Name: 인간 간 줄기 세포를 이용한 인간형 마우스 간 세대 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 44 s
Description: 배우세요 인간 간 줄기 세포를 이용한 인간형 마우스 간 세대 방법으로, TRECK/SCID 마우스에 디프테리아 독소 처리 후 비장 주사로 줄기 세포를 이식하여 기능성 인간 간을 재구성하는 기술입니다.

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쥐를 제공해 주신 Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science의 Mammalian Genetics Project에 감사드립니다. 또한 일본 Sekisui Medical Company Ltd.의 ADME(Absorption, Distribution, Metabolism, Excretion) & Toxicology Research Institute의 S. Aoyama와 Y. Adachi, 그리고 LC-MS/MS 분석에 도움을 준 K. Kozakai와 Y. Yamada에게 감사드립니다. 이 작업은 일본 문부과학성(MEXT)이 Y-W.Z.(18591421, 20591531, 23591872)에 제공하는 보조금의 일부 지원을 받았습니다. 고위급 인재 소개를 위한 Jiangsu 혁신 및 기업가 프로젝트와 Jiangsu 과학 기술 계획 프로젝트(BE2015669); 일본 과학기술청(Japan Science and Technology Agency)의 혁신적인 연구 및 개발의 전략적 촉진을 위한 H.T.(S-innovation, 62890004)에 대한 보조금으로.

