Name: 히트의 예방에 의한 흰쥐의 반작용을 스트레스 고초균 스트레인 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: 학습하세요 흰쥐에서 열 스트레스 합병증을 예방하는 Bacillus subtilis BSB3 균주의 효과를 평가하는 방법을. 경구 투여 후 생리학적 반응을 분석하여 장기 보호 효과를 확인합니다.

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이 작업은 Auburn University 기금 FOP 101002-139294-2050의 지원을 받았습니다.

모든 실험 절차는 오번 대학의 IACUC, 어번, 알라바마에 의해 승인되었다. 문화 미디어, 요리 및 세균 문화 1. 준비 <ol><li> 영양 한천 플레이트에 밤새 성장 바실러스 서브 틸리 스 (Bacillus subtilis)의 BSB3 문화의 하나의 식민지를 가진 플라스크에 영양 배지 10 ㎖를 접종한다. </li><li> 리터 당 포자 매체 (19) (500 ml의 확인 : 박토 영양 국물, 8g, 10 % (w / v)의 KCl을 10 ml의 1.2 % (v)를 4 × 7H 2 O, 10 ml의 황산 / 승, 한천, (15) g) 및 20 분 동안 121 ℃로 오토 클레이브. 다음 멸균 솔루션을 50 ℃로 냉각하고 추가 할 수 있습니다 : 1 M 칼슘을 (NO 3) 2, 1 ml의; 0.01 M MnCl 2, 1 ㎖; 1 mM의 4, 1 ml의 병용했을. </li><li> 실온에서 20 분 동안 40 O를 C에 차가운 준비 매체는 살균 캐비닛 (20) 무균 배양 접시의 각에 25 ml에 붓는다. 매체가 하룻밤 응고 수 있습니다. </li><li> B의 하룻밤 문화의 0.5 ml의 확산acillus 서브 틸리 BSB3 페트리 접시에서 매체의 표면에. 90 %의 포자까지 5 일간 37 ℃로 문화를 품어. 고해상도 현미경에 의한 위상 밝은 포자를 알 수있다. </li><li> 플레이트를 멸균 된 인산 완충 식염수 (PBS) 1 ㎖를 첨가하고 멸균 된 셀 확산기를 이용하여 표면으로부터 박테리아를 긁어 수확 박테리아. 필요할 때까지 냉장고에 정지를 저장합니다. </li><li> O 37 ℃에서 24 시간 - 18 인큐베이션 포자 형성 배지 플레이트 상에 세균 현탁액의 적절한 희석액 (10-5 ~ 10-6)의 0.1 mL의 도금에 의해 박테리아의 생존을 확인 </li><li> 식민지 카운터를 사용하여 접시에 박테리아 식민지를 카운트하고 테스트를 정지 박테리아의 역가를 계산합니다. 최종 농도 1 × 10 8 CFU / PBS에서 ml의 세균 현탁액을 준비합니다. </li></ol> 2. 동물 <ol><li> 300g - 32 수컷 흰쥐 (250을 사용하여). 표준 펠릿 차우와 물을 무료로 액세스 할 수있는 특정 병원균이없는 상태에서 동물을 유지한다. 평균 온도 (21 ± 1 O를 C), 습도 (50 ± 5 %) 및 12 시간 명암주기를 설정합니다. </li></ol> 3. 실험 설계 <ol><li> 적응 2 일 후 구강 투여 (11)에 의해 동물의 치료를 시작합니다. 경구 위관 바늘과 주사기를 사용합니다. B. 16 쥐 치료 서브 틸리 BSB3 현탁액 (랫트 당 1 mL)을 이틀 동안 하루에 두 번씩 (B. 서브 틸리 기). PBS 16 쥐 (쥐 당 1 ㎖) 이일 (PBS 군) (그림 1)에 대한 하루에 두 번을 취급합니다. </li><li> 그룹 1 제어 (PBS / 아니오 스트레스), 그룹 2 (B) : 치료 후, 각 그룹 (그룹당 8 쥐)를 세분화 서브 틸리 스 (B. 서브 틸리 / 아니오 스트레스), 그룹 3 스트레스 (PBS / 열 스트레스) 및 그룹 4- B. 서브 틸리 + 스트레스 (B. 서브 틸리 / 열 스트레스). </li><li> ELEC를 사용하여 각 쥐 직장 온도 측정디지털 온도계를 TRONIC. 25 분 동안 실온에서 그룹 1 및 2의 쥐 유지. 45 O C에서 기후 챔버에서 그룹 3, 4, 상대 습도 25 분 동안 55 %의 장소 동물. </li><li> 이후, 전자 디지털 온도계를 이용하여 모든 군의 각 쥐 직장 온도를 측정한다. 4 시간 동안 실온에서 모든 동물을 놓습니다. </li><li> 밀봉 마취 항아리 - (4 % 2)와 쥐 깊이 (발가락 핀치에 대한 응답의 부재) 마취 될 때까지 관찰 이소 플루 란과 쥐를 마취. 