Name: 대사 표현형을 각기 다른 미성숙, 성숙 및 Tolerogenic 수지상 세포의 생성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: 학습하세요 단핵구에서 내성 및 성숙 수지상 세포를 분화시키는 방법을. 이 기술은 면역학 연구와 백신 개발에 활용할 수 있는 대사 프로파일 분석 모델을 제공합니다.

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<ol><li>Jolles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paul+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Paul Langerhans.</a> J Clin Pathol. 55 (4), 243-24 (2002).</li>
<li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology%2C+quantitation%2C+tissue+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J Exp Med. 137 (5), 1142-1162 (1973).</li>
<li>Steinman, R. M., Swanson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endocytic+activity+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The endocytic activity of dendritic cells.</a> J Exp Med. 182 (2), 283-288 (1995).</li>
<li>Hemmi, H., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR+signalling+and+the+function+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Immunol+Allergy%22%5BJournal%5D)">TLR signalling and the function of dendritic cells.</a> Chem Immunol Allergy. 86, 120-135 (2005).</li>
<li>Mueller, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+maintaining+peripheral+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms maintaining peripheral tolerance.</a> Nat Immunol. 11 (1), 21-27 (2010).</li>
<li>Inaba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+presentation+of+phagocytosed+cellular+fragments+on+the+major+histocompatibility+complex+class+II+products+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient presentation of phagocytosed cellular fragments on the major histocompatibility complex class II products of dendritic cells.</a> J Exp Med. 188 (11), 2163-2173 (1998).</li>
<li>Caux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B70%2FB7-2+is+identical+to+CD86+and+is+the+major+functional+ligand+for+CD28+expressed+on+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">B70/B7-2 is identical to CD86 and is the major functional ligand for CD28 expressed on human dendritic cells.</a> J Exp Med. 180 (5), 1841-1847 (1994).</li>
<li>Paavonen, J., Lehtinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+human+papillomavirus+and+other+sexually+transmitted+agents+in+the+etiology+of+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Interactions between human papillomavirus and other sexually transmitted agents in the etiology of cervical cancer.</a> Curr Opin Infect Dis. 12 (1), 67-71 (1999).</li>
<li>Ohtani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+target+of+rapamycin+and+glycogen+synthase+kinase+3+differentially+regulate+lipopolysaccharide-induced+interleukin-12+production+in+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mammalian target of rapamycin and glycogen synthase kinase 3 differentially regulate lipopolysaccharide-induced interleukin-12 production in dendritic cells.</a> Blood. 112 (3), 635-643 (2008).</li>
<li>Wilde, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+in+renal+biopsies+of+patients+with+ANCA-associated+vasculitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells in renal biopsies of patients with ANCA-associated vasculitis.</a> Nephrol Dial Transplant. 24 (7), 2151-2156 (2009).</li>
<li>Al-Hello, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enterovirus+strain+isolated+from+diabetic+child+belongs+to+a+genetic+subcluster+of+echovirus+11%2C+but+is+also+neutralised+with+monotypic+antisera+to+coxsackievirus+A9%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">An enterovirus strain isolated from diabetic child belongs to a genetic subcluster of echovirus 11, but is also neutralised with monotypic antisera to coxsackievirus A9.</a> J Gen Virol. 89, 1949-1959 (2008).</li>
<li>Ziegler-Heitbrock, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nomenclature+of+monocytes+and+dendritic+cells+in+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood.</a> Blood. 116 (16), 74-80 (2010).</li>
<li>Osugi, Y., Vuckovic, S., Hart, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+blood+CD11c%28%2B%29+dendritic+cells+and+monocyte-derived+dendritic+cells+differ+in+their+ability+to+stimulate+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Myeloid blood CD11c(+) dendritic cells and monocyte-derived dendritic cells differ in their ability to stimulate T lymphocytes.</a> Blood. 100 (8), 2858-2866 (2002).</li>
<li>Reynolds, G., Haniffa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+Mouse+Mononuclear+Phagocyte+Networks%3A+A+Tale+of+Two+Species%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human and Mouse Mononuclear Phagocyte Networks: A Tale of Two Species.</a> Front Immunol. 6, (2015).</li>
<li>Jefford, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+comparison+of+DCs+generated+in+vivo+with+Flt3+ligand+or+in+vitro+from+blood+monocytes%3A+differential+regulation+of+function+by+specific+classes+of+physiologic+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli.</a> Blood. 102 (5), 1753-1763 (2003).</li>
<li>Menck, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+monocytes+by+double+gradient+centrifugation+and+their+differentiation+to+macrophages+in+teflon-coated+cell+culture+bags%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of human monocytes by double gradient centrifugation and their differentiation to macrophages in teflon-coated cell culture bags.</a> J Vis Exp. (91), (2014).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+human+granulocyte+and+monocyte+isolation+procedures+on+functional+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Impact of human granulocyte and monocyte isolation procedures on functional studies.</a> Clin Vaccine Immunol. 19 (7), 1065-1074 (2012).</li>
<li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+protocols+for+surface+and+intracellular+antigen+analyses+of+neural+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry protocols for surface and intracellular antigen analyses of neural cell types.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li>
<li>Faresjo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+for+analysis+of+immune+markers+by+fluorochrome+%28Luminex%29+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide for analysis of immune markers by fluorochrome (Luminex) technique.</a> Methods Mol Biol. 1172, 87-96 (2014).</li>
<li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>Defawe, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+qualification+of+a+multiplex+bead+array+to+assess+cytokine+and+chemokine+production+by+vaccine-specific+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization and qualification of a multiplex bead array to assess cytokine and chemokine production by vaccine-specific cells.</a> J Immunol Methods. 382 (1-2), 117-128 (2012).</li>
<li>Nicholls, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+profile+experiment+using+C2C12+myoblast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells.</a> J Vis Exp. (46), (2010).</li>
<li>Chunharas, A., Pabunruang, W., Hongeng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+self-healing+Langerhans+cell+histiocytosis+with+pulmonary+involvement%3A+spontaneous+regression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Assoc+Thai%22%5BJournal%5D)">Congenital self-healing Langerhans cell histiocytosis with pulmonary involvement: spontaneous regression.</a> J Med Assoc Thai. 85, 1309-1313 (2002).</li>
<li>Bai, L., Feuerer, M., Beckhove, P., Umansky, V., Schirrmacher, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dendritic+cells+from+human+bone+marrow+mononuclear+cells%3A+advantages+for+clinical+application+in+comparison+to+peripheral+blood+monocyte+derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Generation of dendritic cells from human bone marrow mononuclear cells: advantages for clinical application in comparison to peripheral blood monocyte derived cells.</a> Int J Oncol. 20 (2), 247-253 (2002).</li>
<li>Felzmann, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+enrichment+from+leukapharesis+products+for+the+generation+of+DCs+by+plastic+adherence%2C+or+by+positive+or+negative+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Monocyte enrichment from leukapharesis products for the generation of DCs by plastic adherence, or by positive or negative selection.</a> Cytotherapy. 5 (5), 391-398 (2003).</li>
<li>Berger, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+elutriation+of+monocytes+within+a+closed+system+%28Elutra%29+for+clinical-scale+generation+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Efficient elutriation of monocytes within a closed system (Elutra) for clinical-scale generation of dendritic cells.</a> J Immunol Methods. 298 (1-2), 1-2 (2005).</li>
<li>Sallusto, F., Lanzavecchia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+presentation+of+soluble+antigen+by+cultured+human+dendritic+cells+is+maintained+by+granulocyte%2Fmacrophage+colony-stimulating+factor+plus+interleukin+4+and+downregulated+by+tumor+necrosis+factor+alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha.</a> J Exp Med. 179 (4), 1109-1118 (1994).</li>
<li>Pace, S. T., Gelman, B. B., Wong, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Langerhans+cell+histiocytosis+of+the+lacrimal+gland+in+an+adult%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Primary Langerhans cell histiocytosis of the lacrimal gland in an adult.</a> Can J Ophthalmol. 50 (3), 40-43 (2015).</li>
<li>Ravanfar, P., Wallace, J. S., Pace, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diaper+dermatitis%3A+a+review+and+update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Diaper dermatitis: a review and update.</a> Curr Opin Pediatr. 24 (4), 472-479 (2012).</li>
<li>Gebhardt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+case+of+cutaneous+Rosai-Dorfman+disease+refractory+to+imatinib+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A case of cutaneous Rosai-Dorfman disease refractory to imatinib therapy.</a> Arch Dermatol. 145 (5), 571-574 (2009).</li>