모든 동물 실험 절차는 요코하마 시립 대학의 동물 보호 지침에 따라 수행 하였다. 급성 간 손상 마우스 모델 1 세대 <ol><li> 1 ㎎ / ㎖ DT 원액을 1 mg을 디프테리아 독소 (DT) 내지 (0.85 % NaCl 용액 100 ㎖에 0.6 g의 페놀) phenolized 0.85 % NaCl 용액 1 ㎖를 추가한다. 주 : 1 밀리그램의 농도 DT는 / ㎖ 3 ° C ~ 8 ° C에서 약 2 년 동안 저장 될 수있다. </li><li> 직렬 phenolized 0.85 % NaCl 용액에서 0.3 μg의 / ㎖ DT에 1 ㎎ / ㎖ DT 원액을 희석 작업 솔루션으로 0.3 μg의 / ㎖의 DT 용액의 분취 량을 준비합니다. 참고 :이 작업 솔루션은 새로 제조해야한다. </li><li> 치사 용량 (~ 50 % 치사)를 사용하여 실험을 수행, 8 주령 생쥐에게 DT의 1.5 μg의 / kg 투여 량을 관리. <ol><li> 지느러미 드러 누움에 마우스를 잡고 DT의 복강 내 주사를 수행하고 needl를 삽입무릎의 굽힘 아래 전자는 왼쪽이나 정중선의 오른쪽. 방광의 침투를 방지하기 위해 중간 선을 피하십시오. 각도 몸에 바늘이 약 45 °. </li><li> 인슐린 주사기를 이용하여 마우스의 체중 20g 당 0.3 μg의 새로 제조 / ㎖의 100 ㎕ DT와 마우스를 주입. 예를 들어, 18 g의 마우스는 0.3 μg의 / ㎖의 DT 솔루션의 9​​0 μl를 받아야합니다. </li></ol></li><li> 48 시간 후 DT 주입에서는, 혈관을 팽창하기 위해 약 10 분 동안 37 ℃의 수욕 마우스 꼬리 제한 수단에 마우스를 위치시키고 가온하여 꼬리 정맥으로부터 혈액을 수집한다. 그런 다음, 날카로운 메스 블레이드와 함께 끝에서 꼬리 2cm에 1 mm 닉을하고 마이크로 캐 필러 튜브에 혈액을 수집합니다. <ol><li> 5 분 1,500 XG에서 혈액을 포함하는 마이크로 캐 필러 튜브를 원심 분리기와 뜨는 및 세포 펠렛을 분리하여 혈청을 수집합니다. </li></ol></li><li> 1시 20분 희석 마우스 혈청의 피펫 50 μL GOT / AST- 상PIII는 슬라이드. 제조사의 프로토콜에 따라 다목적 건조 화학 자동 분석기를 사용하여 650 nm에서의 반응 생성물 (청색 색소)의 흡광도를 측정한다. 참고 : 아스 파르 테이트 아미노 전이 효소 (AST)의 판독은 / 글루타민산 옥 살로 트랜스 아미나 제 (GOT) 활동이 자동으로 표시됩니다. 16,000 IU / L 급성 간 손상을 앓고있는 것으로 간주 하였다 - 이일은 DT가 주입, 쥐의 약 60 % 12,000 사이 AST 값을 나타내 게시합니다. 이러한 마우스는 새로운 케이지 전달 및 세포 이식을 사용 하였다. </li></ol> 인간의 간 줄기 세포의 2. 준비 <ol><li> CDCP1 + CD90 + CD66- 아군를 얻을 CDCP1, CD90 및 CD66의 세포 항원을 이용한 셀 소터 인간 일차 태아 간세포에서 인간 간 줄기 세포를 분리 한 다음, 콜라겐 IV 코팅 된 배양 접시에 절연 세포군 시드, 앞서 15 일 보도했다. 배아의 인간의 기본 태아 간 세포를 사용하여주 14과 18 사이의 나이. </li><li> 배양액을 흡인 100-mm 배양 접시에 90 % 합류 10 ml의 PBS로 세포를 세척 한 후 PBS를 제거 - 80 % 배양 된 간 줄기 세포를 수집한다. 37 ° C에서 5 분 동안 2 ml의 0.05 % 트립신 / EDTA 용액으로 세포를 Trypsinize. 주 : 세포 분화 쥐 그들의 증식 능력에 영향을 미칠 수 있기 때문에, 90 % 이상의 세포가 합류 세포 이식에 적합하지 않다. </li><li> 현미경 하에서 세포의 분산액의 상태를 모니터한다. 세포가 떠하거나 자유롭게 유동 할 때 나타나는 10 % FBS를 함유하는 DMEM / F12 8 ml를 첨가하여 효소 소화를 멈춘다. </li><li> 천천히 10 ㎖의 혈청 피펫을 사용하여 세포를 정지하고, 15 mL의 원뿔형 튜브에 세포를 옮긴다. 100 XG에 5 분, 4 ° C를위한 세포를 원심 분리기. </li><li> 조심스럽게 10 % FBS를 함유하는 10 ㎖의 DMEM / F12에서 세포 펠렛을 재현 탁하고 현미경 카운팅 챔버를 이용하여 세포 수를 결정한다. </li><li>각 마우스 PBS 씩 50 μL 당 1.0 × 10 6 세포로 세포를 나누어 이식까지 얼음에 저장합니다. </li></ol> 인간의 간 줄기 세포의 3 Intrasplenic 이식 <ol><li> 37 ° C 전기 가열 패드에 깨끗한 케이지를 놓습니다. </li><li> 노즐 아래에 배치하여 - (분당 산소의 2 L에서 1.5 % (부피 / 부피) 1) 마우스 사용 이소 플루 란 흡입 마취. 