮개를 엽니 다. </li><li> 마이크로 집게를 사용하여 외막에 의해 대퇴 정맥을 선택하고 조심스럽게 주위 조직에서 분리하고 동맥을 동반. 마이크로 집게와 떨어져 조직을 당겨 그것을 통해 절단에 의해 곡선 라운드 지적 마이크로 가위로이 작업을 수행합니다. 참고 :이 혈전증에이 경향이 만드는 내막에 외상이 발생할 수 있습니다 정맥 벽의 전체 두께를 잡아하지 마십시오. </li><li> 결찰 측 분기 10/0 나일론 봉합사와 절개 중에 발견 또는 바이폴라 coagulator로 응고. </li><li> 대퇴 정맥 완전 무료로, 4/0 실크 봉합사와의 근위 및 원위 끝을 결찰. 적어도 10mm 길이의 정맥 이식을 얻을 수 있는지 확인하고 약 상복부 분기의 0.5 cm 길이가 남자 로프 밧줄로 사용할 수 포함챔버의 개방 루프를 개최합니다. </li><li> 마이크로 집게 똑바로 마이크로 가위를 사용하여 부드럽게 당겨 절단하여 이식의 끝에서 외막 트림. 이것은 또한 미세 수술 문합 전에 나중에 수행 될 수있다. </li><li> 헤파린 생리 식염수 (헤파린의 10 U / ㎖)와 정맥 이식을 세척하고, 용액에서 휴식을 둡니다. 지속적인 실행을 4/0 실크 봉합사 플러스 두 개 또는 세 개의 추가 간단한 중단 바늘을 사용하여 상처를 닫습니다. </li></ol></li><li> 상공 회의소의 동정맥 루프 및 주입의 창조 <ol><li> 반복 반대쪽 다리에 동일한 방식으로 1.2.4에 1.2.1 단계를 반복합니다. </li><li> 마이크로 집게를 사용하여, 해부 및 상복부 동맥을 모두 분리하고 주변의 지방 패드를 형성 정 맥. 부드럽게 혈관에서 떨어져 조직을 당겨이 작업을 수행 </li><li> 마이크로 집게를 사용하여 주변 조직에서 대퇴의 외막에 의해 동맥과 무료 픽업. 마이크로 집게 및 곡선 라운드 지적 마이크와 함께이 작업을 수행떨어져 조직을 당겨 그것을 통해 절단에 의해 RO 위입니다. 결찰 또는 옆으로 가지를 응고. </li><li> 대퇴부 동맥을 결찰 및 4/0 실크 봉합사를 이용하여 상복부 혈관의 출현 말초 정맥. </li><li> 대퇴 동맥과 정맥의 각 근위 하나의 클램프를 놓습니다. 날카로운 직선 마이크로 가위를 사용하여, 상복부 가지의 출현에 각 혈관 원위부 절단 깨끗한 가로을합니다. 선박에서 멸균 플라스틱 대비 배경을 놓습니다. </li><li> 모든 혈액이 루멘에서 제거 될 때까지 헤파린 생리 식염수의 관대 한 양 적극적으로 혈관을 플래시합니다. </li><li> 수술 필드에 정맥 이식을 가져와 필요한 경우, 단계 1.2.10에 따라 선박 &#39;끝에서 어떤 여분의 외막을 제거합니다. </li><li> 10/0 나일론 봉합사와 두 미세 수술 문합을 수행합니다. 대퇴 정맥과 대퇴 동맥에 선단 정맥 이식편의 기단부를 문합. 이 F 피가 흐를 수 있습니다정맥 이식 내 밸브에서 저항없이 정맥 측에 동맥을 ROM. 참고 : 어떤 왜곡없이 대퇴 혈관과 자연 위치에있는 정맥 이식의 나머지 부분을 확인합니다. </li><li> 문합 부위 모두에서 누수가 있는지 확인합니다. , 상단에 지방의 작은 조각을 배치하고 부드럽게 5 ~ 10 분 동안 압축하여 혈액이 문합 부위에서 나오는 비 맥동​​처럼 작은 누수를 해결합니다. 빠르게 전체 필드 홍수 큰 맥동 누수 추가 바늘이 필요합니다. </li><li> 동정맥 루프의 개통을 확인합니다. 대퇴 동맥의 부드러운 폐색은 대퇴 정맥에서 같은 그것을 충혈해야하면서 축소해야한다. </li><li> 왜곡 또는 꼬임이없는 자연 위치에 후자의 휴식과 동정맥 루프 아래의 조직 공학 챔버의 기초를 놓으십시오. </li><li> 6/0 나일론 봉합사와 사타구니 인대 및 기본 근육의 근막에 챔버의베이스를 고정합니다. </li><li> 오버 덮개를 놓습니다기본 대퇴 혈관 (챔버의 측면에 창) 노치 (notch)를 통해 챔버를 입력 있도록. 뚜껑을 닫을 때, 테더가 위치로 동정맥 루프를 유지하는 역할을 챔버 기지와 뚜껑 사이 상복부 지점을 포착해야합니다. </li><li> 지속적인 실행을 4/0 실크 봉합사 플러스 두 개 또는 세 개의 추가 간단한 중단 바늘을 사용하여 상처를 닫습니다. </li><li> 동물이 온난 패드에 마취에서 회복 할 수 있습니다. </li><li> 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. 마찬가지로, 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다. 24 시간 후, 진통제 등의 카프로 펜의 또 다른 하나의 용량 (5 ㎎ / ㎏, 피하)를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 5 일간 국소 항생제 연고와 상처 치료. 상처가 개방되는 경우, 단계별 1.1.5 1.1.2 에서처럼 동물을 마취 및 1.3과 상처습니다0.14. 매일 동물의 상태를 모니터링합니다. 동물 inacitivity, 식욕 부진, 체중 감소 및 색의 손실 이상의 적당한 흔적이있는 경우 (23 G 바늘 0.25 ㎖에 163 ㎎ / ㎏)을 복강 lethabarb 분사의 치사량을 사용하여 동물을 안락사. </li></ol></li></ol> 2. 플로우를 통해 척추 경 회의소 (동물 당 2 개의 챔버) <ol><li> 수술에 대한 동물의 준비 <ol><li> 반복 1.1.4을 통해 1.1.1 단계를 반복합니다. 두 개의 챔버는 단일 래트 모두 서혜부 영역에 주입 할 수있다. </li></ol></li><li> 대퇴 선박의 분리 및 상공 회의소의 삽입 <ol><li> 반복 1.2.8을 통해 1.2.1 단계를 반복합니다. </li><li> 동맥 완전히 조직을 둘러싼 및 분기 결찰의 해제 정맥 모두, 수술 필드에 실을 가지고. </li><li> 챔버베이스가 더 왜곡 또는 꼬임이 없는지 확인하고의 대응하는 슬릿에 그대로 대퇴 혈관의 각 놓습니다. </li><li> attachi에 의해 챔버를 닫습니다베이스에 뚜껑을 ng를. 지속적인 실행을 4/0 실크 봉합사 플러스 두 개 또는 세 개의 추가 간단한 중단 바늘을 사용하여 상처를 닫고 동물이 앞서 설명한 복구 할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 챔버 및 조직 처리 3. 수확 <ol><li> 실험의 시점 (4~6주 후 주입)에 도달하면, 단계 1.1.2에서와 같이 동물을 마취와 1.1.5 단계를 1.1.3를 반복합니다. </li><li> A # 15 블레이드를 사용하여 상처를 열고 챔버가 완전히 노출 될 때까지 가위로 조직을 잘라. </li><li> 다음 원위 방향으로 피를 우유, 부드럽게 두 microforceps과 용기를 폐색 마지막 근위 집게를 해제 : 혈관 개통의 구조 및 시험에 근위 대퇴 혈관을 노출. 선박이 다시 혈액으로 채워지면,이 개통을 확인합니다. 일 경우에 모두 근위 및 원위 동정맥 루프의 경우 근위 대퇴부 혈관을 결찰전자의 흐름을 통해 구성 및 블록 엉 포함하는 조직으로 챔버를 제거합니다. </li><li> 실험의 끝에서, (23 G 바늘 0.25 ㎖ 중의 163 ㎎ / ㎏)을 복강 내 주사 lethobarb의 치사량을 사용하여 동물을 안락사. </li><li> 24 시간, 실온에서 4 % 파라 포름 알데히드에서 조직을 고정한다. (1-2 mm 두께) 각각 파라핀 왁스 또는 최적의 절단 온도 화합물 파라핀 섹션 (5 μm의) 또는 동결 절편 (10 μm의)에 포함 된 여러 가로 섹션으로 나눈다 조직. 3,4,8,17,22, (24) </li><li> 조직의 일반적인 형태를 조사하는 등의 헤 마톡 실린 및 에오신으로 일상적인 조직 학적 염색을 수행합니다. 심근 예를 들어 심장 트로포 닌 T의 면역 염색에 대한 관심의 세포 유형, 3,4,8,17,22,24,29을 식별하기 위해 특정 항체와 면역 조직 화학 염색을 수행합니다. </li></ol>