<li>Vazquez, P., Robles, A. M., de Pablo, F., Hernandez-Sanchez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-neural+tyrosine+hydroxylase%2C+via+modulation+of+endocrine+pancreatic+precursors%2C+is+required+for+normal+development+of+beta+cells+in+the+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Non-neural tyrosine hydroxylase, via modulation of endocrine pancreatic precursors, is required for normal development of beta cells in the mouse pancreas.</a> Diabetologia. 57 (11), 2339-2347 (2014).</li>
<li>Pellacani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+melanoma+types+based+on+reflectance+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Distinct melanoma types based on reflectance confocal microscopy.</a> Exp Dermatol. 23 (6), 414-418 (2014).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+involvement+of+Langerhans+cell+histiocytosis+in+children--imaging+findings+of+computed+tomography%2C+magnetic+resonance+imaging+and+magnetic+resonance+cholangiopancreatography%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Radiol%22%5BJournal%5D)">Hepatic involvement of Langerhans cell histiocytosis in children--imaging findings of computed tomography, magnetic resonance imaging and magnetic resonance cholangiopancreatography.</a> Pediatr Radiol. 44 (6), 713-718 (2014).</li>
<li>Haustein, M., Terai, N., Pablik, J., Pillunat, L. E., Sommer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapy-resistant+swelling+of+the+upper+eyelid+in+childhood%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Therapy-resistant swelling of the upper eyelid in childhood.</a> Ophthalmologe. 111 (1), 53-57 (2014).</li>
<li>Haidinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+role+of+mammalian+target+of+rapamycin+in+human+dendritic+cell+function+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A versatile role of mammalian target of rapamycin in human dendritic cell function and differentiation.</a> J Immunol. 185 (7), 3919-3931 (2010).</li>
<li>Macedo, C., Turquist, H., Metes, D., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoregulatory+properties+of+rapamycin-conditioned+monocyte-derived+dendritic+cells+and+their+role+in+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Res%22%5BJournal%5D)">Immunoregulatory properties of rapamycin-conditioned monocyte-derived dendritic cells and their role in transplantation.</a> Transplant Res. 1 (1), 16(2012).</li>
<li>Fischer, R., Turnquist, H. R., Taner, T., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+rapamycin+in+the+induction+of+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Exp+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Use of rapamycin in the induction of tolerogenic dendritic cells.</a> Handb Exp Pharmacol. 188 (188), 215-232 (2009).</li>
<li>Nicolette, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+for+active+immunotherapy%3A+optimizing+design+and+manufacture+in+order+to+develop+commercially+and+clinically+viable+products%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells for active immunotherapy: optimizing design and manufacture in order to develop commercially and clinically viable products.</a> Vaccine. 25, 47-60 (2007).</li>
<li>Han, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+3+clinical+dendritic+cell+maturation+protocols+containing+lipopolysaccharide+and+interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 3 clinical dendritic cell maturation protocols containing lipopolysaccharide and interferon-gamma.</a> J Immunother. 32 (4), 399-407 (2009).</li>
<li>Paananen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+biological+analysis+of+echovirus+9+strain+isolated+from+a+diabetic+child%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Molecular and biological analysis of echovirus 9 strain isolated from a diabetic child.</a> J Med Virol. 69 (4), 529-537 (2003).</li>
<li>HC, O. N., Wilson, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+with+in+vitro+production+of+dendritic+cells+using+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Limitations with in vitro production of dendritic cells using cytokines.</a> J Leukoc Biol. 75 (4), 600-603 (2004).</li>
<li>Mest, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-induced+insulin+secretion+is+potentiated+by+a+new+imidazoline+compound%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn+Schmiedebergs+Arch+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Glucose-induced insulin secretion is potentiated by a new imidazoline compound.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 364 (1), 47-52 (2001).</li>
<li>Puc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+activity+after+cold+preservation+of+pancreatic+islet+cells+treated+with+pefloxacin+%28PFX%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial activity after cold preservation of pancreatic islet cells treated with pefloxacin (PFX).</a> Ann Transplant. 3 (1), 38-41 (1998).</li>
<li>Alarcon, C., Serna, J., Perez-Villamil, B., de Pablo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+differentially+regulated+processing+of+proinsulin+in+developing+chick+pancreas%2C+liver+and+neuroretina%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Letters%22%5BJournal%5D)">Synthesis and differentially regulated processing of proinsulin in developing chick pancreas, liver and neuroretina.</a> FEBS Letters. 436 (3), 361-366 (1998).</li>
<li>Jekunen, A. P., Kairemo, K. J., Paavonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+Hand-Schuller-Christian+syndrome+by+a+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Imaging of Hand-Schuller-Christian syndrome by a monoclonal antibody.</a> Clin Nucl Med. 22 (11), 771-774 (1997).</li>
<li>Pearce, E. J., Everts, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell metabolism.</a> Nat Rev Immunol. 15 (1), 18-29 (2015).</li>
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이 논문은 단핵 세포의 미성숙 moDCs, tolerogenic moDCs 성숙한 moDCs에서 생성하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜의 중요한 단계들은 다음 단락에서 자세히 설명한다. 이는 인간 말초 혈액이 프로토콜 및 실시되어야 인간의 혈액 처리를위한 범용주의에서 출발 물질로서 사용하는 것이 중요하다. 그 인간 (24)에 골수 수지상 세포를 유도하기 위해 기술적으로 가능하지만, 말초 혈액에서 발견 된 세포에서 시험 관내 DC 분화 인해 골수에 비해 말초 혈중의 이용에 바람직하다. 말초 혈액에서 발견 된 세포 중에서 CD34 + 조혈 줄기 세포 및 단핵구는 일반적으로 수지상 세포의 시험 관내 생성을 위해 사용된다. 조혈 CD34는 + 세포가 다음 더 랑게르한스로 분화되어 따라 CD1a + 및 CD14 + 서브 세트를 유도하는 GM-CSF와 TNF-α와 배양 줄기세포와 수지상 세포 등을들 수있다. 반면, 단핵구는 미성숙 moDCs를 생성하는 GM-CSF 및 IL-4에서 배양한다. 여러 프로토콜은 말초 혈액에서 단핵 세포의 농축에 사용됩니다; 예를 들어, 플라스틱 접시, 세광과 분리 키트 (25), (26)을 준수하여 준수 프로토콜의 장점은 세포에 최소한의 손상이며, 상대적으로 그러나 순도가 손상 될 수 있습니다 세포 비용 효과적.; 및 추가 단계가 추가 실험을 위해 세포를 분리 할 필요가있다. 세광은 크기 및 밀도에 기초하여 세포를 분리하는 기술이다. 세광의 장점은 세포 생존하고 단핵구 쉽게 추가 실험을 위해 사용될 수있다; 그러나이 기술은 elutriator의 가용성과 유사한 침강 파라미터와 다른 세포 집단 (T 세포 및 단핵 세포)를 분리 할 수​​ 없다는 의해 제한된다. 시판 분리 키트 중 하나를 긍정적으로 선택 자성 마이크로 비드를 이용하거나부정적인 단핵구 인구를 선택합니다. 분리 된 단핵 세포는 (마커 또는 마이크로 비드에 구속되지 않음) &quot;그대로&quot;남아있는 일부 프로토콜은 음의 선택을 사용 단핵구 분리를 향해 바이어스된다. 이 프로토콜에서, CD14 구슬은 PBMC를 긍정적 인 선택 인간 단핵 세포를 사용 하였다. CD14는 세포질 도메인 부족과 CD14에 항체의 결합 신호 전달을 유발하지 않습니다. 또한, 마이크로 비드는 분화 과정을 방해하지 않는, 따라서 문화 후 단핵 세포에서 분리 한 것입니다. 또한, CD14 가장 강하게 단구와 약 호중구 및 일부 골수 수지상 세포, 다른 방법 (17)보다 순도 세포 분리의 결과에 따라서,이 방법을 나타낸다. 혈액 단핵 세포는 수지상 세포 나 대 식세포로 분화 될 수 있으며, 단핵 세포의 운명은 크게 사이토 카인 환경에 따라 달라집니다. 본 논문에서는 moDCs는 (GM을 과립구 - 대 식세포 콜로니 - 자극 인자를 첨가함으로써 생성된다-CSF) 인간 말초 혈액 단핵 세포에 인터루킨 4 (IL-4). GM-CSF는 단핵구 생존 및 IL-4 마크로파지 분화 억제 활성을 나타낸다 필요; 및 단핵구에 GM-SCSF 및 IL-4의 조합 또한 개별 사이토킨 27 비교 미성숙 moDCs 높은 백분율을 얻었다. 말초 혈 단핵구 28, 29, 30, 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α), 인터페론 알파 (IFN-α) 및 인터루킨 13 (IL-13)을 첨가하여 moDCs를 생성하는 다른 프로토콜들이있다. GM-CSF와 IL-4의 결합은 이제 면역 원성 또는 tolerogenic moDCs로 분화하고받은 Th1, TH2 또는 Th17 홍보 moDCs에 편광 플라스틱 미성숙 수지상 세포를 생성하는 허용 프로토콜을 1990 년대에 최적화되었다. 미성숙 moDCs 비타민 D3와 덱사 메사 존의 첨가에 의해 tolerogenic moDCs로 분화된다. 예를 들어 tolerogenic의 수지상 세포를 생성하는 여러 가지 프로토콜을 통해있다핵 인자 - 카파 B (NF-kB) 억제, β 카테닌의 활성 비타민 D3, 덱사메타손 및 라파 마이신 31, 32, 33, 34, 35, 9, 36, 37. 형 비타민 D3와 덱사 메사 존 모두 수지상 개별 약물을 사용하는 경우보다 더 큰 alloproliferation 억제 비타민 D3와 덱사 메사 존의 결과의 조합에 tolerogenic 효과를 유도하는 것으로보고되었지만. 따라서 tolerogenic 수지상 세포의 생성을위한 기존의 프로토콜은 비타민 D3와 덱사 메사 존의 조합으로 개질 하였다. 이 방법은 현재 치료 유틸리티 인간 tolerogenic 수지상의 모델로 인정되고있다. 재구성 비타민 D3 및 덱사메타손 짧은 수명을 가지고주의하는 것이 중요하다. 이 프로토콜에서, 리포 다당류 (LPS)는 DC 성숙 유도제로서 첨가 하였다. 미성숙 moDCs은 염증성 칵테일을 사용하여 성숙을 유도 할 수있다 :(TNF-α), 인터루킨 1 베타 (IL-1β), 인터루킨 6 (IL-6) 및 프로스타글란딘 E2) 또는 전 염증성 사이토 카인 (TNF-α 및 인터페론 감마 (IFN-Γ)). 염증성 칵테일 높은 공동 자극과 이동성 기능을 가진 성숙한 moDCs를 생성하지만 그들은 IL-12 (38)의 상대적으로 낮은 수준을 생산하고 있습니다. TNF-α 또는 IFN-Γ 단독 안정한 표현형 돌기 (39)를 유도 할 수 없다. LPS는 수신자 같은 수용체 4 (TLR4)를 자극 DC 성숙을 유도하는 NF-kB와 미토 겐 활성화 단백질 키나아제 (MAPKs)의 활성화를 매개한다. LPS에 의해 유도 DC 성숙은 DC 성숙 마커 (CD83, CD86, HLA-DR)의 업 규제를 보여주고 또한 IL-12p70의 생산되었다. 또한,이 단계는 또한 임상 암 백신 성숙한 수지상 세포를 제조 TLR3 작용제와 LPS 페어링하도록 변형 될 수있다. 본 논문에서는 tolerogenic 수지상 세포는 LPS 처리에 따라 성숙에 강한 것으로 표시됩니다. 이 DC가 면역 원성이 아니며 relea을하지 않는 것처럼 세미 - 성숙그 자체로는 염증성 사이토 카인 (40). 이 프로토콜의 제한은 분화 과정에서 거짓말. 이 과정은 높은 처리량 분석에 적용 할 수있는 어려움을 포즈 주 7 일 0 8 일이 소요됩니다. 프로토콜에서의 수정은 분화 과정을 단축 아직 다른 상태에서 실행 가능한 DC가 높은 숫자를 산출 할 필요가있다. 둘째, DC가이 프로토콜의 사이토 카인의 첨가에 의해 생성되고 이러한 사이토 카인은 오랜 기간 동안 DC 인구를 유지하지 않습니다. 또한, 사이토 카인 농도로 생체 내에서보다 훨씬 더 사용되며 생체 내 수지상 세포에 생리 학적으로 동일하지 않은 경로의 바이어스 개발 될 수 있습니다. DC 전구체의 시험 관내 배양 물, 예를 들어 생체 내에서 통상 41 DC 분화 필수적인 사이토킨 아니다 GM-CSF에 반응하는 것으로 나타났다. 그럼에도 불구하고, 사이토 카인의 자극은 유전자에 유용한 방법이 될 수 있습니다실험에 대한 시험 관내에서 DC의 높은 숫자를 평가. 이러한 면역 형광 염색 등의 분석이 프로토콜에서 발생하는 이러한 세포를 대상 유동 세포 계측법 할 수있는 능력은,여보세요 반응 연구 및 대사 연구는이 방법의 유용성을 증가시킨다. 이 시험관의 DC는 생체 내 수지상의 희귀 번호와 함께 할 이전에 어려운 DC 개발, 성숙과 항원 제시의 지식을 향상시킬 수있는 좋은 모델이 될. 허용 오차에 비해 면역 면역을 조절하는 DC의 능력은 그들에게 암과자가 면역 질환 42, 43, 44, 45에 대한 치료제의 매력적인 후보를합니다. 이 프로토콜에서 발생하는 면역 원성 수지상은 감염성 질환 및 종양에 대한 백신 접종의 효능을 향상시키기 위해 사용될 수있다; tolerogenic 수지상 원치 않는 T 세포 반응을 제어하고 다음의 이식 거부를 방지하는데 사용될 수있다. 복잡한면역 관용의 균형은 DC 분화 상태에 상당히 의존한다. DC 차별화 여러 신호 전달 경로 및 신진 대사 운명의 적용을받습니다 조정 된 셀룰러 프로그램입니다. DC의 다른 차별화 상태는 생체 에너지 및 생합성의 요구에 차이가; 상태를 휴식에 DC가 비교 예를 들어, 활성화 된 수지상 세포 생존 및 마이그레이션을위한 중요한 더 많은 에너지 대사 적응을 필요로한다. 이것은 비타민 D3, 덱사메타손 및 라파 마이신이 tolerogenic 수지상 세포를 유도하는 능력에 대해 알려진 것이 중요하다 DC 대사에 영향을 설명 하였다. 본 논문에서는 서로 다른 분화 상태에서 moDCs의 에너지 대사는 세포 외 플럭스 분석기를 사용하는 것을 특징으로하고 tolerogenic moDCs 가장 높은 신진 대사 소성 및 LPS 유발 성숙이 가소성을 감소 보였다. 이화 대사에 영향을 tolerogenic DC (46)을 기능하는 동안 근육 대사는 DC의 성숙을 지원합니다. 수지상이 프로토콜에서 생성 된 치료제에 내성 및 허용 오차를 수정하는 열쇠를 쥐고 수지상 세포의 신진 대사 상태를 변경 여부를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 결론적으로, 우리는 DC가 &#39;면역 기능을 연구하는데 중요한 미성숙, tolerogenic 성숙 moDCs의 생성을위한 프로토콜을 제시했다.