또한, 이소 플루 란 적신 거즈를 포함하는 튜브를 사용합니다. <ol><li> 마우스를 가볍게 뒤쪽 발바닥을 곤란하게하여 마취되어 있는지 확인합니다. 무릎 경련이 유발되는 경우, 다시 실에서 마우스를 놓습니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 수의사 연고를 사용합니다. </li></ol></li><li> 전기 면도기를 사용하여 수술 부위를 면도하고 (부피 / 부피) 에탄올 및 포비돈 요오드 소독 할을 70 %를 적용합니다. 그런 다음 절개에 이어 바로 리브의 늑골 테두리 아래 왼쪽 측면에서 1 cm의 피부 절개를 만들복벽뿐만 아니라 복막. </li><li> 조심스럽게 비장 노출됩니다. 직접 각 마우스의 비장에 50 ㎕의 PBS에 1.0 × 106 인간 간 줄기 세포를 주입하기 위해 32-G / 2 인치 바늘 100 μL 미세 주입 주사기를 사용한다. 주입을위한 5 ° 각도로 바늘을 기울입니다. <ol><li> 주사의 깊이가 비장의 절반 이하 두께 있는지 확인하십시오. 바늘을 한쪽 끝 (헤드)에서 비장을 입력하고, 다른 단부 (꼬리)의 셀을 증착한다. </li></ol></li><li> 주입 따라 셀의 누출을 방지하기 위해, 2 분간 부드럽게 손가락을 이용하여 압력을인가하고 바늘을 제거. </li><li> 다시 마우스 본체에 비장을 놓고 근육과 피부를위한 정상 주행 봉합와 공동을 닫습니다. </li><li> 즉시 이식 다음 37 ° C 미리 예열 케이지에 쥐를 전송합니다. 마우스를 보장하기는 편안하게 호흡 케이지에 옆에 마우스를 배치 할 수있다케이지 침구 및 수술 부위 사이의 접촉을 무효화. </li><li> 마취가 봉합 폐쇄 유지하기 위해 오프 착용하고 마우스 조건 수술 전으로 돌아갈 때까지 마우스를 모니터링합니다. </li><li> 마우스를 확인하는 것은 정상적인 마시는 물과 음식이 제공됩니다. 1 시간 후, 동물 센터의 마우스 방에 케이지를 반환하고 매일 쥐를 모니터링 할 수 있습니다. </li></ol> 4. 감지 이식 인간의 간 마우스 간에서 세포 유래 간세포 줄기 주 : 다음 절차는 자궁 경부 전위 다음 케타민과 자일 라진의 과다 복용을 사용하여 모든 동물을 안락사. <ol><li> 4시 - 육주, 이식을 게시 쥐를 안락사 동시에 커티스 절단 및 밴드 수술 가위를 사용하여 복강을 엽니 다. </li><li> , 복막 위의 결합 조직을 해부 확산기로 가위를 사용하고 복막을 열 수있는 원격 교육 알바 함께 복막을 잘라공동. </li><li> , 집게로 흉골을 들어 올려 다이어프램에 구멍 및 자궁 거들을 통해 흉골의 각면을 잘라. </li><li> 간 흉부 측의 대정 맥을 절단하고, 앞쪽 방향으로 간을 통해 식도를 당깁니다. 간을 제거하기 위하여 진동판을 제거한다. 참고 : 위의 팁은 아래의 흉부 장기의 손상을 방지하기 위해 위쪽으로 지적 유지하기 위해주의해야합니다. 흉선은 때때로 흉골의 지느러미 측면에 집착하는 경향이있다이 조심스럽게 피해야한다. </li><li> 핸들로 진동판을 사용하여, 복강 내에서 간 당기는 시작한다. 내부 대정맥은 장소에 간을 개최합니다. 내부 대정 맥을 잘라; 중간에 오른쪽 부신을 해방 않도록주의하십시오. 참고 : 마우스가 중간 엽으로 구성된 네 잎 모양 간, 왼쪽 엽, 우엽과 미상 로브 있습니다. 담낭은 작은 분기에 현탁중간 엽. </li><li> 접합에서 서로의 로브를 분리하고 제조 업체의 프로토콜에 따라 최적의 절삭 온도 OCT () 화합물을 포함. 그라 이오 스탯의 금속 격자의 간 조직을 포함 OCT를 고정. </li><li> -18 ° C에서 그라 이오 스탯을 사용하여 5 μm의 두께 샘플 부분을 잘라 RT 현미경 슬라이드에 그들을 탑재합니다. -80 ° C에서 주식을 저장합니다. 헤 마톡 실린 및 에오신 (H &amp; E)과 이전에보고 절차 (16)에 따라 면역 형광 염색법에 대한 슬라이드를 준비합니다. </li></ol> 5. 인간 알부민 분비의 탐지 및 키메라 비율​​의 계산 <ol><li> 인간 간 재구성을 측정하기 위해, 혈청 및 제조자의 지시에 따라 인간 알부민 ELISA 키트를 사용하여 인간 알부민 ELISA 수행한다. </li><li> 전체 - 인간화 간에서 실시간으로 발현의 PCR 분석을 인간형 키메라 간 비율을 계산한다. 상대 예를 결정인간의 마우스 크로스 굴지 인간 고유의 굴지의 Pression의 수준 비율 (비율 1) 인간 - 마우스 크로스 굴지에 마우스 특정 굴지의 비율 (비율 2). 키메라 비율​​은 비율이 1 /로 (비율 1 + 비율 2)를 계산한다. </li></ol>