<ol><li>Spiliopoulos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+mechanical+circulatory+support%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiol+Res+Pract%22%5BJournal%5D)">Current status of mechanical circulatory support: A systematic review.</a> Cardiol Res Pract. , 574198(2012).</li>
<li>Hsu, P. L., Parker, J., Egger, C., Autschbach, R., Schmitz-Rode, T., Steinseifer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+circulatory+support+for+right+heart+failure%3A+Current+technology+and+future+outlook%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Mechanical circulatory support for right heart failure: Current technology and future outlook.</a> Artif Organs. 36 (4), 332-347 (2012).</li>
<li>Lokmic, Z., Stillaert, F., Morrison, W. A., Thompson, E. W., Mitchell, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+arteriovenous+loop+in+a+protected+space+generates+a+permanent%2C+highly+vascular%2C+tissue-engineered+construct%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">An arteriovenous loop in a protected space generates a permanent, highly vascular, tissue-engineered construct.</a> FASEB J. 21 (2), 511-522 (2007).</li>
<li>Morritt, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+tissue+engineering+in+an+in+vivo+vascularized+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac tissue engineering in an in vivo vascularized chamber.</a> Circulation. 115 (3), 353-360 (2007).</li>
<li>Tanaka, Y., Tsutsumi, A., Crowe, D. M., Tajima, S., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+an+autologous+tissue+%28matrix%29+flap+by+combining+an+arteriovenous+shunt+loop+with+artificial+skin+in+rats%3A+preliminary+report%5BTitle%5D)+AND+%22B+J+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Generation of an autologous tissue (matrix) flap by combining an arteriovenous shunt loop with artificial skin in rats: preliminary report.</a> B J Plast Surg. 53 (1), 51-57 (2000).</li>
<li>Cronin, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+murine+model+of+spontaneous+autologous+tissue+engineering%2C+combining+an+arteriovenous+pedicle+with+matrix+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">New murine model of spontaneous autologous tissue engineering, combining an arteriovenous pedicle with matrix materials.</a> Plast Reconstr Surg. 113 (1), 260-269 (2004).</li>
<li>Forster, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prevascularized+tissue+engineering+chamber+supports+growth+and+function+of+islets+and+progenitor+cells+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">A prevascularized tissue engineering chamber supports growth and function of islets and progenitor cells in diabetic mice.</a> Islets. 3 (5), 271-283 (2011).</li>
<li>Choi, Y. S., Matsuda, K., Dusting, G. J., Morrison, W. A., Dilley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+cardiac+tissue+in+vivo+from+human+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Engineering cardiac tissue in vivo from human adipose-derived stem cells.</a> Biomaterials. 31 (8), 2236-2242 (2010).</li>
<li>Jeyaraj, R., G, N., Kirby, G., Rajadas, J., Mosahebi, A., Seifalian, A. M., Tan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularisation+in+regenerative+therapeutics+and+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Sci+Eng+C+Mater+Biol+Appl%22%5BJournal%5D)">Vascularisation in regenerative therapeutics and surgery.</a> Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 54, 225-238 (2015).</li>
<li>Dew, L., Macneil, S., Chong, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+strategies+for+tissue+engineers%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Vascularization strategies for tissue engineers.</a> Regen Med. 10 (2), 211-224 (2015).</li>
<li>Weigand, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+vascularized+bone+tissue-engineered+constructs+in+a+large+animal+model+combining+intrinsic+and+extrinsic+vascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Acceleration of vascularized bone tissue-engineered constructs in a large animal model combining intrinsic and extrinsic vascularization.</a> Tissue Eng Part A. 21 (9-10), 1680-1694 (2015).</li>
<li>Vacanti, J. P., Langer, R., Upton, J., Marler, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+cells+in+matrices+for+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Transplantation of cells in matrices for tissue regeneration.</a> Adv Drug Deliv Rev. 33 (1-2), 165-182 (1998).</li>
<li>Beahm, E. K., Walton, R. L., Patrick, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+adipose+tissue+construct+development%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Progress in adipose tissue construct development.</a> Clin Plast Surg. 30 (4), 547-558 (2003).</li>
<li>Vunjak-Novakovic, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+cardiac+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Challenges in cardiac tissue engineering.</a> Tissue Eng Part B Rev. 16 (2), 169-187 (2010).</li>
<li>Garcia, J. R., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial-mediated+strategies+targeting+vascularization+for+bone+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Biomaterial-mediated strategies targeting vascularization for bone repair.</a> Drug Deliv Transl Res. , (2015).</li>
<li>Forster, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+and+hepatocytic+differentiation+of+liver+progenitor+cells+in+vivo+using+a+vascularized+tissue+engineering+chamber+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Expansion and hepatocytic differentiation of liver progenitor cells in vivo using a vascularized tissue engineering chamber in mice.</a> Tissue Eng Part C Methods. 17 (3), 359-366 (2011).</li>
<li>Tilkorn, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implanted+myoblast+survival+is+dependent+on+the+degree+of+vascularization+in+a+novel+delayed+implantation%2Fprevascularization+tissue+engineering+model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Implanted myoblast survival is dependent on the degree of vascularization in a novel delayed implantation/prevascularization tissue engineering model.</a> Tissue Eng Part A. 16 (1), 165-178 (2010).</li>
<li>Chang, Q., Lu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+strategy+for+creating+a+large+amount+of+engineered+fat+tissue+with+an+axial+vascular+pedicle+and+a+prefabricated+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Med+hypotheses%22%5BJournal%5D)">A novel strategy for creating a large amount of engineered fat tissue with an axial vascular pedicle and a prefabricated scaffold.</a> Med hypotheses. 79 (2), 267-270 (2012).</li>
<li>Walton, R. L., Beahm, E. K., Wu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+adipose+formation+in+a+vascularized+engineered+construct%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurg%22%5BJournal%5D)">De novo adipose formation in a vascularized engineered construct.</a> Microsurg. 24 (5), 378-384 (2004).</li>
<li>Debels, H., Gerrand, Y. W., Poon, C. J., Abberton, K. M., Morrison, W. A., Mitchell, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+adipogenic+gel+for+surgical+reconstruction+of+the+subcutaneous+fat+layer+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">An adipogenic gel for surgical reconstruction of the subcutaneous fat layer in a rat model.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2015).</li>
<li>Lokmic, Z., Mitchell, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Engineering the microcirculation.</a> Tissue Eng Part B Rev. 14 (1), 87-103 (2008).</li>
<li>Yap, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+liver+progenitor+cell+survival+and+differentiation+in+vivo+by+spheroid+implantation+in+a+vascularized+tissue+engineering+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Enhanced liver progenitor cell survival and differentiation in vivo by spheroid implantation in a vascularized tissue engineering chamber.</a> Biomaterials. 34 (16), 3992-4001 (2013).</li>