Jolles 1 참조하고 전문적인 항원 제시 세포 2로 인정 1973 년 랄프 된 Steinman과 Zanvil 콘을 특징으로 DC 먼저 19 세기 후반에 폴 랑게르한스 (랑게르한스 세포)에 의해 설명되었다. 수지상 세포는 말초 혈액에서와 같은 (랑게르한스 세포와 같은 현재) 피부로와 활성화 코, 폐, 위의 라이닝과 내장의 외부 환경에 노출 된 조직에 특히 풍부한 몸, 대부분의 조직에서 발견된다 그들은 외부 항원을 발생합니다. 미성숙 수지상 세포는 T 세포 (3)을 자극하는 세포 내 이입 능력이 있지만, 상대적으로 낮은 용량을 가지고있다. 미성숙 수지상 세포는 다양한 패턴 인식 수용체 (PRRS) 캡처 병원체 관련 분자 패턴 (PAMPs가) 손상 관련 분자 패턴 (감쇠)를 4 표현한다. 자기 분자가 T 세포 unresponsivene 될 동안 활성화 위험 신호 원성 수지상으로 성숙 이용시SS 및 세포 사멸 5. 면역 원성 수지상 세포는 MHC 분자와 공동 자극 표면 분자 및 주요 나이브 T 세포 6,7에 자신의 능력의 상향 조절을 특징으로한다. 미성숙 수지상 세포는 비타민 D3 대사 산물 (1A), 25 (O)이 D (3) 및 특정 면역 억제제 인터루킨 10 (IL-10) 등의 덱사메타손 및 8-9 라파 마이신에 반응 TREG 유도 또는 tolerogenic 상태 향해 숙성 될 수있다. Tolerogenic 수지상은 표면 수용체 및 리간드를 함유하는 면역 수용체 티로신 계 억제 모티프 (ITIMs)의 발현을 특징으로한다. tolerogenic 수지상에 ILT의 가족, ILT3 및 ILT4를 포함 ITIMs의 신호 전달은 alloproliferation을 억제 Foxp3의 + TREG 확장 (10, 11)를 구동한다. tolerogenic 수지상 세포의 이러한 독특한 특성은 생체 내에서 자신의 깊은 힘, 이식 된 동종 이식과 suppr에 내구성이 뛰어난 내성을 유도하는, 즉 능력으로 이어질자가 면역 질환의 발전을 ESS. Tolerogenic 수지상 세포는 면역 활성화의 억제 기능 성숙 편광 수지상의 하위 유형으로, 따라서 볼 수 있습니다. 형질 수지상 세포와 골수 수지상 12 : 현재, 인간의 말초 혈액에서 수지상 세포의 두 가지 일반적인 부분 집합이 있습니다. 순환 수지상 세포는 인간 혈액 중 백혈구의 2 % 미만으로 구성하는 희귀하고 이것은 그들의 면역 기능을 연구하는 수지상의 적절한 수의 분리에 어려움을 야기. 이 문제를 극복하기 위해, 단핵구 분화 된 수지상 세포는 수지상 세포의 기능 연구를위한 시험 관내 모델로서 사용된다. 이 시험관의 DC는 생체 내 수지상 세포에 비해 유사 수용체와 기능을 가지고 있습니다. 생체 내 수지상의 체외 생성 된 단핵구 유래 수지상 세포 (moDCs)에서 자세한 비교는 다른 실험실 13, 14, 15에 의해 조사한다. 또한 그 moDCs와 CD를보고1C + 수지상 세포는 항원 제시 및 T 세포의 기능 (15)을 유도에 상당 하였다. 본 논문에서는 말초 혈액 단핵 세포에서 미숙 moDCs를 생성 한 후 면역 원성 및 tolerogenic 수지상 세포로 분화하는 방법을 설명합니다. 이 단핵구 유래 수지상 세포 (moDCs)는 그 표면 마커, 사이토 카인 프로필, 면역 기능과 신진 대사 상태를 특징으로한다. 면역 원성 tolerogenic 수지상 세포는 동종 T 세포 또는 조절 T 세포 중 확대 될 다른 사이토 카인을 생산한다. 본 논문에서는 사이토 카인의 프로파일 링은 멀티 플렉스 기술을 사용하는 시스템으로 수행된다. 세포의 성장 매체는 항체 고정화 색상 코드 구슬 배양 및 소형 분석기에서 읽습니다. 수지상 세포의 대사 상태 당분 반영 산소 소모율, 세포 호흡의 지표 및 세포 외 산성화 속도를 측정 외 플럭스 분석기를 이용하여 분석수지상 세포에 플럭스. 이러한 생체 에너지 비율의 측정은 수상 세포 발달과 기능에 필수적인 세포 대사의 변화를 추적하는 수단을 제공한다.