단두대와 빠른 잘린 쥐를 안락사. </li><li> 혈청을 얻는 즉시 현미경 검사 용 피펫으로 혈액 샘플 (각 쥐에서 7 μl를) 데리고 apyrogenic 튜브에 apyrogenic 피펫과 - (16 ml의 15) 각각의 쥐 20에서 트렁크 혈액을 수집합니다. </li><li> 응고 할 수 있도록 적어도 30 분 동안 냉장고에 혈액 튜브를 넣어. 20 O C에서 원심 분리기 튜브, 7,000 XG에 10 분 동안 빠르게피펫으로 혈청을 제거합니다. 분석 할 때까지 -20 ℃로 각각 50 μl의 볼륨에 쥐 저장소에서 얻은 나누어지는 혈청. </li></ol> 4. 수술 <ol><li> 잘라 내기 / 전기 가위로 시체의 아래쪽 복부 및 흉부의 모든 모피 트림. 살균 캐비닛에 시체를 놓고 70 % 알코올로 시체의 면도 표면을 처리. </li><li> 복부의 정중선 절개를 만들기 위해 멸균 메스를 사용합니다. 멸균 핀셋을 사용하여 각 쥐에서 간, 장간막 림프절, 비장과 소장을 제거합니다. </li></ol> 세균 전좌 5. 분석 <ol><li> 미리 무게 멸균 튜브에 간, 장간막 림프절, 비장의 각 샘플을 놓고 무게. 시료와 관의 무게와 빈 튜브의 중량 차이로 시료의 중량을 계산한다. </li><li> 1:10 희석을 얻기 위해 튜브에 멸균 PBS를 추가 (w / v)의의 샘플 및 homoge균질 현탁액 (21)을 얻기 위해 멸균 유리 조직 균질 각 샘플 nize. </li><li> 멸균 PBS에서 각 샘플의 일련 희석 (10-1 10-4)을 확인합니다. 접시 헤민 (0.005 g / L) 및 비타민 K1 (0.01 g / L) MacConkey 플레이트의 표면의 5 %의 혈액 한천 브루셀라 혈액 한천 상 각 조직의 모든 희석액 0.1ml를. </li><li> 37 입출력 C 22 MacConkey의 5 %의 혈액 아가 플레이트 및 호기성 브루셀라 혈액 아가 플레이트 혐기성 조건에서 부화. </li><li> 24 시간 후에 호기성 세균의 콜로니를 카운트하고, 배양 48 시간이 콜로니 계수기를 사용하여 후 혐기성 세균의 콜로니. 조직의 그램의 콜로니 형성 단위 (CFU)의 수와 그 결과를 표현한다. </li></ol> 6. 조직 학적 분석 <ol><li> 수술에 의해 각각의 쥐에서 소장 샘플을 제거 (- 4.2 4.1 단계). 파라핀에 포함 Bouin의 정착액의 샘플을 수정헤 마톡 실린 및 에오신 표준 절차 (23)를 이용하여 6 μm의 섹션과 얼룩 섹션을 준비합니다. </li><li> 각 샘플 (배율 100 배) 24 장 융모 총 점막 두께의 높이를 측정하는 고해상도 현미경 시스템을 사용한다. 각 쥐​​에서 4 샘플을 분석하고 각 샘플에 최소 20 측정을합니다. 마이크로 미터의 결과를 표현한다. </li></ol> 7. 사이토 카인 분석 <ol><li> IL-1β 상업 쥐 ELISA 키트를 사용하여; IL-6; TNF-α; INF-γ 및 IL-10는 제조사의 프로토콜에 따라 혈청 사이토 카인의 수준을 측정한다. </li><li> 관련 장비에 대한 표준을 사용하여 분석 시료의 각 세트에 대한 표준 곡선을 생성합니다. 적절한 표준 곡선과 실험 데이터를 비교하여 각 샘플에서 사이토 카인의 수준을 정의합니다. </li></ol> 8. 리포 폴리 사카 라이드 분석 <ol><li> 래트에 따른 LPS ELISA 키트를 사용하여 혈청 LPS 레벨 분석제조 업체의 프로토콜입니다. 표준 곡선의 값으로 얻어진 값의 비교에 의해 샘플에서 LPS의 농도를 추정한다. </li></ol> 혈액의 9 고해상도 광학 현미경 <ol><li> 이전 25, 26 설명 현미경 시스템을 사용합니다. 라이브 화상을 기록하는 현미경 시스템을위한베이스 및 비디오 카메라와 컴퓨터 (25) 등의 제진 플랫폼을 사용한다. 이전 27 바와 같은 리차드슨 슬라이드를 이용하여 테스트 영상을 보정한다. </li><li> 유리 슬라이드, 커버 슬립, 사진의 각 쥐에서 갓 그린 혈액의 7 μl를 놓고 각 샘플 (확대 1,700X) 72 × 53.3 μm의 2 열 이미지 프레임을 기록합니다. </li><li> 실시간으로 고해상도 직시 광학 이미지를 제공하는 소프트웨어를 사용하여 소포의 농도를 측정한다. 각 실험 조건 28 20 이미지 프레임의 최소를 검사합니다. </li></ol> 10 Statis틱 <ol><li> 평균과 표준 편차 등의 모든 값을 표현한다. 통계 분석 및 그래프 플로팅을 수행합니다. 두 표본 t 검정으로 결과를 분석 통계적 유의성을 정의하는 0.05의 유의 수준을 설정한다. </li></ol>