<li>Findlay, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+breast+reconstruction%3A+Bridging+the+gap+toward+large-volume+tissue+engineering+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered breast reconstruction: Bridging the gap toward large-volume tissue engineering in humans.</a> Plast Reconstr Surg. 128 (6), 1206-1215 (2011).</li>
<li>Tee, R., Morrison, W. A., Dusting, G. J., Liu, G. S., Choi, Y. S., Hsiao, S. T., Dilley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+engineered+cardiac+muscle+flaps+in+syngeneic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Transplantation of engineered cardiac muscle flaps in syngeneic rats.</a> Tissue Eng Part A. 18 (19-20), 1992-1999 (2012).</li>
<li>Dolderer, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+stability+of+adipose+tissue+generated+from+a+vascularized+pedicled+fat+flap+inside+a+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Long-term stability of adipose tissue generated from a vascularized pedicled fat flap inside a chamber.</a> Plast Reconstr Surg. 127 (6), 2283-2292 (2011).</li>
<li>Sekine, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+coculture+within+tissue-engineered+cardiomyocyte+sheets+enhances+neovascularization+and+improves+cardiac+function+of+ischemic+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell coculture within tissue-engineered cardiomyocyte sheets enhances neovascularization and improves cardiac function of ischemic hearts.</a> Circulation. 118, (14 Suppl) 145-152 (2008).</li>
<li>Ting, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adipogenic+potential+of+various+extracellular+matrices+under+the+influence+of+an+angiogenic+growth+factor+combination+in+a+mouse+tissue+engineering+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The adipogenic potential of various extracellular matrices under the influence of an angiogenic growth factor combination in a mouse tissue engineering chamber.</a> Acta Biomater. 10 (5), 1907-1918 (2014).</li>
<li>Zhan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-synthesized+extracellular+matrix+contributes+to+mature+adipose+tissue+regeneration+in+a+tissue+engineering+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Self-synthesized extracellular matrix contributes to mature adipose tissue regeneration in a tissue engineering chamber.</a> Wound Repair Regen. 23 (3), 443-452 (2015).</li>
<li>Messina, A., Bortolotto, S. K., Cassell, O. C., Kelly, J., Abberton, K. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+vascularized+organoid+using+skeletal+muscle+as+the+inductive+source%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Generation of a vascularized organoid using skeletal muscle as the inductive source.</a> FASEB J. 19 (11), 1570-1572 (2005).</li>
<li>Lim, S. Y., Hernández, D., Dusting, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growing+vascularized+heart+tissue+from+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Growing vascularized heart tissue from stem cells.</a> J Cardiovasc Pharmacol. 62 (2), 122-129 (2013).</li>
<li>Poon, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+an+adipogenic+hydrogel+from+subcutaneous+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Preparation of an adipogenic hydrogel from subcutaneous adipose tissue.</a> Acta Biomater. 9 (3), 5609-5620 (2013).</li>
<li>Dilley, R. J., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularisation+to+improve+translational+potential+of+tissue+engineering+systems+for+cardiac+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Vascularisation to improve translational potential of tissue engineering systems for cardiac repair.</a> Int J Biochem Cell Biol. 56, 38-46 (2014).</li>
<li>Lesman, A., Koffler, J., Atlas, R., Blinder, Y. J., Kam, Z., Levenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+vessel-like+networks+within+multicellular+fibrin-based+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Engineering vessel-like networks within multicellular fibrin-based constructs.</a> Biomaterials. 32 (31), 7856-7869 (2011).</li>
<li>Hussey, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seeding+of+pancreatic+islets+into+prevascularized+tissue+engineering+chambers%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Seeding of pancreatic islets into prevascularized tissue engineering chambers.</a> Tissue Eng Part A. 15 (12), 3823-3833 (2009).</li>
<li>Chen, X., Aledia, A. S., Popson, S. A., Him, L., Hughes, C. C., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+anastomosis+of+endothelial+progenitor+cell-derived+vessels+with+host+vasculature+is+promoted+by+a+high+density+of+cotransplanted+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Rapid anastomosis of endothelial progenitor cell-derived vessels with host vasculature is promoted by a high density of cotransplanted fibroblasts.</a> Tissue Eng Part A. 16 (2), 585-594 (2010).</li>
<li>Lin, R. Z., Melero-Martin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor-2+facilitates+rapid+anastomosis+formation+between+bioengineered+human+vascular+networks+and+living+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor-2 facilitates rapid anastomosis formation between bioengineered human vascular networks and living vasculature.</a> Methods. 56 (3), 440-451 (2012).</li>
<li>Dolderer, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+large+volume+adipose+tissue+generation+from+a+vascularized+pedicled+fat+flap+inside+a+chamber+space%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Spontaneous large volume adipose tissue generation from a vascularized pedicled fat flap inside a chamber space.</a> Tissue Eng. 13 (4), 673-681 (2007).</li>
<li>Wei, F. C., Lin Tay, S. K. Principles and techniques of microvascular surgery. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWei%2C+FC+%22Plastic+Surgery.+Volume+1%22">Plastic Surgery. Volume 1</a>. Neligan, P. C., Gurtner, G. C. , Elsevier. Chapter 26 587-620 (2013).</li>
<li>Sekine, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+fabrication+of+functional+three-dimensional+tissues+with+perfusable+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Comm%22%5BJournal%5D)">In vitro fabrication of functional three-dimensional tissues with perfusable blood vessels.</a> Nat.Comm. 4 (1399), 1-10 (2013).</li>
<li>Lim, S. Y., Sivakumaran, P., Crombie, D. E., Dusting, G. J., Pébay, A., Dilley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trichostatin+A+enhances+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+to+cardiogenic+cells+for+cardiac+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Trichostatin A enhances differentiation of human induced pluripotent stem cells to cardiogenic cells for cardiac tissue engineering.</a> Stem Cells Transl Med. 2 (9), 715-725 (2013).</li>
<li>Lim, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tissue+engineering+chamber+supports+human+induced+pluripotent+stem+cell+survival+and+rapid+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">In vivo tissue engineering chamber supports human induced pluripotent stem cell survival and rapid differentiation.</a> Biochem Biophys Res Commun. 422 (1), 75-79 (2012).</li>
<li>Piao, Y., Hung, S. S., Lim, S. Y., Wong, R. C., Ko, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+generation+of+integration-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+keratinocytes+by+simple+transfection+of+episomal+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient generation of integration-free human induced pluripotent stem cells from keratinocytes by simple transfection of episomal vectors.</a> Stem Cells Transl Med. 3 (7), 787-791 (2014).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 이익을 선언합니다.