<table><tbody><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-03</td><td>PBMC 절연</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Becton, Dickinson</td><td>302832</td><td>PBMC 절연</td></tr><tr><td>1.5ml 원심분리기 튜브</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td>PBMC 절연</td></tr><tr><td>15ml 팔콘 튜브</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td>PBMC 절연</td></tr><tr><td>50ml 팔콘 튜브</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td>PBMC 절연</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td>PBMC isolation</td></tr><tr><td>0.2 &micro; m 필터</td><td>Sartorius stedim biotech</td><td>17597</td><td>PBMC 절연</td></tr><tr><td>MACs 키트</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-201</td><td>단핵구 농축</td></tr><tr><td>MiniMACS 분리기</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-102</td><td>단핵구 농축</td></tr><tr><td>세포 배양 등급 물</td><td>Invitrogen, Life Technologies</td><td></td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11875-093</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30070103</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15140</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>10010-031</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>NEAA</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11140-040</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15575</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15630-080</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>피루브산 나트륨</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11360-070</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-093-868</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>IL-4</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-093-924</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>비타민 D3</td><td>Sigma</td><td>D1530</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>Sigma</td><td>D2915</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma</td><td>l2755</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>trypan blue</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15250-061</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>PerCP-conjugated HLADR&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>307628</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>PE 결합 CD80</td><td>BD Biosciences</td><td>557227</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>PE 결합 CD83&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>556855</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>PE 결합 CD86&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>555665</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>APC-conjugated CD11c</td><td>BD Biosciences</td><td>340544</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>PE-conjugated CD14&nbsp;</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-242</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>PE-conjugated BDCA3&nbsp;</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-514</td><td>세포분석</td></tr><tr><td>APC-conjugated ILT3&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>12-5139-73</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>Isotype matched PerCP- conjugated Mab</td><td>BioLegend</td><td>400250</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>Isotype matched PE- conjugated Mab</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-835</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>Isotype matched APC- conjugated Mab</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-836</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>BD LSR II 유세포 분석기</td><td>BD 파밍겐</td><td>BD LSR II&nbsp;</td><td>세포분석</td></tr><tr><td>cytofix/cytoperm</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>APC/CY7-conjugated CD25</td><td>BD pharmingen</td><td>557753</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>PE/CY7-conjugated CD4</td><td>Biolegend</td><td>300512</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>PerCP-conjugated CD3</td><td>Biolegend</td><td>300428</td><td>Cytometry</td></tr><tr><td>EasySep Human CD4+ T cell enrichment kit</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>19052</td><td>동종 반응 연구</td></tr><tr><td>EasySep 자석&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>18000</td><td>동종 반응 연구</td></tr><tr><td>Cell Trace CFSE 세포 증식 키트</td><td>분자 프로브</td><td>C34554</td><td>동종 반응 연구</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>14025092</td><td>동종 반응 연구</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-conjugated FoxP3</td><td>BD Biosciences</td><td>560889</td><td></td></tr><tr><td>Milliplex MAP Human Cytokine/Chemokine 자기 비드 패널</td><td>Millipore</td><td>HCYTOMAG-60K</td><td>사이토카인 분석</td></tr><tr><td>5 ml 폴리스티렌 튜브</td><td>팔콘</td><td>352058</td><td>사이토카인 분석</td></tr><tr><td>Luminex 칼집 유체&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>SHEATHFLUID</td><td>사이토카인 분석</td></tr><tr><td>FLEXMAP 3D 시스템, xPONENT 소프트웨어</td><td>Luminex Corporation</td><td>FLEXMAP 3D</td><td>사이토카인 분석</td></tr><tr><td>MitoTracker Red CMXRos</td><td>Cell Signalling</td><td>9082</td><td>미토콘드리아 활성</td></tr>, <tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td>미토콘드리아 활성</td></tr>, <tr><td>XF 분석 매체(OCR)</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>102352-000</td><td>대사 적응</td></tr><tr><td>포도당&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8769</td><td>대사 적응</td></tr><tr><td>XF 베이스 매체 (ECAR)</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>102353-100</td><td>대사 적응</td></tr><tr><td>L-글루타민</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>25030-081</td><td>대사 적응</td></tr><tr><td>Calibrant</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>100840-000&nbsp;</td><td>대사 적응</td></tr><tr><td>XF 세포 미토 스트레스 키트</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>103015-100</td><td>대사 적응</td></tr><tr><td>XF 해당작용 스트레스 키트</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>103020-100</td><td>대사 적응</td></tr><tr><td>Seahorse&nbsp;</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>XFe96</td><td>대사 적응</td></tr></tbody></table>