<ol><li>Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+function+in+the+heat-stressed+human%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular function in the heat-stressed human.</a> Acta Physiol. 199, 407-423 (2010).</li>
<li>Lambert, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gastrointestinal+permeability+in+exertional+heatstroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc.+Sport+Sci.+Rev%22%5BJournal%5D)">Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke.</a> Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+heat+stress+on+the+porcine+small+intestine%3A+A+morphological+and+gene+expression+study%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+A-Mol.+Integr.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study.</a> Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).</li>
<li>Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Frontiers+in+Thermoregulation+and+Exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Med%22%5BJournal%5D)">New Frontiers in Thermoregulation and Exercise.</a> Sports Med. 16, 163-167 (1993).</li>
<li>Lambert, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+gastrointestinal+barrier+dysfunction+and+its+inflammatory+effects%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects.</a> J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).</li>
<li>Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gastrointestinal+system+-+An+essential+target+organ+of+the+athlete%27s+health+and+physical+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc.+Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance.</a> Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).</li>
<li>Khan, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbes%2C+intestinal+inflammation+and+probiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroent%22%5BJournal%5D)">Microbes, intestinal inflammation and probiotics.</a> Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).</li>
<li>Quigley, E. M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prebiotics+and+Probiotics%3A+Their+Role+in+the+Management+of+Gastrointestinal+Disorders+in+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults.</a> Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).</li>
<li>Gore, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+secondary+prevention+effects+of+the+probiotics+Lactobacillus+paracasei+or+Bifidobacterium+lactis+on+early+infant+eczema%3A+randomized+controlled+trial+with+follow-up+until+age+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Allergy%22%5BJournal%5D)">Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years.</a> Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).</li>
<li>Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+probiotics+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr.+J%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, probiotics and diabetes.</a> Nutr. J. 13, (2014).</li>
<li>Eutamene, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+between+Lactobacillus+paracasei+and+its+bacterial+products+to+counteract+stress-induced+gut+permeability+and+sensitivity+increase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats.</a> J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).</li>
<li>Ait-Belgnaoui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+farciminis+treatment+attenuates+stress-induced+overexpression+of+Fos+protein+in+spinal+and+supraspinal+sites+after+colorectal+distension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).</li>
<li>Fujiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bacillus+subtilis+quorum-sensing+molecule+CSF+contributes+to+intestinal+Homeostasis+via+OCTN2%2C+a+host+cell+membrane+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter.</a> Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).</li>
<li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacillus+probiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiol. 28, 214-220 (2011).</li>
<li>Pinchuk, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+anti-Helicobacter+pylori+activity+of+the+probiotic+strain+Bacillus+subtilis+3+is+due+to+secretion+of+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Ch%22%5BJournal%5D)">In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics.</a> Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).</li>
<li>Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotics+against+Campylobacter+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Travel+Med%22%5BJournal%5D)">Probiotics against Campylobacter pathogens.</a> J. Travel Med. 4, 167-170 (1997).</li>
<li>Gracheva, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+the+new+bacterial+preparation+biosporin+in+treating+acute+intestinal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Zh+Mikrobiol+Epidemiol+Immunobiol%22%5BJournal%5D)">The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections.</a> Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).</li>
<li>Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Bacillus+probiotics+in+prevention+of+antibiotic-associated+diarrhoea%3A+a+randomized%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JMM+Case+Report%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial.</a> JMM Case Report. 1, (2014).</li>
<li>Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Methods+for+Storage+Stability+and+Release+of+Bacillus+Spores%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Prog%22%5BJournal%5D)">Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores.</a> Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).</li>
<li>Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVogel%2C+HG+%22eds+H.G.+Vogel+%26+W.H.+Vogel%22">eds H.G. Vogel & W.H. Vogel</a>. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).</li>
<li>Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+induces+the+translocation+of+cutaneous+and+gastrointestinal+microflora+to+secondary+lymphoid+organs+of+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice.</a> J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).</li>
<li>Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+commensal+microflora+by+toll-like+receptors+is+required+for+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis.</a> Cell. 118, 229-241 (2004).</li>
<li>Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+cytokine%2C+corticosterone%2C+and+tissue+injury+responses+in+mice+during+heat+strain+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).</li>
<li>Ribeiro, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+loss+and+morphometric+study+of+intestinal+mucosa+in+rats+after+massive+intestinal+resection.+Influence+of+a+glutamine-enriched+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Hosp.+Cl%C3%ACn.+Fac.+Med.+S.+Paulo%22%5BJournal%5D)">Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet.</a> Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).</li>
<li>Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+90+nm+%28lambda%2F5%29+in+an+optical+transmission+microscope+with+an+annular+condenser%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser.</a> Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).</li>
<li>Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+administration+of+Bacillus+subtilis+strain+BSB3+can+prevent+heat+stress-related+adverse+effects+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats.</a> J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).</li>
<li>Richardson, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Test+slides%3A+Diatoms+to+divisions-What+are+you+looking+at%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Roy+Microsc+Soc%22%5BJournal%5D)">Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at.</a> Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).</li>
<li>Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+evaluation+of+vesicles+shed+by+rat+erythrocytes+at+elevated+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Therm+Biol%22%5BJournal%5D)">Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures.</a> J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).</li>
<li>Leon, L. R., Helwig, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+stroke%3A+Role+of+the+systemic+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response.</a> J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).</li>
<li>Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+Shock+Protein+70+as+a+Biomarker+of+Heat+Stress+in+a+Simulated+Hot+Cockpit%5BTitle%5D)+AND+%22Aviat+Space+Env+Med%22%5BJournal%5D)">Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit.</a> Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