미세 순환 공학은 현재 두 가지 방법을 통해 본질적으로 조사되고있다. 주입 된 때 상기 제 1 호스트 혈관 층에서 모세관의 것과 연결 체외 구조물 내의 높은 상호 혈관 네트워크 개발을 포함 이와 영양분의 전달을 보장하는 처리라고 inosculation 통해 구축 이식뿐만 아니라 주변뿐만 또한 핵심. 21,32,33에이 사전 혈관라고합니다. 그 모세관 발아 전 또는 병용 이식 세포 분화 및 조직 성장 중 발생하므로 두 번째 방법은, 생체 내에서 바로 호스트 자신의 혈관을 강화하려고. 17,34 여기에 제시된 생체 조직 공학 챔버 프로토콜은 동맥과 정맥을 배치하여 후자의 개념을 이용한다 어느 동정맥 루프 또는 관류 척추 경 구성으로서,시간이 지남에 따라 유의 발아 새로운 모세 혈관의 형성을 가능하게하는 빈 공간을 보호, 내부 챔버 (3) 등의 장점 (1) 시험 관내<...

재생 의학의 새로운 패러다임은 조직 공학 방법을 사용하여 기능 혈관 조직입니다 제조. 1,2 많은 방법을 손상된 조직이나 결함이있는 장기의 교체를 위해 새롭고 건강한 조직을 설계하는 것은, 3-6 실험적으로 작은 동물 모델을 개발되었다 유망한 임상 잠재력. 7,8 그러나, 혈관이 임상 적 크기의 조직을 성장 잠재력을 제한하는 조직 공학에 대한 큰 과제 중 하나 남아있다. (9) 현재 접근 방식은 새로운 혈관이받는 혈관 침대에서 성장 곳 외인성 경로를 따라 조직을 vascularize와 이식 된 조직이 10 혈관이 성장하고 새로 개발 조직과 한마음으로 확장 고유 혈관 통로를 구축을 통해 침입합니다. (11)를 외부 접근 전통적으로 지지체 상에 파종 세포를 포함시험관과 영양분은 이전 배지에 의해 공급되는 기대와 살아있는 동물에 완전한 구조를 주입에 혈관 내 증식이 너무 느리고 매우 얇은 임플란트 (AS 12,13 개념은 단순하다. 순환로부터 공급 &lt;될 1-2mm 두께는) 가능한 유지됩니다. 충분한 신속한 혈관을 통해 영양분과 산소를 제공하는 것은 뼈, 근육, 지방, 고체 기관으로 더 복잡하고 더 큰 조직 공학적 대체를 성장하는 성공적인 시도의 핵심입니다. 14, 15 내장 혈관이의 가능성을 제공합니다 더 큰 구조는 확대 혈액 공급에 상응하는 진보적 조직 성장에 의해 개발. 하나의 디자인 또는 셀 시드 발판없이 혈관 유경의 챔버에 생체 주입입니다.이 두꺼운 본질적으로 혈관 조직의 생성을위한 새로운 절차에 도로를 포장하고있다 5,6. 16, 17 &lt;/ P&gt; 최근 전략 이식하기 전에 조직 이식, - vascularize 미리 개발되었다. 이러한 통합 혈관 네트워크는 이식 두꺼운 조직 이식편의 모든 부분의 생존을 향상시키기 위해 전체 혈액 공급의 신속한 공급을 허용 주입시에 호스트 용기에 접합하다보고자한다. 18 우리는 관류 척추 경 혈관 세포 함유 생체 물질을 함유하는 피하 주입 된 반 강성 밀폐 챔버를 포함 작은 동물에서 생체 내 혈관 조직 공학 모델을 개척했다. 챔버는 이식 된 혈관에서 혈관 신생 발아를 자극 허혈성 환경을 만듭니다. 3 혈관 척추 경을 재구성 동정맥 루프 또는 손상 흐름을 통해 동맥과 정맥이 될 수 있습니다. 3-6,19이 혈관 척추 경 콩나물 기능과 광범위한 동맥의를 모두 예술에 연결 -capillary 정맥 네트워크eriole 정맥의 혈관 척추 경으로 끝난다. 3,20를 또한 둘러싸는 중공지지 챔버 혈관 생성을 향상시키기 위해. 3,21,22을 혈관 척추 경 간단히 주입되면 잠재적으로 기계적 힘을 변형되는 현상 조직을 보호하고 허혈성 드라이브 길어 정상 조직이 아닌 상기 챔버의 내부 공간에 보호, 혈관 발아는 정상 상처 척추 경 주위에 축적한다 새로운 조직과 같은 타임 라인을 따라 중단. 연구자들은 임상 관련 크기의 지원 혈관 3 차원 기능 혈관 조직 구조를 생산하는이 생체 구성을 사용하고 있습니다. 4,23는 또한 그것의 본래 혈관 척추 경으로 설계 혈관 조직 구조가 부상 사이트에서 후속 이식 수확 할 수있다 .보다 임상 적으로 가능한 시나리오는 재건의에 대한 확실한 사이트에서 실을 만드는 것 (24, 25)가슴으로 UCH. 따라서,이 새로이 조직 공학 방법은 재건 수술에 대한 기능적 대상 조직의 새로운 소스를 제공하기 위해 임상 적 잠재력을 가질 수있다. 26-28 다음 프로토콜은 상이한 동물 모델에서 적응 혈관 행렬 생성 및 세포 이동과 분화의 복잡한 과정을 조사하기 위해 이용 될 수있는 래트에서 생체 내 혈관 조직 공학 챔버를 구성하는 일반적인 지침을 제공 할 것이다.