대사 표현형을 각기 다른 미성숙, 성숙 및 tolerogenic 수지상 세포의 생성

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

항원 비특이적 선천 면역 항원과 특정 적응성 면역계 사이의 복잡한 상호 작용으로부터 면역 반응 결과. 면역계는 분자 자체에 대한 내성을 유지하고 병원체에 빠르게 반응에서 일정한 균형이다. 수지상 세포 (DCS)는 적응 면역 시스템에 선천 면역 연결자가 아닌 자기의 적응 응답 균형 강력한 전문 항원 제시 세포이다. 성숙 신호에 따라, 미성숙 수지상 세포를 선택적으로 또는 면역 원성 tolerogenic 수지상 세포로 분화하도록 자극 할 수있다. 면역 수지상 세포 클론 확장 항원 특이 적 T 세포 증식에​​ 신호를 제공한다; tolerogenic 수상 세포는 항원 특이 적 T 세포 결실 또는 조절 T 세포의 클로 날 팽창에 의해 내성을 조절하면서. 이 때문에 고유 한 속성으로, 수지상 세포는 높은 암과자가 면역 dise 용으로 치료제 수요가있다ASE에. 수지상 세포는 시험관 내에서 특정 항원에 면역 원성 및로드 tolerogenic 모두 특정 면역 반응을 탑재 인체에 주입 할 수있다. 이 작품은 표면 마커의 발현, 기능과 신진 대사 표현형에 차이가 단핵 세포, 미성숙 단핵구 유래 수지상 세포 (moDCs), tolerogenic 성숙 moDCs에서 체외에서 생성 할 수있는 수단을 제공한다.