심각한 건강 상태 (29)에서, 고온에 노출 된 결과. 예방 및 열 스트레스와 관련된 합병증의 조기 발견은 매우 중요 (30)이다. 제시된 프로토콜은 열 스트레스 부작용 방지를위한 다양한 방식의 효능을 평가하는 데 사용될 수있다. 이 프로토콜 내에서 중요한 단계는 다음과 같습니다 열처리 과정 (45 O C, 25 분); 수집 및 독소 오염을 방지하는 혈액 처리 중 apyrogenic 재료의 사용; 동결 융해를 반복을 피하기 위해 -20 ℃로 혈청 분취 량을 유지; 세균 전위의 분석에서 멸균 절차에 따라. 이 프로토콜은 열 스트레스의 부작용 방지를위한 박테리아와 쥐의 구강 치료를 위해 설립되었다. 관리 및 다른 화합물의 다른 경로의 경우,이 프로토콜은 수정 될 수 있습니다. TR의 예를 들면, 시간열 스트레스 전에 eatment은 확장 될 수있다. 경구 투여는 직장 ...

다양한 스트레스 요인이 인간과 동물의 건강에 영향을 미칩니다. 체온은 가장 스트레스가 많은 요인 중 하나이며, 만성, 급성 및 치명적인 질병을 유발합니다1. 열 스트레스 후 장 형태의 변화와 장 장벽 무결성의 상실이 많은 사례에서 보고되었습니다2,3. 이 보호 장벽은 장내 세균과 그 독소, 특히 지질다당류(LPS)가 내강에서 내부 순환으로 이동하는 것을 방어하는 역할을 합니다4,5. 장내 미생물총(microbiota)의 안정성은 장 장벽 기능, 숙주의 면역 반응, 스트레스 상태에 대한 내성에 큰 영향을 미친다6. 따라서 장내 미생물총(microbiota)의 조절은 스트레스 관련 부작용을 예방하기 위한 새로운 접근법을 제공할 수 있습니다. 
>jove_content<유익한 박테리아는 설사, 염증성 장 질환, 아토피 피부염,대사 장애 7-10과 같은 다양한 임상 상태를 성공적으로 관리하기 위해 장내 미생물군을 변형하는 유망한 전략으로 사용되어 왔습니다. 유익한 박테리아의 프로바이오틱스 효과에는 장 건강을 지원하는 필수 대사 산물 생성, 면역 체계 자극, 유당 내성 촉진, 상피 기능 장애 회복이 포함됩니다. 프로바이오틱스는 시험관 내 및 동물 모델에서 스트레스 관련 합병증을 예방하는 데 효과적이었습니다11,12. 
연구자들은 바실러스 박테리아가 장 항상성을 지원하고13 숙주에 유익한 영향을 미치기 때문에 프로바이오틱스로서 바실러스 박테리아에 더 많은 관심을 기울였습니다14. 이전 데이터는 체외15,16 및 임상 시험17,18에서 병원체에 대한 바실러스 프로바이오틱스의 높은 효능을 입증했습니다. 여기에서는 열 스트레스 후 합병증에 대한 B. subtilis BSB3 균주의 예방 효과를 평가하는 것을 목표로 합니다.