<table><tbody><tr><td>15번 블레이드 메스 1개</td><td>Braun</td><td>BB515</td><td></td></tr><tr><td>치상 Adson 핀셋 1개</td><td>Braun</td><td>BD527R</td><td></td></tr><tr><td>지침 holder 1개</td><td>Braun</td><td>BM201R</td><td></td></tr><tr><td>양극 응고기 1개&amp;nbsp;</td><td>Braun</td><td>US335</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 지침 holder B-15-8.3 1개</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00763</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 확장 핀셋 D-5a.2 1개</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00125</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 보석 세공용 핀셋 JF-5 1개</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00108</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위 - 직선형 SAS-11 1개</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00098</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위 - 곡선형 SDC-11 1개</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00090</td><td></td></tr><tr><td>싱글 클램프 B-3 2개</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00400</td><td></td></tr><tr><td>10/0 나일론 봉합사 2개</td><td>S &amp;amp; T</td><td>03199</td><td></td></tr><tr><td>6/0 나일론 봉합사 1개</td><td>Braun</td><td>G2095469</td><td></td></tr><tr><td>4/0 실크 봉합사 2개</td><td>Braun</td><td>C0760145</td><td></td></tr><tr><td>Xilocaine 1%</td><td>Dealmed</td><td>150733</td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>Heparin Sodium</td><td>Dealmed</td><td>272301</td><td>5,000 UI/ml</td></tr><tr><td>Ringer Lactate</td><td>Baxter</td><td>JB2323</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>돔 모양 조직 공학 챔버 1개</td><td>custom made</td><td></td><td></td></tr><tr><td>유동 챔버 1개</td><td>custom made</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lectin I, Griffonia Simplicifolia&amp;nbsp;</td><td>Vector Laboratories</td><td>B-1105</td><td>1.67 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Troponin T 항체</td><td>Abcam</td><td>Ab8295</td><td>4 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>인간 특이적 Ku80 항체</td><td>Abcam</td><td>Ab80592</td><td>0.06 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Desmin 항체</td><td>Dako</td><td>M0760</td><td>2.55 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Cell Tracker CM-DiI 염료</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C-7000</td><td>3 mg/10&lt;sup&gt;6&lt;/sup&gt; cells</td></tr><tr><td>Lethabarb (sodium pentobarbitone)</td><td><a href="www.virbac.com.au" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Virbac Animal Health</a></td><td>LETHA450</td><td>325 mg/ml</td></tr><tr><td>유연한 가열 패드</td><td><a href="http://www.redzoneheating.com.au" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Redzone Heating</a></td><td>RZ/Medium</td><td></td></tr></tbody></table>