단핵구 정화 및 수지상 세포 분화 단핵 세포는 CD14 + 미성숙 수지상 세포를 수득하는 GM-CSF 및 IL-4의 존재 하에서 완전 배지에서 양성 선별 자기 분리 (도 1B) 배양 (이어서, 말초 혈액 (도 1a) 밀도 원심 분리 한 PBMC로부터 정제 된 도 2A). 비타민 D3 및 덱사메타손 후 GM-CSF와 IL-4를 첨가 tolerogenic moDCs (그림 2B)로 미성숙 moDCs의 분화의 결과. LPS는 성숙 (도 2D)에 대한 저항성을 확인 LPS로 자극 하였다 moDCs (도 2C) 및 tolerogenic moDCs 성숙 미성숙 moDCs의 성숙을 유도 하였다. 이 연구에 사용 된 혈액 샘플을 통보 이전에 건강한 공여자로부터 얻었다동의. moDC 특성 유동 세포 계측법에 의해 마커 특성 표면 DC 표면 마커 분석 성숙한 moDCs은 LPS 처리 tolerogenic moDCs, tolerogenic moDCs 미숙 moDCs (그림 3)에 비해 성숙 마커 HLA-DR, CD83 및 CD86의 가장 높은 수준을 표명 것으로 나타났다. 이러한 결과는 LPS 자극 다음 미숙 moDCs에 비해 tolerogenic moDCs가 성숙에 내성이 있다고 설명했다. 또한, tolerogenic moDCs를 LPS는 처리 및 tolerogenic moDCs은 미성숙과 성숙 moDCs에 비해 CD14, BDCA3 (CD141) 및 면역 글로불린 같은 성적 증명서 (ILT) 3의 발현 증가를 표시. 우리가 여기에서 생성 된 tolerogenic moDCs 이전 보고서 (23)과 일치한다. moDCs의 기능적 특성 성숙을위한 유도 moDCs은 면역 원성되고 CD4 + T 세포의 증식을 촉진 사이토 카인을 놓습니다. 우리는 공동 배양 된 T 세포의 증식을 측정함으로써 다양한 moDC 아형의 면역 원성을 평가 하였다. CD4 + T 세포의 낮은 alloproliferation (도 4a)에 도시 된 바와 같이 Tolerogenic moDCs는 성숙한 moDCs 비해 좋지 면역원이었다. Tolerogenic moDCs는 낮은 IFN-Γ CD4 + T 세포 (그림 4B)와 alloreaction 공동 문화, 낮은 IL-12p40, 높은 IL-10 사이토 카인 생산을 특징으로한다. 또한, 어른의 moDCs에 tolerogenic moDCs의 수를 증가 공동 배양 유도 allospecific CD4 + T 세포는 CD25 + 고 Foxp3를 조절 T 세포 (도 4C)의 주파수를 증가. <p클래스 = &quot;jove_content&quot;FO : 유지-together.within 페이지 = &quot;1&quot;&gt; 미토콘드리아 활동 분석 레드 CMXRos는 moDCs의 미토콘드리아 막 전위 레벨을 분석 미토콘드리아 활성을 반영하는데 사용된다. Tolerogenic moDCs는 다른 moDC 분화 아형 (도 5a)에 비해 높은 미토콘드리아 활성을 갖는 것으로 관찰되었다. 다음에, 미토콘드리아의 산소 소모 속도 (OCR)는 bioanalyzer를 사용하여 다른 moDC 아형에 대해 평가된다. OCR 측정을 포함하지만 이에 기초 호흡, 호흡 공급 능력, 양자 누출 및 비 미토콘드리아 호흡에 한정되지 정보를 제공 대사 프로필 고해상도 통계를 허용한다. OCR의 측정은 스트레스에 반응하는 세포의 능력을 평가하는 수단을 제공한다. 세포는 대사 적으로 연속하여 세 가지 화합물의 첨가에 의해 교란된다. 첫 번째 주입은 올입니다ATP 합성을 억제하는 상기 전자 전달계 (ETC)의 복소 V 억제 igomycin (ATP 커플러). 이 단계는 ATP 합성에 소비되는 산소의 비율과 미토콘드리아 내막을 가로 질러 양성자 누설을 극복하기 위해 소비 된 산소의 비율을 구별한다. 두번째 주사는 않고, 미토콘드리아 막에 걸쳐 대신 미토콘드리아 막전위의 붕괴 에너지와 산소의 급속한 소모 리드 복합 V.의 양자 채널을 통해 수소 이온 운반에 의해 ATP 합성을 방해 FCCP (ETC 촉진제) 인 ATP의 생성. FCCP 처리는 세포의 예비 호흡 용량을 계산하는데 사용될 수있다. 스트레스 조건에서 예비 호흡 능력의 유지는 세포 생존에 중요하다. 이 용량은 등에 관여하는 효소의 기질의 가용성 및 기능 용량 등 여러 가지 요인에 의해 결정된다 세 번째 주입 로테 논하는 COMPL의 조합예 내가 억제제 및 Antimycin A, 복잡한 III 억제제. 이 조합은 미토콘드리아 호흡을 종료하고 OCR은 미토콘드리아 기능 장애 (도 5C)의 결과로서 감소하는 것으로 관찰된다. Tolerogenic moDCs 성숙한 moDCs (그림 5D)보다 더 높은 기저 OCR 수준을 표시. 또한, tolerogenic은 LPS-tolerogenic, 미숙 moDCs 성숙한 moDCs (그림 5E)에 비해 예비 호흡기 용량을 증가 보였다. moDCs의 대사 특성 락트산 및 양성자 당분 동안 세포로부터 방출되기 때문에, 우리는 세포 외 산성화 (ECAR) (도 6b)의 속도를 실시간으로 분석을 행하여 moDCs 당분의 활성을 분석 하였다. 포도당의 존재하에 모든 moDCs의 당분 레이트와, 기저 단에 비해 증가미성숙 moDCs (그림 6D)보다 높은 당분 비율을 나타내는 성숙한 moDCs. Tolerogenic 미성숙 moDCs은 LPS 처리 moDCs (도 6b)와 비교하여 (글루코스의 존재에 의해 유도 oligomycin)보다 최대 해당 작용을 나타냈다. tolerogenic 미숙 moDCs의 당분 용량은 성숙 moDCs (그림 6E)보다 높았다. 높은 당분 속도는 대조적으로, 당분 예약 성숙한 moDCs (그림 6 층)에서 가장 낮았다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig1.jpg" /> 그림 1 :. 말초 혈액에서 단핵구 정제 (A)는 혈액 25 ml를 조심스럽게 원심 분리 전에 50 ML 튜브 당 피콜 15 ml의에 적층된다. PBMC를는 밀도 원심 분리 후 플라즈마 아래 층에 집중된다. (B)는 PBMC를 접속사있는 마이크로 비드와 인큐베이션<html> 인간 CD14 항체 (이소 : 마우스의 IgG2a를) 단일 클론하는 비공 액. CD14 + 단핵 세포를 분리하는 분리기의 자기장에 배치 된 컬럼에로드 된 다음과 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig2.jpg" /> 그림 2 : moDCs의 형태 학적 특성. (A) GM-CSF 및 IL-4 중에는 200ng / ㎖ 미성숙 moDCs를 생성하는 0 일, 4, 6에서 정제 CD14 + 단핵 세포에 첨가되고; 및 (B) 100 nm의 비타민 D3와 5 일에 10 나노 덱사메타손과 자극의 추가 단계는 tolerogenic moDCs를 생성합니다. 미성숙 moDCs 및 tolerogenic moDCs은 (C)를 ​​생성 moDCs를 성숙 (D) LPS-tolerogenic moDCs하기 위해 6 일에 1 μg의 / ml의 LPS로 자극한다.ttps : //www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig2large.jpg &quot;대상 =&quot;_ 빈 &quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig3.jpg" /> 그림 3 :. 유동 세포 계측법 tolerogenic의 표면 마커 HLA-DR, CD80, CD83, CD86, CD11, CD14, BDCA3과 LT3의 발현 수준 (녹색), LPS-tolerogenic (검정), 미숙 (빨간색)에 의해 표면 마커 특성, 성숙 (파란색) moDCs. 아이소 타입 컨트롤은 회색으로 표시됩니다. 각 세포 유형에 대한 개별 히스토그램 형광 강도와의 겹쳐 X 축에 대해 로그 Y 축 세포 수를 플롯한다. 모든 히스토그램 네 번의 독립된 실험의 대표 값이다. 10.4049 / jimmunol.1303316 (2015년 6월 1일) :이 수치는 J Immunol 194 (11), 5174-5186, 도이에서 수정되었습니다. 재현 및 저작권 허가를 게시. 저작권 2015 년 미국 협회면역학, Inc.는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig4.jpg" /> 그림 4 : moDCs의 기능 특성. (A) tolerogenic의 증가 숫자와 공동 배양에 의해 유도 된 CD4 + T 세포의 alloproliferation 주파수의 정량 (TOL, 녹색), LPS-tolerogenic (L-TOL, 검정), 미숙 (IMM 적색)과 성숙 ​​(MAT 청색) moDCs. 데이터는 네 개의 독립적 인 실험으로부터 풀링시켰다 던넷 다중 비교 사후 테스트와 양방향 ANOVA로 분석 하였다 성숙한 moDCs 대 모든 moDCs 사이 + SEM 통계의 차이를 의미한다. IFN-Γ (왼쪽 패널), IL-12p40 (가운데 패널) 및 IL-의 (B) 사이토 카인 분석 10 (오른쪽 창하나 tolerogenic (녹색), 미숙 (빨간색) 또는 성숙 (파란색) moDCs의 수를 증가 공 배양 CD4 + T 세포 사이의 alloreactions에서 상층 액에서 리터). 데이터는 여섯 독립적 인 실험에서 풀링 된되었다; ± SEM (C) CD4 + T 세포와 alloproliferation tolerogenic moDCs의 수가 증가의 존재 하에서 성숙한 moDCs와 공 배양에 의한 조절 T 세포의 확장을 의미한다. 왼쪽 Y 축, CD4 + T 세포 증식의 주파수. 오른쪽 Y 축, CD25 + Foxp3의 높은 증식 성 CD4 + T 세포 상에 게이팅 셀의 주파수. 데이터는 세 개의 독립적 인 실험으로부터 모으고; ± SEM을 던넷 다중 비교 사후 검사로 일방향 ANOVA로 분석 하였다 tolerogenic moDCs 부재 대 존재 간의 통계적 차이를 의미한다. (D) CD4 + T 세포 alloproliferation (왼쪽)와 CD25highFoxP3 + 세포의 주파수 (우) 공동에 의한 tolerogenic moDCs와 문화성숙한 moDCs의 수가 증가가 존재한다. 데이터는 세 개의 독립적 실험으로부터 모으고; 성숙한 moDCs의 부재가 던넷 다중 비교 사후 테스트와 양방향 ANOVA로 분석 하였다 대비 ± SEM에게 존재 사이의 통계적 차이를 의미한다. 10.4049 / jimmunol.1303316 (2015년 6월 1일) :이 수치는 J Immunol 194 (11), 5174-5186, 도이에서 수정되었습니다. 재현 및 면역학의 저작권 허가. 저작권 2015 년 미국 협회 게시, Inc.는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig5.jpg" /> 그림 5 : moDCs의 미토콘드리아 활동의 분석. (A) moDCs의 미토콘드리아 막 전위의 레벨 (적색 CMXRos)를 F로 수득낮은 세포 계측 분석. 네 개의 독립적 인 실험의 데이터를 모았다. ± SEM (B) 실시간 미토콘드리아 호흡의 도식 표현을 의미한다. 기초 호흡로부터 oligomycin의 첨가 (단지 V 억제) FCCP (최대 호흡 유도) 및 로테 논 / A 혼합물 antimycin (전자 전달계 [ETC] 억제) 후에 시작 OCR 분석. 미토콘드리아 SRC (최대 호흡에서 차감 최대 기초)는 OCR 곡선에서 파생됩니다. (C) tolerogenic의 미토콘드리아 OCR (pmol의 / 분) (녹색 TOL)의 대표 운동 연구, LPS-tolerogenic (L-TOL, 블랙) , 미숙 (IMM, 적색)과 성숙 ​​(MAT, 파란색) oligomycin의 순차적 인 추가 (OLIG) moDCs 및 기초 호흡, FCCP 및 로테 / A (ROT-AA)를 antimycin. (D) OCR 정량을 사용하여 moDCs ( E는) moDCs의 호흡 용량을 아끼지. 데이터 다섯 독립적 인 실험에서 풀링 하였다. ± SE 평균10.4049 / jimmunol.1303316 (2015년 6월 1일) : M.이 수치는 J Immunol 194 (11), 5174-5186, 도이에서 수정되었습니다. 재현 및 면역학의 저작권 허가. 저작권 2015 년 미국 협회 게시, Inc.는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig6.jpg" /> 그림 6 : moDCs의 대사 특성. (A) 실시간 당분의 도식 표현. ECAR 분석 (최대 셀 당분 복잡한 V 억제를 유발한다) oligomycin, 세포를 포도당 (당분 유도)에 첨가하여 당이없는 배지에서 배양하는 기저 ECAR에서 시작하고, 마지막으로 2- 데 옥시 D- 포도당(해당 작용 억제). 당분 비율 (기초 ECAR에 대한 감산 해당 작용 유도), 당분 해 능력 (기초의 ECAR에 대한 감산 최대 당분), 및 당분 예약은 (최대 당분이 당분 유도를 위해 감산)을 ECAR 곡선에서 파생됩니다. (B)의 대표 운동 연구 당분에 의존 tolerogenic의 ECAR (MPH / 분) (녹색 TOL), LPS-tolerogenic (블랙 L-TOL), 미숙 (빨간색 IMM), 그리고 성숙 (MAT, 파랑) 포도당 (Gluc)의 순차적 인 추가를 사용하여 moDCs, oligomycin (OLIG), 2-DG. (C) 바 기저 ECAR 수준 (D) 당분 속도 (E) 당분 용량 및 (F) moDCs의 당분 예약을 보여줍니다. 데이터는 세 개의 독립적 인 실험으로부터 모으고; 6 SEM을 의미한다. 통계적인 차이점은 Tukey의 다중 비교 사후 검사로 일방향 ANOVA로 분석 하였다. 10.4049 / jimmunol :이 수치는 J Immunol 194 (11), 5174-5186, 도이에서 수정되었습니다0.1303316 (2015년 6월 1일). 재현 및 면역학의 저작권 허가. 저작권 2015 년 미국 협회 게시, Inc.는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