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저자는 공개할 경쟁적인 재정적 이해관계가 없습니다.

최근의 연구는 마우스 간 성인 간세포 증식 및 간 줄기 세포 (17)를 포함하여 인간 간세포 증식을 할 수 있음을 보여 주었다. 이 다시 채워 간 약물 대사 시험 및 신약 개발 18 전임상 실험 모델로 사용되고있다; 뿐만 아니라, 그들은 세포 성숙과 분화 (19)에 대한 생체 내 환경을 제공하고 있습니다. 본 연구의 주된 목적은 약물 대사 활동의 획득을 위해, 인간 미성숙 간세포 증식, 성숙 및 분화를 허용하는 신규 간 질환의 마우스 모델을 생성 하였다. intrasplenic 이식의 과정은 광범위하게 연구되고있다. 쥐의 비장 세포를 이식은 평균 수명에 걸쳐 생존. intrasplenic 이식 프로토콜은 특정 연구 질문 조사에 매우 유용한 것으로 입증되었습니다;많은 실험실은 전 세계적으로 인해 개선 된 생쥐의 생존과 간 재생의 간 세포 이식에 대한 높은 재현성 및 신뢰성 모델이 프로토콜을 사용하려고했습...

마우스는 인간을 대상으로 한 생물의학 연구가 제한되어 있기 때문에 제약 테스트에 일반적으로 사용됩니다1; 그러나 이러한 모델은 인간에서 관찰된 효과를 부정확하게 시뮬레이션할 수 있기 때문에 항상 유용한 것은 아닙니다. 현재 의료용으로 사용되는 대부분의 약물은 주로 간에서 대사됩니다. 그러나 동일한 약물이 종 간 차이로 인해 마우스와 인간의 간에서 다른 대사 산물로 대사될 수 있습니다. 따라서 개발 과정에서 잠재적인 약물이 임상 적용에 위험을 초래하는지 여부를 판단하기 어려운 경우가 많습니다2,3. 
이 문제를 해결하기 위해, "인간화된" 쥐 간은 쥐4-6 내에서 인간 간 세포를 성장시킴으로써 개발되었으며, 이 모델은 인간 간에서 관찰된 것과 유사한 약물 반응을 나타냅니다. 현재 인간화 간 생성에 사용되는 주요 마우스 모델에는 우로플라스미노겐 활성제(uPA+/+) 마우스4,7, 푸마릴아세토아세테이트 가수분해효소(Fah−/-)마우스6 및 최근에 보고된 티미딘 키나아제(TK-NOG) 마우스가 포함됩니다. 
그러나 이전 보고서에 따르면 이식된 인간 미성숙 세포 또는 줄기 세포는 Alb-uPA tg(+/−)Rag2(−/−) 마우스 간8-10에서 성인 인간 간세포보다 경쟁력이 떨어집니다. 더욱이, Fah−/− 마우스는 분화된 간세포에만 성장 이점을 제공하고 미성숙 간 전구 세포에는 제공하지 않습니다11. 실험실에서 인간 간 줄기 세포(HpSCs)를 TK-NOG 마우스에 이식하는 것은 성공적이지 못했습니다. 따라서 인간 미성숙 간 세포의 효율적인 생착을 위한 유용한 마우스 모델은 현재 존재하지 않습니다. 
따라서, 우리는 인간의 미성숙한 간세포로 효율적으로 재채울 수 있는 새로운 Alb-TRECK/SCID 마우스 모델을 개발했습니다. 이 형질전환 마우스 모델은 간 세포 특이적 알부민 프로모터의 제어 하에 인간 헤파린 결합 EGF 유사 성장 인자(HB-EGF) 수용체를 발현합니다. 디프테리아 독소(diphtheria toxin, DT)를 투여한 후, 이 마우스는 간세포의 조건부 절제로 인해 전격성 간염이 발생하여 기증자 세포 거주 및 증식이 가능해진다12. 이전 연구에서 마우스 간세포가 Alb-TRECK/SCID 마우스에 성공적으로 이식되었지만(13,14), Alb-TRECK/SCID 마우스를 사용한 인간화 간 생성은 아직 보고되지 않았습니다. 
이 연구에서는 HpSC의 이식을 통해 Alb-TRECK/SCID 마우스에서 인간화 간을 생성했습니다. 이 인간화된 간은 보편적인 줄기세포 분화를 위한 생체 내 환경을 제공하고 인간 약물 대사 패턴 및 약물-약물 상호 작용을 예측할 수 있는 능력을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>인간 알부민</td><td>시그마</td><td>A6684</td><td>마우스</td></tr><tr><td>인간 CK19</td><td>Dako</td><td>M088801</td><td>마우스</td></tr><tr><td>인간 핵</td><td>Millipore</td><td>MAB1281</td><td>마우스</td></tr><tr><td>인간 CK8/18</td><td>프로젠</td><td>GP11</td><td>기니피그</td></tr><tr><td>CDCP1</td><td>Biolegend</td><td>324006</td><td>마우스</td></tr><tr><td>CD90</td><td>BD</td><td>559869</td><td>마우스</td></tr><tr><td>CD66</td><td>BD</td><td>551479</td><td>마우스</td></tr><tr><td>GOT/AST-PIII</td><td>후지필름</td><td>14A2X10004000009</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Gibco</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Biowest</td><td>S1520</td><td></td></tr><tr><td>0.05% Trypsin-EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>디프테리아 독소</td><td>시그마</td><td>D0564-1MG</td><td></td></tr><tr><td>인간 알부민 ELISA 키트</td><td>Bethyl Laboratories</td><td>E88-129</td><td></td></tr><tr><td>주사기 (1 ml)</td><td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>32G 1/2" 바늘</td><td>TSK</td><td>PRE-32013</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.Compound(118 ml)</td><td>Sakura Finetek Japan</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>MoFlo 고속 세포 분류기</td><td>Beckman Coulter</td><td>B25982</td><td></td></tr><tr><td>DRI-CHEM 7000</td><td>Fujifilm</td><td>14B2X10002000046</td><td></td></tr></tbody></table>