에 내장 혈관 신생에 의하여 조직 공학<em&gt; 생체</em&gt; 조직 공학 상공 회의소

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

재건 수술에서, 서로에 대한 복잡하고 비용이 많이 드는 무역 하나의 결함있는자가 재건의 현재의 방법에 대한 대안에 대한 임상이 필요하다. 조직 공학이 수요 증가를 해결하기 위해 약속을 보유하고있다. 그러나, 대부분의 조직 공학 전략 인해 열악한 혈관 안정 기능적 조직 대체물을 생성하지 못한다. 본 논문은 관류 동맥과 정맥 중 하나 동정맥 루프 또는 흐름을 통해 척추 경 구성으로는 보호 중공 챔버 내부 지향 내장 혈관의 생체 조직 공학 챔버 모델에 초점을 맞추고있다. 이 챔버 기반 시스템에서 혈관 신생 발아는 동정맥 혈관에서 발생하고,이 시스템은 점차적으로 석면 혈관 조직과 챔버 공간을 채우고 구동 허혈성 염증 내생 세포 이동을 끈다. 외인성 세포 / 챔버 구축시에 매트릭스 주입 셀 SUR 향상천공되지 및 개발하는 엔지니어링 조직의 특이성을 결정한다. 우리의 연구는 이러한 챔버 모델이 성공적 지방, 심장 근육, 간 등의 다른 조직을 생성 할 수 있다는 것을 보여 주었다. 그러나, 수정 및 개선이 형성이 일관되고 재현 표적 조직을 보장하기 위해 필요합니다. 이 문서는 생체 내에서 두 개의 서로 다른 혈관 조직 공학 챔버 모델의 제조를위한 표준화 된 프로토콜을 설명합니다.

상기 프로토콜에 기재된 바와 같이 조직 공학 챔버들의 생성은 미세 수술을 실시 하였다. 챔버 내부에서 발생하는 조직 3. 다양한 조직 유형이 성공적으로 생체 내 혈관 챔버 (도 2)를 이용하여 설계 한 프로토콜 단계에서 설명하는 바와 같이 조직 학적으로 관찰 할 수있다. 이러한 신생아 쥐의 심근 (그림 2A), 지방 조직 세포 외 기질 (그림 2C)에서 파생 된 하이드로 겔와 쥐 골격 근육 아세포 (그림 2B), 및 지방 조직과 근육 조직과 심장 조직을 포함한다. 조직의 형태 학적 평가 스테레오 조사원 ImageJ에 시스템 또는 소프트웨어 중 하나를 수행 할 수있다. 다양한 조직 성분의 질적 평가 외에도 3,4,8,...

이것은 조직 공학 챔버 내부의 미세 수술 동정맥 루프 또는 관류 척추경 구성을 사용하여 생체 내 혈관 조직을 구성하기 위한 지침입니다. 생성된 혈관 조직은 장기 재생 및 조직 결함 교체, 약물 검사 및 질병 모델링에 사용할 수 있습니다.

In reconstructive surgery, there is a clinical need for an alternative to the current methods of autologous reconstruction which are complex, costly and ...