미성숙 수지상 세포는 내성과 내성 사이의 균형을 조절하기 위해 내성 또는 성숙 수지상 세포로 선택적으로 분화될 수 있습니다. 이 연구는 미성숙 단핵구 유래 수지상 세포(moDC), 체외 내성 및 성숙한 moDC(대사 표현형이 다른 moDC)를 생성하는 방법을 제시합니다.

대사 표현형을 각기 다른 미성숙, 성숙 및 Tolerogenic 수지상 세포의 생성

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 실험 또는 백신 개발을 위해 단핵구에서 내성 및 성숙한 수지상 세포를 생성하는 것입니다. 이 방법은 수지상 세포의 발달, 성숙 및 항원 제시를 연구하기 위한 모델을 제공함으로써 면역학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 실험을 위해 체외에서 많은 수의 수지상 세포를 생성할 수 있다는 것입니다.세포분석기를 사용하여 살아있는 세포의 수를 계산하기 위해 미리 준비된 20마이크로리터의 말초 혈액 단핵세포 또는 PBMC 세포 현탁액을 20마이크로리터의 트리판 블루와 혼합하여 단핵구 농축을 시작합니다. 그런 다음 세포 현탁액을 원심분리합니다. 상층액을 완전히 흡인하고 세포 펠렛을 10 내지 7번째 세포에 대해 80마이크로리터의 염색 완충액 농도로 다시 현탁합니다.7번째 셀에 10개당 20마이크로리터의 CD-4 마이크로 비드를 추가합니다. 잘 섞어 섭씨 4도에서 15분 동안 세포를 배양합니다. 7번째 세포에 10개당 1ml의 염색 완충액으로 세포를 세척하고 세포를 원심분리합니다.상등액을 완전히 흡인하고 세포 펠렛을 다시 현탁시킵니다. 최대 2배의 10에서 8번째 총 셀에 대한 중간 컬럼을 얻고 컬럼을 분리기의 자기장에 배치합니다. 다음으로, 500마이크로리터의 염색 완충액으로 컬럼을 헹굽니다.세포 현탁액을 컬럼에 피펫으로 주입하고 컬럼을 통과하는 라벨링되지 않은 세포를 15ml 튜브에 수집합니다. 컬럼 아래에 새 15ml 튜브를 교체하고 500마이크로리터의 염색 완충액으로 컬럼을 세 번 세척합니다. 세척 사이에 새 염색 완충액을 추가하기 전에 컬럼 저장소가 비어 있는지 확인하십시오.분리기에서 컬럼을 제거하고 새 15ml 튜브에 놓습니다. 1ml의 염색 완충액을 컬럼에 피펫팅하고, 플런저를 컬럼 안으로 단단히 밀어 자기 라벨링된 셀을 즉시 씻어냅니다. 그런 다음 새 컬럼에서 illuded fraction을 사용하여 자기 분리 단계를 반복하여 CD14 plus 세포의 순도를 높입니다.CD14 플러스 단핵구 4세트를 0점 3에서 0점 5배, 10에서 6분의 1 농도로 6개의 웰 플레이트에 IL-4의 세포 배양 배지를 파종합니다. 섭씨 37도의 조직 배양 인큐베이터에서 5%의 CO2로 세포를 배양합니다. 4일차에 배양액에서 850마이크로리터의 배지를 제거하고 원심분리기를 합니다.상등액을 흡입하고 펠릿을 1ml의 세포 배양 배지에 다시 현탁시킵니다. 세포 혼합물을 배양액에 다시 추가합니다. 5일째에 배지 1리터당 1마이크로리터의 비타민 D3 스톡과 1마이크로리터의 덱사메타존 스톡을 2세트에서 2세트로 첨가하여 내성 moDC를 생성합니다.6일차에 GMCSF 밀리리터당 200나노그램과 IL-4 밀리리터당 200나노그램을 모든 세트에 추가합니다. GMCSF 및 IL-4로만 처리된 세트 중 하나에 LPS 밀리리터당 1마이크로그램을 추가하여 성숙한 moDC를 생성합니다. LPS 밀리리터당 1마이크로그램을 톨러겐 moDC 한 세트에 추가하여 LPS 톨러겐 moDC를 생성합니다.마지막으로, 7일차에 PVS EDTA로 배양 접시를 세척하여 다양한 유형의 moDC를 수확합니다. 미성숙 moDC는 0일, 4일, 6일에 정제된 CD-14와 단핵구에 GMCSF 및 IL-4를 첨가하여 생성되었습니다. GMCF 및 IL-4 이후 비타민 D3와 덱사메타존을 첨가하면 미성숙 moDC가 내성 moDC로 분화되었습니다.LPS는 미성숙 moDC의 성숙을 성숙 moDC로 유도하기 위해 추가되었습니다. 그리고 성숙에 대한 저항성을 확인하기 위해 LPS로 내성 moDC를 자극했습니다. DC 표면 마커를 분석한 결과, 성숙한 moDC는 가장 높은 수준의 성숙 마커인 HLA-DR, CD80, CD83 및 CD86을 발현하는 것으로 나타났습니다.반대로, 내성 moDC는 미성숙 및 성숙 moDC에 비해 CD14, BDCA3 및 면역글로불린 유사 전사체의 발현이 증가한 것으로 나타났습니다. mytocondrial 활성을 반영하기 위해 빨간색 CMXRos를 사용하여 tolerogenic moDCs는 다른 moDC 분화 아형에 비해 더 높은 mytocondrial 활성을 갖는 것으로 관찰되었습니다. 개발 후 이 기술은 면역학 분야의 연구자들이 백신 및 면역 요법 개발을 위해 수지상 세포의 대사 기능을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 동영상은 마우스 골수에서 골수양 돌기 세포를 차별에 대한 절차를 설명합니다. 마우스 경골과 대퇴골, 그리고 골수 처리의 분리가 증명하고 있습니다. 세포 표현형 및 CPG를 사용하여 IL - 12 생산 다음과 성숙을 묘사한 분화 전후의 세포 형태를 보여주는 사진, 그림이 표시됩니다.