인간 간 줄기 세포를 이용한 인간형 마우스 간 세대

Generation of a Humanized Mouse Liver Using Human Hepatic Stem Cells

인간 간세포 이식을 통해 확립된 인간화된 간을 가진 키메라 마우스를 포함하는 새로운 동물 모델이 개발되었습니다. 간에 기능적인 인간 간세포가 다시 채워진 이 마우스는 인간 간세포 생물학, 약물 대사 및 기타 전임상 응용을 조사하는 데 유용한 도구 역할을 할 수 있습니다. 인간 간세포를 마우스에 성공적으로 이식하는 데 필요한 핵심 요소 중 하나는 인간 세포와의 경쟁을 방지하고 인간 기증자 세포 확장 및 분화를 촉진하기 위한 적절한 공간과 미세환경을 제공하기 위해 내인성 간세포를 제거하는 것입니다. 현재까지 푸마릴아세토아세테이트 가수분해효소(Fah) 및 우로플라스미노겐 활성제(uPA) 마우스를 사용하는 두 가지 주요 간 손상 마우스 모델이 확립되었습니다. 그러나 Fah 마우스는 주로 성숙한 간세포와 함께 사용되며 uPA 모델의 적용은 번식 감소로 인해 제한됩니다. 이러한 한계를 극복하기 위해 Alb-toxin receptor mediated cell knockout(TRECK)/SCID 마우스를 사용하여 미성숙한 인간 간세포의 생체 내 분화 및 인간화 간 생성을 수행했습니다. 인간 간 줄기 세포(Human hepatic stem cell, HpSCs)는 디프테리아 독소(DT) 치료 후 치명적인 전격성 간 부전이 발생한 Alb-TRECK/SCID 마우스의 간을 성공적으로 재증식했습니다. Alb-TRECK/SCID 마우스의 이 인간화 간 모델은 약물 대사 및 약물-약물 상호 작용과 관련된 연구에서 기능적으로 응용될 것이며 다른 생체 내 및 체외 연구를 촉진할 것입니다.