<table><tbody><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Sigma-Aldrich,&nbsp;St. Louis, MO</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>에틸 알코올&nbsp;</td><td>Pharmco products Inc. 미국 코네티컷주 브룩필드&nbsp;</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>한</td>천 <td>VWR</td><td>97064-334</td><td></td></tr><tr><td>맥콩키 한천 플레이트</td><td>VWR</td><td>470180-742</td><td></td></tr><tr><td>5% 혈액 한천 플레이트</td><td>VWR</td><td>89405-024</td><td></td></tr><tr><td>브루셀라 혈액 한천 플레이트 Hemin, 비타민 K</td><td>VWR</td><td>89405-032</td><td></td></tr><tr><td>Bouin' s Fixative</td><td>Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA</td><td>15990</td><td></td></tr><tr><td>IL-10 Rat ELISA kit</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td><td>KRC0101</td><td></td></tr><tr><td>IL-1beta Rat ELISA Kit</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td><td>KRC0011</td><td></td></tr><tr><td>IL-6 Rat ELISA Kit</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td><td>KRC0061</td><td></td></tr><tr><td>INF-gamma Rat ELISA Kit</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td><td></td><td></td>KRC4021</tr><tr><td>TNF-alpha Rat ELISA Kit</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td><td>KRC3011</td><td></td></tr><tr><td>Rat LPS ELISA Kit</td><td>NeoBioLab, MA, USA</td><td>RL0275</td><td></td></tr><tr><td>Environmental Chamber 6020-1</td><td>Caron, Marietta, OH, USA</td><td>6020-1</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기&nbsp;</td><td>Beckman Coulter, 인디애나폴리스, 미국</td><td>, Optima L-90K</td><td></td></tr><tr><td>울트라 원심분리기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>광학 현미경 광학 시스템</td><td>CitoViva Technology Inc., Auburn, AL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colony 카운터</td><td>Fisher Scientific, 피츠버그, 펜실베니아, 미국</td><td>RE-3325</td><td></td></tr><tr><td>Freezer</td><td>Haier, 브루클린, 뉴욕, 미국</td><td>HCMO50LA</td><td></td></tr><tr><td>울트라 마이크로플레이트 리더</td><td>Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA</td><td>ELx 808</td><td></td></tr><tr><td>자동 스트립 워셔</td><td>Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA</td><td>ELx50</td><td></td></tr><tr><td>피펫</td><td>Gilson, Pipetman, France</td><td>P100, P200, P1000</td><td></td></tr><tr><td>C24 인큐베이터 쉐이커</td><td>New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA</td><td>Classic C24</td><td></td></tr><tr><td>Rocking Shaker&nbsp;</td><td>Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA</td><td>55</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA</td><td>875713</td><td>100 mm x 15 mm</td></tr><tr><td>SterilGard III Advance</td><td>The Baker Company, Sanford, ME, USA</td><td>SG403</td><td></td></tr><tr><td>Culture Growing Flasks</td><td>Corning Incorporated, Corning, NY, USA</td><td>4995</td><td>PYREX 250 ml 삼각 플라스크</td></tr><tr><td>광학 분광계 Genesys 20</td><td>Thermo Scientific, 미국 매사추세츠주 월섬.</td><td>4001</td><td></td></tr><tr><td>Sony DXC-33 비디오 카메라</td><td>Sony</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Richardson 테스트 슬라이드</td><td>전자 현미경 과학, Hatfield, PA, USA</td><td>80303</td><td></td></tr><tr><td>Millipore 정수 시스템</td><td>Millipore</td><td>Direct-Q</td><td></td></tr><tr><td>Image-Pro Plus 소프트웨어</td><td>미디어 사이버네틱스, MD, 미국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>트리플 빔 밸런스</td><td>오하우스 코퍼레이션, Parsippany, NJ, 미국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>조직 균질화기, Dounce</td><td>VWR</td><td>71000-518</td><td></td></tr></tbody></table>