본 절차의 전반적인 목표는 조직이 성장하고 확장함과 동시에 견고한 혈액 공급 체계가 발달할 수 있는 공간을 조성하여, 최종적으로 혈관화된 거대 3차원 조직 블록을 생성하는 것입니다. 이 방법은 재건 목적뿐만 아니라 장기 대체 및 복구를 위한 혈관화 조직 공학의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 새로 생성된 조직이 생존을 위해 외부 환경의 확산에 의존할 필요 없이, 자체 혈관 네트워크를 통해 내재적으로 혈액을 공급받는다는 점입니다.Sue McKay와 Liliana Pepe가 절차를 시연하겠습니다. 최소 250 g 이상의 체중을 가진 쥐를 마취하고, 발가락 꼬집기 시험을 통해 마취 깊이를 평가하십시오. 쥐가 반응하지 않으면, 절차 전반에 걸쳐 2% isoflurane을 사용하여 진정 상태를 유지하십시오.다음으로, 눈에 epsomic 연고를 도포합니다. 그런 다음 쥐를 배와 등이 위로 향하게 눕힌 상태에서 전기 면도기를 사용하여 서혜부를 면도하고, 적신 거즈로 털을 제거합니다. 이어서 70% ethanol이 함유된 chlorhexidine 용액으로 수술 부위를 세척합니다.마지막으로, 동물에게 멸균 타월을 덮고 수술을 진행합니다. 15번 메스를 사용하여 서혜인대와 평행하게 왼쪽 서혜부 피부를 4 cm 길이로 절개합니다. 다음으로, 가위로 노출된 서혜부 지방 패드를 원형으로 절개하되, 상복벽 혈관을 기점으로 하는 혈관경에 부착된 상태로 둡니다.이제 마이크로 가위로 복벽과 그 아래의 대퇴 혈관 사이의 막성 결합 조직 유착을 제거합니다. 그런 다음 복벽에 리트랙터를 배치하고 내측으로 당겨 서혜인대와 대퇴 혈관의 전체 길이를 노출시킵니다. 다음으로 마이크로 포셉과 곡선 가위를 사용하여 상복벽정맥을 박리하고 주변 지방으로부터 분리합니다.이 정맥은 테더(tether) 역할을 하게 됩니다. 대퇴 혈관과 신경이 포함된 혈관 주위 초(perivascular sheath)를 절개하십시오. 서혜인대(inguinal ligament)부터 상복벽동맥 분지(epigastric branch) 원위부의 분기점까지 전체적으로 절개합니다.이 시점에서, 그리고 전체 과정 전반에 걸쳐 대퇴 혈관을 조심스럽게 다루는 것이 매우 중요합니다. 혈관이 손상되면 혈전증이 발생하여 실험 전체가 실패할 수 있습니다. 그 다음, 미세 핀셋을 사용하여 대퇴 정맥의 외막을 잡고, 주변 조직 및 인접한 동맥으로부터 조심스럽게 분리합니다.이 단계에서는 정맥벽의 전체 두께를 잡지 마십시오. 이는 내막에 손상을 주어 정맥이 혈전증에 취약해질 수 있기 때문입니다. 또한 이 단계에서 측분지들을 10-0 nylon 봉합사로 결찰하거나 양극 응고기로 응고시키십시오. 대퇴정맥을 완전히 분리한 후, 4-0 silk 봉합사로 근위부와 원위부를 결찰하여 복벽상분지 길이 약 0.5 cm를 포함하여 최소 10 mm 길이의 정맥 이식편을 확보하십시오.가지 부분은 챔버 내에서 루프가 열린 상태를 유지하도록 고정하는 가이 로프(guy rope) 테더 역할을 합니다. 그다음, 이식편 양 끝단에서 외막을 다듬어 제거합니다. 필요한 경우, 이 단계는 미세외과적 문합 전으로 미룰 수 있습니다.헤파린 생리식염수로 세척한 후, 헤파린 생리식염수를 채운 상태로 유지하여 정맥 이식편 준비를 마무리합니다. 그런 다음, 4-0 실크 봉합사를 이용한 연속 봉합과 2~3개의 추가 단순 단속 봉합으로 상처를 폐쇄합니다. 시작 단계에서는 이전에 시연한 것과 같이 반대측 사지의 서혜인대와 대퇴 혈관 전체 길이를 노출시킵니다.그런 다음, 미세 핀셋을 사용하여 주변 지방 패드로부터 상복벽동맥과 정맥을 각각 박리하고 분리합니다. 혈관에서 조직을 떼어낼 때는 부드럽게 조작하십시오. 이어 대퇴동맥의 외막을 잡아 들어 올려 주변 조직으로부터 분리합니다.이 과정에서 동맥의 측분지들을 결찰하거나 응고시킵니다. 그 다음, 대퇴동맥과 대퇴정맥의 근위부에 클램프를 배치합니다. 이제 4-0 silk 봉합사를 사용하여, 상복벽 혈관이 분지되는 지점의 원위부에서 대퇴동맥과 대퇴정맥을 결찰합니다.이제 혈관 아래에 멸균 플라스틱 대비 배경지를 놓고, 날카롭고 직선인 미세 가위를 사용하여 각 혈관을 횡단면으로 절단합니다. 절단 후, 루멘에서 모든 혈액이 제거될 때까지 충분한 양의 헤파린 처리된 식염수로 혈관 내부를 강력하게 세척합니다. 이제 정맥 이식편을 수술 시야로 가져옵니다.정맥 이식편의 근위단은 수혜자의 대퇴정맥에, 원위단은 수혜자의 대퇴동맥에 문합할 수 있도록 위치시킵니다. 이렇게 하면 정맥 이식편 내부의 판막으로 인한 저항 없이 동맥측에서 정맥측으로 혈류가 흐를 수 있습니다. 대퇴 혈관과 정맥 이식편이 꼬임 없이 자연스러운 위치에 놓였는지 확인하십시오.10-0 나일론 봉합사를 사용하여 양측에 외과적 문합술을 시행합니다. 손상을 최소화하는 정교한 미세 외과적 문합이 핵심입니다. 혈관 내막의 손상, 혈관의 건조 또는 부적절한 봉합은 문합 부위에 혈전이 형성되기 쉽게 만듭니다.그런 다음, 두 문합 부위에 누출이 있는지 확인합니다. 문합 부위에서 박동 없이 혈액이 흘러나오는 작은 누출의 경우, 작은 지방 조각이나 스펀지를 위에 올리고 5~10분 동안 부드럽게 압박하여 해결합니다. 수술 시야 전체를 빠르게 채울 정도로 박동성 누출이 심한 경우에는 추가 봉합이 필요합니다.다음으로 동정맥 루프의 개통성을 확인합니다. 대퇴동맥을 부드럽게 폐쇄하면 루프가 수축해야 합니다. 반대로, 대퇴정맥을 폐쇄하면 루프가 팽창해야 합니다.이제 조직 공학 챔버의 바닥 부분을 동정맥 루프 아래에 배치하십시오. 루프가 꼬이거나 꺾인 곳 없이 자연스러운 위치에 놓였는지 확인하십시오. 그런 다음, 6-0 나일론 봉합사를 사용하여 챔버의 바닥 부분을 서혜인대와 그 아래의 근육 근막에 고정하십시오.다음으로, 챔버의 베이스 위에 덮개를 덮습니다. 루프가 위치를 유지할 수 있도록 덮개 아래에서 epigastric branches를 집어 고정합니다. 그 후, 연속 봉합법(continuous running)으로 4-0 silk suture를 사용하여 상처를 봉합하고, 추가로 두 세 번의 단순 단속 봉합(simple interrupted stitches)을 시행하여 마무리합니다.마지막으로, 개별 케이지에서 동물이 마취로부터 회복되도록 하고, 진통제로 carprofen을 단회 피하 투여합니다. 이전과 동일하게 동물의 수술 준비를 합니다. 한 마리의 랫드 양측 서혜부에 각각 하나씩, 총 두 개의 챔버를 이식할 수 있습니다.그 다음, 앞서 설명한 대로 대퇴 혈관을 분리합니다. 동맥과 정맥 모두 주변 조직으로부터 완전히 분리되고 그 분지들이 결찰되면, 챔버를 수술 시야로 가져옵니다. 그런 다음, 손상되지 않은 각각의 대퇴 혈관을 챔버 바닥의 해당 슬롯에 배치합니다.어느 쪽도 꼬이거나 꺾이지 않았는지 확인하십시오. 다음으로, 베이스에 뚜껑을 부착하여 챔버를 닫습니다. 그런 다음 이전에 설명한 대로 상처 부위를 봉합하고 동물이 회복될 때까지 기다립니다.조직 공학 챔버의 미세 수술적 제작은 기술된 방법대로 수행되었습니다. 신생 쥐 심근세포를 이용한 심장 조직, 쥐 골격근모세포를 이용한 근육 조직, 그리고 지방 조직 세포외 기질 유래 하이드로젤을 이용한 지방 조직을 포함하여 다양한 조직 유형이 생체 내 혈관화 챔버를 통해 성공적으로 공학적으로 제작되었습니다. 입체 분석 시스템을 통해 특정 조직 부피에 대한 편향 없는 정량 분석이 가능합니다.예를 들어, 횡단면에서 렉틴으로 염색된 내피세포를 사용하여 혈관 부피를 추정했습니다. 형광 염료로 표지된 세포를 체내에 이식한 후, 세포의 운명을 추적할 수 있습니다. 예를 들어, dye i로 표지된 신생 쥐 심근세포가 이식 3일 후 조직 구조물에서 검출되었습니다.또는, 이종 이식 연구에서 이식된 세포를 식별하기 위해 종 특이적 항체를 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 면역 결핍 쥐에 이식된 인간 유도만능줄기세포는 챔버에서 수확한 조직 내에서 식별될 수 있습니다. 숙련된 경우, 유동 챔버와 동정맥 루프의 이식에는 각각 약 20분과 90분이 소요됩니다.이 절차를 수행하는 동안에는 항상 무균 상태를 유지하는 것이 중요하며, 오염이 발생할 경우 필요한 조치를 취해야 합니다. 혈관을 부드럽게 다루는 것과 비외상성 미세 외과적 문합이 성공의 핵심이라는 점을 잊지 마십시오. 이러한 관점에서, 특히 동정맥 루프를 구축하기 전에는 기본적인 미세 외과 교육을 받을 것을 권장합니다.