장백의-트렉 / SCID 쥐 간세포는 알부민 프로모터의 조절 하에서 인간 DT 수용체 HB-EGF 유전자를 발현하고 DT 정부 (12) 아래의 세포 독성 효과를 나타낸다. 간 손상에 DT 치료의 효과를 평가하기 위해, 1.5 μg의 / kg의 DT의 용량은 8 주령 장백의 - 트렉 / SCID 마우스에 주입하고 간 48 시간 포스트 DT 관리의 병리학 적 변화는 조직 학적으로 평가 하였다. (DT하지 처리) 대조군 마우스와 비교하여 처리 마우스 DT 증가 혈청 AST 활성이 정체에 대한 수정을 도시하는 무질서 간 구조를 나타내었다. 또한, DT-처리 생쥐의 간세포 함께 어두운 핵 (아마 세포 사멸 간세포) 여러 깊이 스테인드 acidophilic 세포질 흠도 있었다; 다른 간세포는 그림 1 (보존 또는 거의 또는 전혀 포털 정맥 염증 어두운 핵을 가진 공포 형성 세포질을 전시 등장 </강한&gt;). 이러한 결과는 장백...

여기에서는 미성숙 및 확장 가능한 인간 간 줄기 세포의 이식 후 Alb-toxin receptor mediated cell knockout(TRECK)/SCID 마우스에서 생성된 새로운 인간화 마우스 간 모델을 제시합니다.

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in ...

본 외과적 줄기세포 이식 절차의 전반적인 목표는 약물 대사 획득을 위한 세포 증식, 성숙 및 분화가 가능한 인간 미성숙 간 줄기 전구세포를 사용하여 인간의 간 기능을 갖춘 새로운 키메라 마우스 모델을 생성하는 것입니다. 이 방법은 인간 공여 간 줄기세포 전구체의 증식, 분화 및 손상된 마우스 수용체 간의 재구성을 지원하는 미세 환경을 조성하는 강력한 도구를 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 성숙 및 증식된 세포를 사용할 수 있으며 간이 거의 완전히 재세포화된다는 점입니다.먼저, 1 mg의 DT에 페놀화된 0.85% sodium chloride 용액 1 mL를 첨가하여 1 mg/mL 농도의 디프테리아 독소(DT) 스톡 용액을 제조합니다. Albtrek SCID 마우스를 등쪽으로 눕혀 고정한 뒤, 정중선 좌측 또는 우측의 무릎 굽힘 부위 아래쪽으로 바늘을 체벽과 45도 각도가 되도록 삽입하여 DT를 복강 내 투여합니다. 인슐린 주사기를 사용하여, 20 g 마우스당 갓 제조한 0.3 µg/mL 농도의 DT를 100 µL 주입합니다. DT 주입 48시간 후, 마우스를 보정기에 넣고 30 °C 온수조에서 꼬리를 약 10분 동안 가온하여 혈관을 확장시킵니다.그다음 꼬리 끝에서 2 cm 떨어진 지점에서 날카로운 메스 날을 사용하여 꼬리에 1 mm 크기의 작은 절개창을 내고, 모세관을 사용하여 혈액을 채취합니다. 혈액이 담긴 모세관을 1500 ×g에서 5분 동안 원심분리한 후, 세포 펠렛으로부터 상층액을 분리하여 혈청을 수집합니다. 1:20으로 희석한 혈청 50 µL를 GOT ASTP3 슬라이드에 피펫팅합니다.그런 다음 제조사의 프로토콜에 따라 다목적 자동 건식 화학 분석기를 사용하여 650 nanometers에서 반응 생성물의 흡광도를 측정합니다. 셀 소터(cell sorter)를 사용하여 인간 일차 태아 간 세포로부터 CDCP1, CD90 및 CD66 세포 항원을 가진 인간 간 줄기세포를 분리하여 CDCP1 양성, CD90 양성, CD66 음성 하위 집단을 얻습니다. 해당 세포를 collagen four 코팅 배양 접시에 분주하고 37 degrees Celsius에서 배양합니다.세포의 밀도가 80에서 90%의 confluence에 도달하면, PBS를 사용하여 세포를 한 번 세척하십시오. 그 다음 0.05% Trypsin EDTA를 첨가하고 상온에서 배양하십시오. 현미경 관찰 시 세포가 떠오르거나 자유롭게 흐르는 것처럼

generation-of-a-humanized-mouse-liver-using-human-hepatic-stem-cells

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연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 문서는 인간의 배아 줄기 세포 집단에서 인간 간장 endoderm의 생성에 초점을 맞출 것이다.