히트의 예방에 의한 흰쥐의 반작용을 스트레스<em&gt; 고초균</em&gt; 스트레인

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

본 연구는 열 응력과 관련된 합병증에 대한 바실러스 서브 틸리 스 (Bacillus subtilis) 균주의 보호 효과를 평가하기 위해 디자인되었다. 서른 두 흰쥐이 연구에 사용되었다. 동물을 경구 B. 두 일 동안 하루에 두 번 처리 하였다 서브 틸리 BSB3 변형 또는 PBS. 다음날 마지막 처리 후, 각 그룹을 분할하고, 두 개의 실험 그룹 (하나는 PBS로 처리 한 B. subtilis에 처리) 25 분 동안 45 ℃로 넣었다. 두 대조군은 실온에서 25 분 동안 머물렀다. 모든 쥐를 안락사시키고, 다른 매개 변수는 모든 그룹에서 분석 하였다. 열 스트레스의 악영향 융모 높이 및 장 상피 점막 전체 두께의 감소에 의해 등록된다; 루멘에서 박테리아의 전위; 혈액 (LPS) 수준 리포 폴리 사카 라이드의 적혈구의 수포 및 고도 증가했다. 치료의 보호 효능은 사전 평가되고이러한 부작용의 vention. 이 프로토콜은 열 스트레스 합병증의 예방을위한 박테리아와 쥐의 구강 치료를 위해 설립되었다, 그러나이 프로토콜은 수정 및 관리의 다른 경로에 대해 서로 다른 화합물의 분석에 사용할 수 있습니다.

열 스트레스 후 바로 전에 동물의 체온의 평균은 각각 36.7 ± 0.07 입출력 C 및 40.3 ± 0.17 O C (P &lt;0.05)이었다. 열 (그룹 3)로 쥐의 노출 융모 높이의 현저한 억제 및 점막 전체 두께의 결과 (도 2, 3 참조). 열 유해한 영향에서 스트레스 보호 소장 전에 BSB3 균주의 경구 투여. 장내 세균은 세균의 전위 장간막 림프절 분석 (MLN) 간 및 각 쥐의 비장에 의해 결정 하였다. 1.7 × 103 ± 4.6 × 10 2 CFU / g 조직 (그림 4)의 농도로 세균 배양 MLN에서만 고립 된 쥐의 간 (그룹 3) PBS로 사전 처리 및 열에 노출. 대조군에서 모든 테스트 샘플 (그룹...

우리는 유익한 박테리아로 경구 전처리를 통해 쥐의 열 스트레스 영향을 예방하기 위한 프로토콜을 설명했습니다. 이 프로토콜은 다양한 투여 경로 및 다양한 화합물의 분석에 수정 및 사용할 수 있습니다.