골수 엽 성의 전구 물질에서 골수양 돌기 세포의 문화

돌기 세포에 의해 이차 림프​​ 장기의 항원 프레 젠 테이션은 T 세포 적응 면역 반응을 중재의 개시를 위해 중요합니다. 여기서 우리는 골수의 문화 파생 murine 돌기 세포, 활성화 및 2 광자 이미징에 대한 라벨을 보여줍니다.

골수의 생성은 2 광자 영상에서 사용하기 위해 Murine 돌기 세포를 유래

이 비디오는 인간 단핵구에서 미성숙, 성숙 및 내성 수지상 세포(DC)의 생성을 보여줍니다. 성장 인자와 사이토카인을 가진 단핵구의 배양은 미성숙 DC의 생산으로 이어집니다. 면역 조절 분자에 대한 반응으로 미성숙 DC는 내성 및 성숙 DC로 분화합니다.

단핵구에서 미성숙, 성숙 및 톨러겐 수지상 세포 생성

이 동영상은 면역조절 약리제를 사용하여 수지상 세포(DC)를 허용 DC(TolDC)로 변환하는 방법을 보여줍니다. 이 변환은 CD4+ T 세포에 대한 면역억제 효과를 통해 TolDC 기능을 평가하여 확인됩니다.

수지상 세포와 CD4+ T 세포 사이의 상호 작용에 대한 면역조절 약리학적 제제의 효과

종양 면역 요법에 사용하기 위해자가 수지상 세포의 큰 숫자 (DCS)를 생성하기위한 가장 일반적으로 사용되는 방법을 설명합니다. 방법은 단핵 세포에서 수지상 세포를 분화하는 IL-4, GM-CSF를 사용합니다. 그들은 환자에게 다시 주입하기 전에 미성숙 수지상 세포는 성숙하고 항원과 함께로드를 자극한다.

면역 요법에 대한 종양 항원로드 성숙 수지상 세포의 준비

과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF)로 배양된 골수 세포는 대식세포와 수지상 세포(DC)를 포함하는 이종 배양을 생성합니다. 이 방법은 MHCII 및 히알루로난(HA) 결합을 사용하여 GM-CSF 배양의 DC와 대식세포를 구별하는 방법을 강조합니다. 이 문화권의 대식세포는 폐포 대식세포와 많은 유사점을 가지고 있습니다.

마우스 골수에서 생성 및 GM-CSF의 식별 파생 폐포와 같은 대 식세포와 수지상 세포

여기 우리는 식별 하 고 격리 GM-CSF 골수성 세포 고속 셀 정렬 사용 하 여 구동의 다 수에 대 한 메서드를 제공 합니다. Ly6C 및 CD115 식에 따라 5 가지 인구 (일반적인 골수성 창시자, granulocyte/macrophage 창시자, monocytes, monocyte 파생 된 대 식 세포 및 monocyte 파생 된 DCs)를 확인할 수 있습니다.

골수성 창시자 및 정렬 전략 소설 셀을 사용 하 여 Murine 골에서 수지상 세포 선구자의 큰 숫자의 생성

여기, 선물이 개발 및 특성 tolerogenic 수지상 세포 (TolDCs) 하 고 그들의 immunotherapeutic 유틸리티를 평가 하는 프로토콜.

개발 및 Murine Tolerogenic 수지상 세포의 기능적 특성

여기서 우리는 체외 DC 분화에 대한 안정적인 녹다운 세포주를 얻기 위해 shRNA의 렌즈바이러스 트랜스듀션을 사용하여 수지상 세포(DC)의 개발에 관여하는 잠재적 전사 인자를 선별하기 위한 프로토콜을 제공합니다.

대장포에이성 줄기및 전구세포주에서 짧은 헤어핀 RNA 중재 유전자 녹다운에 의한 수지상 세포 개발 연구

시알리다아제 처리를 사용하여 분리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 탈시알릴화된 인간 단핵구 유래 수지상 세포(mo-DC)를 생성하는 독특하고 포괄적인 프로토콜이 제시됩니다. 또한, mo-DC의 표현형 및 기능적 특성을 평가하고, 시알리다아제 처리가 mo-DC의 성숙 수준을 어떻게 향상시키는지를 평가하는 방법이 기재되어 있다.

Generation of Monocyte-Derived Dendritic Cells with Differenting Sialylated Phenotypes (시알릴화 표현형이 다른 단핵구 유래 수지상 세포 생성)

in vitro 에서 naive monocyte 유래 수지상 세포에서 내성 수지상 세포를 생성하는 약리학적 제제의 능력을 평가하고 자가 조절 T 세포 생성을 통해 그 효능을 검증하는 절차를 설명합니다.

인간 CD14+ 단핵구에서 톨러겐 수지상 세포 생성을 위한 면역조절제를 테스트하는 간단하고 효율적인 방법

학습하세요 단핵구에서 내성 및 성숙 수지상 세포를 분화시키는 방법을. 이 기술은 면역학 연구와 백신 개발에 활용할 수 있는 대사 프로파일 분석 모델을 제공합니다.

대사 표현형을 각기 다른 미성숙, 성숙 및 Tolerogenic 수지상 세포의 생성

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