인간 배아 줄기 세포 인구에서 Hepatocyte 같은 전지의 강력한 생성

인간화 마우스를 사용하여 종양 특정 T 세포의 생성 및 특성이 여기에 설명되어 있습니다. 인간 thymic 조직 및 유전자 변형 인간의 조혈 줄기 세포는 면역 저하 된 쥐에 이식되어 있습니다. 안티 종양 면역 반응의 생체 시험에서 허용하는 엔지니어링 인간의 면역 시스템의 reconstitution에이 발생합니다.

줄기 세포 기반 유전자 치료 종양 모델로 BLT 인간화 마우스를 사용하여

이 비디오는 인간 면역 체계와 간 세포를 가진 이중 인간화 마우스 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이는 인간 간 세포와 조혈 줄기 및 전구 세포를 비장 내 주사를 통해 형질전환 면역 결핍 마우스에 이식하여 간 세포의 생착과 인간 면역 세포의 발달을 유도하는 것을 포함합니다.

인간 간 세포와 면역 세포를 이용한 인간화 마우스 모델 개발

면역 결핍 쥐에서 인간 종양 이종 이식은 암 생물학을 연구하는 중요한 도구입니다. 인간의 간세포 암 세포 또는 종양 파편에서 피하 및 간내 이종 이식을 생성하는 특정 프로토콜이 설명되어 있습니다. 받는 사람 생쥐의 부분 간 절제술에 의해 유도 된 간 재생은 간내 생착을 촉진하기위한 전략으로 제시된다.

면역 결핍 마우스의 피하 및 간내 인간의 간세포 암 이종 이식의 생성

이 프로토콜은 HIV 감염에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역을 가진 인간화 된 골수/간/흉선 마우스 모델을 구성하는 방법을 설명합니다.

인간화 된 마우스 모델에 HIV 감염에 대 한 줄기 세포를 기반으로 설계된 내성

여기, 우리 현재 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 hepatocytes를 사용 하 여 가족성 콜레스테롤 혈 증의 인간 간 공상 마우스 모델을 생성 하는 프로토콜. 콜레스테롤 혈 증에 대 한 새로운 치료법을 테스트 하기 위한 유용한 모델입니다.

가족성 콜레스테롤 혈 증 인간의 간 공상 마우스 모델을 사용 하 여 유도 만능 줄기 세포 유래 Hepatocytes

이 프로토콜은 인간 면역 계통 및 간 세포 둘 다로 인간화한 마우스를 설치하는 믿을 수 있는 방법을 제공합니다. 인간 간세포 및 CD34+ 조혈 줄기 세포의 경내 주사를 통해 달성된 이중 재구성 면역 결핍 마우스는 인간 면역 결핍 바이러스-1 감염에 취약하고 관찰된 바와 같이 간 손상을 재현합니다. HIV에 감염된 환자.

HIV 관련 간 병인을 위한 이중 인간화 TK-NOG 마우스 모델 구축

정형외과 성 인간 간 전이성 포도막 흑색종 이종이식 마우스 모델은 배양된 인간 포도정 흑색종 세포주를 가진 환자 유래 종양 덩어리 및 바늘 주입 기술을 이용한 외과 정형외과 이식 기술을 사용하여 만들어졌습니다.

면역결핍 마우스에서 간 직교 인간 편도 흑색종 Xenograft 플랫폼의 생성

이 문서의 목표는 만능 줄기 세포로부터 인간 간 선구분화를 유도하는 표준화된 접근법을 제공하는 것입니다. 즉시 사용 가능한 미디어 제형이 있는 이 절차의 개발은 사용자에게 생체 의학 연구 및 번역을 위한 인간 간 세포를 생성하는 촉진 시스템을 제공합니다.

정의된 분화 시스템을 사용하여 만능 줄기 세포에서 간 선조 사양

여기에서 우리는 정상 상태 말초 혈액에서 분리된 단핵 세포를 사용하여 인간 자가 간 스페로이드를 생성하는 비유전적 방법을 제시합니다.

간 질환 연구를 위한 말초 혈액의 인간 간 스페로이드

배우세요 인간 간 줄기 세포를 이용한 인간형 마우스 간 세대 방법으로, TRECK/SCID 마우스에 디프테리아 독소 처리 후 비장 주사로 줄기 세포를 이식하여 기능성 인간 간을 재구성하는 기술입니다.

인간 간 줄기 세포를 이용한 인간형 마우스 간 세대

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