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

본 실험의 전반적인 목표는 열 스트레스 이후의 합병증에 대한 B.subtilis BSB3 균주의 예방 효과를 평가하는 것입니다. 이 방법은 열 스트레스로 인한 부작용 예방에 관한 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 열 스트레스 합병증을 완화하기 위한 다양한 접근 방식을 평가하는 데 사용할 수 있다는 점입니다.이 절차의 시연은 저희 실험실의 연구원인 Ludmila Globa와 Oleg Pusovyy가 진행하겠습니다. 먼저, 영양 한천 배지 플레이트에서 하룻밤 동안 배양한 Bacillus subtilis BSB3의 단일 콜로니를 준비합니다.플라스크에 10 mL의 영양 배지(nutrient broth)를 접종합니다. 37 °C에서 하룻밤 동안 배양합니다. 여기에 표시된 레시피에 따라 500 mL의 포자 형성 배지를 준비합니다.그런 다음 121 °C에서 20분 동안 오토클레이브합니다. 다음의 멸균 용액들을 첨가하기 전, 배지가 50 °C까지 식도록 둡니다. 멸균 작업대 내에서 준비된 배지를 상온의 40 °C까지 20분 동안 냉각합니다.그리고 20개의 멸균 페트리 접시에 각각 25 milliliters씩 붓습니다. 배지가 하룻밤 동안 굳도록 둡니다. 다음으로, 하룻밤 동안 배양한 Bacillus subtilis BSB3 배양액 0.5 milliliters를 포자 형성 배지 플레이크 표면에 도말합니다.플레이트를 37 °C에서 5일 동안 배양하여 포자 형성률이 90%에 도달하게 합니다. 그 다음 고해상도 현미경을 사용하여 위상차 밝은 포자를 확인합니다. 박테리아를 수확하려면 플레이트에 1 mL의 PBS를 첨가하고, 멸균된 셀 스프레더를 사용하여 표면에서 박테리아를 긁어냅니다.현탁액을 필요한 때까지 4°C에서 보관하십시오. 세균 현탁액의 적절한 희석액 0.1 mL를 포자 형성 배지 플레이트에 도말하고 37°C에서 18~24시간 동안 배양하여 세균의 생존력을 확인하십시오. 콜로니 카운터를 사용하여 세균 콜로니 수를 측정하고 테스트한 현탁액 내 세균의 역가를 계산하십시오.그 다음 PBS에서 최종 농도가 1×10⁸ CFU/mL가 되도록 세균 현탁액을 준비합니다. B.subtilis BSB3 또는 PBS를 2일 동안 경구 투여하여 쥐를 처치한 후, 동물을 세분화하고 체온을 측정한 다음, 그룹 1과 2의 쥐를 25분 동안 실온에 둡니다. 그룹 3과 4의 동물은 45°C, 상대 습도 55%의 환경 챔버에 25분 동안 둡니다.각 쥐의 직장 온도를 다시 측정한 후, 모든 동물을 상온에서 4시간 동안 둡니다. 그다음, 텍스트 프로토콜에 따라 동물을 안락사시키고 체간혈을 채취한 뒤 장기를 적출하여, 각 장기 샘플을 미리 무게를 잰 멸균 튜브에 넣고 무게를 측정합니다. 각 튜브에 멸균 PBS를 추가하여 샘플의 중량 대 부피 희석 배수를 1:10으로 맞추고, 멸균 유리 조직 균질기를 사용하여 균질한 조직 현탁액을 생성합니다.다음으로, 멸균된 PBS를 사용하여 각 시료를 단계별로 희석합니다. 그 후, 모든 희석액 0.1 milliliters를 MacConkeys 배지와 5% blood agar 표면에 도말합니다. 또한 Hemin과 Vitamin K1이 함유된 brucella blood agar에도 도말합니다. 플레이트를 배양한 후, 콜로니 카운터를 사용하여 각 플레이트 그룹의 콜로니 수를 측정합니다.결과를 조직 1g당 콜로니 형성 단위(CFU) 수로 표시하십시오. 텍스트 프로토콜에 따라 소장 절편을 준비하고 염색한 후, 고해상도 현미경을 사용하여 장 융모와 총 점막벽 두께를 측정하십시오. 쥐 한 마리당 최소 4개의 샘플을 분석하고, 각 샘플에서 최소 20회의 측정을 수행하십시오.혈액 샘플의 고해상도 광학 현미경 관찰을 수행하려면, 비디오 카메라와 컴퓨터가 연결된 현미경 시스템을 진동 격리 플랫폼 위에 설치하여 실시간 이미지를 기록하십시오. 텍스트 프로토콜에 따라 테스트 이미지를 보정한 후, 각 쥐에서 갓 채취한 혈액 7 µL를 유리 슬라이드 위에 올리고 커버글라스를 덮습니다. 그런 다음 각 샘플에서 72 by 53.3 µm² 크기의 이미지 프레임 10개를 촬영하고 기록하십시오.마지막으로, 실시간으로 고해상도 직접 관찰 광학 이미지를 제공하는 소프트웨어를 사용하여 소포의 농도를 측정합니다. 열 스트레스 전과 직후 동물의 평균 체온은 각각 36.7 ± 0.7 °C 및 40.3 ± 0.17 °C였습니다. 쥐를 열에 노출시킨 결과 융모 높이와 총 점막 두께가 유의하게 억제되었습니다.하지만 스트레스 유도 전 BSB3 균주로 처리한 결과, 장이 열의 유해한 영향으로부터 보호되었습니다. 장내 세균의 전이 여부를 확인하기 위해 장간막 림프절, 간 및 비장을 분석하였습니다. 여기에 나타난 바와 같이, 열에 노출된 PBS 처리 쥐의 장간막 림프절 및 간 샘플에서만 조직 1g당 1.7 × 10³ ± 4.6 × 10² CFU 농도로 세균이 분리되었습니다.반면에, BSB3 균주를 투여받은 대조군 및 열 스트레스 동물로부터 얻은 모든 테스트 샘플은 무균 상태였습니다. 열 스트레스를 받은 쥐에서 IL 1beta, IL-6, TNFalpha 또는 인터페론 감마 사이토카인 수치의 변화는 기록되지 않았습니다. 그러나 열 처리 전 PBS 처리 동물에서는 IL-10 및 LPS 수치가 상승했습니다.따라서 B.subtilis BSB3 전처리는 열처리 후 혈청 내 IL-10 및 LPS의 상승을 억제했습니다. 마지막으로, 열 스트레스 전 PBS를 투여한 쥐의 혈액에서는 유리 소포의 농도가 유의미하게 증가한 것이 확인되었으나, BSB3 처리 동물에서는 그렇지 않았습니다. 혈액 수집 시에 발열성 물질을 사용하지 않도록 주의하고, 혈청 액체를 -20 °C에서 보관하며 반복적인 동결 및 해동을 피하는 정밀함이 필요하며, 세균 전이 분석 동안 멸균 절차를 준수하는 것이 중요합니다.열 스트레스에 따른 합병증에 관한 추가적인 질문에 답하기 위해, 열 스트레스 후 박테리아 투여와 같은 절차를 수행할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

DA 쥐에서 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 encephalomyelitis :이 비디오는 여러 경화증의 동물 모델의 유도 및 임상 채점을 보여줍니다. 전체 쥐의 척수하고 완전한 프로 인드의 도움이되는가 포함된 유제와 immunizing 쥐가 유도된 질병은, 인간의 질병을 닮은 임상 징후를 보여줍니다.