tissue-engineering-intrinsic-vascularization-an-vivo-tissue

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

우리 그룹은 심장 혈관 시스템의 생리 타악기의 스트레스가 implantable 작은 직경 혈관 이식을 다시 생성하기 위해 일일 생물 반응기 문화 시스템을 개발했습니다.

타악기 생물 반응기를 사용하여 생물 공학 기반 혈관의 이식

여기서 우리는 인간의 코드 혈액 유래 내피 식민지 - 형성 세포 (ECFCs) 및 골수 - 유래 subcutaneously immunodeficient 마우스로 콜라겐 / fibronectin 겔에 포함된 mesenchymal 줄기 세포 (MSCS)를,.을 제공하는 방법을 설명 이 셀 / 젤 조합은 마우스 vasculature와 연결하는 인간의 혈관 네트워크를 생성합니다.

Immunodeficient 마우스의 생체 공학 인간 Microvascular 네트워크

테스트 시스템으로 인간의 3D 종양 조직을 만들 수있는 방법이 설명되어 있습니다. 이러한 기술은 decellularized 생물 혈관을 비계 (BioVaSc), 인간의 기본 세포와 흐름 생물 반응기의 동적 조건에서뿐만 아니라 정적에서 배양 할 수있는 종양 세포 라인을 기반으로합니다.

인간의 3 차원의 조직 공학<em&gt; 시험관</em&gt; 종양 테스트 시스템

혈관은 성공적인 조직 공학의 접근 방법의 핵심입니다. 따라서, 신뢰성있는 기술은 조직 구조에서의 혈관 망의 발달을 평가하기 위해 필요하다. 여기서 우리는 시각화 및 생체 내에서 혈관 생성을 정량화하기 위해 간단하고 비용 효율적인 방법을 제시한다.

전체 피부 결함 모델은 생체의 혈관 신생을 평가하기<em&gt; 생체</em

동물의 희생까지 생체 내에서 엔드 - 투 - 엔드 문합 및 실시간 디지털 평가를 사용하여 양의 경동맥에 조직 설계된 선박 (TEVs)의 상호 위치 배치를위한 단계별 프로토콜입니다.

티슈 엔지니어링 혈관 이식 및 이후의 이식을위한 수술 기법<em&gt; 생체</em&gt; 모니터링

여기, 우리는 두 번 시드를 부분적으로 유도 만능 줄기 세포로 쥐에 이식을위한 기능적인 조직 설계 혈관 이식을 생성하는 프로토콜을 제시 (PiPSC은) - 탈세 포화 선박 발판 생물 반응기에서 유래 내피 세포 - 평활근 세포 및 PiPSC 산출했다.

마우스 모델에서 조직 공학 혈관의 생성 및 손톱 확장

이 연구에서는 콜라겐, 평활근 세포 및 내피 세포를 직접 배양하여 살아있는 혈관 조직을 신속하게 만드는 기술을 제시합니다. 또한 엔지니어링된 혈관 조직의 기계적 특성화를 위한 새로운 프로토콜이 설명됩니다.

혈관 조직 재생을위한 엔지니어링 3D Cellularized 콜라겐 젤

이 논문은 내피 세포의 생리 학적 특성을 요점을 되풀이 미세 혈관을 설계하는 사출 성형 방법을 제공한다. 미세 유체 기반의 공정은 흐름, 세포 성분, 형상, 생화학 그라디언트로 테일러 조건과 특허 3 차원 혈관 네트워크를 생성합니다. 제조 공정 및 잠재적 응용 예들이 설명된다.

미세화 및 3D 미세 혈관의 조립

우리는 고립과 잘 특성화 된 환경에서 생체 내에서 혈관을 분석하기위한 모델로서 동정맥 (AV) 루프의 생성을위한 미세 수술 방법을 설명합니다. 이 모델은뿐만 아니라 혈관 신생의 조사에 유용 할뿐만 아니라 최적의 엔지니어링 축 방향으로 혈관 및 이식 가능한 조직에 적합합니다.

소형 동물 모델에서의 동정맥 (AV) 루프는 혈관 신생과 혈관을 조성한 조직 공학을 공부하기

엔지니어링 된 조직은 중요한 영양소와 가스를 제공하고 신진 대사 폐기물을 제거하기 위해 적절한 혈관 네트워크에 크게 의존합니다. 이 작업에서는 내피 세포 및 지지 세포의 단계별 파종 프로토콜이 제어된 3D 환경에서 혈관 거동을 연구하기 위한 고도로 조직된 혈관 네트워크를 생성합니다.

스테셀레이트 비계에 단계별 세포 파종하여 발아 혈관을 연구합니다.

이 프로토콜은 생리학적으로 관련된 종양온어칩(tumor-on-a-chip) 모델을 제시하여 고처리량 기초 및 중개 인간 암 연구를 수행하고, 약물 스크리닝, 질병 모델링 및 로딩, 유지 관리 및 평가 절차에 대한 설명과 함께 맞춤형 의학 접근법을 발전시킵니다.

암 연구를 위한 생리학적 인간 혈관화 미세종양 모델 확립

배우세요 생체 내 혈관화 조직 공학 기법으로 동맥정맥 루프를 이용하여 쥐에서 삼차원 혈관화 조직을 생성하는 방법. 이 기술은 장기 재생 및 조직 수복 연구에 활용됩니다.

에 내장 혈관 신생에 의하여 조직 공학

더 많은 동영상 탐색