유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 Encephalomyelitis 임상 채점

출처: Sorokulova, I., et al. Bacillus subtilis 균주에 의한 쥐의 열 스트레스 부작용 예방. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 유익한 박테리아 또는 인산염 완충 식염수(PBS)로 전처리되고 장 장벽 무결성을 평가하기 위해 열 스트레스에 노출된 쥐를 보여줍니다. 대조군 쥐의 수많은 콜로니와 달리 치료된 쥐의 간에서 더 적은 장 유래 박테리아 콜로니는 온전한 상피 장벽과 최소한의 박테리아 전좌를 나타냅니다.

열 스트레스를 받는 쥐의 장내 미생물 전좌에 대한 유익한 박테리아의 효과 평가

출처: 소로쿨로바, I. 외. Bacillus subtilis 균주에 의한 쥐의 열 스트레스 부작용 예방. J. Vis. Exp. (2016)이 영상은 열 스트레스에 노출된 쥐에서 Bacillus subtilis 의 보호 효과를 평가하기 위해 사용되는 조직학적 및 혈액 현미경 분석을 소개합니다.

열 스트레스 쥐에서 Bacillus subtilis 의 효과를 평가하기 위한 조직학 및 혈액학적 분석

이 비디오에서는 마우스 모델에서 운동 열사병(EHS)을 연구하기 위한 단계별 프로토콜에 대해 설명합니다.

운동 열사병 마우스 모델: 운동 열사병의 기전을 연구하기 위한 프로토콜

선물이 유도 하 고 탐지 LPS 주입 수 있습니다 Sprague-Dawley 쥐에 의해 발생 하는 CMHs CMHs의 병 인에 대 한 연구 조사 미래에 활용 하는 프로토콜.

아 급성 대뇌 Microhemorrhages 쥐에서 Lipopolysaccharide 주입에 의해 유도 된

여기, 우리 프로토콜 및 관련 만성 스트레스에 노출 된 후 변경 내용을 확인을 쥐 모델을 사용 하 여 메 틸 Seq, epigenomic 플랫폼의 구현을 설명 합니다. 결과 쥐 메 틸-Seq 플랫폼은 쥐에서 스트레스 노출에서 발생 하는 메 틸 화 차이 감지 수를 보여 줍니다.

쥐 메 틸-Seq 플랫폼 관련 스트레스에 노출 된 후 변경 내용을 확인 하

여기서, 우리는 선충 C. 예쁜꼬마선충에서 세포 단백질 독성 스트레스 반응을 형광 전사 기의 활성화를 측정하고 생리적 스트레스에 대한 감수성을 측정하여 특성화한다.

C. Elegans의 생리적 스트레스 반응 측정

이 프로토콜은 감전과 같은 불리한 외부 자극으로부터 자유로운 마우스에서 표준화되고 반복 가능한 전임상 모델인 편성 열사병(EHS)의 개발을 설명합니다. 이 모델은 기계론, 예방 및 치료 연구를 위한 플랫폼을 제공합니다.

마우스에서 운동 열사병의 전임상 모델

여기에서는 대장염에 대한 Bacillus cereus 의 긍정적인 효과를 조절하는 장내 미생물총(microbiota)의 역할을 조사하기 위해 항생제 유도 pseudo-germ-free dextran sulfate 나트륨 유발 대장염 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

장내 미생물군 조절을 통한 대장염에 대한 Bacillus cereus 투여의 완화 효과 조사

장내 미생물은 특정 또는 보존 메커니즘을 통해 숙주의 건강에 긍정적 또는 부정적 영향을 미칠 수 있습니다. Caenorhabditis elegans 는 그러한 미생물을 스크리닝하는 편리한 플랫폼입니다. 본 프로토콜은 웜 건강의 대용으로 사용되는 선충 스트레스 저항성에 미치는 영향에 대한 48개의 박테리아 분리주의 고처리량 스크리닝을 설명합니다.

Caenorhabditis elegans 건강에 영향을 미치는 미생물 분리물의 고처리량 스크리닝

이 프로토콜은 몽골 의학 이론을 기반으로 우울증에 대한 만성 예측 불가능한 경미 스트레스(CUMS) 모델과 행동 테스트를 검증하는 방법을 설명합니다.

몽골 의학에 근거한 쥐의 만성 예측 불가능한 경미한 스트레스

학습하세요 흰쥐에서 열 스트레스 합병증을 예방하는 Bacillus subtilis BSB3 균주의 효과를 평가하는 방법을. 경구 투여 후 생리학적 반응을 분석하여 장기 보호 효과를 확인합니다.

히트의 예방에 의한 흰쥐의 반작용을 스트레스

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